Trabalho 1: Obteno de Cafena por Extraco das Folhas de Ch

Lgia Figueiredo Gustavo Lopes 28 de Maro de 2006

Resumo Extraiu-se cafena (1,3,7-trimetil-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona) de folhas de ch preto. Para tal, recorreu-se a dois processos de extraco primeiro slido-lquido (levando ebulio uma mistura de gua, folhas e carbonato de clcio) e de seguida lquido-lquido (com diclorometano). O produto obtido foi recristalizado e obteve-se um rendimento inferior a 9,6%. A pureza da cafena foi avaliada pela medio do seu ponto de fuso (223,2-236,5 o C) e comparao com o valor tabelado (235-239 o C). Conclui-se que foi obtido um produto com uma pureza razovel, ainda que com um rendimento baixo.

Introduo

A cafena (1,3,7-trimetil-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona) faz parte da famlia dos alcalides (molculas orgnicas com azoto); mais precisamente a uma classe que ocorre na Natureza, as metil-xantinas (a xantina est representada na gura 1). Outras metil-xantinas importantes so a teolina (3,7-dihidro-1,3-trimetil-1H-purina-2,6-diona) e a teobromina (3,7dihidro-3,7-trimetil-1H-purina-2,6-diona)[5]. A teobromina (encontrada no chocolate) e teolina so duas dimetil-xantinas, com dois grupos metilo, em contraste com a cafena, que possui trs (gura 2). Os principais efeitos siolgicos da cafena no organismo humano so o efeito estimulante, o efeito diurtico e a dependncia qumica. Causa o aumento da taxa metablica, o relaxamento da musculatura lisa dos brnquios, do trato biliar, do trato gastrintestinal e de partes do sistema vascular. Afecta tambm a reparao do ADN ao inibir a aco de protenas 1

INTRODUO
O

HN N O N N

Figura 1: Frmula estrutural da xantina.

O N N N N O N O N N NH O N N HN N O

cafena

teofilina

teobromina

Figura 2: Frmula estrutural de metil-xantinas. afectas ao processo. A cafena pode ser detectada em todo o corpo humano cinco minutos aps o consumo e atinge a concentrao mxima aos 20-30 minutos. metabolizada no fgado e tem uma meia vida de cerca de 3-6 horas. Quando ingerida em excesso, pode causar vrios sintomas desegradveis, incluindo irritabilidade, dores de cabea, insnia, diarreia e palpitaes do corao. A dose letal para um adulto de cerca de 10 g, aproximadamente o contedo em cafena de 100 chvenas de caf ou 50 Kg de chocolate[1]. Esta experincia comummente realizada em disciplinas inciais de qumica orgnica, onde so apresentadas as principais tcnicas de isolamento, puricao e caracterizao de substncias. Face ao objectivo de isolar a cafena das folhas de ch, inicialmente feita uma extraco slido-lquido pretende-se que a cafena, na fase slida, passe para a fase lquida, a gua. As folhas de ch contm, alm de cafena (2-3,5%)[6], tambm polissacardeos como amido e celulose (que constituem a maioria da composio das folhas), aminocidos, taninos e saponinos, entre outros. A solubilidade da cafena em gua de 2,2 mg/ml a 25 o C e de 670 mg/ml a 100

1
o

INTRODUO

C[6], enquanto o amido e a celulose so praticamente insolveis em gua. Por conseguinte, aproveita-se este facto e leva-se uma mistura de gua, folhas de ch e carbonato de clcio (que ser importante num passo posterior) ebulio durante tempo suciente. Embora esta extraco slido/lquido extraia a maior parte da cafena, a soluo conter ainda muitos outros compostos, como os taninos[6, 8]. Para separar essoutros compostos tambm solveis em gua, recorrese a uma extraco lquido-lquido com um solvente no polar o diclorometano. Este separa a cafena1 dos constituintes polares. Os taninos possuem uma polaridade intermdia, pelo que necessrio convert-los em compostos mais polares para que se no dissolvam em diclorometano e sejam separados da cafena. Para este efeito, recorre-se hidrlise bsica da sua funo ster por tratamento com carbonato de clcio[6]:
no solveis em diclorometano

