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Bioqumica Experimental

Bioqumica Experimental

Lipdios
Junho 2007

Alessandra C. Dametto Daniara C. Fernandez Flavia Cagnin Sheila Pasqualotto


5 Licenciatura

INTRODUO

Os lipdios, juntamente com as protenas e os carboidratos, so macronutrientes de importncia biolgica que podem ser sintetizados no organismo, com exceo dos cidos graxos essenciais. Eles exercem, nos seres vivos, funes energticas, estruturais e hormonais. Energeticamente, so importantes porque produzem 9Kcal por grama quando oxidado no organismo. Esta importante fonte de combustvel para os seres humanos contribui, em alguns paises, com 30-40% do total de energia consumida na alimentao. Em outros paises, esta contribuio esta na faixa 15 a 25% do total de energia consumida. Estruturalmente eles fazem parte das membranas celulares e das organelas. As prostaglandinas e os tromboxanos so derivados dos lipdios e desempenham importantes funes hormonais. Alem disso, os lipdios reduzem a perda de calor do organismo devido sua baixa condutividade trmica. Os lipdios diferem uns dos outros pelas suas composies qumicas e propriedades fsicas, exceto pelo fato de que todos so solveis em solventes orgnicos, tais como ter, ter de petrleo, clorofrmio, benzeno, tetracloreto de carbono, acetona etc., e so insolveis em gua. Os fundamentais para: 1. fornecer a maior quantidade de calorias por grama. 2. transportar as vitaminas lipossolveis (vitaminas A, D, E, e K). 3. melhorar a palatabilidade dos alimentos. 4. diminuir o volume da alimentao. 5. aumentar o tempo de digesto. 6. fornecer cidos graxos essenciais. Estudos recentes tm mostrado que o maior consumo de leos e gorduras est relacionado com melhores condies econmicas de uma populao. A ingesto excessiva de gordura, contudo, parece contribuir para vrias doenas crnicas como: doena cardiovascular, diabetes melito, obesidade, derrame cerebral e cncer. Por isso, recomenda-se baixo consumo de gorduras alimentares (menos de 30% do total lipdios da alimentao so

de energia ingerida). Uma vez ingerida por indivduos normais, a gordura dos alimentos quase completamente absorvida e para isso so necessrios a bile, a lipase gstrica e a lipase pancretica. Na ausncia dessa ltima, os triglicerdios so excretados intactos nas fezes. J em casos de alteraes na mucosa intestinal como no sprue, excretamse cidos graxos e monoglicerdios nas fezes. A capacidade do organismo de armazenar gordura pertence, infelizmente, ser praticamente ilimitada. As gorduras so encontradas em todos os tecidos, mas predominam no tecido adiposo branco e no marrom. As clulas dos mamferos so capazes de sintetizar de novo cidos graxos saturados e insaturados da serie n-9, a partir da acetilcoenzima A. Contudo, h falta de enzimas para inserir dupla ligao na posio n-6 e n-3 das cadeias de carbono dos cidos graxos. CLASSIFICAO DOS LIPDIOS : Os lipdios importantes em nutrio animal podem ser classificados em: A) lipdios simples: cidos graxos, gorduras neutras (mono, di e triglicerdios) e ceras (-steres de esterol e steres no-esteroidais). B) lipdios compostos: fosfolipdios (cidos fosfatdicos, lecitinas, cefalinas etc), glicolipdios e lipoprotenas C) lipdios derivados, lcoois (incluindo esteris e hidrocarbonetos). CIDOS GRAXOS: cidos graxos saturado: So cidos monocarboxlicos constitudos de uma cadeia hidrocarbonada saturada, ou seja, com todas as valncias do carbono ligadas tomos de hidrognio. Quanto maior o tamanho da cadeia hidrocarbonada maiores sero o peso molecular, o ponto de fuso e a insolubilidade do acido graxo ou do lipdio que o contenha. cidos graxos saturados so encontrados principalmente em gorduras animais, sendo os mais comuns o esterico e o palmtico. Na notao do acido graxo o primeiro numero indica o numero de carbono da molcula, seguindo-se di pontos e o numero de ligaes contidas na cadeia hidrocarbonada.

