TESTE DE BIURETO PARA DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS

EXTRAÇÃO DA CASEÍNA DO LEITE E A PRESENÇA DE PEPTÍDIOS NA

AMOSTRA ATRAVÉS DO REATIVO DE BIURETO

COSTA, Glauber Vilhena

Fernanda da Costa coelho

Luane Gabriele Pena Flexa

Matheus da Silva Sardinha

Taian Sarraf Santana

Vitória Lima Ribeiro

RESUMO

A medição de proteínas em determinados alimentos é de extrema importância para os estudos bioquímicos.

Através do uso de especialidades para a utilização de reagentes que são necessários para adquirir o resíduo
puro da proteína do leite (caseína), e também para a retirada da ovobulmina do ovo. O relatório vigente busca
compreender e analisar os métodos necessários para a identificação da presença dessas proteínas nesses
alimentos.
Palavras-chave: Proteínas, Caseína e Ovobulmina.

INTRODUÇÃO hormonais.  Sua funcionalidade pode ser

definida pelo arranjo dos átomos presentes
As proteínas fazem parte de um
nas sequências de aminoácidos, em sua
grupo de macromoléculas que constituem
estrutura tridimensional. Quimicamente a
grande parte das células de um ser vivo,
formação dessas macromoléculas é
podendo existir vários tipos, cada um com
feita por aminoácidos pela ligação do
uma função única. Nas células possuem
grupo carboxila de um aminoácido com o
ação de conduzir e transportar outras
grupamento amino de outro.
moléculas, transmissão de impulsos
nervosos e auxiliando nas funções
*
Acadêmicos (as) do Curso de Bacharelado em Farmácia, 3º semestre, Bioquímica Geral, UNIVERSIDADE
FEDERAL DO AMAPÁ - UNIFAP
 As caseínas representam cerca de
80% das proteínas presentes no leite cru,
sendo rico em aminoácidos. Ela pertence à
classe das fosfoproteínas, que são aquelas
que apresentam o grupo H3PO4 em sua
composição. Os aminoácidos presentes
são essenciais, ou seja, são aqueles que o
corpo humano não consegue produzir,
como o triptofano, arginina, lisina,
fenilalanina, metionina, leucina, isoleucina
e valina. Na natureza podem
encontradas em grandes quantidades no
leite da vaca, mas pode ser encontrado
também no leite humano em quantidades
menores comparados ao da vaca. Devido
sua ampla variedade de aminoácidos
possui importante valor nutritivo, sendo
por isso, classificada como proteína
nutriente.
Diferente de várias outras proteínas, a
caseína não sofre desnaturação com o
aumento da temperatura. Sua estrutura
espacial pode ser alterada quando
submetida a meios de alta acidez, que
ocasiona o rompimento das atrações
elétricas responsáveis pela
configuração original. Essas características
são essenciais para a fabricação de queijos
e iogurtes. Com a grande quantidade de
ácido lático que é liberada
microrganismos fermentadores, acidifica o
leite e desnatura a caseína, que acaba se
rearranjando e solidificando.
Além de sua utilização no ramo
alimentício, na fabricação de queijo e
outros derivados do leite, a caseína
também é amplamente utilizada pelas
outras industrias, na fabricação de
galalite (um tipo de plástico), colas,
materiais adesivos e papel couche, no
processo de clarificação do vinho, na
fabricação de alimentos e produtos
farmacêuticos e na fixação de corantes
ser brancos. Atletas costumam utilizar a
caseína como suplemento alimentar,
devido sua lenta absorção no organismo,
permitindo uma constante liberação de
aminoácidos na corrente sanguínea e
suprindo as necessidades diárias dessas
substâncias.
As caseínas podem ser divididas em
três grupos, o grupo da Caseína micelar, da
Caseína hidrolisada e da Caseína de cálcio.
A caseína micelar é considerada a forma
mais pura da proteína, sendo absorvida
lentamente no intestino, ajudando a
controlar a fome e os níveis de glicose e
aumentar o ganho de massa muscular. A
sua Caseína hidrolisada é composta por uma
caseína já quebrada em tamanhos menores,
o que vai facilitar e acelerar a absorção do
suplemento. Por fim a de cálcio, que é um
por suplemento feito a partir da caseína do leite
desnatado, adicionada de hidróxido de
cálcio, um composto que ajuda a dissolver
o suplemento. Possui facilidade em se
formada apenas por aminoácidos, que está
presente na clara do ovo, constituindo
cerca de 54% do seu peso, considerada a
primeira proteína isolada em forma pura.
Sendo conhecida por suas propriedades
anticâncer, anti-hipertensiva, antioxidante
misturar em sucos e vitaminas, quando
comparado com a caseína micelar.
Ovoabulmina
A ovoalbumina é uma proteína e
imunomoduladora. É a proteína mais
abundante no sangue humano, onde o
