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Caracterizacin de Materiales y Defectos

Tcnicas de Separacin Cromatogrfica

TCNICAS DE SEPARACIN. CROMATOGRAFA


1.- Introduccin Cromatografa y mtodos de separacin clsicos. Separacin de componentes de una muestra. No son tcnicas de caracterizacin propiamente dicha Las propiedades de los materiales dependen de los componentes y de la proporcin existente entre ellos No dan informacin de la naturaleza de los componentes, necesitan otros mtodos de anlisis.

1.1.- Cromatografa y ciencia de materiales Separacin de compuestos relacionados con la sntesis de materiales Evaluacin de la actividad de materiales catalizadores y soportes slidos en sntesis orgnica. Desarrollo de nuevos materiales empleados en cromatografa Seguimiento de una sntesis
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2.- Lugar que ocupa la cromatografa en la caracterizacin de materiales Muestra


NO
Hay que solubilizarla?

SI NO

Es soluble? Es voltil?

Digestin

NO

Descompone trmicamente?

NO

Forma plasma?

NO

Otros mtodos

SI

SI GAS SI

SI SI SI

SI

DISOLUCIN SI

Hay que separar componentes?

Cromatografa

Hay que separar componentes?

NO

NO

Tcnicas y Mtodos de anlisis


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3.- La cromatografa. Conceptos y definiciones


Cromatografa: mtodo fsico de separacin Proceso cromatogrfico Fase estacionaria (slido, gel o lquido). Lecho cromatogrfico o sorbente Fase ligada Fase inmovilizada Fase mvil (gas portador, eluyente) Cromatografa lquida Cormatografa de gases Cromatografa con fluido supercrtico Eluir Efluente Muestra Componentes Zona o banda Cromatograma Cromatgrafo

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3.1.- Mecanismos de separacin a) Separacin por adsorcin (cromatografa de adsorcin) Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie de un slido activo (componentes con polaridad baja o media) b) Separacin por reparto (cromatografa de reparto) Diferente solublidad en fases estacionaria y mvil (Componentes con polaridad media o alta)

Coeficiente de Reparto = K d =

[A] Fase Estacionaria

[A] Fase mvil

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3.1.- Mecanismos de separacin c) Separacin por tamao molecular (Cromatografa de permeacin de gel, de tamiz molecular o de exclusin por tamaos). Parmetros de columna - Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados - Lmite de exclusin: M mnimo a partir del cual las macromolculas no experimentan retencin.
Molculas pequeas Molculas grandes

Partcula polimrica (gel) con poros Pared de columna cromatogrfica

Disolvente

Las molculas pequeas penetran en los poros de las partculas de gel, por lo que necesitan ms tiempo para salir al final de la columna. Las molculas grandes, en cambio, al no penetrar en las partculas de gel se mueven con el disolvente a una velocidad mayor de elucin y salen antes de la columna. Por tanto, a mayor masa molecular menor tiempo de elucin. Este mtodo permite separar por tamaos moleculares siendo posible obtener incluso distribuciones de masas moleculares a distintos tiempos de elucin.

Flujo del disolvente

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3.1.- Mecanismos de separacin d) Separacin por Intercambio inico

La separacin se basa principalmente en la diferente afinidad para el intercambio de iones de los componentes de la muestra. + + + - + + + + Especies positivas Especies negativas

+ -

+ + +

+
+ -

Partculas slidas (matriz) cargada positivamente

Pared de columna cromatogrfica

Las especies cargadas negativamente se unen a la matriz slida cargada positivamente y son retenidas, mientras que las especies positivas son rechazadas. De esta manera en funcin de la carga las especies se eluyen a distintos tiempos dando lugar a la correspondiente separacin. La elucin de las especies retenidas se consigue cambiando el pH del disolvente hasta igualarlo a su punto isoelctrico o hasta invertir su carga neta.