cidos graxos insaturados: So cidos monocarboxlicos contendo uma cadeia hidrocarbonada com uma ou mais ligaes duplas. As duplas fazem com que os dois tomos de hidrognios ligados aos dois carbonos envolvidos na ligao estejam em um mesmo lado do plano ou em lados opostos. Quando os hidrognios se encontram no mesmo lado, o ismero cis; se em lados opostos, o ismero trans. Os cidos graxos trans so encontrados em produtos gordurosos industrializados. Pesquisas recentes indicam que eles podem aumentar as concentraes de LDL-colesterol, com riscos para a sade. Os cidos graxos insaturados de importncia biolgica so ismeros cis. Quando o acido graxo possui uma dupla ligao, ele conhecido por monoinsaturado; se, duas ou mais ligaes duplas, por poliinsaturados. Encontra-se na notao dos cidos graxos insaturados a letra n, ou w, seguido do numero do tomo do carbono unido por um hfen e contado a partir do terminal metil da cadeia hidrocarbonada. Os cidos graxos insaturados tem ponto de fuso mais baixo do que os saturados de mesmo numero de tomos carbonos. O acido olico que monoinsaturado constitui quase 50% da gordura do toucinho e mais de 75% do leo de oliva. Os cidos graxos poliinsaturados existem em menores quantidades nos alimentos, sendo boas fontes os leos vegetais: amndoas, peixe, frango e legumes. O msculo esqueltico em repouso o principal local de utilizao de ambos os cidos graxos. O msculo pode armazenar algum acido graxo como triglicerdio. A captao e a oxidao de cidos graxos pelo msculo esto aumentadas, quando seus nveis plasmticos so altos. Isso torna a utilizao da glicose reduzida e apresenta uma condio conhecida como resistncia insulina, isto , a captao de glicose pelo msculo esta diminuda para uma dada concentrao plasmtica de insulina. O fgado um rgo que utiliza cidos graxos livres circulantes. Quanto maior a concentrao circulante de cidos graxos, maior a captao heptica. Os cidos graxos no fgado podem ser convertidos em triglicerdios e fosfolipdios, ser oxidados completamente para o dixido de carbono e gua ou ser parcialmente oxidados para corpos cetnicos (acido acetocido e b-hidroxibutrico). A sntese ocorre no citoplasma, enquanto a oxidao ocorre nas mitocndrias. Os cidos graxos que no so oxidados vo formar os triglicerdios. Se a sntese de triglicerdios exceder a formao de lipoprotenas, o excesso de triglicerdios armazenado em gotculas de gordura dando origem ao fgado gorduroso. Esses cidos podem deixar o

fgado e entrar em outros tecidos como o msculo cardaco e o rim, nos quais so usados como fonte de energia. O encfalo metaboliza a glicose preferencialmente, mas utiliza os corpos cetnicos como fonte de energia, durante o jejum prolongado.

cidos graxos essenciais: Os cidos graxos essenciais so poliinsaturados que no podem ser sintetizados pelas clulas dos mamferos a partir de acetil-coenzima A e, portanto, tem que ser ingeridos na alimentao. Os mamferos no apresentam enzimas que sejam capazes de inserir dupla ligao nas posies n-6 e n-3, respectivamente, das cadeias hidrocarbonadas dos cidos graxos. Os cidos graxos alimentares essenciais so o acido linolico e o acido linolnico. As necessidades dos cidos graxos essncias acima citados so avaliadas pela quantidade necessria para prevenir ou reverter sintomas de deficincia em animais e humanos e para atingir o teor mximo de C20:4 n-6 e C22:6 n-3 nos tecidos. Os cidos graxos essenciais fazem parte da estrutura dos fosfolipdios que so componentes importantes das membranas e da matriz estrutural de todas as clulas. A composio em cidos graxos dos fosfolipdios de membrana , em parte, determinada pela composio dos cidos graxos n-6 e n-3 da alimentao. Dessa forma, a composio da gordura alimentar pode influenciar varias funes relacionadas a membrana, tais como ligao de hormnios e atividades associadas a enzimas e transportadores. GORDURAS E LEOS: Os cidos graxos consumidos na dieta so armazenados nos tecidos como triglicerdios ou gorduras. Os monoglicerdios e os diglicerdios ocorrem nos tecidos em quantidades negligenciveis, mas so importantes intermedirios metablicos. Os triglicerdios so steres de trs cidos graxos com o glicerol. So designados simples ou mistos, dependendo do numero de diferentes cidos graxos presentes na molcula. Triestearina, por exemplo, indica um triglicerdio simples contendo somente acido esterico na molcula, enquanto 1-leo, 2-estearo, 3-palmitina um triglicerdio contendo cidos olico, esterico e palmtico. Os triglicerdios slidos na temperatura ambiente so conhecidos como gorduras, enquanto aqueles no estado liquido so os leo. Os leos,