R O(C = O) R + H2 O + CaCO3 ROH + R (C = O)O Ca2+

grupo ster glucose sal de cido glico

As tcnicas de puricao relevantes para este trabalho so a recristalizao e a sublimao. A sublimao da cafena (que acabou por no ser efectuada) permite a obteno de cristais de cafena resultantes da deposio do vapor no papel de ltro. Este processo de puricao ecaz porque a temperatura de ebulio da cafena mais baixa que a das impurezas[7]. Idealmente, este processo deve ser efectuado para a amostra de cafena a presses muito baixas, o que permite a sublimao a temperaturas mais baixas e minimiza a decomposio da amostra[10]. A recristalizao da cafena por meio da acetona (com isolao dos cristais por ltrao trompa) possvel porque o primeiro composto dever ter grande solubilidade no segundo a quente e baixa a frio2 . Por outro lado, as impurezas devero ser solveis a frio. A escolha da acetona tambm apropriada pelo facto de esta no reagir com a cafena.
A solubilidade da cafena cerca de 9 vezes superior no diclorometano do que na gua, o que permite que a cafena migre para a fase orgnica. Enquanto, na gua, a cafena se dissolve principalmente devido a ligaes de hidrognio com pares de electres livres de oxignio e azoto; no diclorometano, estas ligaes do lugar a interaces hidrofbicas do diclorometano com partes hidrofbicas da cafena, como os grupos metilo[3]. 2 Em particular, na recristalizao desta experincia, adiciona-se ainda ter de petrleo soluo em acetona. A cafena menos solvel neste solvente misto e comea a precipitar[2].
1

PARTE EXPERIMENTAL

2
2.1

Parte Experimental
Aparelhagem e Montagens

A balana utilizada nas pesagens tinha uma preciso de 0,1 g e era da marca Kern, enquanto que a placa de aquecimento era da marca Variomag. Para evaporar o diclorometano, de modo a obter a cafena, utilizouse um evaporador rotativo da German Webber SA, e a determinao do ponto de fuso foi efectuada com uma preciso de 0,1 o C, usando um medidor de pontos de fuso Stuart Scientic. Um esquema de um evaporador rotativo est representado na gura 3.

Figura 3: Esquema de um evaporador rotativo. Foi necessrio usar diversas tcnicas, entre as quais a ltrao por vazio, ltrao simples e a extraco lquido-lquido, o que requereu diversas montagens, como as que se apresentam de seguida. Na ltrao a vcuo (neste caso com uma trompa de gua, gura 4), o lquido puxado devido baixa presso gerada. Comparativamente ltraco simples, a ltrao a vcuo garante um melhor rendimento em termos de lquido recuperado e uma maior velocidade de ltrao.

PARTE EXPERIMENTAL

Figura 4: Esquema de uma montagem de ltrao trompa. A ltrao simples o processo de ltragem que consiste em separar lquidos e slidos atravs de papel (papel de ltro). A extraco lquido-lquido (gura 5) consiste na repartio de um soluto em duas fases lquidas nas quais apresenta diferentes solubilidades. O lquido extractor o solvente no qual o soluto mais solvel (nesta experincia, o diclorometano).

Figura 5: Esquema da montagem para uma extraco lquido-lquido.

PARTE EXPERIMENTAL

2.2

Reagentes

Ao longo da actividade experimental usaram-se, como reagentes, carbonato de clcio, CaCO3 , 99%, da Analar Trade Marck; gua da torneira; ch preto de marca genrica; cloreto de sdio, NaCl, 99.8%, de Mat. Laboratrios de Jos Manuel Gomes dos Santos; diclorometano, CH2 Cl2 , 100%, de Jos M. Vaz Pereira SA; sulfato de magnsio, MgSO , 100%, de Jos M. Vaz Pereira SA; acetona, CHCOCH, 99.5%, da Merck e, por m, ter de petrleo, 100%, de Jos M. Vaz Pereira SA.

