GUA GRAU REAGENTE PARA LABORATRIO E OUTROS FINS ESPECIAIS

Eymard de Meira Breda CRQ 02300/276 Setembro/2001

1- INTRODUO A gua de abastecimento urbano ("gua de torneira") no tem pureza suficiente para muitas aplicaes especficas como uso em laboratrios, preparao do banho de hemodilise, produo de medicamentos e alguns produtos qumicos especficos, produo de determinados componentes eletrnicos, alimentao de caldeiras, sistemas de gerao de vapor, sistemas de refrigerao etc. No caso especfico de pesquisas e anlises em geral, os pesquisadores analticos comumente esto envolvidos com elementos e compostos presentes ao nvel de ppb (partes por bilho) na gua e outros materiais. Os mtodos analticos usados em pesquisa biolgica so freqentemente sensveis a vrios contaminantes, particularmente metais pesados, matria orgnica dissolvida e microorganismos. A cromatografia lquida de alta resoluo (HPLC high performance liquid cromatography) requer gua ultrapura para calibrao das linhas-base do detector e para eluio das colunas de fase reversa. A anlise de traos de metais requer gua isenta dos elementos a serem determinados, purificada, preferencialmente, atravs de um sistema que inclua a deionizao. 2- PADRES DE QUALIDADE DE GUA PARA LABORATRIO Para atender a crescente sensibilidade exigida em suas pesquisas, vrias organizaes profissionais tm estabelecido padres de qualidade de gua. Esses grupos, nos Estados Unidos, incluem o National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS - Comit Nacional para Padres de Laboratrios Clnicos), o College of American Pathologists (CAP - Colegiado dos Patologistas Americanos), a Association for Advancement of Medical

Instrumentation (Associao para o Avano da Instrumentao Mdica- AAMI) e a American Society for Testing and Materials (ASTM - Sociedade Americana para Ensaios e Materiais); a nvel internacional, podemos citar, entre outros, a Organizao Mundial de Sade (OMS) e rgos especficos da Comunidade

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Econmica Europia. Como exemplo, o NCCLS especificou quatro tipos de gua, de acordo com suas respectivas aplicaes, que so definidos a seguir: 2.1- gua Tipo I: pode ser considerada como a gua de qualidade ideal, isto , a gua com a melhor qualidade possvel de ser obtida com a tecnologia disponvel atualmente para tratamento e purificao de gua. Deve ser usada em mtodos de anlise que requeiram mnima interferncia e mximas preciso e exatido (absoro atmica, espectrometria de emisso de chama, traos de metais, procedimentos enzimticos sensveis a traos de metais, eletroforese, cromatografia lquida de alta resoluo, fluorometria);

preparao de solues-padro e de solues tampo; processos onde a presena de microorganismos deve ser mnima. A gua tipo I deve ser usada no momento em que produzida; no deve ser estocada, pois sua resistividade diminui, podendo ocorrer lixiviao de metais e/ou compostos orgnicos do frasco de estocagem e tambm

desenvolvimento / contaminao bacteriana. 2.2- gua Tipo II: mtodos analticos e processos onde tolerada a presena de bactrias: reagentes em geral, sistemas de microbiologia e mtodos / processos aos quais no necessrio o uso da gua tipo I e da gua para aplicaes especiais. 2.3- gua Tipo III: para lavagem de vidraria em geral, produo de gua de maior grau de pureza e preparao de culturas bacteriolgicas. 2.4- gua para Aplicaes Especiais: utilizada em procedimentos que requerem a remoo de contaminantes especficos - remoo de pirognicos para cultura de tecidos / clulas e remoo de traos de orgnicos para cromatografia lquida de alta resoluo. As tabelas a seguir mostram os padres de qualidade de gua dos tipos I, II e III e os principais padres de qualidade de gua tipo I adotados por trs respeitadas instituies dos EUA o NCCLS, o CAP e a ASTM:

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TABELA 1 - Especificaes do NCCLS para "gua Grau Reagente PARMETRO Bactrias ( UFC / ml ) pH Resistividade a 25 C (M.cm) Condutividade a 25 C ( S / cm ) S i O2 ( mg / l ) Slidos Totais ( mg / l ) Carbono orgnico oxidvel total (mg / l) TIPO I < 10 No aplicvel > 10 < 0,1 < 0,05 < 0,1 < 0,05 TIPO II < 1000 No aplicvel >1 <1 < 0,1 <1 < 0,2 TIPO III No aplicvel 5-8 > 0,1 < 10 <1 <5 <1

TABELA 2 - Padres de gua Tipo I adotados nos EUA PARMETRO NCCLS Resistividade mnima (M.cm, 25C) 10,0 Condutividade mxima(S/cm, 25C) 0,1 Silicatos, mximo ( mg / l ) Dimetro mximo particulado (m) de material 0,05 0,2 CAP 10,0 0,1 0,05 0,22 ASTM 18,0 0,056 0,003 0,2 Tipo I-A: 10/1000 ml Tipo I-B: 10 / 100 ml Tipo I-C: 10 / 10 ml

Microorganismos - n. mximo de unidades formadoras de colnia por mililitro (UFC / ml)

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NOTA: a resistividade e a condutividade da gua tipo I devem ser medidas em linha; a medio em recipientes pode dar resultados falsos nesse caso especfico. 3- CONTAMINANTES PRESENTES MAIS FREQENTEMENTE NA GUA A seguir, so descritos os 5 tipos de contaminantes encontrados comumente na gua; O item 8 deste captulo discorre mais detalhadamente sobre os mtodos para determinar sua presena e concentrao. 3.1- Material Particulado: inclui, principalmente, slica, resduos desagregados do metal de tubulao e colides. Estas partculas em suspenso podem entupir filtros, vlvulas, tubos e membranas de ultrafiltrao e de osmose reversa. O material particulado visvel como uma nvoa ou turbidez e detectado atravs de filtrao combinada com mtodos gravimtricos ou atravs de microscopia.

