- Remover meio

- Lavar 2x com PBS

- Tripsinizar / lavar rotina

- Lavar 1x com PBS

- Contar- Colocar no tubo de FACS de 5 x 10a4 a 10a6 células

- Lavar com tampão de FACS (PBS, Azida 0,1%, 1% BSA ou 2% SFB) e add em tubo de
FACS

- Verter rapidamente de uma vez só com firmeza, escorrer com tubo de cabeça para
baixo, marcar no pellet

- Incubar com 5uL Fc block, ou em 5% de soro de carneiro por 15min a 4oC (Fc block
deve ser adicionado de acordo com a quantidade de células de e de anticorpos a serem
colocados/tubo/volume)

- Não lavar

- Add anticorpo à amostra com bloqueio por 30min a 4oC no escuro

- Lavar com tampão de FACS

- Ressuspender e ler em PBS-formol ou imediatamente se no tampão de FACS

Obs. Fazer sempre titulação com 1, 3 e 5uL dependendo da orientação original do fabricante

Fazer sempre tubo controle (branco) e tubos com controle de isotipo