em geral, possuem uma alta proporo de cidos graxos de cadeia curta (menos de oito tomos de carbono) ou cidos graxos insaturados. As gorduras possuem cidos graxos saturados de cadeia longa e tem pontos de fuso mais altos que os dos leo, da serem slidos na temperatura ambiente. Contudo, leos contendo cidos graxos de cadeias de carbono de comprimento de 6 a 12 tomos so praticamente inexistentes na natureza. Os chamados triglicerdios de cadeia mdia (TCM) tem sido sintetizados e contem aproximadamente 75% de acido caprlico, 22 a 23% de acido cprico, 1% cada de acido caprico e lurico, e traos de outros cidos graxos, tais como palmtico, esterico e linolico. Os TCM so lquidos a temperatura ambiente e mais solveis em gua do que os triglicerdios que ocorrem normalmente. Eles so rapidamente absorvidos no trato gastrintestinal e no requerem sais biliares para sua absoro. Por essas razoes, os TCM parecem ter valor teraputico no tratamento de doena com sprue tropical, insuficincia pancretica e outras condies afetando a absoro de lipdios. As gorduras animais diferem de espcie para espcie e mesmo nas diferentes partes de um mesmo animal. A gordura de porco funde a 28C, a de carne de vaca a 40Ce a de carneiro a 51C. Isso significa que a gordura de porco de consistncia mais mole e tem mais acido graxo insaturado do que as duas outras. PROPRIEDADES DOS TRIGLICERDIOS: Hidrogenao: A hidrogenacaoconsiste na saturao da dupla ligao com hidrognio,

solidificando, dessa forma, os triglicerdios que contenham cidos graxos insaturados. Esse processo utilizado para a produo de margarinas. A hidrogenao incompleta nas ligaes duplas faz com que a margarina fique mais pastosa. Rancificao: Processos hidrolticos e oxidativos transformam os triglicerdios em compostos com cheiro e sabor desagradveis. O processo hidrolticos ocorre custa de enzimas bacterianas que agem principalmente sobre triglicerdios que contenham cidos graxos de cadeia curta como, como por exemplo, os existentes na manteiga. O processo oxidativo mais comum e envolve triglicerdios que contenham cidos graxos insaturados. Em presena do oxignio molecular, formam-se hidroperxidos que se decompem dando origem aos aldedos responsveis pelo

cheiro e sabor desagradveis. Os hidroperxidos podem formar peroxirradicais que so potentes agentes oxidantes. Esses agentes podem ser neutralizados por substancias conhecidas como antioxidantes. Entre os antioxidantes incluem-se as vitaminas C e E, o acido glico, o propigalato, o butil-hidroxianisol (BHA) e o butil-hidroxitolueno (BHT). Hidrlise: Os triglicerdios hidrolisam-se produzindo cidos graxos e glicerol quando catalisados por cidos ou por enzimas denominadas lpases. Quando a hidrolise ocorrer em presena de lcali, os produtos sero glicerol e sal do acido graxo, conhecidos como sabo. A reao denomina-se saponificao. Detergncia: Os detergentes so caracterizados por serem compostos que possuem em sua estrutura uma poro hidroflica e uma hidrofbica. Os sais dos cidos graxos tem na cadeia hidrocarbonada a poro hidrofbica e na carboxila dissociada (carga negativa neutralizada por sdio ou potssio), a poro hidroflica. A ao de limpar e a habilidade de emulsificar de um detergente dependem de sua capacidade de formar micelas que englobam os materiais gordurosos na sua poro hidrofbica. A lecitina, um fosfolipdio, utilizada na industrializao de alimentos para a fabricao de produtos de dissoluo instantnea, como leite em p, chocolates etc. DIGESTO, ABSORO E TRANSPORTE DE GORDURAS: O evento inicial da digesto de lipdios da alimentao comea na boca. Embora nenhuma hidrolise de triglicerdio ocorra na boca, os lipdios estimulam a secreo da lpase das glndulas serosas na base da lngua. Essa lpase torna-se ativa no estomago e responde por 20 a 30% da digesto de lipdios no estomago. A lpase lingual preparada da lngua bovina usada industrialmente na fabricao de queijo muzzarela. Embora haja secreo de uma lpase gstrica, ela no de maior importncia fisiolgica. A atividade dessa lpase diminui com a extenso da cadeia de carbono dos cidos graxos nos triglicerdios. Praticamente no age sobre os triglicerdios que contenham cidos graxos com cadeia hidrocarbonada de 10 ou mais tomos de carbono.