2.3

Mtodo Experimental

A experincia, nas linhas indicadas nesta seco, foi realizada Terafeira, dia 14 de Maro de 2006. Comearam por pesar-se 5 g de CaCO3 e 14,9 g de ch e mediramse 180 ml de gua. Depois levou-se esta mistura ebulio durante 27 minutos, agitando sempre. Tratou-se, ento, de realizar uma ltrao trompa, juntando mais gua quente de modo a facilitar a ltrao. Ao ltrado adicionaram-se 4,9 g de NaCl e agitou-se-o com uma vareta. Posteriormente, extraiu-se a soluo com CH2 Cl2 , em dois passos, com 25 ml de cada vez, por forma a que a extraco fosse mais eciente. Juntou-se uma certa quantidade de MgSO ao lquido extrado, e agitouse vigorosamente durante 10 minutos, por forma a absorver a gua. De seguida, efectuou-se uma ltrao simples e recolheu-se a mistura de diclorometano e cafena num balo previamente tarado. De seguida, evaporou-se o CH2 Cl2 atravs de um evaporador rotativo (gura 3). Para arrefecer o balo, aps a evaporao, colocou-se este debaixo de gua corrente, secou-se com papel absorvente e pesou-se. De modo a puricar o produto obtido, retirou-se a cafena das paredes do balo, adicionaram-se alguns mililitros de acetona e colocou-se o balo em contacto com os vapores de gua aquecida numa panela, evitando sempre a evaporao da acetona. Adicionou-se, ento, ter de petrleo at surgir uma turvao e depois realizou-se uma nova ltrao trompa por forma a isolar os cristais de cafena. Finalmente, guardaram-se os cristais num pequeno frasco, no completamente tapado, e colocou-se este ltimo num exsicador. Uma semana mais tarde, foi medido o ponto de fuso da amostra de cafena obtida.

RESULTADOS

Resultados

Na tabela 1, encontram-se as quantidades de reagentes realmente utilizadas3 . Como produto, obteve-se um p e cristais brancos (cafena), com uma massa conforme a tabela 2. A preciso da balana era de 0,1 g; tomouse 0,05 g para desvio absoluto dos valores medidos com este aparelho. Substncia folhas de ch CaCO3 . NaCl CH2 Cl2 MgSO4 CH3 (CO)CH3 ter petrleo Quantidade 14,9 g 4,8 g 4,9 g 225 ml alguns gramas 2 ml algumas gotas

Tabela 1: Quantidades de reagentes usados.

Substncia Cafena bruta Cafena puricada

Quantidade 0,1 g <0,05 g

Tabela 2: Quantidades de produtos obtidos. A determinao das massas de cafena no foi directa mediu-se a massa dos recipientes sem o produto e com o produto e tomou-se a diferena.

3.1

Rendimento do processo

Determinemos agora o rendimento deste processo de extraco da cafena. Dado que as folhas de ch contm entre 2% e 3,5% de cafena[6] e que temos mfolhas = 14,9 g, donde podemos determinar a massa de cafena
Na extraco slido/lquido, utilizou-se tambm gua na quantidade que se julgou necessria durante a extraco propriamente dita, 180 ml; durante a ltraco, o volume necessrio para minimizar a soluo que caria no erlenmeyer.
3

ESPECTROS IV E 1-HNMR

contida nas folhas (mi ): mi [mfolhas 2%, mfolhas 3,5%] [0,298; 0,522] Se considerssemos as impurezas na cafena bruta (com massa mf b = 0,1 g0,05 g) desprezveis poderamos calcular o rendimento do processo da seguinte forma: bruto = bruto mf b mi min mf b max mf b , max mi min mi [9,6%; 50%]

Como a massa de cafena obtida foi inferior ao valor mnimo que a balana capaz de medir (0,05 g), sabemos apenas que a massa de cafena puricada obtida inferior a esse valor. Temos ento que o rendimento no processo na obteno de cafena puricada dado por pur < 9,6%, dado que a massa de cafena dada por mf p < 0,05 g.

