Unidad 6. Nutricin microbiana y caracterizacin de bacterias.

Prctica 11. Metabolismo de bacterias.

Objetivos
Relacionar la actividad metablica de los microorganismos con los cambios

producidos en diferentes sustratos.

Caracterizar mediante pruebas bioqumicas una bacteria aislada y compararlos con

una bacteria de referencia

Introduccin
Todos los seres vivos tienen la capacidad de efectuar una serie de reacciones que les permiten incorporar y transformar diversos compuestos. Estas transformaciones son catalizadas por enzimas y son acompaadas por reacciones energticas. An cuando todas las reacciones biolgicas son catalizadas por enzimas el tipo de estas o de los sistemas enzimticos vara en los diferentes microorganismos. De este modo para estudiar el metabolismo de un microorganismo se utiliza una batera de sustratos y despus de incubar se procede a reconocer el tipo de reacciones que se efectuaron mediante la determinacin de los productos que se formaron. La suma de las actividades enzimticas, as como las caractersticas nutricionales permiten la identificacin de las bacterias. Existen sistemas especializados en la identificacin de bacterias.

1. Sesin. Materiales
Microorganismos Bacterias aisladas, resiembra de 24 horas. Una bacteria por persona. Equipo y material 2 mecheros 2 asas bacteriolgicas 2 gradillas Medios de cultivo 2 tubos de 13x100mm con 3.5mL de agar Kligler inclinado. 2 tubos de 13x100mm con 3.5mL de agar Citrato de Simmons inclinado. 2 tubos de 13x100mm con 3 mL de Caldo Nitrato con campana de Durham. 2 tubos de 13x100mm con 3 mL de Caldo Rojo de fenol ms manitol con campana de Durham. 2 tubos de 13x100mm con 3 mL de Caldo Rojo de fenol ms sacarosa con campana de Durham. 2 tubos de 13x100mm con 3mL de Gelatina Nutritiva. 2 tubos de 12x75mm con 2mL de medio SIM. 2 tubos de 12x75mm con 2mL de medio MIO.

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4 tubos de 12x75mm con 2mL de medio Hugh and Leifson ms glucosa. 4 tubos de 12x75mm con 2mL de medio RMVP. 2 tubos de 12x75mm con 2mL de caldo urea o Surraco. 1 matraz con aceite mineral estril 1 matraz con parafina estril 1 sistema de identificacin API Material que deben tener los alumnos 4 tubos de 16x150 con 9mL de SSI estril.

Metodologa
a) Activacin de las cepas aisladas y de prueba. 1. Inocular cada una de las cepas bacterianas aisladas y la bacteria control de cada equipo en una caja petri con Agar Nutritivo para obtener colonias aisladas. 2. Incubar a 37C durante 24 horas. b) Preparacin de las pruebas bioqumicas. 1. Etiquetar los medios de cultivo para pruebas bioqumicas y los tubos de solucin salina isotnica. Preparar un juego para cada una de las dos cepas aisladas y una bacteria control. Refrigerar. c) Siembra de Pruebas Bioqumicas. 1. De la caja de agar Nutritivo con la cepa control, resuspender tres colonias aisladas con las mismas caractersticas en un tubo con SSI. 2. De la suspensin de microorganismos, inocular los tubos con las pruebas bioqumicas segn la siguiente tabla. Mtodo de inoculacin Estra ondulada y picadura Estra ondulada Picadura Medios Agar Kligler Citrato de Simmons Agar LIA Medio SIM Medio MIO Hugh and Leifson (2 tubos) Caldo Nitrato Caldo Rojo de Fenol ms sacarosa Caldo Rojo de Fenol ms manitol Caldo RMVP (2 tubos) Caldo Urea o Surraco Sello de aceite mineral No No No No No Si, uno de los tubos No No No No No

Asada en medio lquido

3. Colocar los tubos en un bote de plstico e incubar a 37C durante 24 horas. 4. Repetir la inoculacin para cada una de las cepas aisladas.

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2. Sesin. Metabolismo (pruebas bioqumicas) Materiales

Equipo y material 2 gradillas Reactivos 2 frascos gotero con reactivo de Griess A. 2 frascos gotero con reactivo de Griess B. Zinc en polvo. 2 frascos gotero con reactivo de Ehrlich. 2 frascos gotero con reactivo de Rojo de Metilo. 2 frascos gotero con KOH al 40% 2 frascos gotero con -nalfol. 1 caja petri con agar nutritivo.

Metodologa
a) Interpretacin de las pruebas bioqumicas. 1. Despus de la incubacin, revisar los fundamentos de cada una de las pruebas bioqumicas. Emplear los reactivos reveladores segn la tabla e Interpretar los resultados de las cepas. Medios Agar Kligler Citrato de Simmons Medio SIM Medio MIO Hugh and Leifson (2 tubos) Caldo Nitrato Caldo Rojo de Fenol ms sacarosa Caldo Rojo de Fenol ms manitol Caldo RMVP (tubo uno) Caldo RMVP (tubo dos) Caldo Urea o Surraco Gelatina Nutritiva 2. 3. 4. 5. Reactivo Revelador No No Ehrlich Ehrlich No Griess A y B No No Rojo de metilo KOH y -nalfol No No

Registrar los resultados para las cepas control y las cepas aisladas. Revisar en la bibliografa y comparar los resultados obtenidos para las cepas control. Identificar a las cepas aisladas. De ser posible, inocular un sistema de identificacin API 20 para bacterias Gram negativas.

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3 y 4. Sesiones.
Siembra e interpretacin del sistema API.

Disposicin de desechos
1. El material plstico como las cajas Petri desechables, papel filtro y palillos de madera debern colocarse en los contenedores de incineracin previamente atadas con masking las cajas petri. 2. Las pruebas de Nessler y Griess realizadas en portaobjetos debern recolectarse por separado y entregar para el tratamiento de residuos qumicos. 3. Esterilizar el material de vidrio en los que realiz sus lecturas y posteriormente lavar.

Bibliografa complementaria
Mac Faddin, Jean F. 2003. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de

importancia clnica. 3 edicin. Mdica Panamericana, Argentina. QR67 M3318 2003

Ramrez-Gama, R. M., B. Luna Milln, O. Velsquez Madrazo, L. Vierna Garca, A. Meja

Chvez, G. Tsuzuki Reyes, L. Hernndez Gmez, I. Mggenburg, A. Camacho Cruz y M del C. Urza Hernndez. 2006. Manual de Prcticas de Microbiologa General. 5 edicin. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.

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