A presena da gordura no duodeno promove a liberao do hormnio enterogastrona que retarda o esvaziamento gstrico. A velocidade de entrada da gordura no duodeno regulada e parece estar relacionada com a atividade das enzimas lipolticas pancreticas. A ao da lpase pancretica aumentada pela propriedade detergente dos sais biliares junto com cidos graxos e glicerol. Defeitos genticos e interferncia na secreo de enzimas associadas s doenas pancreticas promovem anormalidades na digesto dos lipdios. Os lipdios no digeridos podem promover a esteatorreia, condio na qual as fezes so gordurosas, volumosas e muito claras. Nesse caso, alem das deficincias de lipdios como fonte de energia, haver, tambm, no organismo falta dos cidos graxos essenciais e vitaminas lipossolveis. O jejuno o principal local de absoro dos lipdios. Os cidos graxos e monoglicerdios formados no processo de digesto, por ao da lpase pancretica sobre a emulso de triglicerdios e fosfolipdios da alimentao, formam micelas junto com sais biliares, fosfolipdios, vitaminas lipossolveis e colesterol. Dentro das clulas da mucosa, os monoglicerdios e cidos graxos so reesterificados para triglicerdios. O triglicerdio recm formado envolvido por um envelope de protenas (apoprotenas), fosfolipdios e colesterol (cerca de 30% como colesterol livre e 70% como colesterol esterificado), constituindo os quilomcrons que so drenados pelo ducto torcico diretamente na veia subclvia. Quilomcrons so, portanto, lipoprotenas grandes contendo principalmente triglicerdios em seu miolo. Quando os quilomcrons passam pela circulao perifrica, eles interagem com a lpase lipoprotica, uma enzima que esta localizada na superfcie endotelial dos capilares. Essa enzima hidrolisa os triglicerdios dos quilomcrons e os cidos graxos livres so liberados e captados pelos adpcitos nos quais so ressitetizados a triglicerdios e armazenados. Aqueles liberados nos capilares do msculo esqueltico so captados e usados para a produo de energia. O restante da partcula de quilomcrons s, contendo menos triglicerdios, captado pelo fgado.

TRANSPORTE DE LIPDIOS ENDGENOS: Os lipdios so transportados por lipoprotenas. As lipoprotenas classificam-se de acordo com suas densidades ou mobilidade eletrofortica. H uma correspondncia entre essas duas classificaes: a lipoprotena de muito baixa densidade (VLDL)

corresponde a frao pr-beta da eletroforese em papel; a lipoprotena de densidade baixa (LDL) corresponde a frao beta e a lipoprotena de densidade alta (HDL) corresponde a frao alfa da classificao eletrofortica. O fgado produz e secreta a VLDL. A interao dessa partcula com a lpase lipoprotena resulta na liplise de triglicerdios deixando uma VLDL remanescente no plasma. Essa pode ser captada pelo fgado ou ser convertida em LDL. A converso em LDL envolve a lpase heptica que hidrolisa triglicerdios e fosfolipdios da superfcie da partcula. A LDL ento formada tem seu miolo composto quase inteiramente de steres de colesterol. Embora a LDL possa entregar colesterol para os tecidos perifricos, a maioria das partculas de LDL circulantes removida pelo fgado. Outra classe de lipoprotena constituda pela HDL. Ela contm principalmente steres de colesterol no seu miolo. A HDL importante por promover o transporte reverso do colesterol sintetizado no tecido perifrico para o fgado a fim de ser excretado. Cerca da metade do colesterol produzido pelo corpo parece ser feita nos tecidos perifricos. GORDURA CORPORAL: Ao nascimento, o corpo humano contm aproximadamente 12% de gordura e aos seis meses atinge o pico de cerca de 25%; ento declina para 15 a 18% na prpuberdade. Aos 18 anos, os homens tm aproximadamente 15 a 18% de gordura corporal de as mulheres 20 a 25%. H um em ambos os sexos aps a puberdade e durante a vida adulta, atingindo cerca de 30 a 40% do peso corporal. Entre as idades 20 a 50 anos, o contedo corporal aumenta de gordura dos homens, aproximadamente, dobra, enquanto o das mulheres aumenta mais ou menos 50%. O total do peso corpreo, entretanto, aumenta de somente 10 a 15%, indicando que houve uma reduo na proporo de massa corporal magra. A porcentagem da gordura corprea influenciada pelo nvel de atividade fsica. Durante o treinamento fsico, a gordura corporal diminui e o tecido magro aumenta. Aps o treinamento, o processo revertido. Essas variaes entre o tecido magro e a gordura corprea podem ocorrer sem mudana no peso do corpo, mas, se uma atividade fsica regular se mantm na vida adulta, o aumento da gordura corporal pode ser prevenido.

