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FOSFORILAO OXIDATIVA

por meio da fosforilao oxidativa ,realizada na mitocndria, que as clulas eucariticas tm sua maior fonte de ATP. Nesse processo o ATP formado a partir de ADP e Pi . O ATP um transdutor energtico universal dos sistemas vivos que utilizado na condio da maioria das reaes dependentes de energia. Sugere-se que cada molcula de ATP sintetizada e desfosforilada mais de 3.000 vezes( dependendo do indivduo) a cada 24 horas para suprir as necessidades do organismo. Esse suprimeno se d na maior parte na membrana mitocondrial,e realizado por dois sistemas acoplados: a cadeia mitocondrial transportadoras de eltrons e a fosforilao oxidativa.

8.1 Estrutura Mitocondrial


Os processos que envolvem liberao e conservao de energia de clulas aerbicas acontece nas mitocndrias. A presena de mitocndrias e a quantidade da mesma depender da funo da clula. A mitocndria formada por duas membranas com diferentes propriedades e funes biolgicas. A membrana externa lisa formada por lipdeos e protenas, com poucas funes de transporte e enzimtica. A membrana mitocondrial interna composta de 75% de protenas e contm as enzimas envolvidas no transporte de eltrons e na fosforilao. Ao contrrio da membrana externa ,a membrana interna impermevel para manter a compartimentalizao das funes metablicas entre o citosol e a membrana interna. Os compostos vo se mover atravs de protenas denominadas carregadoras ou translocases. As cristas da membrana interna , que so pregas voltadas para o interior , aumentam a superfcie da membrana e a quantidade de cristas reflete a atividade respiratria da clula.O espao entre a membrana interna e a externa condiz ao citosol das clulas, e o espao delimitado pela membrana interna chamado de matriz mitocondrial.

8.2 Reaes de oxidao-reduo


Uma reao de oxidao-reduo envolve a transferncia de eltrons ,na qual uma substncia ir doar eltrons e a outra ir ganhar os mesmos . Assim, uma reao de oxidao- reduo total composta de duas meias-reaes acopladas e constituem um par redox: Fe 2+ -- Fe3+ + e (oxidao) 2+ + Cu + e --- Cu (reduo) Em algumas reaes de oxidaoreduo so transferidos tanto eltrons quanto prtons O potencial-padro de reduo (E0f) a tendncia com que o doador de eltrons perde os mesmos para um aceptor de eltrons e definido como a fora eletromotiva (fem) ,em volts(V), gerado por uma meia-clula ,na qual os dois membros do par redox so comparados com uma meia-clula referncia padro de hidrognio(2H+ + 2e_- H2) sob condies padro . O potencial-padro das meias reaes do hidrognio em pH 7 E0F= -0,42V.

Existe uma relao na qual quanto maior o potencial- padro maior a afinidade da forma do par redox em aceitar os eltrons. O potencial depende das concentraes das espcies em questo . O potencial de reduo (E) est relacionado com o potencial-padro (Eof) .

8.3CADEIA ELETRONS

MITOCONDRIAL

TRANSPORTADORA

DE

Nas clulas eucariticas o estagio final de oxidao de nutrientes ocorre nas mitocndrias por um processo chamado de respirao celular ou cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. Os transportadores de eltrons funcionam em complexos multienzimaticos conhecido como NADH-coenzima oxidorredutase; succionato oxidorredutase ecitocromo e oxidase. Os grupos prostticos transportadores de eltrons associados aos complexos prostticos so; nicotinamida, nucleotdeos da flavina, ubiquinona, citocromo e protenas ferro-enxfre.

Complexo I transfere eltrons do NADH para ubiquinona.


A transferncia de eltrons atravs da cadeia respiratria inicia com o complexo I. Composto por 43 cadeias polipeptdicas o complexo I ao maior protena transportadora de eletrons. Alem de uma molcula de FMN, o complexo contem sete centros de ferro-enxofre.