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3.2- Materiais Inorgnicos Dissolvidos (slidos e gases): ons clcio e magnsio (Ca++ e Mg ++) dissolvidos de formaes rochosas; gases, como o dixido de carbono (CO2), que se ioniza na gua e forma cido carbnico; silicatos lixiviados de leitos arenosos de rios ou de recipientes de vidro; ons ferroso (Fe++) e frrico (Fe+++), liberados de tubos e superfcies de ferro; ons cloreto e fluoreto, de estaes de tratamento de gua; fosfatos, de detergentes e fertilizantes; nitratos, de fertilizantes; ons alumnio, mangans, cobre etc. H vrios testes para identificar substncias inorgnicas especficas; o mais simples deles a medida direta da condutividade ou da resistividade eltrica. A maioria das substncias inorgnicas dissolvidas tem carga eltrica, positiva (ctions) ou negativa (nions), e transmitem corrente eltrica quando se mergulha eletrodos na gua e se aplica voltagem nos mesmos. Quanto maior for a quantidade de ons presentes, maior ser a condutividade e menor ser a resistividade. A condutividade medida em microsiemens / cm e mais adequada para gua com grande quantidade de ons; a resistividade medida em megohm.cm e mais adequada para gua com poucos ons dissolvidos. Ambas as medidas so recprocas; assim, a 25 C, uma gua com resistividade = 18,2 megohm.cm tem condutividade = 0,055 microsiemens / cm - esta a gua de mais elevada pureza que se consegue obter com a tecnologia atual. A TABELA 3 mostra a comparao entre valores de resistividade e condutividade: TABELA 3 - Comparao de valores de resistividade e condutividade Resistividade em M.cm (megohm.cm ) Condutividade em S/cm (microsiemens / cm) 0,1 10,0 1,0 1,0 10,0 0,1 18,24 0,055

3.3- Materiais Orgnicos Dissolvidos: pesticidas, herbicidas, gasolina, solventes e compostos orgnicos em geral, resduos de tecidos animais e vegetais; tambm pode haver resduos de revestimentos internos de tubulaes, conexes e tanques de estocagem, decorrentes da lixiviao de tais superfcies; note-se que esse ltimo caso decorre de falha no projeto e / ou

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na fabricao do sistema de purificao de gua; portanto, cada sistema deve ser projetado no s para remover o mximo de contaminantes como tambm para minimizar a incorporao dos mesmos gua. importante utilizar gua isenta de contaminantes orgnicos em anlises de substncias orgnicas via HPLC, cromatografia gasosa, eletroforese e fluoroscopia e em pesquisas envolvendo cultura de tecidos. Para se determinar os nveis de contaminantes orgnicos presentes na gua tipo I so usados os analisadores de carbono orgnico total, que oxidam os compostos orgnicos e medem o CO2 liberado. 3.4- Microorganismos: a gua de superfcie contm grande variedade de microorganismos, incluindo bactrias, protozorios, algas e outros.

Considerando que a maioria da gua vem de estaes municipais, onde sofre tratamento intensivo para remoo de microorganismos, os principais micrbios concernentes aos sistemas de purificao de gua so as bactrias. Estas penetram nos sistemas de purificao atravs da gua de alimentao, folgas de conexes, vazamentos e trincas; no interior do sistema as bactrias segregam uma substncia polimrica que permite sua aderncia a superfcies internas de tanques e recipientes de estocagem, tanques e cartuchos de resinas de troca inica, tubulaes e quaisquer outras superfcies de difcil limpeza. As bactrias so usualmente detectadas e quantificadas por filtrao da amostra de gua atravs de um filtro de porosidade de 0,45 micrometro e posterior cultura desse filtro em meio adequado, durante alguns dias. As contagens de bactrias so reportadas em UFC/ml (unidades formadoras de colnias por mililitro). 3.5- Pirognicos: so, tipicamente, fragmentos de paredes de clulas bacterianas gram-negativas, ou lipopolisacardeos. Quando injetados em um mamfero, os pirognicos causam um aumento na temperatura do corpo. Assim, a gua de grau farmacutico e para uso em injetveis deve ser isenta de pirognicos. Estes tambm tm efeito degenerador ou letal em culturas de tecidos. Os pirognicos so detectados por injeo da amostra de gua em cobaias e monitoramento de sua temperatura corporal; no caso de concentraes muito

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baixas de lipopolisacardeos, usado o teste LAL (Limulus Amoebocite Lysate), que bastante sensvel. 4- MTODOS DE PURIFICAO A tecnologia atual permite a utilizao de vrios processos de purificao de gua, sejam isolados, sejam combinados, dependendo da qualidade da gua bruta e da qualidade desejada para a gua tratada; os principais so: destilao; deionizao; osmose reversa; filtrao; adsoro em carvo ativado; ultrafiltrao; oxidao com radiao ultravioleta; adsoro orgnica etc., sendo os principais descritos a seguir. 4.1- Deionizao: comumente utilizada nos laboratrios para produzir gua purificada de consumo rotineiro; funciona atravs da adsoro das impurezas pelas resinas de troca inica: as resinas catinicas trocam seus ons hidrognio (H+ ) por contaminantes catinicos (clcio, magnsio, ferro, alumnio, mangans, cobre, zinco, cromo, nquel e outros metais e ctions diversos); as resinas aninicas trocam seus ons hidroxila (OH- ) por contaminantes aninicos (sulfato, sulfito, sulfeto, clorato, clorito, cloreto, nitrato, nitrito, fosfato, fluoreto e outros nions, alm da slica). As resinas de troca inica so polmeros orgnicos geralmente sulfonados e derivados do estireno e do divinilbenzeno, na forma de pequenas partculas quase sempre esfricas (dimetro < 0,5 mm). Os principais fabricantes mundiais so a Bayer, Rohm & Haas, Dow Qumica e Resintech, entre outros.

Fig. 1

Fig. 2

Fig. 3

Gros de resinas de troca inica (ampliados)

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Fig. 4 - Estrutura de resinas de troca inica O processo consiste em passar a gua atravs de um leito dessas partculas, quando ento os ctions e nions presentes na gua vo deslocando e substituindo gradativamente os ons hidrognio e hidroxila ativos das mesmas, at satur-las, ou seja, at que no haja mais ons H+ e OH- para serem substitudos: nesse ponto, a resina tem que ser regenerada, isto , tratada quimicamente de modo a se recuperar sua capacidade de troca inica; o processo de regenerao exatamente o inverso da operao, quer dizer, promove a substituio, nas partculas das resinas, dos ctions e nions seqestrados durante a operao normal por ons H+ e OH-, respectivamente. A deionizao isoladamente no produz gua totalmente pura, pelos seguintes motivos: a) h fuga de pequenos fragmentos de resina do sistema durante a operao; b) a gua estagnada nos tanques e cartuchos promove excessivo crescimento bacteriano; c) no remove alguns compostos orgnicos; d) no remove toda a matria orgnica dissolvida na gua de alimentao e, de fato, essa matria orgnica pode colmatar (cobrir e bloquear) a resina.

