Onde estará o DNA
CONCLUSÃO: Com esta atividade prática foi possível isolar o ADN e
TEORIA:
Teoria Celular- A célula é a unidade básica estrutural e funcional de
todos os seres vivos. Todos os seres vivos são constituídos por células. Todas
as células provêm de células pré-existentes.
Universalidade do DNA (ácido desoxirribonucleico)- Com os 4 nucleótidos
diferentes ( Adenina (A), Timina (T), Guanina (G), Citosina (C), no ADN, que
podem estar presentes em grande número de vezes e em sequências diferentes,
existe uma grande diversidade de moléculas de DNA. Um determinado codão
(sequência de 3 bases nitrogenadas) tem o mesmo significado para a maioria
dos organismos.
PRINCÍPIOS:
-Nas células eucarióticas o DNA encontra-se dentro do núcleo (cerca de 99%),
mas também no estrema dos cloroplastos e na matriz mitocondrial nas
mitocôncrias (1%).
-O DNA é responsável por toda a atividade celular.
- O DNA é formado por duas cadeias polinucleótidicas, antiparalelas e
enroladas em hélice (dupla hélice).
-Os monómeros do DNA são os nucleótidos que são constituídos por uma
pentose, um grupo fosfato e uma base nitrogenada.
-As bases nitrogenadas que formam o DNA são: adenina, timan, citosina e
guanina.
-Os grupos fosfatos e as pentoses (desoxirribose são hidrofilicos).
-As bases nitrogenadas são hidrofóbicas.
-O DNA está associado a histonas (proteína com função de organização e
estabilização do material genético).
-As células eucarióticas vegetais têm parede celular formada por celulose ,um
polissacarideo de carácter rígido.
-A membrana celular é constituída por fosfolípidos.
-Os detergentes emulsionam lípidos
-Emulsão é a mistura entre dois líquidos imiscíveis em que um deles encontra-
se na forma de finos glóbulos no seio do outro líquido. A estes finos glóbulos
no seio líquido chamamos de micelas
-Emulsão: mistura entre dois líquidos imisciveis obtendo micelas.
-O DNA, no grupo fosfato, apresenta um número elevado de cargas negativas
que tendem a se repelirem.
-Temperaturas altas desnaturam proteínas (enzimas)
-O carmim acético cora os ácidos nucleicos.
-O álcool é menos denso que a água e não miscível
- O NaCl (cloreto de sódio) quando dissolvido em água separa-se em Na+ e em
Cl- .
CONCEITOS:
DNA; Maceração; Lípidos; Banho Maria; Núcleo; Membrana Citoplasmática;
Emulsão; Ácido Nucleico; Célula Eucariótica Vegetal; Bicamada
fosfolipídica; Bases nitrogenadas;
Timina; Adenina; Citosina; Guanina; Grupo fosfato; Parede celular; Celulose;
dupla cadeia polinucleotidica; Ligações fosfodiéster; Membrana nuclear;
Glicidos; Polissacarídeos;
Nucleótidos; Desnaturar; DNAses; Hidrofóbicas; Hidrofilicas ; Histonas
presente nas células e observá-lo macroscopicamente e microscopicamente. É possível isolá-lo a
como poderemos isolá-lo? partir do processo descrito no procedimento. O ADN, nas células
eucarióticas vegetais ( tipo de célula que foram utilizadas) está presente
MATERIAL: • Microscópio ótico
nas mitocôndrias, cloroplastos mas maioritariamente no núcleo .
• Cebola composto
• Água destilada
• Bisturi
• Almofariz • Álcool frio a 96% (5 oC) INTERPRETAÇÃO:
• Sal de cozinha – NaCl (2
• Proveta e 2 tubos de - O almofariz foi usar para macerar o DNA.Deste modo foi possível quebrar
colher de chá)
ensaio as paredes celulares das células eucarióticas vegetais, constituídas por
• Detergente da loiça (3
• Balão de Erlenmeyer celulose , e as membranas citoplasmáticas, assim sendo possível libertar o
colheres de chá)
de 100 ml conteúdo presente nas células sem danificar os núcleos celulares (local onde
• Papel de filtro • Carmim acético está armazenado maior parte do DNA- 99% ) por estes serem demasiado
• Vareta/palito • Funil pequenos.
