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CITOCININAS

1. DESCOBERTA E IDENTIFICAO As clulas diferenciadas normalmente no se dividem, mas podem reassumir esta capacidade, sob determinadas condies. Por exemplo, quando ocorre um ferimento, as clulas mais prximas leso so induzidas a se dividir, o que importante para a cicatrizao do ferimento. O estmulo difusvel, sendo que substncias exsudadas de tecidos vasculares tambm podem estimular a diviso em feridas de batata. Em outras situaes, quando um ferimento no caule de dicotiledneas infectado por bactrias da espcie Agrobacterium tumefaciens, pode ocorrer a formao de um tumor, conhecido como "galha da coroa". Neste caso, interessante notar que as clulas que retomam a capacidade de diviso continuam se multiplicando sem controle, comportando-se como clulas cancergenas. Foi observado que o aquecimento destes tecidos (a 42 C) permite a obteno de tumores livres de bactrias. A utilizao destes tumores como explante (para cultura de tecidos) pode resultar no crescimento de uma massa disforme de clulas, denominada "calo", sem que seja necessria a adio de hormnios vegetais ao meio de cultura.

Figura 1: Galhas da coroa em plantas de tomate. Tumor formado a partir do aumento de enzimas envolvidas na sntese de citocinina.

Nos experimentos iniciais envolvendo tentativas de cultura de tecidos vegetais, foram observadas diferenas marcantes, considerando-se a origem do tecido. Geralmente, explantes de razes se desenvolviam bem, ao contrrio daqueles de origem caulinar. Se, ao meio de cultivo destes ltimos, fossem acrescentadas auxinas, observava-se a formao de calos cujas clulas eram gigantes e poliplides. Dentre os materiais testados, no sentido de se obter clulas normais, as melhores respostas foram obtidas ao se utilizar o leite de coco. Mais tarde, derivados do esperma autoclavado de arenque, mostraram-se igualmente eficientes em estimular a diviso nas clulas dos calos cultivados de fumo.

Todos estes experimentos indicam que fatores difusveis so capazes de e estimular e controlar a diviso celular. Estas substncias so atualmente chamadas genericamente de citocininas, em funo de estimularem a diviso celular (citocinese). A substncia ativa, obtida partir do esperma de arenque, foi denominada de cinetina (6-(2-furfuril)-aminopurina), no sendo encontrada em plantas superiores. Em 1963 foi identificada, em gros imaturos de milho, uma citocinina natural denominada de zeatina (tambm encontrada no leite de coco), que corresponde citocinina biologicamente ativa, encontrada na maioria de plantas superiores.

Figura 2: Estruturas de algumas citocininas. (A) Cinetina, uma citocinina sinttica, gerada quando o DNA autoclavado. (B) Zeatina foi a primeira citocinina endgena isolada de plantas (C) N6-Benziladenina um composto sinttico com atividade de citocinina.

Algumas bactrias e fungos secretam citocininas livres. Elas participam de certas interaes entre bactrias e plantas, como a formao dos ndulos em leguminosas, as associaes com micorrizas, a formao das "vassouras de bruxa" (infeco por Corynebacterium fascians), alm do tumor denominado galha da coroa (j descrito anteriormente). Outras citocininas podem ser obtidas da hidrlise de t-RNA (que possui bases modificadas) de plantas, bactrias ou animais. A Benzil-aminopurina (BAP), ou benzil-adenina (BA), uma citocinina sinttica muito utilizada em cultura de tecidos vegetais. As citocininas podem ser detectadas utilizando-se HPLC, espectrometria de massa, cromatografia gasosa, mtodos imunolgicos ou bioensaios. Como exemplos de bioensaios, podemos citar: - a cultura de medula de fumo (em meio contendo auxina). - o alongamento celular, em cotildones foliceos de rabanete.