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Portanto, deve-se combinar a deionizao com outros processos de purificao para se conseguir o grau de pureza de gua necessrio para pesquisa e anlises de maiores preciso e sensibilidade. 4.2- Osmose Reversa: a osmose reversa pode ser melhor explicada aps se entender o processo natural da osmose. Osmose o movimento da gua atravs de uma membrana semipermevel, do lado com menor concentrao de impurezas (mais puro) para o lado de maior concentrao de impurezas (lado de maior salinidade, menos puro). Esse movimento continua at que as concentraes atinjam o equilbrio ou que a presso no lado mais concentrado se torne alta o suficiente para impedir o fluxo. A osmose o processo natural pelo qual a gua absorvida pelas razes das plantas e se move de uma clula para outra em nossos corpos. Quando se aplica, na soluo mais concentrada, uma presso maior do que a presso osmtica, usando uma bomba de alta presso, as molculas de gua so empurradas de volta atravs da membrana para o lado menos concentrado, o que resulta na purificao da gua; este o processo da osmose reversa.

Fig. 5 - Esquema de purificao da gua por membrana fluxo cruzado: a gua de alimentao forada a passar longitudinalmente pelo interior da membrana; a presso aplicada faz com que parte da gua atravesse as paredes porosas da membrana e saia purificada.

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Fig. 6 - Exemplos de membranas filtrantes usadas em osmose reversa, nanofiltrao e ultrafiltrao.

Fig. 7 - Detalhe de construo de uma membrana filtrante usada em osmose reversa ou nanofiltrao ou ultrafiltrao. A osmose reversa remove 90 a 99% da maioria dos contaminantes. A TABELA 4, a seguir, mostra o desempenho da osmose reversa na remoo de contaminantes diversos.

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TABELA

Eficincias

da

osmose

reversa

na

remoo

de

contaminantes CONTAMINANTE Slidos suspensos Bactrias Vrus Pirognicos Substncias orgnicas c/ massa molecular > 250 Daltons Substncias inorgnicas monovalentes Substncias inorgnicas divalentes Substncias inorgnicas trivalentes Eficincias de remoo (%) 100 99,5 99,5 99,5 97 - 99,5 94 - 96 96 - 98 98 - 99

Devido sua excepcional eficincia de purificao, a osmose reversa uma opo que tem uma relao custo / benefcio muito atrativa para um sistema de purificao de gua. Devido sua alta capacidade de remoo de bactrias e pirognicos, a osmose reversa freqentemente combinada com a deionizao de modo a reduzir consideravelmente a freqncia de regenerao das resinas de troca inica, o que aumenta muito a vida til das mesmas. A osmose reversa, isoladamente, um recurso para se obter gua pr-purificada de alta qualidade, adequada para muitas aplicaes de rotina em laboratrio. 4.3- Filtrao Atravs de Carvo Ativado: remove o cloro por quimisoro e as substncias orgnicas dissolvidas por adsoro. Geralmente, o filtro de carvo ativado colocado nos sistemas de purificao de gua antes da osmose reversa e antes da deionizao, pois tanto as membranas de osmose quanto as resinas de troca inica so sensveis ao cloro e podem ser colmatadas pela matria orgnica dissolvida. Por outro lado, h quem prefira no colocar o filtro de carvo antes das resinas, de modo a manter o cloro na gua e dificultar a proliferao microbiana nas resinas. Tambm se costuma colocar o filtro de carvo ativado no ciclo de polimento dos sistemas de purificao de gua, para remoo de traos de substncias orgnicas.

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Atualmente os filtros de carvo ativado granulado vm sendo substitudos por filtros de carvo sinterizado (compactado), que tem superfcie de contato bem maior e mais resistente, dificultando a liberao de partculas para a gua.

Fig. 8 - Filtro de carvo ativado sinterizado (carbon block) 4.4- Adsoro Orgnica: seqestra contaminantes orgnicos presentes em concentraes ao nvel de traos. Esse processo permite obter gua com menos de 20 ppb (20 partes por bilho ou 0,02 mg/l) de carbono orgnico total. O cartucho de adsoro orgnica pode conter resinas especiais e carvo ativado e colocado geralmente no ciclo de polimento (pstratamento) do sistema de purificao. 4.5- Filtrao Microporosa ou Submicrnica: usa uma membrana ou fibra oca com porosidade de 0,2 micrometro que evita a passagem de qualquer contaminante com dimetro acima desse valor. Os filtros submicrnicos retm partculas de carvo do filtro de carvo ativado, fragmentos de resina do sistema de deionizao e bactrias que possam ter penetrado no sistema. O CAP e o NCCLS consideram que a gua est livre de particulados quando ela tenha sido filtrada atravs de filtro de porosidade = 0,2 micron.

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Fig. 9

Fig. 10

Cartucho e membranas filtrantes 4.6- Ultrafiltrao: utiliza uma membrana que muito similar utilizada em osmose reversa, exceto pelo fato de que os poros do ultrafiltro so ligeiramente maiores. O ultrafiltro utilizado para remover pirognicos da gua purificada. Considerando que uma alta porcentagem da gua trazida ao ultrafiltro passa atravs dele, ele eventualmente ir entupir caso no receba manuteno adequada. Em um sistema projetado adequadamente, o ultrafiltro regularmente lavado, tangencialmente, para eliminao dos contaminantes.

Fig. 11 - Sistema de purificao com 3 pr-filtros e um ultrafiltro

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4.7- Oxidao com Ultravioleta ou Foto-Oxidao: usa radiao UV com o comprimento de onda de 254 nm para eliminar bactrias do sistema. Tambm dissocia e ioniza certas substncias orgnicas a 185 nm para subseqente remoo das mesmas por deionizao e adsoro orgnica no ciclo de polimento.

