1- Suponha que pretende identificar pequenas diferenças num gene específico (sequência

desse gene fácil de obter nas bases de dados) entre dois indivíduos da mesma espécie
de mamífero. Como procederia?

2-
a. Qual a diferença entre um nucleótido didesoxi (ex. ddATP) e os nucleótidos de
que normalmente é constituído o DNA?
b. Refira-se ao interesse do primeiro tipo de nucleótidos.

3- A clonagem de produtos PCR pode ser facilitada em plasmídeos preparados para o

efeito. Quais as características específicas desses plasmídeos e qual o racional que
permite a sua utilização?

4-
a. Em que circunstâncias faz sentido fazer a clonagem direcional de um produto
de PCR?
b. Faz algum sentido preocuparmo-nos com a clonagem direcional de uma
biblioteca de cDNA?
c. E de uma biblioteca de DNA genómico?

5- Um vetor utilizado em leveduras apresenta 1 elemento CEN4, 2 elementos TEL e 1

elemento URA3.
a. Qual o papel de cada um desses elementos?
b. Quais os requisitos específicos no que se refere às estirpes em que este vetor
deve ser usado?

6- Na figura é apresentado um esquema de funcionamento de um sistema de expressão

em duas etapas. Será possível que possamos controlar a expressão do gene de interesse
e obter boas quantidades de proteína recombinante utilizando IPTG? Justifique.

7- Nas aulas práticas utilizou-se simultaneamente em alguns meios dois antibióticos:

cefotaxima e canamicina. Quais as razões para tal procedimentos?
8- Suponha que fez uma diluição de 1:4 de uma solução de DNA utilizando água ultra
pura. A análise por espetrofotometria (a 260nm) indicou-lhe que a concentração de
DNA nesta ultima solução era de 250ng/μL. Como procederia para que em 2μL
pudesse adicionar 10ng a uma reação de PCR?

9- Pretende-se expressar um gene humano em plantas.

a. Refira-se à construção de DNA que iria utilizar referindo o papel de todos os
componentes.
b. Refira-se ao procedimento que utilizaria para efetuar a transformação
genética.

10- A transformação de células de inseto com baculovirus é usualmente feita por co-
transfeção (co-transformação). Quais os intervenientes neste processo e qual o
racional de tal procedimento?