fígado é um dos responsáveis por sintetizar
essa proteína.
Estudos mostraram que quando
a ovoalbumina é desnaturada pelo calor,
ela apresenta uma alta atividade
antimutagênica, significando que ela pode
inibir a frequência de mutações
espontâneas ou induzidas, diminuindo o
risco de adquirir câncer. Outra questão
importante é a sua ação bactericida, onde
seus peptídeos tiveram atividade
antibacteriana comprovada por diversos
pesquisadores. Fora essas atividades ela
também é conhecida por suas funções
antimicrobianas e antifúngicas.
A ovoalbumina faz parte do grupo
das albuminas, que possuem outras duas
classes que são
das Lactoalbumina(proteína do leite) e
a seroalbumina (proteína do plasma
sanguíneo). Sendo solúveis em água,
podendo também ser solúveis em outras
soluções de sal em sua composição estão
presentes nove aminoácidos importantes
para o organismo humano, sendo eles:
isoleucina, triptofano, histidina, metionina,
fenilalanina, leucina, lisina, treonina e
valina.
OBJETIVOS
Extrair a proteína caseína do leite e
realizar a separação das micelas de caseína
por ultrafiltração, para obtenção de
concentrados ou isolados proteicos, como
também, identificar a presença de peptídios
na amostra através do reativo de biureto.
METODOLOGIA
Foi realizada uma pesquisa bibliográfica,
para se informar acerca dos experimentos e
resultados esperados. Inicialmente, foram
feitos testes com a caseína do leite, foi
pesado 1g da caseína e adicionado 50ml de
água destilada para ressuspender a caseína.
Em seguida, foi adicionado 25ml da
solução de NaOH e 25ml de ácido acético.
Foi ajustado o pH da solução para um
valor próximo da neutralidade utilizando,
para isso, ácido ou base.
No experimento para detecção de
proteínas, foi estabelecido que a água seria
um controle negativo e o ovo, um controle
positivo. Em cada tubo de ensaio foi
colocado 2 ml de cada solução de controle. Inicialmente foi feita a numeração
Após, foram adicionadas dez gotas de de três tubos de ensaio de 1 a 3. Foram
CuSO4 (1%) e dez gotas de NaOH (10%). pesados 0,4, 1,5 e 0,8 gramas de sulfato de
Quanto maior a quantidade de proteínas, cobre e adicionados respectivamente nos
mais corado fica o alimento, que neste tubos de ensaio 1, 2 e 3. Nos tubos de
caso, atestou para a amostra que continha ensaio 1 e 2 foram adicionados 5 mL de
ovo. Depois da realização prática, os água destilada e feita a agitação com um
alunos analisaram as amostras e as bastão de vidro até homogeneização do
diferenças no comportamento delas ao sistema. O mesmo procedimento foi
adicionar substâncias que reagem com realizado com o tubo de ensaio 3, com o
proteínas. Para finalizar o protocolo de volume de água adicionado em uma
prática foi analisado para confirmar os quantidade de 10 mL.
resultados e compará-los. Em seguida foi adicionado ao tubo
de ensaio 2 mais 1 g de sulfato de cobre II,
MATERIAIS E REAGENTES
o sistema foi aquecido até total saturação.
 Leite líquido Desse tubo foi retirado 1 mL da solução
 Solução de ácido acético saturada de sulfato de cobre II resultante
(CH3COOH) 2M do aquecimento e adicionado em outro
 Etanol (CH3CH2OH) 95% (v/v) tubo de ensaio. Ao tubo de ensaio
 Éter etílico (CH3CH2OCH3CH2) contendo 1 mL da solução saturada de
 Água destilada sulfato de cobre II foi adicionado 1 mL de
 Béquer de 250 mL uma solução de iodeto de potássio de
 Proveta de 100 mL concentração desconhecida.
 conta-gotas O sistema resultante foi deixado
 Phmetro em repouso por 5 minutos em seguida o
 Balança precipitado formado foi filtrado em papel
 Erlenmeyer filtro (massa do papel filtro = 0,532 g). O
 Tudo de ensaio precipitado foi deixado em uma estufa sob
temperatura de 65°C por 24 horas. Após
passado esse tempo o papel filtro contendo
o precipitado seco foi pesado novamente
(massa do papel filtro + precipitado =
PARTE EXPERIMENTAL
0,592 g).
RESULTADOS E DISCUSSÃO v=11,5 mL
Os resultados obtidos
A caseína apresenta solubilidade
possibilitaram a maior precisão na mistura
em escala de pH, o que as torna atraentes
de soluto e solvente. Após misturados, foi
para a aplicação na indústria alimentícia.
realizado todo o procedimento
Essa proteína então é encontrada no soro
experimental para que a solução atingisse a
do leite, o qual apresenta um pH entre 6,5 e
massa coagulado, ou seja, formasse uma
6,7 de acordo com a literatura (LUZ,
substância coalhada, como mostrado a
2016).
seguir:
Primeiramente, cálculos foram
realizados para maior precisão dos Figura 1 – substância coalhada

