2022

Aula 02

 Modos Cromatográficos em HPLC

 Preciso Saber Sobre Cromatografia em Fase Normal?
 Por que cromatografia em fase reversa é tão importante?
Introdução
Interações envolvidas
Tipos de solventes
Tipos de coluna
Como controlar a separação
Algumas limitações

 Fase Normal

 Interação Hidrofílica (HILIC)

 Fase Reversa

 Fase Reversa Não Aquosa

 Par Iônico

 Troca Iônica

 Exclusão de Tamanho (GPC)

2
Aula 02

p-Aminotolueno o-Aminotolueno

Fonte: Copyright © 2002

Waters Corp.

Amino – Ciano – Diol

3
Aula 02

 Problemas mais comuns em Fase Normal:

Baixa reprodutibilidade de separação – Acúmulo de água na fase móvel
(Fase Higroscópica);
Equilíbrio lento da coluna – 2 a 3x maior que em fase reversa;
Encaudamento de picos – por causa de interações secundárias,
ocasionadas por exemplo, pelo acúmulo de água na coluna.

4
Aula 02

 Por que cromatografia em fase reversa é tão importante?

Figura: Coluna de HPLC. (a) Coluna empacotada com partículas esféricas; (b) esquema de
uma partícula individual, esquematizada com grupos C18 ligados; (c) representação de uma
partícula porosa esférica, em detalhe expansão de 10x. Fonte: Snyder (2010) 5
Aula 02

6
Aula 02

Molécula do soluto

Interação Adsorção
solvofóbica

Fase móvel
absorvida

Partição

7
Aula 02

 Moléculas de tamanho similar eluem em sequência com a

diminuição da polaridade;

(1) Benzonitrila
(2) Anisol
(3) Tolueno

8
Aula 02

9
Aula 02

 Problemas mais comuns:

“i-PDeA” é uma marca registrada da Shimadzu

10