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BACILOS GRAM NEGATIVOS

FERMENTADORES

Profa. Maiza Rocha de Abrantes


DACT / CCS / UFRN
maizarab@gmail.com
oxidase (-)  Enterobactérias
Fermentadores

oxidase (+)  Vibrios


BGN

oxidase (+)Ex.: Pseudomonas spp.

Não-fermentadores

oxidase (-) Ex.: Acinetobacter spp


ENTEROBACTÉRIAS

Fámilia: Enterobacteriaceae

Gêneros: Escherichia, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Enterobacter,


Serratia, Citrbacter, Proteus, Providencia, Morganella.
ENTEROBACTÉRIAS
• Maior e mais heterogênea família de BGN;

• 30 gêneros / + de 120 spp.;

• Mais de 95% dos micro-organismos isolados pertencem a apenas 10


gêneros;

• Representam 80% (ou +) de todos os Gram negativos de


importância clínica isolados na rotina;
ENTEROBACTÉRIAS
• Presentes na água, solo, vegetais e no intestino do homem e
animais;

• Os pertencentes a microbiota humana, podem provocar


infecções oportunistas;

• Cerca de 70% das infecções urinárias e 50% das septicemias;

• Estão também associados gastroenterites;


Classificação

• Hibridização e sequenciamento de ácidos nucléicos;

• Propriedades bioquímica: baseada em ações enzimaticas;

• Estrutura antigênica: baseada na presença de antigenos O, K, H –


Sorogrupos e Sorotipos.
Classificação Sorológica
Endotoxina

• Ativação do complemento;

• Liberação de citocinas;

• Febre;

• Leucocitose;

• Coagulação intravascular disseminada;

• Diminuição da circulação periférica;

• Choque e morte (disfunção orgânica maciça).


FISIOLOGIA E ESTRUTURA:

• Caracteristicas morfotintoriais;

• Anaeróbios facultativos;

• Exigências nutricionais simples;

Observações Fenotípicas Preliminares

• Fermentam a glicose;

• Reduzem o nitrato a nitrito;

• São catalase positivos;

• Citocromo Oxidase negativos.


BACILOS GRAM NEGATIVOS
Ágar Mac Conkey Ágar Eosina Azul de Metileno
Fermentadores de Glicose

Tríplice Açúcar Ferro – TSI

Ágar Ferro de Kligler – KIA


N,N-dimetil-p-fenilenodiamina + ɑ naftol + O2 Citocromo Oxidase Azul de Indofenol + H2O2
Fatores de Virulência Comuns Associados as
Enterobactérias:

• Endotoxina (lipídio A do LPS);

• Cápsula;

• Variação de fase antigenica (Ags K e H - controle genético);

• Sequestro de fatores de crescimento – Ferro;

• Resistência ao poder bactericida do soro – sistema

complemento;

• Resistência Antimicrobiana (Pasmidial).


PATOLOGIAS

1. Infecções extra-intestinais:
 Localizadas: ITU, Pneumonias, Pele;

 Sistemicas: Bacteremias, Septicemias.

2. Infecções intestinais:

 Escherichia coli : EPEC, EAEC, DAEC, ETEC, EIEC, EHEC;

 Shigella: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boidii, S. sonnei;

 Salmonella: S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Typhimurium, S. Enteritidis.


DIAGNÓSTICO LABORATORIAL

PROCESSAMENTO PRIMÁRIO:
Coleta e transporte do Material Biológico (Salina tamponada
Glicerinada, Cary-Blair, Stuart , BHI)

 Bacterioscópico

1.N de células epiteliais > N de leucócitos = amostra não representativa


2.N de células epiteliais < N de leucócitos = amostra representativa
MEIOS DE CULTURA
Meios de Transporte – STG /Cary-Blair / Stuart / BHI;

Meios Seletivos diferenciais para Bacilos Gram Negativos:


Ágar Eosina Azul de Metileno (E.M.B.);
Ágar Mac Conkey com ou sem sorbitol;

Meios Seletivos diferenciais para Salmonella e Shigella:


Ágar Entérico Hektoen (Ágar HE);
Ágar Salmonella e Shigella (Ágar SS);
Ágar Xilose-Lisina-Desoxicolato (Ágar XLD);

Meios de Enriquecimento Prévio:


Caldo Tetrationato, Caldo Selenito Cistina, Caldo GN, Caldo BHI.
Ágar Mac Conkey
Fórmula (g/l)
Peptonas ____ 17,0
Polipeptona ____ 3,0
Sais biliares ____ 1,5
Lactose ____ 10,0
Cloreto de sódio __ 5,0
Vermelho neutro ___ 0,03
Cristal violeta ___ 0,001
Ágar ____ 13,5

pH final = 7,1
Ágar Eosina Azul de Metileno
Fórmula (g/l)
Peptona _____ 10,0
Lactose _____ 5,0
Sacarose _____ 5,0
Fosfato bifásico de potássio _____ 2,0
Eosina _____ 0,4
Azul de metileno ___ 0,065
Ágar _____ 13,5