Fig. 12 - Cartuchos com lmpadas UV 5- COMPARAO DE PROCESSOS DE PURIFICAO DE GUA TABELA 5 - Processos de purificao de gua comparao de eficincias de remoo de contaminantes PROCESSO DE PURIFICAO Adsoro com carvo ativado Deionizao Destilao Filtrao Osmose Reversa Oxidao Ultravioleta Ultrafiltrao Slidos dissolvidos ionizados R E B / E (*1) R B (*7) R R Gases dissolvidos ionizados R (*2) E R R R R R Substncias Orgnicas Dissolvidas B / E (*3) R B R B B / E (*5) B (*4) Material particulado R R E E E R E

Bactrias R R E E E B (*6) E

Pirognicos R R E R E R B/E

E = EXCELENTE (remoo total ou quase total); B = BOM (remoo de quantidades apreciveis); R = RUIM (pouca ou nenhuma remoo).

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OBSERVAES SOBRE A TABELA 5 (1*) - A resistividade da gua purificada por destilao 1 ordem de magnitude inferior resistividade da gua deionizada, devido,

principalmente, presena de CO2 e, algumas vezes, de H S, NH3 e 2 outros gases ionizados presentes na gua de alimentao. (2*) - O carvo ativado remove o cloro por quimisoro (adsoro qumica). (3*) - Quando usados em combinao com outros processos de purificao, alguns tipos especiais de carvo ativado e outros adsorventes sintticos exibem excelentes capacidades de remoo de contaminantes

orgnicos. (4*) - Os ultrafiltros tm demonstrado eficincia para remover contaminantes orgnicos especficos, com base na sua capacidade de peneiramento molecular. (5*) - Nos processos descontnuos (batelada) a oxidao com luz UV de 185 nm eficiente para remover traos de contaminantes orgnicos, quando usada como ps-tratamento. A reposio da gua de alimentao exerce influncia crtica sobre o desempenho de tais processadores

descontnuos. (6*) - Os sistemas de oxidao UV (luz UV de comprimento de onda = 254 nm), alm de no removerem fisicamente as bactrias, podem ter seu poder bactericida ou bacteriosttico limitado pela intensidade luminosa, tempo de contato e vazo. (7*) - A concentrao residual de slidos depende da concentrao de slidos da gua de alimentao. 6- MTODOS DE PREPARAO DE GUA GRAU REAGENTE DO TIPO I A gua tipo I pode ser produzida por diferentes combinaes dos processos citados anteriormente; a escolha dos processos depender de vrios fatores como qualidade da gua de alimentao, presso e vazo requeridas, turnos de trabalho, consumo, aplicaes especficas etc.

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A resistividade da gua tipo I deve ser maior do que 10 M.cm a 25 C, medida em linha. As medies de resistividade no detectam contaminantes orgnicos nem contaminantes no ionizados e tambm no propiciam informao precisa sobre contaminantes inicos ao nvel de mg/l (ppm). Portanto, necessrio fazer em separado as determinaes dos teores dos contaminantes tais como carbono orgnico total, slica e contagem de colnias de bactrias, alm de pH, dureza e alcalinidades.

7- PREPARAO DE GUA GRAU REAGENTE DOS TIPOS II E III A gua tipo II produzida tipicamente por destilao ou deionizao. Sua resistividade deve ser maior do que 1 megohm.cm a 25 C. Devem ser observadas as mesmas precaues adotadas para a gua do tipo I com referncia determinao de contaminantes. J para a gua do tipo III geralmente bastam uma filtrao e uma deionizao. 8- PARMETROS QUE DEVEM SER PERIODICAMENTE MONITORADOS NA GUA GRAU REAGENTE 8.1- Microbiologia A gua de superfcie contm grande variedade de microorganismos, incluindo bactrias, protozorios, algas e outros. Considerando que a maioria da gua vem de estaes municipais, onde sofre tratamento intensivo para remoo de microorganismos, os principais micrbios concernentes aos sistemas de purificao de gua so as bactrias. Estas penetram nos sistemas de purificao atravs da gua de alimentao, folgas de conexes, vazamentos e trincas; no interior do sistema as bactrias segregam uma substncia polimrica que permite sua aderncia a superfcies internas de tanques e recipientes de estocagem, tanques e cartuchos de resinas de troca inica, tubulaes e quaisquer outras superfcies de difcil limpeza. As bactrias so usualmente detectadas e quantificadas por filtrao da amostra de gua atravs de um filtro de porosidade de 0,45 micrometro e posterior cultura desse filtro em meio adequado, durante alguns dias.

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As contagens de bactrias so reportadas em UFC/ml (unidades formadoras de colnias por mililitro). Os organismos que freqentemente contaminam a gua so bastonetes gram-negativos, incluindo representantes dos gneros Pseudomonas, Alcaligenes, Flavobacterium, Klebsiella, Enterobacter,

Aeromonas e Acinectobacter. 8.1.1- Aspectos a considerar: trs aspectos relativos contaminao bacteriana devem ser considerados: nveis permitidos / tolerados de bactrias que podem estar presentes quando se produz diferentes tipos de gua grau reagente; efeitos de diferentes concentraes de bactrias na exatido e na preciso dos testes do laboratrio clnico; influncia da carga bacteriana sobre a manuteno de outros parmetros significativos de qualidade da gua grau reagente por exemplo, carbono orgnico total (COT). 8.1.2- Efeitos da contaminao bacteriana: idealmente, a gua grau reagente deve ser isenta de bactrias; porm, a produo e estocagem de gua grau reagente tornam isso difcil se no impossvel. As bactrias podem afetar a qualidade da gua grau reagente por desativar reagentes ou alterar substratos ou metablitos por ao de enzimas; contribuir para o aumento do carbono orgnico total; alterar as propriedades ticas da gua e causar alto background (rudo de fundo) de absorvncia em anlises espectrofotomtricas; produo de pirognicos e endotoxinas. Poucos estudos foram publicados sobre esses problemas tericos. Vrios testes clnicos laboratoriais usam reagentes que so ou bactericidas ou bacteriostticos, ou que tenham preservantes (por exemplo, a azida sdica). A gua grau reagente contaminada viabiliza a multiplicao das