Succinato-enzima Q oxidorredutase
Uma via independente do complexo I, permite a entrada de eltrons de potencial relativamente alto na cadeia transportadora de eltrons, ultilizando o complexo succinato-coenzima Q oxidoredutase que tambm catalisa a reduo da CoQ e CoQH2. Os grupos redos incluem o FAD, protenas Fe-S e o citocromo b560.. O FADH2 formado no ciclo do cido ctrico pela oxidao do succinato e furamato na presena da enzima succinatodesoxigenase.pertencentes ao complexo II.

Complexo III tranfere eltrons do CoQH2 para o citocromo c.


O Complexo III catalisa a transferncia de eltrons CoQH2 para citocromo c co transporte de prtons da matriz para o espao intermembranoso. O complexo enzimtico formado por no mnimo oito protenas diferentes. Nos organismos anaerbicos as funes geradoras de energia possuem varios citicromos localizados na membrana mitocondrial interna.No decorrer dos ciclos cataltico, os tomos de ferro dos citocromos oscilam entre o estado oxidativo frrico e o estado reduzido ferroso. A CoQ reduzida reoxidadda pelo citocromo b. O

centro reagente deste intermedirio redox o tomo de ferro do complexo porfirinico. Em seguida o citocromo b e oxidado pelo citocromo c e assim sucessivamente ate o fim do ciclo. Complexo IV oxida o citocromo c e reduz o O2 . neste complexo proteico que ocorre a catalise e atransferencia de 4 eletrons do citocromo c para ate o oxignio molecular para formar gua. As centros redox do complexo IV nos mamferos incluem heme e ons cobre situados entre as 13 subunidades em cada metade do complexo dimerico. O citocromo c oxidase tambm transloca dois prtons da matriz para o espao intramembranar. Esse mecanismo no esta bem esclarecido nesta fase.

E.Energia livre de transferncia de dois eltrons


A medida de variao de energia livre das reaes de oxidao-reduo dependente da diferena de voltagem entre os potenciais padro de reduo . Na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons dois eltrons so transferidos do NADH atravs de uma serie de aceptores de eltrons com potenciais de reduo crescentes ate o O2 .

A.Teoria quimiosmtica
Teoria quimiosmtica ou propulsora de prtons (proposta por Peter Mitchell em 1961) incorporada de elementos de outra proposta. a do acoplamento conformacional (1974). A teoria postula que o transporte de eltrons e a sntese de ATP esto acoplados pelo gradiente eletroqumico atravs da membrana mitocondrial interna neste modelo, a energia livre do transporte de eltrons pela cadeia mitocondrial leva ao bombeamento de H (prtons) da matriz para o espao intermembrana, estabelecendo um gradiente eletro qumico de H (fora prtonmotiva, pmj) atravez da membana mitocondrial interna. Acoplamento do transporte mitocondrial de eltrons e a sntese de ATP (teoria quimiosmtica). O transporte de eltrons movimenta os prtons da matriz mitocondrial para o espao intermembranas estabelecendo um gradiente eletroqumico de prtons atravs da membrana mitocondrial interna, O retorno dos prtons para a matriz via F0F1 (ATP-sintase) e a gerao de ATP mostrada esquerda da figura. A energia tambm utilizada na translocao do Ca2+.

B. Sntese de ATP
A sntese do ATP na mitocndria catalisada pelo complexo TPsntase TPsntase bombeadora de prtons, F0F1 ATPsintase, complexo T) encontrada na membrana mitocondrial interna . O componente F0 um complexo proteco integral de membrana com oito diferentes tipos de subunidades e insolvel em gua O F0 o canal transmembrana que transfere prtons para o stio ativo da ATPsintase. A unidade F1 catalisa a sntese de ATP em trs stios ativos.

