PURIFICAÇÃO DA AMOSTRA

Purificação é a separação da amostra, onde rompe as células e expulsa essas

proteínas,ácidos nucléicos,lipídeos de outros componentes,sendo preciso separar todos
eles,descartar o que não é do interesse e ficar única e exclusivamente com as moléculas
alvo.
O DNA,proteínas,RNA,lipídios em geral,além de outros componentes celulares,estão todos
reunidos em uma única solução,sendo necessário separar nesse contexto apenas os ácidos
nucleicos,seja ele DNA ou RNA ,usando algum processo químico ou físico que permita essa
separação.
Três processos que auxiliam na separação das moléculas de ácidos nucleicos dos demais
constituintes celulares,são;
-salting-out:
processo a qual a mostra passou pelo processo de lise e adição de sal caotrópico,que
fazem as pontes de hidrogênio serem desfeitas,obtendo uma grande quantidade de
material fragmentado e os ácidos nucleicos.sendo assim, as proteínas e outros elementos
celulares tendem a sair da solução,realizando o passo de centrifugação.
-separação orgânica;
Fenol,agente desnaturante e altamente hidrofóbico.
-Interação com sílica;
O óxido de sílica interage com o DNA na forma salina e fica fixo na sílica(funil onde ocorre
a lavagem e remove quaisquer outros constituintes que não estejam interagindo com a
molécula de sílica).