OBJETIVOS Identificar a existncia de lipdios no meio de anlise, bem como os diferentes tipos de lipdios. MATERIAIS E MTODOS Materiais utilizados: Microscpio, pipetas volumtricas, tubos de ensaio, bico de Bunsen, gelo, cido clordrico, cido sulfrico, hidrxido de sdio, soluo de lugol, gua destilada, solues de glicose, frutose, amido, lactose, maisena, acar, goma arbica, ribose, reagentes de Bial, Benedict, Molish, Seliwanoff, Barfoed.

cido olico

Glicerol

cido esterico

Parte A. Ensaios gerais para glicerol 1. Identificao de gorduras pelo teste da acrolena Quando se aquece o glicerol na presena de bissulfito de sdio, aquele composto desidratado e oxidado acroleina, conforme a reao abaixo. A acrolena facilmente detectvel devido ao seu odor

intenso, desagradvel e irritante. Assim, este teste propicia uma maneira de detectar a presena de glicerol livre em gorduras.
HOH2C CHOH HOH2C Glicerol H2C CH HOC Acrolena

NaHSO3

H2O

Metodologia Adicionou-se uma pequena quantidade de amostra (2 a 3 gotas) em um tubo contendo bissulfito de sdio (entre 1 a 2 g) e aqueceu-se rigorosamente em bico de gs. Verificou-se ento, os odores exaladores. Resultados e discusses Tabela 1. Resultados obtidos - teste da acrolena Amostras Amostra 6 Glicerol Ac. Esterico Ac. Oleico Odor Odor irritante e desagradvel( cheiro de plstico queimado) Cheiro de desagrvel Odor irritante e desagradvel (mesmo cheiro da amostra) Odor irritante e desagradvel (mesmo cheiro da amostra)

Pela tabela acima, podemos observar que a amostra continha glicerol, pois sentiu-se um odor intenso, desagradvel e irritante. Isso se deve a presena da acrolena, produto da oxidao do glicerol. 2. Teste do hidrxido de cobre Metodologia Adicionou-se aos tubos de ensaio 1,0 mL de soluo de NaOH 10% e a seguir gotas de soluo de sulfato de cobre 5%. Por fim adicionou-se gotas de soluo de lipdios.

Resultados e discusses Tabela 2. Resultados obtidos - teste do hidrxido de cobre Amostras Amostra 6 Glicerol Ac. Esterico Ac. Oleico Colorao ou precipitado Separa a fase Separa a fase No separa a fase Separa a fase

As duas fases observadas devido a insolubilidade dos lipdeos, ou seja, as duas solues possuem polaridades diferentes. A soluo de cobre tem colorao azul, esta ficou na parte superior e a fase aquosa, incolor, na fase superior. Parte B. Ensaio para cidos graxos 3.Teste do Iodo : Este teste identifica a presena de cido graxo insaturado. Ocorre uma reao de halogenao, em que o iodo reage com as duplas ligaes do cido graxo insaturado.

Se houver dupla ligao, o iodo ser consumido e a colorao caracterstica da soluo de iodo diminuir de intensidade. Metodologia Pipetou-se 1 mL de uma soluo 10% de lipdio em clorofrmio. Adicionou-se gota a gota soluo de iodo at colorao estvel.