Quando o componente F1 est conectado ao componente F0, a TPsintase (F0F1ATPase) catalisa a sntese de ATP No entanto, quando o componente F1 liberado para a matriz mitocondrial ocorre uma ao contrria sua funo normal, ele catalisa a hidrlise do ATP (o reverso da sntese).A formao e a liberao de ATP ocorre em trs etapas 1.Uma molcula de ADP e uma molcula de P ligam-se ao stio 0 (aberto) 2.A passagem de prtons para o interior atravs da membrana mitocondrial interna causa mudanas na conformao dos stios catalticos A conformao aberta (0) contendo ADP e recentemente ligado torna-se um stio frouxo (L) 0 stio frouxo, j preenchido com ADP e P, torna-se um stio firme (T) o stio T contendo ATP converte-se em stio O (aberto) 3.0 ATP liberado do stio aberto, o ADP e P, condensan-se para formar ATP no stio firme (T).

C. Transporte ativo do ATP, ADP e P atravs da membrana mitocondrial


Para que essas molculas atravessem a membrana necessria a presena da ATP-ADP trans/ocase (trans/ocador de AJJP ATP) uma protena irntocondrial transportadora de ons e metablitos carregados que impelida pelo potencial de membrana. O segundo sistema de transporte de membrana a fosfatotrans locase, que promove a entrada de um P e um H (prton) para o interior da matriz (sistema de simporte PH ). que atua em conjunto com a ATPADP-translocase A ao combinada desses dois transportadores promove a troca do ADP e P citoslicos pelo ATP da matriz mitocondrial com o ganho lquido de um H no espao intermembrana

D. Nmero de transportadora

ATP

gerados de

via

cadeia mitocondrial eltrons

A relao precisa entre o nmero de prtons que retornam para a matriz mitocondrial atravs da F1 F0 ATP sintase e o nmero de ATP gerados permance incerto Existe o consenso de que trs prton voltam para a matriz para cada ATP gerado Tambem acredita-se que o par de eltrons que entra na cadeia transportadora a partir do NADH atravs dos Complexos 1, III e IV resulta na translocao de 10 prtons (as estimativas variam entre 9 e 12 prtons) para o espao intermembrana O retorno desses 10 prtons por meio da ATP-sintase promove a sntese de 2,5 ATP FDH2 que se oxida no complexo II sem passar pelo Complexo 1, transloca seis eltrons para o espao intermembrana O retorno desses 6 prtons por meio da ATP-sintase sintetiza l,5 ATP A razo P O uma medida do nmero de ATP sintetizados por tomo de oxignio utilizado, ou por mol de gua produzida. Estudos recentes

confirmaram os valores (2,5 e 1,5) para a razo PIO e, portanto, no correspondem aos valores anteriormente usados (3 e 2, respectivamente) O transporte do fosfato para a matriz resulta em um ganho lquido de um prton Desse modo, assumindo que 10 prtons so bombeados para fora da matriz mitocondrial e quatro prtons retornam para cada ATP sintetizado, 10/4 molculas de ATP so produzidas para cada dois eltrons liberados do NADEI para 02 na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons Clculo similar mostra que 6/4 molculas de ATP so produzidas por eltrons emanados do FADEI2

E. Regulao da fosforilao oxidativa


A velocidade do transporte de eltrons e da fosforilao oxidativa so controlados estritamente pelas necessidades energticas da clula O controle pelo ADP ilustrado pelo fato que a mitocndria s oxida o NADEI e o FADEI2 quando houver disponibilidade de ADP e P como substratos para a fosforilao Os eltrons no fluem pela CMTE at o oxignio, a menos que o ADP seja simultaneamente fosforilado a ATP A velocidade da fosforilao oxidativa limitada pelo quociente de ao das massas [ATP]/[ADP][P] Ou seja, a ATPsintase inibida em altas concentraes de ATP e ativada quando as concentraes de ADP e P esto elevadas A ATPsintase inibida por altas concentraes de ATP e ativada por teores de ADP e P elevados As quantidades relativas de ATP e ADP intramitocondrial so controladas por duas protenas transportadoras presentes na membrana interna o transiocador de ADPATP e o carreador de fosfato (ver acima) O trans locador de DPTP uma protena dimrica responsvel pela troca 1 1 do ATP intramitocondrial pelo ADP citoplasmtico Como o ATP possui uma carga negativa a mais que o ADP, o transporte do ATP para o exterior e do ADP para o interior da mitocndria so favorecidas O transporte de I-12P04 junto com um prton mediada pela fosfato-translocase, tambm conhecida como I-12P04 /1-1 simporte (movem solutos atravs da membrana na mesma direo) O transporte de 4 prtons para o interior necessrio para a sntese de cada molula de ATP. 3 para dirigir o rotor ATP-sintase e 1 para dirigir o transporte do fosfato para o interior

