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prevención de la salud

Procesado de muestras
en el laboratorio de la
clínica (II)
La citología consiste en el estudio microscópico de
las células. Para poder realizar una adecuada inter-
pretación de la citología es imprescindible que las
técnicas de obtención y procesado de las muestras
sean correctas.

Toma de muestras

El estudio citológico se puede realizar sobre diversos

tipos de muestras: lesiones cutáneas o subcutáneas,
ganglios linfáticos, órganos, piel, médula ósea, líquidos
orgánicos, etc.

En esta segunda parte del trabajo sobre Existen cuatro tipos de técnicas para obtener muestras:
toma de muestras hablaremos de la toma de
muestras para citología. Os contamos como a. Impronta.
b. Raspado.
obtenerla, como procesarla y como enviarla a c. Frotis.
un laboratorio externo si fuese necesario. d. Punción-Aspiración con aguja fina (PAAF).

a. Impronta
s
Esta técnica consiste en apoyar un por-
taobjetos sobre el tejido lesionado para
que las células desprendidas de la lesión
se adhieran al porta. Se puede realizar con
fragmentos de tejido obtenidos por biop-
sia o bien en lesiones externas en anima-
les vivos.
Cuando utilizamos fragmentos de tejido es
conveniente que apoyemos varias veces, sin
presionar, la cara de la muestra sobre un pa-
pel secante, para eliminar la contaminación
de sangre en la muestra. Posteriormente,
apoyaremos la muestra varias veces sobre
portas limpios hasta que obtengamos una
capa uniforme y fina de células.
Si utilizamos esta técnica en lesiones externas
del animal vivo, es importante realizar una im-
pronta, apoyando ligeramente el porta sobre
Para realizar un
raspado echaremos
una gota de aceite
sobre la zona y
sobre la hoja de
bisturí para mejorar
la adherencia de la
muestra
la zona afectada, antes de lavar la lesión. Des-
pués, lavaremos la lesión con una gasa y sue-
ro fisiológico, reavivaremos la lesión mediante
raspado con una cuchilla de bisturí, secare-
mos con material absorbente, y volveremos a
realizar otra impronta.
b. Raspado
Esta técnica consiste en el raspado con una
cuchilla de bisturí de la superficie de una le-
sión. Su mayor utilidad es el estudio de lesio-
nes externas.
Primero lavaremos la lesión con suero fi-
siológico y secaremos la zona con papel
absorbente. Echaremos una gota de acei-
te sobre la zona elegida y sobre la hoja de
bisturí para que se adhiera el material que

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vamos a raspar. Posteriormente apoyare-
mos el filo de la cuchilla perpendicular a la
superficie de la lesión y la desplazaremos
varias veces sobre la misma, sin ejercer ex-
cesiva presión.
El material obtenido se transfiere al centro de un
portaobjetos limpio y se extiende siguiendo cual-
quiera de las técnicas que comentaremos poste-
riormente en la preparación de extensiones.
c. Frotis
Esta técnica consiste en la obtención de célu-
las deslizando suavemente un hisopo o bas-
toncillo de algodón sobre una superficie orgá-
nica. Conviene humedecer el bastoncillo con
suero fisiológico para prevenir el daño en las
células de la muestra.
Se usa, fundamentalmente, cuando no es
posible obtener muestras mediante impron-
ta, raspado o aspiración con aguja fina, por
ejemplo en trayectos fistulosos, citología va-
ginal, etc...
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Una vez obtenida la muestra, deberemos apo-
yar y hacer rotar el hisopo sobre el porta, sin
ejercer mucha presión y sin pasar dos veces
por el mismo sitio.
d. Punción-Aspiración con aguja
fina (PAAF):
Esta técnica está especialmente indicada
para la obtención de muestras citológicas de
órganos o lesiones sólidas, mediante la pun-
ción y/o aspiración de lesiones con una aguja
y una jeringa.
Para esta técnica se suelen utilizar agujas de
22 g (amarillas) y jeringas de 10 cc.
Es importante preparar la zona donde se va
a realizar la punción. Para muestras subcutá-
neas, bastará con limpiar la zona de piel con
alcohol. Si la muestra se va a recoger por pun-
ción de la cavidad abdominal, torácica o arti-
culaciones, la zona de piel deberá prepararse
como un campo quirúrgico.
Para realizar la punción aspiración, se debe
sujetar firmemente la masa con los dedos,
siempre que sea posible, con el fin de favo-
recer la penetración de la aguja en la piel y en
el tejido, y el control de la dirección. La aguja,
unida a la jeringa, se dirige hacia el centro de
la masa y se ejerce una presión negativa (ha-
ciendo retroceder el émbolo de la jeringa has-
ta aproximadamente 3⁄4 partes del volumen
de la jeringa).
Se puede realizar aspiraciones de varias zo-
nas de la masa, evitando en todo momento
salirnos de la masa y que el material aspi-
rado se contamine con sangre. Si la masa
es grande, podemos mantener la presión
negativa mientras redirigimos la aguja a otra
zona. En masas pequeñas es más conve-
niente suspender la presión negativa mien-
tras movemos la aguja.
Una vez obtenido el material, se deja de ejer-
cer la presión negativa y se extrae la aguja y la
jeringa de la masa y de la piel. Posteriormente,
separamos la aguja de la jeringa y llenamos
de aire esta última, mediante una aspiración.
Entonces, se vuelve a colocar la aguja en el
cono de la jeringa y se expele el contenido en
la parte central de un porta, intentando que
quede en forma de gota.
Existe una variante de esta técnica que es
la punción con aguja fina sin aspiración. Se
realiza de forma similar, pero sin ejercer pre-
sión negativa, con lo que está especialmente
indicada en lesiones muy vascularizadas (con
mucho sangre) y en los ganglios linfáticos.
Realizaremos la punción de la lesión, movien-
do varias veces la aguja dentro de la masa,
hacia adelante y atrás, e intentando perma-
necer en el mismo trayecto. La recogida de
células se realiza mediante el corte de la pro-
pia aguja, que se irá llenando con las células
desprendidas.
Luego acoplamos una jeringa de unos 10 cc
que previamente habremos llenado de aire y
expeleremos el material en un porta limpio. De-
bemos hacer esto lo antes posible para evitar
que se seque la muestra. La punción se puede
repetir varias veces en una misma masa siempre
que no aparezca contaminación sanguínea.
Finalmente, se realizará la extensión como co-
mentaremos a continuación.
Procesado de las Muestras
1. Extensión
En el caso de las muestras obtenidas por ras-
pado o por PAAF, el material obtenido debe
ser extendido sobre el porta para formar una
capa fina de células que permita una correc-
ta visualización. Es muy importante realizar el
manejo de la muestra con mucho cuidado,
evitando ejercer excesiva presión para no da-
ñar las células.
Para evitar que la muestra se seque, de-
beremos realizar la extensión lo más rápi-
 prevención de la salud.13

