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Nasceu Greenville, na Califórnia, mas foi criado em Modesto, no mesmo estado. Filho
de James William Marsters (Ministro religioso) e Margaret Lynn Raymond Marsters
(assistente social que quase se tornou freira), ele tem dois irmãos: Susan (mais velha) e
Paul (mais novo). Escolheu a carreira de ator depois que, ainda criança, participou da
peça Ursinho Pooh, interpretando o burrico Ió.
Cursou, entre outras escolas, por dois anos a The Juilliard School, em Nova Iorque, de
onde foi expulso, por não ter se adaptado.
De Nova Iorque, já casado com Liane Davidson, mudou-se para Chicago, onde fundou a
Genesis Theatre Company. Em 1990, o casal foi para Seattle, fundando lá o New
Mercury Theatre. Durante anos, participou de várias produções: A Tempestade, Twelfth
Night, Macbeth (Shakespeare), Ohio Impromptu (Samuel Beckett), Life is a Dream
(Pedro Calderón de la Barca), Misalliance (Bernard Shaw), A Phoenix Too Frequent
(Christopher Fry), Kvetch (Steven Berkoff), Criminals in Love (George F. Walker), The
Shawl (David Mamet), A Doll House (Henrik Ibsen), Red Noses entre muitas outras.
Logo após o cancelamento de Angel (que teve 5 temporadas), James fez os filmes Cool
Money (Ladrões de Luxo, no Brasil) e Shadow Puppets, e teve uma participação
especial na série Smallville, como o Professor Milton Fine/Brainiac, tradicional inimigo
de Clark Kent (o Superman).
Ao teatro, só voltou uma única vez no ano de 2000, na peça The Why, produzida por
Noah Wyle (da série E.R., Plantão Médico no Brasil e Serviço de Urgência em
Portugal). Também em seu currículo podemos destacar os filmes Chance (produzido,
dirigido e estrelado pela colega Amber Benson, a Tara de Buffy), Widing Roads e House
on Haunted Hill, um episódio da série antológica Strange Frequency e a participação
como convidado especial no episódio Into the Labyrinth da série Gene Roddenberry's
Andromeda (estrelada por Kevin Sorbo).