F. Desacopladores da fosforilao oxidativa


Os desacopladores da fosforilao oxidativa so substncias presentes na membrana mitocondrial interna que dissipam o gradiente de prtons ao trazerem novamente os prtons do espao intermembrana para a matriz mitocondrial, contornando a ATP sintase Aumentam a permeabilidade dos 1-1 e so capazes de dissociar a fosforilao oxidativa do transporte de eltrons

G. Desacoplamento do transporte de eltrons e termognese


Recm-nascidos, animais que hibernam e animais adaptados ao frio necessitam maior produo de energia que a normalmente produzida pelo metabolismo Os animais de sangue quente usam o calor para manter a temperatura do corpo Sob condies normais, o transporte de eltrons e a

sntese de ATP esto intimamente acoplados de tal forma que o calor produzido mantido ao mnimo No tecido adiposo marrom, a maior parte da energia produzida pela CMTE no empregada para formar ATP Em lugar disso, ela dissipada como calor (Esse tecido tem cor marrom devido ao grande nmero de mitocndrias que contm) Ao redor de 10% da protena na membrana mitocondrial interna constituda de termogenina ou protena desacopladora que permite que os prtons retornem matriz sem passar pelo complexo F0F1. Desse modo, quando a termogenina est ativa, a energia de oxidao no conservada na forma de ATP mas dissipada como calor A protena desacopladora ativada quando ela se liga a cidos graxos O processo de gerao de calor na gordura marrom, chamado termognese sem tremor, regulado pela noradrenalina (na termognese com tremor, o calor produzido pela contrao muscular involuntria) A noradrenalina, um neurotransmissor liberado por neurnios especializados que terminam no tecido adiposo marrom, inicia um mecanismo de cascata que hidroliza molculas de gordura Os cidos graxos produzidos por hidrlise das gorduras ativam a protena desacopladora A oxidao de cidos graxos continua at cessar o sinal de noradrenalina ou at que as reservas de gorduram acabem

H. Transporte de eltrons do citosol para a mitocndria


O NADEI produzido na gliclise no pode ser utilizado diretamente pela cadeia mitocondrial . Como a gerao de NADEI ocorre no citosol e a membrana mitocondrial interna impermevel a essa substncia, possvel transportar somente os eltrons do NADEI para a mitocndria por um dos sistemas de circuitos. 1. Lanadeira. Est presente nos msculos e crebro dos mamferos, e emprega a enzima 3 fosfoglicerol desidrogenase que catalisa a reduo da diidroxiacetona fosfato pelo NADEI para originar 3 fosfoglicerol . A dndroxiacetonafosfato , ento, transferida de volta para o citosol . Dudroxiacetona. Circuito glicerol-fosfato. O NADH citoslico reduz a dhdroxiacetona-fosfato a glicerol3fosfato em reao catalisada pela glicerol 3fosfato-desidrogenase citoslica. A reao reversa emprega uma flavoproteina ligada superfcie externa da membrana interna que transfere os eltrons para a coenzima Q (ubiquinona). 2. Lanadeira . Est disponvel nas clulas hepticas, cardacas e renais e de outros tecidos. Nesse sistema, o NADEI citoslico reduz o oxaloacetato a malato pela malato desidrogenase extramitocondrial. O oxalacetato formado transformado em aspartato que pode atravessar a membrana Este sai da mitocndria e, no citosol, regenera o oxaloacetato regenerado na mitocndria transfere os eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons, onde forma ATP. O NADH citoslico reduz o oxaloacetato a malato., que transportado atravs da membrana interna para a matriz mitocondrial. A reoxidao do malato gera NADH que transfere os eltrons para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons. A operao contnua do circuito necessita o retorno do oxaloacetato para o citosol O oxaloacetato citoslico regenerado por meio de reaes de transaminao tanto mitocondriais como citoslicas. A proporo de cada

lanadeira varia para cada tecido O fgado utiliza, principalmente, a malatoaspartato, enquanto certas clulas musculares so mais dependentes do circuito do glicerol-fosfato.