3.2

Ponto de Fuso

O ponto de fuso da cafena puricada, determinado uma semana depois de ser efectuado o processo de puricao, deu-se entre os 223,2o C e os 236,5 o C.

Espectros IV e 1-HNMR

Uma boa forma de de avaliar o grau de pureza de um produto traar o seu espectro de IV e de 1-HNMR e comparar com o espectro caracterstico da substncia no estado puro. No caso desta experincia, apenas se avaliou o grau de pureza da cafena a partir do registo do ponto de fuso. Apresentamos, no entanto, ambos os espectros da cafena (guras 6 e 7) no estado puro e discutindo os mesmos na seco 5.2.

DISCUSSO

Figura 6: Espectro de IV da cafena (mtodo nujol mull)[9].

5
5.1

Discusso
Pureza e Rendimento

Ao longo da actividade experimental fomos perdendo produtos intermdios , por exemplo, o caso da primeira ltrao por vcuo e da ltrao simples, uma vez que no conseguimos retirar todos os resduos dos recipientes onde se encontravam para os respectivos funis e, no caso da ltrao a vcuo, no se extraiu toda a gua do ch, j que se interrompeu o processo enquanto ainda pingava gua, perdendo, deste modo alguma quantidade de cafena. O mesmo aconteceu quando se realizou extraco lquido-lquido, j que ainda cou na ampola um pouco da fase orgnica por precauo, para evitar a sada do lquido menos denso que, por sua vez, tinha nele dissolvido compostos inorgnicos. A existncia de emulses dicultou bastante este ltimo passo. So de registar ainda outros factores como o facto de a extraco slido-lquido no retirar toda a cafena das folhas do ch.

DISCUSSO

10

Figura 7: Espectro de 1-HNMR da cafena em CDCl3 [9]. O rendimento4 obtido para a primeira parte da experincia (extraco da cafena do ch) est compreendido num intervalo de valores baixos e com extremos muito dspares (entre 9,6% e 50%). A grande incerteza neste intervalo deve-se queloutra relativa quantidade de cafena presente no ch utilizado, (neste caso, o intervalo para a massa de cafena [0,298; 0,522]) e do facto de a balana usada nas medies no ser muito sensvel, isto , a preciso da balana analtica era de 0,1 g, o que pouco adequado para medir as massas inferiores 0,2 g que foram encontradas. No foi possvel determinar o rendimento da segunda parte da experincia devido incapacidade da balana em indicar a massa dos cristais; sabe-se, no entanto, que este valor muito baixo inferior a 9.6% a partir da informao da massa mnima que a balana pode medir. Alm das consideraes j tecidas no inccio desta seco e referentes a toda a parte da experincia que antecede a recristalizao, uma explicaPara se ser preciso, no exactamente o rendimento da obteno de cafena at este ponto que est a ser medido, j que a amostra dever conter bastantes impurezas da ser feita a recristalizao posteriormente.
4