• Óxido de silício • Máquina fotográfica
digital -O sal foi utilizado para ajudar a manter as proteínas dissolvidas no líquido
(areia)
extraído ,impedindo que elas se precipitassem com o DNA. O grupo de
fosfato ,um dos constituintes de DNA, apresenta um elevado número de
PROCEDIMENTOS:
cargas negativas que tendem a se repelirem e com a adição de sal ,que
1-Cortar pequenos fragmentos de cebola, juntar um pouco
contribuiu com iões positivos (Na+,sódio),a carga ficou neutra, logo houve
de óxido de silício e efetuar a sua maceração no almofariz.
menos repulsão e as moléculas estabilizaram.Assim o DNA foi observado
2-No balão de Erlenmeyer deitar 100 ml de água
mais facilmente.
destilada, 1 colher de chá de sal de cozinha e 2 colheres
de chá de
-O detergente foi utilizado para emulsionar as membranas celulares e as
detergente da loiça. Agitar suavemente a mistura durante
membranas nucleares (ambas formadas por lípidos) e assim o contéudo
cerca de 2 a 3.
celular (incluindo algumas proteínas) é libertado e disperso na solução aquosa
3-Seguidamente adicionar cerca de 50 ml desta mistura
.
ao almofariz (com os fragmentos) e continuar o processo
de
-O objetivo do aquecimento da solução em banho-maria é manter a
esmagamento por mais 2 a 3 minutos.
desorganização entre os fosfolipidos, desnaturar as enzimas presentes nas
4-Colocar o preparado em banho-maria (37oC) durante
células ,especialmente as DNAses, evitando assim que o DNA seja
cerca de 10 minutos.
despolimerizado, o que seria prejudicial à realização da atividade
5-Usando papel de filtro, filtrar através do funil a mistura
experimental.
do almofariz para uma proveta.
6-Marcar com uma caneta duas linhas num tubo de ensaio
-A solução foi filtrada num papel de filtro para ser possível separar as paredes
(uma ao meio do tubo e outra perto do bordo) e transferir
celulares e as membranas citoplasmáticas do restante conteúdo celular
a mistura até à primeira linha.
nomeadamente dos núcleos .
7-Adicionar ao tubo de ensaio álcool frio até à segunda
linha. Fazer escorrer o álcool lentamente pelas paredes do
-Antes da adição do alccol frio à solução foi feita uma marcação com uma
tubo.
caneta no tubo de ensaio, para distinguir as duas fases (solução aquosa e fase
8-Deixar repousar e observar a formação de duas fases:
alcoólica) uma vez que ambas são incolores. O alcool é menos denso do que a
uma superior alcoólica e outra inferior aquosa.
água e por isso a fase acima da marcação é a fase alcoólica.
9-Introduzir uma vareta/palito no tubo de ensaio e, com
-Adição de álcool frio é utilizado para a precipitação do DNA.Assim as
movimentos circulares, procurar misturar as duas fases.
moléculas de DNA que estavam presentes na solução aquosa ascendem.Isto
Os ácidos nucleicos insolúveis no álcool precipitam e
acontece porque o DNA é menos denso que a solução aquosa e mais denso
formam uma massa filamentosa esbranquiçada que
que o álcool. O choque térmico entre a solução aquosa e o alcool frio formou
contém
uma reação gasosa que conduziu à ascensão do DNA no tubo de ensaio ,para
também proteínas e outros materiais.
a fase alcoólica,tornando-o vísivel
10- Retirar um pouco de massa filamentosa (localizada na
fase alcoólica) e dispor numa lâmina juntando-lhe
algumas gotas de Carmim Acético. Fazer o respetivo RESULTADOS:
desenho. (estão na página seguinte)