8.5 Rendimento da oxidao completa da glicose


Cada molcula de glicose completamente oxidada a CO2 e 1-120 pelas vias da gliclise, utilizando o circuto malato/aspartato gera 32 molculas de ATP aceitando os novos valores para a relao PIO. - Fosforilao oxidativa Balano de ATP formados pela completa oxidao da glicose a CO2 na gliclise e no ciclo do cido ctrico Reaes ATP/m 01 A utilizaodo circuto glicerol-fosfato encontrada no msculo esqueltico e no crebro, apenas 3OATP so formados. A oxidaio da glicose a CO2 e 1-120, libera 2870 kJmol 1 A energia livre para a sntese de 32 ATP corresponde a 32 x 30,5 = 976 kJmol 1. A eficincia termodinrnica de formao de ATP a partir da glicose 976 x 100/2870 = 34%.

8.6 Estresse oxidativo


Algumas vezes, o oxignio pode aceitar eltrons para formar derivados instveis, conhecidos como espcies reativas de oxignio (ROS). Como os ROS reagem facilmente com vrios componentes celulares, a sua ao pode lesar clulas de modo significante Nos organismos vivos, a formao de ROS geralmente mantida em quantidades mnimas por mecanismos antioxidantes. Em certas ocasies, denominadas coletivamente como estresse oxidativo, os mecanismos antioxidantes so contornados com a ocorrncia de leso oxidativa A leso ocorre principalmente por inativao enzimtica, despolimerizao polissacardica, leses oxidativas no DNA e rompimento das membranas biolgicas. Alm da contribuio aos processos de envelhecimento, a leso oxidativa foi relacionada a um grande nmero de doenas.

A. Espcies reativas de oxignio


As propriedades do oxignio esto diretamente relacionadas com sua estrutura molecular. A molcula de oxignio diatmica um diradical. Um radical um tomo ou grupo de tomos que contm um ou mais eltrons no-emparelhados Dioxignio um diradical porque possui dois eltrons noemparelhados. A I-IO formada como resultado da transferncia sequencial de 4 eltrons para o 2 Durante o processo, vrios ROS so formados A citocromooxidase captura os intermedirios reativos em seu stio ativo at que todos os 4 eltrons tenham sido transferidos para o oxignio Entretanto, os eltrons podem escapar da via

de transporte de eltrons e reagir com o para formar ROS. Sob circunstncias normais, os mecanismos antioxidantes de defesa celular miniminizam as leses ROS tambm so formados durante processos no enzimticos. O primeiro ROS formado durante a oxidao do oxignio o radical superxido. A maioria dos radicais superxidos so produzidos na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons pelos eltrons derivados do ciclo Q no complexo III e pela flavina NADHdesidrogenase. O radical superxido atua como nuclefilo e tanto como agente oxidante como agente redutor. Devido as suas propriedades de solubilidade, o 2 causa considervel leses oxidativas aos componentes fosfolipdicos da membrana. Quando gerado em meio aquoso, o 02 reage consigo mesmo para formar 2 e perxido de hidrognio. A limitada reatividade do H2u2 permite a sua passagem atravs de membranas e torna-se grandemente disperso A reao subsequente do 112O2 com o o Fe2 resulta na produo do radical hidroxila, uma espcie altamente reativa. 8 Fosforilao oxidativa