2. BIOSSNTESE, METABOLISMO E TRANSPORTE. As citocininas naturais so purinas, particularmente derivadas de adenina adicionada de uma cadeia lateral isoprenide. O precursor inicial para a sntese de citocininas o isopentenil difosfato (produto da via do mevalonato). A enzima isopentenil AMP sintase (citocinina-sintase) forma isopentenil adenosina -5-fosfato (isopentenil AMP) a partir de AMP e isopentenil difosfato. O isopentenil AMP convertido em isopentenil adenosina. Esta convertida em isopentenil adenina que, logo, convertida em zeatina. Os nveis celulares de citocininas so afetados pela sua degradao (via citocinina oxidase) ou converso em derivados inativos, como nucleosdeos ou nucleotdeos. As citocininas podem tambm formar conjugados com a glicose (glicosdeos). As formas conjugadas podem ser transportadas, armazenadas ou representar uma maneira de inativao temporria. Os nveis mais elevados de citocininas so encontrados em rgos jovens (sementes, frutos, folhas) e nos pices radiculares. Esses, provavelmente so locais de sntese, mas tambm podem ser locais de acmulo aps o transporte. As citocininas fluem nos exsudados radiculares o que uma evidncia de que so sintetizadas principalmente nos pices radiculares e translocadas via xilema. A forma predominante no xilema a de nucleotdeos. 3. PAPEL BIOLGICO DAS CITOCININAS - As citocininas promovem a diviso celular e a formao de rgos. Na diviso celular tambm participam as auxinas. Provavelmente as auxinas promovem a duplicao do DNA, enquanto que as citocininas estimulam a citocinese. - Participam da regulao da morfognese em cultivos in vitro. A proporo relativa auxina/citocinina a base para a micropropagao in vitro (organognese): -a) uma relao auxina/citocinina alta estimula a formao de razes. -b) uma relao auxina/citocinina baixa estimula a formao de ramos e folhas.

Figura 3- Figura mostrando a regulao da morfognese a partir do balano auxina/citocinina. Relao auxina/citocinina alta estimula a formao de razes (a), j a relao auxina/citocinina baixa estimula a formao de ramos e folhas (b).

- Retardam a senescncia e estimulam a mobilizao de nutrientes. Por exemplo: quando folhas destacadas enrazam, a senescncia retardada. As razes, aparentemente, sintetizam e proporcionam citocininas s folhas, ajudando a mant-las fisiologicamente jovens, especialmente pela drenagem de nutrientes para as folhas. Possivelmente esta atuao deva-se, tambm, proteo das citocininas sobre o sistema de membranas (manuteno de sua integridade ou proteo contra sua degradao). As citocininas previnem a oxidao de cidos graxos das membranas. Provavelmente elas inibem a formao ou promovem a rpida eliminao de radicais livres (como o nion superxido ou o radical hidroxila). - Estimulam a drenagem de solutos para os locais com citocininas. Os tecidos jovens podem mobilizar nutrientes de tecidos velhos. Folhas jovens ou estruturas reprodutivas (flores, sementes e frutos) drenam acares, aminocidos e outros solutos das folhas adultas. A aplicao de citocininas (benzil-adenina) em rosas ou cravos retarda sua senescncia. - As citocininas promovem o desenvolvimento de gemas laterais em dicotiledneas. - Promovem a maturao de cloroplastos e a sntese de clorofilas e/ou protenas relacionadas (como as do complexo coletor de luz - LHCII). - Estimulam o alongamento celular em certos cotildones foliceos.

4. MECANISMO DE AO DAS CITOCININAS Como os outros fitohormnios, as citocininas atuam, provavelmente, pela ativao de um receptor especfico de membrana. Embora o mecanismo de ao no esteja esclarecido, as citocininas promovem a diviso celular, incrementando a transio de G2 para a mitose, atravs do aumento da sntese de protenas. Ao contrrio das auxinas e giberelinas, que regulam a transcrio da informao gnica no ncleo, as citocininas influenciam a traduo da informao gnica no citossol. Elas aumentam o nmero de polissomos e alteram a qualidade das protenas sintetizadas. Afetam pouco a produo de mRNA e muito mais a sua estabilidade, ou o seu processamento e traduo (exemplo mRNA para as protenas do complexo coletor de luz dos cloroplastos). As "citocininas" presentes no tRNA na forma de "bases modificadas" devem atuar na regulao da sntese protica. As citocininas participam tambm da regulao da concentrao citoslica de Ca2+, promovendo aumento na absoro de Ca2+ do meio externo.