DISCUSSO

11

o adicional para este baixo rendimento deve-se ao facto de no se haver conseguido retirar toda a amostra do balo a cafena no se dissolveu na totalidade e cou parcialmente retida nas paredes do balo por ocasio da transferncia da soluo para o erlenmeyer. Ficaram ainda alguns cristais no erlenmeyer aquando da transferncia da soluo para o funil, apesar de se ter adicionado mais ter de petrleo do que aquele referido no guia[6]. O ponto de fuso, a uma determinada presso, um valor constante, caracterstico de uma substncia pura e, teoricamente, no se observam, durante a medio do ponto de fuso, variaes de temperatura signicativas. No entanto, se a amostra for impura, a amplitude ser muito maior; a presena de impurezas contribui tambm para a diminuio do ponto de fuso. Neste caso vericou-se que a fuso da amostra teve incio aos 223,2o C e que terminou aos 236,5 o C, estando o valor do ponto de fuso da substncia pura no intervalo 235-239 o C. Posto isto, conclui-se que a cafena apresentava provavelmente impurezas, dados o abaixamento do ponto do fuso e o alargamento do intervalo. Deve salientar-se o facto de se ter havido muita diculdade em conseguir ler os valores de temperatura que correspondiam ao incio e m da fuso (no entanto, este ponto no dever, em si, ser suciente para explicar o largo intervalo de valores apresentado no invalidando, portanto, a inferncia feita para a existncia de impurezas).

5.2

Anlise dos Espectros

Analisando agora o espectro de IV (gura 6), verica-se que aos 1700 cm se encontra um pico forte a que corresponde o grupo dos aldedos e cetonas (C=O) e, junto a esse pico, no lado direito, h a marca do grupo alceno (C=C extenso). Perto dos 3000 cm, ocorre um pico mdio-forte que caracteriza o grupo alcano. Deste modo, o espectro de IV indica-nos alguns grupos funcionais que constituem a cafena. Por outro lado, o espectro de 1-H NMR (gura 7), presente na seco 4, indica a existncia de 4 picos (todos singletos), 3 deles mais fortes, que ocorrem aproximadamente a 3.4, 3.6 e 4 ppm, e um deles mais fraco, cujo valor aproximadamente 7.5 ppm (zonas A, B, C e D da gura 8, respectivamente[9]). Pela anlise da frmula de estrutura da cafena (gura 8), podemos deduzir que as reas relativas dos picos so 3:3:3:1, que corresponde tambm ao nmero de hidrognios ligados ao carbono em cada zona, dado que o composto tem apenas 10. Dado que nenhuns dois tomos adjacentes possuem ambos tomos de hidrognio ligados, todos os picos so singletos.

CONCLUSO

12

Os trs picos entre os 3.4 e os 4 ppm so de difcil atribuio a cada uma das zonas dado corresponderem todos a tomos de hidrognio de grupos metilo ligados a tomos de azoto e os seus deslocamentos qumicos serem semelhantes.

B
O N

A
C
N N O N

Figura 8: Frmula de estrutura da cafena e zonas de tomos de hidrognio com igual deslocamento qumico. A zona D a que apresenta ncleos de hidrognio a campo mais baixo porque estes esto ligados aos carbonos do anel (aromtico e planar) de imidazol, estando menos blindados o movimento circular dos electres deslocalizados gera um campo magntico que refora a intensidade do campo exterior, desblindando os tomos de hidrognio (neste caso trata-se apenas de um nico tomo).

Concluso

Assim sendo, conclui-se que foi extrada pouca quantidade de cafena, j que o valor mnimo que a nossa amostra de ch tinha desta rondava os 0.298 g e que foram obtidos menos de 0,1 g (rendimento inferior a 9,6%). Conclui-se ainda que a cafena era obtida continha algumas impurezas, devido ao diferente ponto de fuso obtido aps o processo de puricao. Posto isto, pode armar-se que o processo teve resultados relativamente fracos.

REFERNCIAS

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Referncias
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REFERNCIAS

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[9] SDBSWeb. National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. 26 Mar. 2006. <http://www.aist.go.jp/RIODB/SDBS />. [10] Shevlin, Michael. Lab 3: Isolation of Caffeine. Chem130 Survey of Organic and Biochemistry. 2003. University of Illinois At Chicago. 19 Mar. 2006 <http://tigger.uic.edu/~shevlin/academics/fall 03/lab3.html>.