B. Mecanismos enzimticos antioxidantes


As principais defesas enzimticas contra o estresse oxidativo so: superxido dismutase, o glutationa peroxidase e a catalase A ampla distribio celular dessas enzimas previne a ao de espcies de oxignio reativa.. 1. Superxido-dismutase (SOD). uma classe de enzimas que cataliza a formao de 1-1202 e 02 a partir do radical superxido 202-t-2H >H202+02 Existem duas formas principais de SOD. Em humanos ocorre no citoplasma a isoenzima CuZn Uma isoenzima contendo Mn encontrada na matriz mitocondrial. 2. Glutationaperoxidase. uma enzima chave no sistema responsvel pelo controle dos nveis de peroxidase celular A enzima contm selnio e A enzima catalisa a reduo de vrias substncias pelo agente redutor glutationa (C+SEI) Alm da reduo do 1-1202 pera formar gua, a glutationa-peroxidase transforma perxidos orgnicos em lcoois. Vrias enzimas auxiliares mantm a funo da glutationaperoxidase A 0514 regenerada a partir do OSSO pela glutationa-redutase. O NADPEI necessrio para a reao fornecido principalmente pela via das pentoses-fosfato. O NADPEI tambm produzido por reaes catalisadas pela isocitrato-desidrogenase e pela enzima mlica. 3. Catalase. uma enzima contendo heme que emprega o JJ202 para oxidar outros substratos. Quantidades abundantes de catalase so encontradas nos peroxissomos, ricos em 14202 gerados em vrias reaes excesso de 1-1202 convertido em gua pela catalase.

C. Molculas antioxidantes
Os organismos vivos usam molculas antioxidantes para se autoproteger dos radicais.

Resumo
1 A maioria das reaes que captam ou liberam energia so reaes de oxidao-reduo Nessas reaes, os eltrons so transferidos entre o doador de eltrons (agente redutor) e o aceptor de eltrons (agente oxidante). Em algumas reaes, somente os eltrons so transferidos, em outras, tanto os eltrons como os prtons so transferidos A tendncia de um par redox cornungado em perder um eltron chamado potencial redox Os eltrons fluem espontaneamente do par redox eletronegativo para o mais positivo. Nas reaes redox favorveis o AE positivo e AG negativo 2 O oxignio empregado pelos organismos aerbicos como aceptor terminal de eltrons na gerao de energia Vrias propriedades fsicas e qumicas o tornam capaz desse papel Alm de sua disponibilidade, o oxignio difunde facilmente atravs das membranas celulares e facilmente aceita eltrons 3 As molculas de NADH e FADH2 produzidas na gliclise, f3-oxidao dos cidos graxos, oxidao de alguns aminocidos e ciclo do cido ctrico geram energia na cadeia mitocondrial transportadora de eltrons A via consiste de uma srie de carreadores redox que recebem eltrons do NADH e FADH2 No final do caminho os eltrons, juntamente com os prtons so doados para o oxignio para formar H20 -1 Durante a oxidao de NADH, existem trs etapas na quais a energia liberada suficiente para sintetizar ATP So elas as etapas 1. III e IV 5 A fosforilao oxidativa o mecanismo no qual o transporte de eltrons est acoplado para a sntese de ATP De acordo com a teoria quimiosmtica, a criao de um gradiente de prtons que acompanha o transporte de eltrons est acoplado a sntese de ATP 6 A completa oxidao de uma molcula de glicose resulta na sntese de 29,5 a 31 ATP, dependendo do circuito (lanadeira) de eltrons utilizado, o circuito glicerol-fosfato ou o circuito malato-aspartato, para transferir os eltrons do NADH citoplasmtico para a cadeia mitocondrial transportadora de eltrons 7 O uso de oxignio pelos organismos aerbicos relaciona-se com a produo de ROS (espcies reativas de oxignio). O ROS formado porque as molculas de diradical de oxignio aceita um eltron por vez Exemplos de ROS incluem o radical superxido, perxido de hidrognio, radical hidroxila e sing/et oxigen O risco da presena de elevado contedo de ROS mantido ao mnimo por mecanismos celulares de defesa antioxidante

Referncias
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