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bactrias; a contagem bacteriana total de gua no estril aumenta proporcionalmente com o tempo de estocagem da gua antes de seu uso. Com reagentes, controles e padres adequados, os testes laboratoriais tm condies de detectar possveis desvios de qualidade dos reagentes quase que com absoluta certeza. Sem dvida, a qualidade da gua grau reagente utilizada para preparar / reconstituir tais reagentes pode ser a fonte de um problema, e, o excesso de bactrias, a sua causa. Os fabricantes de reagentes tm que especificar o tipo de gua grau reagente necessrio para prepar-los / reconstitu-los. 8.1.3- Diretrizes gerais: os limites aqui sugeridos para contagem de bactrias totais e tempos de estocagem foram estabelecidos com base nos comentrios anteriores. Os limites recomendados podem ser conseguidos atravs de sistemas adequados para produo de gua grau reagente, no momento em que ela for produzida. Os mtodos so prontamente adaptados s utilidades existentes nos laboratrios clnicos e utilizam tcnicas familiares ao seu pessoal. Os laboratrios clnicos devem avaliar seu prprio histrico de experincias e reconhecer que nveis excessivos de bactrias podem causar problemas na manuteno da qualidade da gua grau reagente. 8.1.3.1- Quantificao: a dosagem microbiolgica deve incluir a avaliao da contagem do total de colnias segundo mtodo padronizado, aps incubao temperatura de (36 + 1)C por 24 horas, seguida por 24 h a (23 + 3)C. A concentrao microbiolgica reportada como Unidades Formadoras de Colnias por mililitro (UFC / ml). 8.1.3.2- Coleta de amostras - o procedimento para amostragem o seguinte: a) coletar a amostra em frasco estril, de tamanho suficiente para conter toda ela. Deixar espao vazio suficiente para viabilizar a

homogeneizao da amostra antes da anlise; b) abrir a torneira totalmente e deixar a gua escorrer durante pelo menos 1 minuto antes de coletar a amostra; a seguir, restringir a

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vazo para encher o frasco sem que haja respingos. Deve-se ter em mente que o fluxo (vazo) inadequado uma das causas mais comuns de contagens elevadas de bactrias; c) coletar um mnimo de 10 ml de gua de cada ponto de amostragem; d) preservar a amostra a uma temperatura entre 2 e 8C e process-la aps, no mximo, 6 horas. Caso no seja possvel preserv-la nessa faixa de temperatura, a anlise dever ser feita no mximo 1 hora aps a coleta. 8.1.4- Mtodos para contagem de bactrias totais 8.1.4.1- Diretrizes Gerais: os procedimentos de contagem de bactrias propiciam mtodos padronizados para quantificar a populao de bactrias heterotrficas aerbicas e facultativamente anaerbicas presentes na gua. uma medio emprica porque as bactrias ocorrem sozinhas, em pares, cadeias, clusters ou packets. Alm disso, nenhum meio isolado ou conjunto de condies fsicas e qumicas pode ser considerado como capaz de viabilizar o crescimento bacteriano em uma amostra de gua; conseqentemente, o nmero real de bactrias pode ser maior que o nmero de UFCs (unidades formadoras de colnias). 8.1.4.2- Critrios para escolha do mtodo: vrias normas referentes qualidade de gua recomendam uma gama de procedimentos para determinar a contagem de bactrias totais, como placa, filtrao e mtodos bacteriolgicos de amostragem. Ao se escolher um mtodo, a deciso deve estar baseada nas seguintes consideraes: a) sensibilidade do mtodo; b) uso de meios que possam viabilizar o desenvolvimento de bactrias mais comumente isoladas da gua no espao de tempo especificado; c) recursos disponveis para execuo do procedimento; d) custo do procedimento.

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8.1.4.3-

Limitaes

dos

mtodos:

os

mtodos

recomendados

no

compreendem todas as tcnicas que podem atender os objetivos j mencionados. Diferentes mtodos podem recomendar a amostragem de diferentes volumes de gua, especialmente quando se utiliza os conjuntos (kits) de contagem de bactrias disponveis atualmente no mercado. Volumes de amostra a partir de 1 ml j podem ser suficientes para se ter uma boa sensibilidade, uma vez que possvel detectar contaminao a nveis abaixo de 1 UFC/ml. Volumes maiores so recomendados para minimizar problemas de distribuio com bactrias em suspenso em fluidos. importante que se garanta suficiente homogeneizao do meio, de modo a se ter distribuio representativa dos microorganismos para a contagem de bactrias totais na amostra de gua grau reagente do laboratrio qumico. Ao se usar um sistema de kit comercial, seguir as instrues para amostragem e contagem e converter os resultados para UFC/ml. O NCCLS no recomenda o mtodo do loop calibrado porque tem pouca sensibilidade para contagens de colnias abaixo de 100 UFC/ml. 8.1.5- Condies de incubao para a contagem de bactrias totais 8.1.5.1- Manter uma temperatura de (36+1)C; essa temperatura deve ser medida com um termmetro calibrado e rastrevel Rede Brasileira de Calibrao (RBC). Nos EUA, o NCCLS recomenda que o termmetro seja rastrevel ao Instituto Nacional de Cincia e Tecnologia (NIST). 8.1.5.2- Monitorar a umidade da incubadora periodicamente (muitas incubadoras possuem controles de umidade); recomenda-se umidade na faixa de 70 a 96% a 36C. Caso a incubadora no possua controle de umidade, manter uma bandeja de gua na cmara da incubadora para garantir a umidade necessria. 8.1.5.3- Para garantir as condies mais adequadas incubao, seguir as seguintes etapas:

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a) incubar as amostras a (36 + 1)C durante 24 horas; b) a seguir, incubar temperatura ambiente (23+3)C por um perodo adicional mnimo de 24 horas. O tempo total de incubao deve ser de no mnimo 48 horas. 8.2- Pirognicos Os pirognicos so detectados por injeo da amostra de gua em cobaias e monitoramento de sua temperatura corporal; no caso de concentraes muito baixas de lipopolisacardeos, usado o teste LAL (Limulus Amoebocite Lysate), que bastante sensvel. O NCCLS, por si, no tem recomendaes especficas para dosagem de pirognicos, podendo ser utilizados os mtodos disponveis na literatura atual. Deve-se ter em mente que essa dosagem indispensvel mesmo para a gua que tenha sido purificada por destilao. 8.3- pH Sua medio peridica necessria para garantir o atendimento s especificaes que os fabricantes dos kits de diagnstico fazem para a gua a ser usada com os mesmos. Alm disso, o pH pode indicar se o sistema de deionizao de gua est com desempenho satisfatrio ou no, ou se o balano inico do leito de resinas est correto ou no; por exemplo, um pH muito baixo da gua efluente de um sistema de desmineralizao pode significar que h excesso de resina catinica em relao resina aninica, ou que, por algum motivo, a resina aninica tenha atingido a saturao antes da resina catinica. Para as medidas de pH o NCCLS recomenda o uso de 2 solues-tampo como referncia, uma delas com pH neutro (7,0) e outra com pH menor em torno de 4, por exemplo. Pode-se usar os tampes comercialmente disponveis, desde que os mesmos tenham certificado de qualidade, de preferncia rastreveis RBC. Tambm se pode preparar tais solues no prprio laboratrio, utilizando reagentes de pureza ACS ou equivalente.