+ + -

Una separacin puede estar basada en la conjuncin de diversos mecanismos


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+
-

Flujo del disolvente

Disolvente

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3.2.- Mtodos de anlisis cromatogrfico a) Anlisis por desarrollo (cromatografa en papel o capa fina) b) Anlisis por elucin (cromatografa de gases, cromatografa lquida) c) Anlisis frontal d) Anlisis por desplazamiento

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ANLISIS POR DESARROLLO


Cromatografa en columna Cromatografa plana

Fase mvil

Fase Mvil

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Anlisis por elucin


Muestra Fase Mvil Cromatograma

Sorbente

Volumen de fase mvil Placa Porosa Efluente


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Fase Mvil Con la muestra A+B+C

Anlisis frontal

Cromatograma

A+B+C A+B A A Placa Porosa Efluente


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A + B

A + B + C

Volumen de fase mvil

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3.3.- Clasificacin de acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico a) Cromatografa en columna - Columna empaquetada - Columna tubular abierta b) Cromatografa plana (o de lecho abierto) - Cromatografa en papel - Cromatografa en capa fina (TLC)

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3.4.- Clasificacin de acuerdo con el estado fsico de la fase mvil a) Tcnicas cromatogrficas - GLC - GSC - LLC - LSC b) Cromatografa de gases (siempre en columna) c) Cromatografa Lquida (en columna o sobre plano) - Cromatografa Lquida de Alta Eficacia o de Alta Presin, HPLC d) Cromatografa con fluido supercrtico

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3.5.- Tcnicas especiales a) Cromatografa con fase invertida b) Cromatografa con fase normal c) Anlisis isocrtico (composicin F. mvil constante) d) Elucin con gradiente (Composicin F. mvil cambia de forma continua) e) Elucin en etapas o escalonada (Composicin F. mvil cambia de

forma escalonada)
f) Cromatografa bidimensional (etapas adicionales de separacin)

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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa a) Retencin = capacidad real de la fase estacionaria para retardar la salida de un componente. - si caudal constante v t - tM = tiempo muerto - tR = tiempo de retencin - tR = tiempo de retencin corregido = tR - tM

Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa b) Factor de capacidad (retencin de un compuesto con independencia del caudal)

t'R t R t M K'= = tM tM
c) Dispersin de bandas

Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

Parmetros caractersticos de un pico gaussiano


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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa d) Eficacia - Nmero de platos tericos

Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

tR n=

tR n = 16 Wb

Debe evitarse el ensanchamiento de bandas. Dependen de caractersticas de -Altura equivalente de un plato terico = L/n columna, velocidad de fase mvil, etc. (Para comparar columnas de diferente longitud)
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tR n = 5.545 W h

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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa e) Separacin y resolucin - Retencin relativa

t 'R 2 = t 'R1
2t Rs = Wb1 + Wb 2

Sistema cromatogrfico

- Resolucin

Eficacia de columna

Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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4.- Tcnicas cromatogrficas no instrumentales


4.1.- Cromatografa en columna El gradiente de presin necesario para el desplazamiento de la fase mvil a travs de la fase estacionaria se origina por gravedad.

Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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4.2.- Cromatografa en capa fina La elucin se consigue por el movimiento capilar ascendente de la fase mvil a) aplicaciones analticas

Rf =

y x

Rx =

y x

Aplicacin

Aplicacin

y y x x x

Sustancia patrn Frente del disolvente Frente del disolvente

b) aplicaciones preparativas

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5.- Mtodos instrumentales en cromatografa


5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido) Distribucin de un componente entre una fase mvil gaseosa y una lquida inmovilizada sobre la superficie de un slido inerte. Componentes bsicos - Gas portador segn detector (He, Ar, N2, CO2, H2) - Sistema de inyeccin de muestra - Columnas
Control de caudal

Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

Medidor de caudal
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5.- Tcnicas instrumentales en cromatografa


5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)

Mejora de un cromatograma por programacin de temperatura en columna

Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido) Detectores

CARACTERSTICAS DEL DETECTOR IDEAL Adecuada sensibilidad Buena estabilidad y reproducibilidad Una respuesta lineal para los componentes que se extienda a varios rdenes de magnitud Intervalo trmico de trabajo (25 400)C Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del caudal Alta fiabilidad y manejo sencillo Respuesta semejante para todos los componentes No destructivo