a. Técnica de “aplastamiento” (squash):

Esta técnica de extensión consiste en los siguientes pasos:

1) Poner el material en forma de gota en uno
de los extremos del porta
2) Apoyar sin ejercer mucha presión un
segundo porta por una de sus caras y en
sentido perpendicular al primero
3) Con un movimiento rápido, deslizar el
segundo porta sobre el primero


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b. Técnica de extensión sanguínea:

Está técnica de extensión puede usarse cuando la muestra ob-

tenida es muy fluida. Se utiliza sobre todo para extender las go-
tas de sangre para hacer un frotis.

Utilizaremos dos portas, uno con la gota de muestra en un ex-

tremo, y el otro para realizar la extensión (Figura 2). El porta de
arriba puede ser sustituido por un cubre.

1) Apoyaremos uno de los bordes cortos del porta de

extensión (o un cubre), sobre el porta con la muestra,
formando un ángulo de 30-40º
2) Deslizaremos el porta de extensión hasta contactar
con la gota, con lo que el material se extenderá en
forma de línea en el borde corto del porta de exten-
sión
3) Con un movimiento rápido y suave deslizamos el por-
ta de extensión, alejándonos de la gota, formándose
una capa uniforme



damente posible una vez que coloquemos la gota de muestra en el
portaobjetos.
Todas las extensiones deben de ser marcadas con rotuladores indele-
bles al alcohol o con lapicero (en portas esmerilados) para su correcta
identificación.
Existen varías formas de realizar la extensión, aquí os desarrollamos dos
de ellas la técnica de “aplastamiento” (squash) y la de extensión
2 Fijación y tinción
Para que las células se adhieran al portaobjetos, y para evitar que se
degeneren las células, hay que fijar la muestra.
El método de fijación puede variar según la técnica de tinción que se
vaya utilizar. Normalmente en la clínica o para el envío de muestras a
otro laboratorio la muestra debe de secarse al aire y luego debe fijarse
con metanol. También puede utilizarse el primer reactivo de las técnicas
rápidas.
Muchas veces la tinción de las extensiones citológicas se hace en la pro-
pia clínica para realizar allí su interpretación pero otras veces se remite.
todas las extensiones deben de
ser marcadas con rotuladores
indelebles al alcohol o con
lapicero (en portas esmerilados)
para su correcta identificación
prevención de la salud.15
Si la muestra se remite a un laboratorio especializado es mejor no teñir-
las en la clínica, hay que fijarlas y dejarlas sin teñir.
Cuando la preparación se tiñe en la clínica se usa normalmente la
Técnica rápida Diff-Quik®. Esta técnica de tinción es muy utilizada
debido a su sencillez y rapidez, todos sus reactivos son comercia-
les y están ajustados para realizar la técnica en el menor tiempo
posible.
Remisión de Muestras:
Cuando se remitan muestras de citologías a un laboratorio especializa-
do, estas deben ir en contenedores adecuados.
Las extensiones deben enviarse fijadas (metanol) y colocadas en porta-
preparaciones de plástico. Si no disponemos de ellos pueden proteger-
se envolviéndolas con varias capas de papel adsorbente.
Ante cualquier duda sobre el procesamiento de la muestra o forma
de envío es aconsejable ponerse en contacto con el laboratorio de
referencia.