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8.4- Resistividade e Condutividade So 2 parmetros relacionados concentrao de ons presentes na gua, ou seja, concentrao de materiais nela dissolvidos por exemplo, ons clcio e magnsio (Ca++ e Mg++) , presentes nas guas de abastecimento e cuja origem pode ser a lixiviao de formaes rochosas e o uso de reagentes no tratamento de potabilizao); gases, como o dixido de

carbono (CO2), que se ioniza na gua e forma cido carbnico; silicatos lixiviados de leitos arenosos de rios ou de recipientes de vidro; ons ferroso (Fe+2) e frrico (Fe+3), liberados de tubos e superfcies de ferro; ons cloreto e fluoreto, de estaes de tratamento de gua; fosfatos e nitratos, de detergentes e fertilizantes; ons alumnio, mangans, cobre etc. A maioria das substncias inorgnicas dissolvidas tem carga eltrica, positiva (ctions) ou negativa (nions), e transmitem corrente eltrica quando se mergulha eletrodos na gua e se aplica voltagem nos mesmos. Assim, quanto maior for a concentrao inica, mais fcil ser a transmisso de corrente eltrica. A resistividade inversamente proporcional concentrao de ons presentes na gua; portanto, quanto maior for a quantidade de ons presentes, menor ser a resistividade (isto , a gua ter menos resistncia passagem da corrente eltrica) e maior ser a condutividade (ou seja, a gua conduzir melhor a corrente eltrica). A condutividade medida em microsiemens/cm (S/cm) e mais adequada para gua com grande quantidade de ons; a resistividade medida em megohm.cm (M.cm) e mais adequada para gua com poucos ons dissolvidos. Ambas as medidas so recprocas; assim, a 25 C, uma gua com resistividade = 18,2 M.cm tem condutividade = 0,055 S/cm - esta a gua de mais elevada pureza que se consegue obter com a tecnologia atual. A medio da resistividade ou da condutividade d apenas uma indicao genrica, no especfica, da presena e concentrao de espcies qumicas ionizadas; ela no consegue indicar a presena, tipo e concentrao de

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espcies qumicas no ionizadas, ou mesmo de substncias ionizadas ao nvel de partes por bilho. A 25C e a uma resistividade de 10 M.cm (= ao limite inferior para a gua tipo I) a concentrao de espcies ionizadas menor do que 10-6 equivalentes-grama por litro; em guas com resistividades maiores, o decrscimo na contaminao inica extremamente pequeno. A resistividade da gua tipo I tem que ser medida diariamente, apenas em linha, atravs de um eletrodo adaptado tubulao; essa medio no pode ser feita em uma amostra coletada da tubulao porque a gua tipo I absorve a contaminao atmosfrica com extrema rapidez, reduzindo gradativamente a resistividade e causando leitura instvel e progressivamente crescente no medidor. Para a gua tipo II o NCCLS tambm recomenda monitoramento dirio da resistividade; porm, nos casos da gua tipo II e gua tipo III essa medio pode ser feita em amostra coletada da sada do sistema de purificao, no sendo necessria a medio exclusivamente em linha. 8.5- Material Particulado Constitudo principalmente por slica, resduos desagregados de metais de tubulaes e colides. Tais partculas em suspenso podem entupir filtros, vlvulas, tubos e membranas de ultra / nanofiltrao e de osmose reversa. O material particulado visvel como uma nvoa ou turbidez, e detectado atravs de filtrao combinada com mtodos gravimtricos ou atravs de microscopia. A slica solvel, particularmente, pode ser um srio problema em certas regies geogrficas; ela interfere prejudicialmente na maioria das dosagens de enzimas, anlises de metais ao nvel de traos e anlises de eletrlitos; ela tambm interfere diretamente em algumas anlises espectrofotomtricas. A concentrao de slica pode ser determinada principalmente atravs de espectrofotometria, espectrofotometria de absoro atmica (EAA) ou espectrometria de plasma acoplado indutivamente (ICP); uma concentrao

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elevada de slica na gua deionizada pode indicar que a resina aninica j atingiu o ponto de saturao e, conseqentemente, a necessidade de regenerao do leito de resinas. 8.6- Contaminao Orgnica Causada principalmente por resduos de pesticidas, herbicidas, gasolina, solventes orgnicos, resduos de tecidos animais e vegetais e compostos orgnicos em geral; tambm pode haver resduos de revestimentos internos de tubulaes, conexes e tanques de estocagem, decorrentes da lixiviao de tais superfcies; note-se que esse ltimo caso decorre de falha no projeto e/ou na fabricao do sistema de purificao de gua; portanto, cada sistema deve ser projetado no s para remover o mximo de contaminantes como tambm para minimizar a incorporao dos mesmos gua. importante utilizar gua isenta de contaminantes orgnicos em anlises de substncias orgnicas via HPLC, cromatografia gasosa, eletroforese e fluoroscopia e em pesquisas envolvendo cultura de tecidos. H vrios mtodos para investigar a contaminao da gua grau reagente por compostos orgnicos, porm eles so inviveis para uso rotineiro no laboratrio clnico; devido a isso, o NCCLS no recomenda, a princpio, nenhum mtodo em especial. A anlise espectrofotomtrica da gua na regio do ultravioleta distante um deles, mas s vivel com um espectrofotmetro especial para pesquisas; se h disponibilidade desse recurso, ele pode ser til para avaliar a presena de compostos orgnicos na gua produzida. J os mtodos baseados na reduo do permanganato de potssio no so adequados porque so limitados e no conseguem detectar grande variedade de orgnicos; a cromatografia lquida de alta resoluo (HPLC), se disponvel, pode satisfazer essa necessidade. Finalmente, h os analisadores de carbono orgnico total, que oxidam os compostos orgnicos e medem o CO2 liberado.