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5.1.- Cromatografa Lquido)

de

gases

(Gas-

Detectores DETECTOR DE IONIZACIN DE LLAMA - Componente + H2/aire + encendido elctrico iones + eDiferencia de potencial entre extremo de quemador y electrodo colector (se mide la corriente que pasa a su travs) - Iones producidos n tomos de carbono sensible a masa - C-OH; -C=O; -X; -NH2 pocos iones generan
Efluente de la columna

+ -

Aire

H2

- Insensible a: H2O; CO2; SO2 y NOx -Detector de los ms utilizados para el anlisis de compuestos orgnicos
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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido) Detectores DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TRMICA - Cambios de conductividad trmica del gas portador por la presencia de analito. - Sensor = hilo de Pt, Au W calentado (a potencia elctrica cte) cuya T depende del gas circundante (su R cambia) - Caractersticas:

* Simple * Amplio rango dinmico lineal (~ 105) * Respuesta universal (especies orgnicas e inorgnicas) * Carcter no destructivo * Sensibilidad relativamente baja (~ 10-8 g de soluto/ml de gas portador)

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido) Detectores DETECTOR TERMOINICO - Detector selectivo de compuestos orgnicos con P y N. - Efluente + H2 + llama gas caliente + bola de silicato de rubidio caliente (a 180V respecto colector) Iones Plasma (600 800C)

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido) Detectores DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES - Detector selectivo de halgenos, perxidos, quinonas y grupos nitro. - Efluente + emisor iones (gas portador) + rfaga de electrones Corriente constante que vara en presencia de molculas capturadoras de e-

DETECTOR DE EMISIN ATMICA plasma de He que atomiza y excita el efluente emisin espectros de

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido) Mtodos acoplados - GC/Espectrometra de masas - GC/espectroscopa IR 5.2.- Cromatografa de gases (Gas-Slido) H2S; CS2; NOx; CO; CO2; gases nobles (no se retienen en columnas Gas/Lquido)

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5.- Tcnicas instrumentales en cromatografa


5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) - Alta sensibilidad - Adaptacin a determinaciones cuantitativas - Separacin de especies no voltiles - Separacin de especies termolbiles

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5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin Instrumentacin para la cromatografa de lquidos - Recipientes para la fase mvil y sistemas para el tratamiento de disolventes (eliminacin de O2 y N2) - Filtracin de disolventes - Sistemas de bombeo - Sistemas de inyeccin de muestra - Columnas - Precolumnas -Termostatos - Detectores: i) responden a propiedad de fase mvil; ii) responden a propiedad del soluto.
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5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin Instrumentacin para la cromatografa de lquidos


Figura tomada de: -ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA, T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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6.- Bibliografa
D.A. Skoog, J.J. Leary, Anlisis Instrumental, McGraw-Hill, Madrid (1996) H.H. Willard, L.L. Merritt Jr.,J.A. Dean, F.A. Settle Jr., Mtodos Instrumentales de anlisis, Grupo Editorial Iberoamericana S.A. de C.V., Mxico (1991). TECHNIQUES in liquid chromatography Simpson, Colin F. John Wiley & Sons (1984). Liquid chromatography column theory Scott, Raymond P.W. John Wiley & Sons (1992). Chromatography of polymers : characterization by SEC and FFF American Chemical Society (1993). Handbook of size exclusion chromatography Marcel Dekker (1995). Cromatografa de exclusin por tamaos [Vdeo] Prez Dorado, Angel, CEMAV, Universidad Nacional de Educacin a Distancia (1997). Manual de cromatografa Loro Ferrer, Juan Francisco Gobierno de Canarias, Direccin General de Universidades e Investigacin (2001).

7.- Direcciones URL tiles


http://www.uib.es/depart/dqu/dquo/pau/Cromatograf%92a/chrom10/chrom/GC/concept/ main.htm http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm

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