Fundamentos de Química Experimental 1º semestre 2021

João Henrique Stempkoski da Rosa

N° USP 12562323

Lista de Exercícios
Aula 06 – CROMATOGRAFIA

QUESTÃO 1: A cromatografia é uma técnica de destaque nas análises químicas, devido a facilidade
de separação, identificação e quantificação de espécies químicas. Por definição, a cromatografia é
um método-físico químico de análise que possibilita a separação de componentes de uma
determinada mistura, através da distribuição desses componentes em duas fases, as quais estão em
contato íntimo. Como são denominadas essas duas fases? Descreva brevemente o princípio da
separação cromatográfica.

Na cromatografia a separação dos componentes depende de duas fases, a estacionária e a móvel. A

fase móvel passa através da fase estacionária carregando a mistura em velocidades diferentes, devido
a afinidade dos solutos com a fase móvel e a fase estacionária.

QUESTÃO 2: Descreva os princípios físico-químicos básicos da separação cromatográfica.

Na separação cromatográfica através de adsorção o soluto fica retido na superfície da fase

estacionária através de interações eletrostáticas e forças de Van Der Waals. Nesse caso, a fase
estacionária é sólida e a móvel é líquida ou gasosa. O soluto se “prende” a fase estacionária por
adesão.

Já a partição consiste nas diferenças de solubilidade dos componentes na fase móvel. Os solutos
menos solúveis na fase móvel ficam retidos nos poros da fase estacionária, enquanto os mais
solúveis são arrastados pela fase estacionária.

A separação por troca iônica consiste em submeter o soluto a uma fase estacionária de carga oposta
em um pH específico, que possibilite reverter a atração entre ambos.

Na exclusão molecular a fase estacionária possui diversos poros de diferentes dimensões que retêm
as moléculas e as separam de acordo com seus tamanhos.

A separação por bioafinidade é realizada ligando a molécula do soluto a uma outra molécula
específica, como um anticorpo em caso de antígeno, uma enzima em caso de substrato ou um açúcar
em caso de lectina. A ligação entre ambas deve ser reversível e é necessário que a molécula a ser
separada permaneça intacta ao fim do processo.
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QUESTÃO 3: Há muitos fatores governando o grau de adsorção e a solubilidade, mas o mais

importante é a polaridade. Explique brevemente como a polaridade influencia na velocidade de
separação dos componentes de uma mistura por cromatografia.

A polaridade influencia no processo de eluição do soluto. Aquele que possui menor afinidade com
o solvente é eluído primeiro, portanto, é separado mais rápido. Já o soluto que possui maior afinidade
com a fase móvel é “arrastado” por mais tempo.

QUESTÃO 4: O nome dado a um tipo particular de cromatografia depende da maneira como o

experimento é conduzido. Explique as diferenças entre a cromatografia em coluna e a cromatografia
de camada delgada e de papel.

Na cromatografia de camada delgada ocorre a separação entre sólido-líquido, em que a fáse móvel
líquida arrasta o soluto por uma camada fina contendo um adsorvente em uma placa de vidro que
permanece em um recipiente fechado. Assim, o solvente arrastará os compostos que menos
interagirem com a fase estacionária
Figura 1- Cromatografia em camada delgada
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A cromatografia em coluna consiste em um processo no qual a é feita uma coluna de vidro contendo
uma fase estacionária (geralmente sílica) que reterá o soluto da fase móvel.
Figura 2- Cromatografia em coluna

Na cromatografia em papel a fase móvel é líquida ou gasosa e a fase estacionária é o próprio papel,
que retém o soluto e possibilita a separação da mistura.
Figura 3- Cromatografia em Papel
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QUESTÃO 5: Quais os três tipos de cromatografia com base na fase móvel? Qual a característica
de cada uma?

Os três tipos são cromatografia gasosa, líquida e supercrítica. A gasosa é utilizada em compostos
que podem ser vaporizados sem se decompor. A líquida é utilizada para separar compostos que estão
em solução. Já a supercrítica é utilizada quando a fase móvel é o dióxido de carbono na forma de
fluido supercrítico, isto é, quando não há mais distinção entre as fases líquida e gasosa.

QUESTÃO 6: Quais são os métodos de enchimento da coluna na cromatografia de coluna?

Por via úmida: Mistura-se a fase móvel e o adsorvente, preenche-se a coluna com a mistura e depois
adiciona-se a amostra em solução no topo da coluna.

Por via seca: Adiciona-se o adsorvente na coluna, coloca-se a amostra no topo da coluna misturada
com um pouco de adsorvente e depois coloca-se a fase móvel.

QUESTÃO 7: Faça um comparativo entre as técnicas da cromatografia de papel e de camada

delgada, citando suas vantagens e desvantagens.

A cromatografia de camada delgada é um tipo de cromatografia de adsorção, em que o soluto

interage com a fase estacionária, que terá afinidade por substâncias polares. Suas vantagens são fácil
execução, maior rapidez, menor trajeto da fase móvel, boa resolução, manchas em geral menos
difusas, baixo custo, versatilidade e facilidade de repetição. Suas desvantagens são degradação de
compostos que deslizam facilmente e dificuldade na quantificação.

Já a cromatografia em papel é um tipo de cromatografia simples e barata, além de ser necessária

pouca quantidade de amostra. Suas desvantagens são a aplicação limitada, a tendência das moléculas
em se difundir nas extremidades das alíquotas e baixa quantidade de reveladores.