pH final= 7,2
Ágar Entérico Hektoen

Fórmula (g/l)
Peptona ___ 12,0
Extrato de levedura ___ 3,0
Sais Biliares ___ 9,0
Lactose ___ 12,0
Sacarose ___ 12,0
Salicina ___ 2,0
Cloreto de sódio ___ 5,0
Tiossulfato de sódio ___ 5,0
Citrato férrico e amônio ___ 1,5
Fucsina ácida ___ 0,1
Azul de timol ___ 0.04
Ágar _____ 14,0

pH final = 7,6
Ágar XLD

Fórmula (g/l)
Xilose ___ 3,5
Lisina ___ 5,0
Lactose ___ 7,5
Sacarose ___ 7,5
Cloreto de sódio ___ 5,0
Extrato de levedura ___ 3,0
Vermelho de fenol ___ 0,08
Desoxicolato de sódio ___ 2,5
Tiossulfato de sódio ___ 6,8
Citrato férrico e amônio ___ 0,8
Fucsina ácida ___ 0,1
Azul de timol ___ 0.04
Ágar _____ 13,5

pH final = 7,4
IDENTIFICAÇÃO DOS BGNF
IDENTIFICAÇÃO BIOQUÍMICA (Biótipos)

1. Sistemas convencionais – triagem


(TSI, SIM, LIA, CIT, FAL)

2. Sistemas simplificado: Enterotube, IAL / EPM

3. Métodos automatizados – identificação rápida.


Sistemas convencionais - TSI
Sistemas convencionais: TSI, SIM, Citrato, Fenilalanina, Uréia

Koneman et al., 2008


ENTEROTUBE
IAL / EPM

Indol

Motilidade

L-Triptofano

Sacarose

H2S

Gás

Glicose

Uréia

L-Lisina
EXEMPLOS:
Métodos automatizados – identificação rápida
VITEK®, MicroScan®

SELADORA ESTUFA de CULTURA

Câmara de vácuo
PAINEL BIOQUÍMICO
ANTIMICROBIANOS - PAINEL
SELAGEM À VÁCUO
ESTUFA de CULTURA
IDENTIFICAÇÃO SOROLÓGICA (Sorotipos)
Testes de Aglutinação Rápida em Lamina

Antígeno Somático (O) – (LPS) – termoestável


• Polissacarídeo O – antigenicamente variável
• Core – antígeno comum à todas enterobactérias
• Lipídio A – componente tóxico

Antígeno Capsular (K) – termolábel - envoltório (interferente) -


Antígeno Vi de Salmonella Typhi

Antígeno Flagelar (H) – proteínas termolábeis - (interferentes)


ANTIBIOGRAMA

Teste de Sensibilidade por Disco Difusão


(Método de Kirby- Bauer)

Amicacina, Gentamicina;
Ampicilina;
Cefaclor, Ceftriaxona, Ceftazidima, Cefepime;
Cloranfenicol;
Ertapenem, Imipenem;
 Ciprofloxacina, Levofloxacina, Lomefloxacina, Norfloxacina;
Nitrofurantoina;
Trimetoprim-sulfametoxazol.
Resistência Intrínseca
 Citrobacter diversus, Klebsiella spp.:

Ampicilina, Amoxicilina, Carbenicilina, Ticarcilina

 Proteus mirabilis:

Colistina, Nitrofurantoina, Tetraciclina

 Proteus vulgaris:

Ampicilina, Amoxicilina, Cefalosporina (1a),

Cefuroxima (2a), Colistina, Nitrofurantoina

 Salmonella spp.:

Cefalosporina (1a e 2a), Aminoglicosídeos.


TRATAMENTO/PREVENÇÃO/CONTROLE

– Antibioticoterapia – orientada por antibiograma;

– Tratamento da Coagulação Intravascular Disseminada;

– Reidratação oral (TRO) ou Endovenosa;

– Antibióticos profiláticos;

– Saneamento básico, TTO de água, Educação sanitária;

– Controle e Fiscalização de Produtos Alimentares;

– Cozimento Completo de Carnes;

– Controle das Moscas;

– Hospitais – lavagem das mãos, assepsia rigorosa, esterilização de


equipamentos.
REFERÊNCIAS
1. ALTERTHUM, F & TRABULSI, LR. Microbiologia, 5a ed, Editora Atheneu. 2008.

2. Filho SANTOS Lauro. Manual de Microbiologia, 4a ed, João Pessoa, 2007.

3. JAWETZ, E., Microbiologia Médica, Rio de Janeiro; Guanabara Koogan, 24a, 2009.

4. KONEMAN, EW., ALLEN, SD., JANDA, WM., SCHRECKENBERGER, PC., Jr. WINN, WC.,
Diagnóstico Microbiológico, Texto e Atlas Colorido, 6a ed,, Editora Médica e Científica Ltda.
2007.

5. MURRAY, PR., ROSENTHAL, KS., KOBAYASHI, GS., PFALLER, MA., Microbiologia Médica,
Rio de Janeiro, 4a ed, Guanabara Koogan, 2005.

6. OPLUSTIL, CP., ZOCCOLI, CM., TOBOUTI, NR., SINTO, SI., Procedimentos Básicos em
Microbiologia Clínica, São Paulo, 3a ed, SARVIER, 2010.

7. ROSSI, F., ANDREAZZI, D.B., Resistência Bacteriana – Interpretando o Antibiograma, São


Paulo, Atheneu, 2005.
Obrigada!

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