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9- ESTOCAGEM DE GUA GRAU REAGENTE A gua grau reagente em particular dos tipos especial, I e II - no deve ser estocada em qualquer recipiente que seja. Ela tem que ser usada no momento em que produzida, devido contaminao pelo ar ambiente e tambm pelo inevitvel desenvolvimento microbiano que ocorre na gua estagnada. Alm disso, tambm devido ao desenvolvimento microbiano, nunca se deve usar as primeiras quantidades de gua produzida por um sistema de purificao que tenha ficado inativo por mais de 4 horas. Ao reiniciar a operao do sistema, deve-se desprezar os primeiros volumes de gua produzida; essa quantidade a ser desprezada deve ser equivalente a, pelo menos, 2 volumes estticos do sistema. O ideal que o sistema de purificao de gua seja dotado de um sistema de recirculao, de modo a manter a gua em movimento, mesmo nos perodos em que o laboratrio no funciona; o NCCLS recomenda uma velocidade mnima de recirculao equivalente a 5 ft/s (~ 1,6 m/s). 10- TABELA 6 ESPECIFICAES PARA COLETA, MANUSEIO,

PRESERVAO E ESTOCAGEM DE AMOSTRAS DE GUA EM FUNO DO PARMETRO A SER MEDIDO PARMETRO ABS (detergentes) Acidez Alcalinidade Arsnio Brio Boro Brometo Cdmio TIPO DE FRASCO P; V P(A); V(B) P; V P(A); V(A) P(A); V(A) P P; V P(A); V(A) Volume Mnimo (ml) 1000 100 200 1000 1000 100 ---------1000 ESTOCAGEM MXIMA 24 h 24 h 24 h 6 meses 6 meses 28 dias 28 dias 6 meses

PRESERVAO Refrigerar < 4C, no escuro Refrigerar < 4C, no escuro Refrigerar < 4C, no escuro Adicionar HNO3 at pH<2 Adicionar HNO3 at pH<2 No requerida No requerida Adicionar HNO3 at pH<2

P= Plstico (polietileno ou similar); V= vidro; A= lavado com HNO3 1+1; B= borossilicato.

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PARMETRO

TIPO DE FRASCO

Volume Mnimo (ml)

PRESERVAO

ESTOCAGEM MXIMA

Carbono orgnico total V 100 (COT) P(A); V(A) 1000 Chumbo Cianeto Cloro residual Cobre Cobre (colorimetria)
Condutividade

P; V P; V

500 500

Analisar imediatamente ou adicionar HCl at pH < 2 e refrigerar < 4C, no 7 dias escuro Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses Ad. NaOH at pH>12; refrig. < 4C, no 24 h escuro Analisar imediatamente 30 minutos

P(A); V(A) 1000 P(A); V(A) 500 P; V P; V P(A); V(A) P(A); V(A) P; V P; V P; V P; V P; V 500 500 300 1000 1000 100 500 100 100

Cor Cromo hexa Cromo total DBO5 Dixido de carbono Dixido de cloro DQO solvel DQO total Dureza Estanho Fenol Ferro Fluoreto Fosfato Iodo Mangans Mercrio

Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses Adic. HNO3 at pH<2; refrigerar a T < 28 dias 4C, no escuro Refrigerar a T < 4C, no escuro 28 dias Refrigerar a T < 4C, no escuro 28 dias Refrigerar a T < 4C, no escuro 24 h Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses Refrigerar a T < 4C, no escuro 24 h Analisar imediatamente Analisar imediatamente Nenhuma 30 minutos

P; V 100 P(A); V(A) 1000 P; V P(A); V(A) P V(A) P; V P(A); V(A) P(A); V(A) P; V 500 1000 300 100 500 1000 500 1000

Microbiol. N2 Orgnico, P; V 500 Kjedahl P(A); V(A) 1000 Nquel

Ad. H2SO4 at pH<2; refrigerar a T < 7 dias 4C no escuro Ad. H2SO4 at pH<2; refrigerar a T < 7 dias 4C no escuro Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses Ad. H2SO4 at pH<2; refrigerar a T < 28 dias 4C no escuro Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses No requerida 28 dias Refrigerar < 4C, no escuro 48 h Analisar imediatamente 30 minutos Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses Adicionar HNO3 at pH<2 28 dias Refrigerar a T < 4C, no escuro 24 h Adicionar H2SO4 at pH<2; refrigerar a 7 dias T < 4C no escuro Adicionar HNO3 at pH<2 6 meses

P= Plstico (polietileno ou similar); V= vidro; A= lavado com HNO3 1+1; B= borossilicato.

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PARMETRO Nitrato (NO3-) Nitrito (NO2-) Nitrognio amoniacal (N-NH3) NO3- + NO2O2 dissolvido O2 - eletrodo Winkler Odor leos e Graxas Oznio pH Prata Sabor Salinidade Selnio Slica Slidos Sulfato Sulfeto Temperatura Turbidez Zinco

TIPO DE FRASCO P; V P; V P; V P; V DBO DBO V

Volume Mnimo (ml) 100 100 500 200 300 300 500

PRESERVAO

Refrigerar < 4C, no escuro Analisar o mais cedo possvel; refrigerar 48 h a T < 4C no escuro

ESTOCAGEM MXIMA 48 h

Adicionar H2SO4 at pH<2; refrigerar a 7 dias T < 4C no escuro Adicionar H2SO4 at pH<2; refrigerar a T < 4C no escuro Analisar imediatamente Titulao pode ser retardada aps acidulao Analisar o + cedo possvel; refrigerar a T < 4C no escuro Adicionar H2SO4 at pH<2; refrigerar a T < 4C no escuro Analisar imediatamente Analisar imediatamente Adicionar HNO3 at pH<2 Analisar imediatamente; refrigerar a T < 4C, no escuro Analisar imediatamente ou usar lacre de cera Adicionar HNO3 at pH<2 Refrigerar a T < 4C, no escuro; no congelar. Refrigerar a T < 4C, no escuro Refrigerar a T < 4C, no escuro Adicionar 4 gotas Zn(CH3COO)2 2N e NaOH at pH > 9; refrigerar a T < 4C, no escuro Analisar imediatamente Analisar no mesmo dia; refrigerar a T < 4C, no escuro Adicionar HNO3 at pH<2 28 dias 30 minutos 8h 6h 28 dias 30 minutos 2h 6 meses 24 h 6 meses 6 meses 28 dias 2 dias 28 dias 28 dias Nenhuma 24 h 6 meses

V (boca larga, 1000 calibrado ) V 1000 P; V ----------P(A); V(A) 1000 V 500

V (lacre 240 de cera) P(A); V(A) 1000 P P; V P; V P; V P; V P; V ------------------------------100 ---------------------

P(A); V(A) 1000

P= Plstico (polietileno ou similar); V= vidro; A= lavado com HNO3 1+1; B= borossilicato.

