Universidad Austral de Chile Escuela de Tecnologa Mdica Sede Puerto Montt

PRCTICO BIOLOGA CELULAR DIVISION CELULAR: MITOSIS

I. FUNDAMENTO
El ciclo celular es un proceso que consiste en la replicacin de material gentico y formacin de clulas hijas. Compromete dos etapas: La primera llamada interfase, donde no ocurre divisin celular propiamente dicha y la segunda de divisin celular (ver figura). Dependiendo del tipo de clulas donde se lleve a cabo, la divisin celular toma el nombre de Mitosis (si ocurre en clulas somticas) o Meiosis (si ocurre en clulas germinales). La mitosis implica cuatro etapas: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. En las dos primeras ocurre la duplicacin de material gentico y en las dos ltimas se lleva a cabo la distribucin de los cromosomas. El resultado final son dos clulas hijas diploides (2n).

II. OBJETIVOS
Reconocer las distintas fases del ciclo celular en celulas somaticas de raiz de cebolla.

III. MATERIALES
- Placa Petri - Orceina actica - Pinza de madera - Microscopio - Mechero de alcohol - Acido Actico - Etanol - Laminas portaobjetos y cubreobjetos - Papel toalla - Cebolla cultivada por 3 dias - Materiales de diseccin: tijera, pinza punta fina. - Gotero estilete.

IV. PROCEDIMIENTO
Con 8 unos das de anticipacin a la prctica preparar el cultivo de cebolla de la siguiente manera: En un vaso con agua, de preferencia de borde oscuro, colocar una cebolla mediana de tal manera que haga contacto la parte terminal de la cebolla con el agua y dejar en lugar semioscuro.

Preparacin de la muestra
1 Disponer de gran nmero de races de cebolla, haciendo cortes de la parte terminal (aproximadamente de 0.5cm.) y depositar en una placa Petri. 2 Colorear con orceina por 10 minutos: contiene orceina A que interrumpe el proceso si se est dando en ese momento y reblandece la unin de las clulas muertas, as como orcena B que tie la cromatina o material hereditario. 3 Luego calentar la muestra slo hasta que emane vapores por 2 veces consecutivas con intervalos de enfriamiento. 4 Trasladar las races a diferentes portaobjetos, separar slo el pice (parte terminal de la raz) y agregar una gotita de orceina y cubrir con el cubreobjeto. 5 Apretar la muestra suavemente con la yema de los dedos. 6 Secar el exceso de colorante con papel secante y llevar al microscopio para su observacin a menor y mayor aumento.

Interfase

Profase temprana

Profase tardia

Metafase

Anafase temprana

Anafase tarda Telofase temprana Telofase tardia

Citocinesis

CUESTIONARIO
1. Por qu hemos tomado muestras de la punta de las raicillas y no, por ejemplo, de una hoja de la cebolla, que habra resultado ms sencillo? 2. Qu diferencias y semejanzas existen entre la mitosis de una clula animal y una clula vegetal? 3. Qu otros tipos de divisin celular conoces (tanto en eucariotas como en procariotas) que no sea el de la mitosis? 4. Qu ocurrira si la mitosis no tuviese un control (no estuviese regulada) y las clulas estuvieran continuamente dividindose?

DIVISIN CELULAR: MEIOSIS

I. INTRODUCCION La meiosis es un proceso celular, ligado a la reproduccin sexual, por el cual, la clula madre de naturaleza diploide, da origen a los gametos de naturaleza haploide, de tal manera que en la fecundacin se reestablece el numero diploide de cromosomas. As, mientras la mitosis es un proceso de divisin celular con formacin de dos ncleos hijos con el mismo nmero de cromosomas que la clula original, en la meiosis en cambio hay dos divisiones celulares con reduccin del nmero de cromosomas a la mitad. La meiosis es un proceso citolgico que comprende dos divisiones celulares. En la primera divisin meitica ocurre una serie de intercambios de material gentico entre los cromosomas homlogos. Este fenmeno es un proceso complejo que comprende una larga profase en la que, para su mejor estudio y comprensin, se distinguen los estadios: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis. Entre la telofase I y el comienzo de la segunda divisin meitica, a diferencia con la mitosis, no hay un periodo de sntesis y duplicacin del ADN, por lo dems la divisin meitica II, tiene lugar como la mitosis normal en cada una de las clulas haploides (meiocitos de segundo orden), resultantes de la divisin meitica I.

II. OBJETIVOS:
Al finalizar la presente prctica los alumnos estarn capacitados para: 2.1 Reconocer y diferenciar los estados fisiolgicos por los que atraviesan los cromosomas durante el proceso meitico en clulas animales.

III. MATERIALES Y METODOS

Un excelente material para la observacin de los procesos de divisin celular lo constituyen insectos de la especie Grillos asimilis grillo domstico y Laplatacris sp langosta. En los individuos machos debe recuperarse el testculo despus de la diseccin en el que se estudiara la meiosis en clulas de maduracin (espermatocitos) de la zona proximal al canal deferente. El material a usar en el presente ejercicio es el siguiente: - Grillo o saltamontes machos - Microscopio - Mechero de alcohol - Cloroformo - Carmin actico - Carnoy - Solucin salina 0.7% - Placas petri - Laminas, laminilla - Algodn - Papel filtro - Estilete de punta fina

IV: PROCEDIMIENTO

- Anestesiar los animales en las placas petri, colocando dentro de un pedazo de algodn embebido en cloroformo. - Disecar el animal con la ayuda del estereomicroscopio o lupas, colocndolo en posicin dorsal. Separar los testculos adicionndoles la solucin salina procurando no exponer los rganos al aire para evitar posibles desecaciones. - Seccionar los testculos en partes pequeas de 2 a 3 mm y colocarlos en un vial con fijador carnoy por espacio de 30 min. - Traspasar los fragmentos a una luna de reloj que contiene carmin acetico y lleve al calor del mechero hasta que entre en ebullicin por espacio de 15 segundos de 5 a 7 veces. - Retire el fragmento del testculo con una pinza de punta fina y colquela sobre un portaobjetos y agrguela una gota de carmin actico. - Tape la preparacin con una laminilla cubre objetos y sobre esta ponga un papel absorbente. Presione el cubre objetos con la yema del dedo pulgar y luego con la extremidad plana de un lpiz presionar un poco mas fuerte hasta convertir el material del porta objetos en una capa delgada (squash). Al realizar esta operacin, tenga cuidado para no romper el cubre objetos. - Limpie el exceso de colorante del porta objetos con papel higinico y lleve el preparado al microscopio para su observacin a menor y mayor aumento. - Observar y esquematizar.