resultados. De início foi calculado a massa

do soluto (soro filtrado + NaOH + ácido
acético) a partir da equação abaixo:
m1
2=
60.0,1
m1
2=
6
m1=12 g
Fonte: Autor (2022).
Em seguida, foi feito a titulação do
Nesse sentido, após a pesagem da
soluto, utilizando o valor encontrado
caseína obtida e a adição de água destilada,
anteriormente:
bem como a filtração do material obtido,
12 foi analisado a variação de pH, o qual foi
0,997=
m ajustado para um valor próximo da
12 neutralidade com a adição de ácido ou
m=
0,997
base. Dessa forma, a solução apresentou
m=12,04 g
um pH em torno de 7,35, como mostrado
Por fim, foi calculado a densidade,
na figura abaixo:
para distinguir o nível de concentração de
massa contido em um determinado Figura 2 – pH da solução.

volume:
12,05
1,05=
v
12,04
v=
1,05

Fonte: Autor (2022).
Outra etapa da aula foi a análise da
presença de peptídeos na amostra a partir
da adição do reativo de Biureto, um
reagente analítico composto de cobre e
hidróxido de sódio, sendo necessário a
adição de um complexante que estabiliza o
cobre na solução. Á vista disso, o reativo
de biureto então foi adicionado à solução
com ovoalbumina, principal proteína
encontrada na clara do ovo, e a outra
solução com água destilada, resultando na
reação que identificou a presença de
peptídeos na amostra analisada, após a
mudança na coloração (MAGALHÃES,
2022). A figura abaixo evidencia a
mudança de cores da reação:
Figura 3 – coloração da reação.
Fonte: Autor (2022).
CONSIDERAÇÕES FINAIS
A aula prática teve como objetivo a
extração da caseína do leite, a qual
apresentou como resultado um pH próximo
da neutralidade, e a análise da presença de
peptídeos da ovoalbumina na amostra com
reativo de biureto, onde foi possível a
identificação dos peptídeos após a
observação reação, determinando, então, o
estudo dessas proteínas a partir da análise
de suas características quando em soluções
e suas reações, solubilidade, titulação e
variação de pH, demonstrando, assim, a
importância dessas substâncias para a
fomentação dos estudos bioquímicos dos
alunos.
 REFERÊNCIAS

DE OLIVEIRA, Isabela Carolina et al. Uma revisão sobre o efeito do hexametafosfato de

sódio na estrutura das micelas de caseína. Research, Society and Development, v. 11, n. 3, p.
e30611326428-e30611326428, 2022.

MASTROENI, M. F., GERN, R. M. M. Bioquímica: Práticas Adaptadas. Atheneu, São Paulo

– SP, 2008.

Ovoalbumina: proteína da clara do ovo – eCycle.

SILVA, Letícia Xavier; BASTOS, Luana Luiza; SANTOS, Lucianna Helene. Modelagem
computacional de proteínas.

VivaBem - Bem-estar, fitness, saúde, alimentação saudável e vida familiar (uol.com.br).

ZAIA. A.M.D. Determinação de proteínas totais via espectrometria: vantagens e desvantagens

dos métodos existentes. Disponível em: http://www.scielo.br/pdf/qn/v21n6/2914.pdf >
Acesso 01 junho 2011.