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11- PRINCIPAIS FATORES A SEREM CONSIDERADOS NA ESPECIFICAO, PROJETO E SELEO DE UM SISTEMA PARA PURIFICAO DE GUA. Um sistema de purificao de gua para usos especiais geralmente tem que ser constitudo por vrios mtodos de purificao para que consiga produzir a gua com a qualidade objetivada. Assim, alm do custo propriamente dito (que fator importante, porm nunca deve ser considerado isoladamente) imprescindvel que o projeto, especificao e seleo de um dado sistema observem os fatores descritos a seguir. 11.1- Caractersticas Fsicas, Qumicas e Microbiolgicas da gua de Abastecimento: so fatores muito importantes, pois determinam a freqncia de manuteno do sistema substituio / limpeza de elementos e membranas filtrantes, verificao / limpeza / substituio de conexes e tubulaes, regenerao de resinas trocadoras de ons etc. Tambm so importantes para determinar a eventual necessidade de mtodos mais adequados / viveis a serem empregados para a purificao inicial da gua bruta (filtros de areia, de carvo, desclorador etc.) e para dimensionar a quantidade de materiais filtrantes e resinas trocadoras de ons

eventualmente necessrias (nesse caso, considera-se a vazo a ser tratada). Deve ser considerada a pior condio, isto , os piores ndices de contaminao que a gua de alimentao pode atingir devidos, por exemplo, a variaes sazonais (em perodos de seca a concentrao de impurezas dos mananciais aumenta significativamente). 11.2- Caractersticas Fsicas, Qumicas e Microbiolgicas da gua Purificada (qualidade objetivada em funo das anlises / ensaios caractersticos das atividades do laboratrio): determinam principalmente os mtodos a serem empregados para o polimento (ltima etapa de purificao) da gua, bem como os mtodos necessrios para a pr-purificao da gua bruta. 11.3- Vazo Necessria: tambm deve ser considerada em conjunto com os fatores citados anteriormente, no s para os clculos e especificaes dos mtodos de purificao como, tambm, para dimensionamento do nmero, tipo e dimenses de dispositivos de purificao e para o dimensionamento

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de

eventuais

reservatrios-pulmo

tanques

de

recirculao,

se

necessrio. 11.4- Distncia da Sada do Sistema ao(s) Ponto(s) de Uso: os pontos de uso da gua purificada devem ficar o mais prximo possvel da sada do sistema de purificao; quanto maior a distncia, maior a possibilidade de contaminao microbiana ou mesmo por entradas de ar ou arraste de partculas de tubulaes. Alm disso, distncias maiores podem requerer estocagem provisria da gua (que absolutamente inadmissvel para gua de grau reagente I e II) e/ou bombeamento (que tambm significa maior possibilidade de contaminao, alm de custo adicional). Em determinados casos pode ser bem mais interessante e recomendvel possuir mais de um sistema de purificao. 11.5- Leiaute: assim como a distncia, outro fator que pode favorecer muito a contaminao principalmente microbiana o nmero de curvas da tubulao, devido formao dos chamados dead legs (pontos mortos), onde pode haver estagnao da gua e conseqente desenvolvimento microbiano. A tubulao deve ter o mnimo possvel de joelhos e conexes e tambm deve ser sempre aparente (externa s paredes), para viabilizar manuteno peridica. 11.6- Material de Carcaas de Filtros, Tanques, Reservatrios, Tubulaes e Conexes: os tipos de anlises, ensaios e de outras aplicaes especiais determinam o material de construo desses componentes, pois podem sofrer interferncias devidas lixiviao do material da tubulao, se essa for metlica, ou ao desenvolvimento bacteriano, muito facilitado por porosidades de tubulaes de material plstico como o PVC, por exemplo. 11.7- Disponibilidade de Assistncia Tcnica: assegurar-se de que os fornecedores do sistema e de seus componentes tenham capacidade tcnica, estoques de reposio e recursos suficientes que permitam atendimento imediato em caso de algum problema. Muitos incautos se deixam iludir pelo custo aparentemente baixo e tambm pela fluncia verbal e argumentaes dos vendedores, o que pode trazer grandes prejuzos no futuro. Sempre recomendvel obter o mximo possvel de referncias

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sobre o desempenho do sistema e sobre o tipo / capacidade de assistncia tcnica, antes de qualquer deciso definitiva. 11.8- Instrumentao e Controle: os aparelhos e instrumentos de medio para monitoramento rotineiro da gua purificada devem ser compatveis com seu grau de pureza. Um simples condutivmetro de bancada no tem a mnima condio para medir a condutividade de gua que seja de grau reagente I ou II; nesses casos, deve ser usado um condutivmetro com sensibilidade de leitura na casa de 0,01 S/cm ou mesmo um resistivmetro, sempre que possvel instalado em linha. Condutivmetros, resistivmetros e medidores de pH tm que estar sempre com a calibrao em dia, feita preferencialmente por entidades associadas RBC Rede Brasileira de Calibrao. BIBLIOGRAFIA 1- BAYER - pgina eletrnica: artigos tcnicos diversos sobre resinas de troca inica e seu emprego na purificao de gua e de outros lquidos. 2- EPA (Environmental Protection Agency E.U.A.) - pgina eletrnica: artigos tcnicos diversos sobre laboratrios e purificao de gua. 3- EPA, AWWA, WPCF: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater - 17 edio - Partes 1070B, 1080 A / B / C, 9020 B e 9050. 4- FISHER SCIENTIFIC: Catlogo Eletrnico de Reagentes e Materiais de Laboratrio. 5- Gould, Charles: Treating Industrial Water with Membrane Technology OSMONICS / Separation & Filtration Systems 1 / 3 / 1995. 6- NCCLS: Doc. C3-A2 / Vol.11, N. 13 - Preparao e Teste de gua Grau Reagente no Laboratrio Clnico 2 edio. 7- OSMONICS pgina eletrnica: artigos tcnicos sobre purificao de gua e filtrao com membranas. 8- R. CHAPMAN - pgina eletrnica: artigos tcnicos sobre purificao de gua. 9- RESINTECH - pgina eletrnica: artigos tcnicos diversos sobre resinas de troca inica e seu emprego na purificao de gua e de outros lquidos.

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