Resultados e discusses Tabela 3. Resultados obtidos para o teste de adsoro de iodo amostras Amostra problema glicerol cido esterico cido olico colorao ou precipitado turvo vermelho vermelho turvo Gotas do reagente adicionadas descorou Nada ocorreu descorou descorou

A descolorao da amostra significa que o lipdeo em questo apresenta em sua estrutura insaturaes. O glicerol uma estrutura saturada, por esta razo, o iodo no foi consumido e nada ocorreu aps sua adio. Os dois cidos em questo, apresentam em sua estrutura insaturaes, por isso houve a descolorao da soluo. A amostra pode conter, pela semelhana da colorao, cido olico.

5. Reao com ctions metlicos Metodologia Dissolveu-se separadamente em tubos de ensaio 0,01g de cido oleico e 0,1 g de cido estearico em 2,0 mL de ter etilico. Gotejou-se as seguintes soluoes: cloreto de calcio, acetato de chumbo, cloreto de magnesio, cloreto de aluminio, e sulfato de cobre. Resultados e discusses Tabela 4. Resultados obtidos reao com ctions metlicos cido graxo Acido Esterico Acido Olico ons Metlicos Ca2+ Mg2+ Al3+ Cu2+ Ca2+ Mg2+
Al3+

Observaoes Incolor Incolor Incolor Duas fases


Superior leo

Cu2+

Inferior- gua + on Cu2+ -azul Incolor Incolor Incolor Igual ao teste com c. esterico

Tanto o cido olico quanto o cido esterico apresentam uma cadeia hidrofbica e um grupo hidroflico. Quando esses lipdeos se encontram em soluo que contm ctions, a parte hidroflica tendem a solvatar esses ctions. A parte hidrofbica fica orientada em direo ao solvente. Quanto mais duro for o ction, mais eficiente ser a solvatao e mais solvel ser a soluo que contm o lipdeo. O on Al3+ mais duro que os outros ons, assim sua soluo ser mais solvel. No apresentar duas fases como aconteceu no caso do cobre. Parte C. Reaes gerais para triglicerdeios 6. Saponificao basicamente a interao ( ou reao qumica ) que ocorre entre um cido graxo existente em leos ou gorduras com uma base forte com aquecimento. O sabo um sal de cido carboxlico e por possuir uma longa cadeia carbnica em sua estrutura molecular, ele capaz de se solubilizar tanto em meios polares quanto em meios apolares. Alm disso, o sabo um tensoativo, ou seja, reduz a tenso superficial da gua fazendo com que ela "molhe melhor" as superfcies. O teste da saponificao identifica a presena de cido graxo. Para isso colocamos a amostra na presena de uma base como KOH (Hidrxido de Potssio) ou NaOH (Hidrxido de Sdio).

Reao de Saponificao O composto 4 uma molcula anfiptica, com uma "cabea" polar (COO- K+) e uma cauda apolar formada pelo radical "R". Quando em meio aquoso molculas anfipticas tendem a se agrupar formando estruturas esferides, as micelas. Este o princpio da limpeza de gorduras produzida pelo sabo. Metodologia

Colocou-se em dois tubos de ensaio uma pequena quantidade de amostra. Adicionou-se 8,0 mL de soluo alcolica de KOH 5,6%. Aqueceu-se apenas um tubo em banho de gua fervente por 10 min. Retirou-se duas gotas de cada tubo e tranferiuse (separadamente) para outros dois tubos contendo 3,0 mL de gua. Resultados e discusses Tabela 5. Resultados obtidos reao de saponificao tubos 1 2 Antes do aquecimento Sem espuma Sem espuma Aps aquecimento Formao de espuma Formao de espuma

Este teste identifica a presena de triglicdeo na amostra, pois a hidrlise alcalina gera como produto uma mistura de sais de cidos carboxlicos de cadeia longa. A formao da espuma na amostras identifica que tal reao aconteceu. Nos dois tubos no houve diferena quanto a colorao ou a intensidade da formao do sabo. 7. Extrao do colesterol da gema do ovo Metodologia Colocar em um tubo de ensaio 0,1 mL de extrato e em seguida um segundo tubo contendo 0,2 mL de soluo 0,1 % de colesterol em clorofrmio. Adicionar 5,0 mL do reativo cromogenico em cada tubo e agitar. Colocar os tubos em banho maria 37 C, mantendo-os nesta temperatura e no escuro, por 15 min. Observar a variao de colorao (verde) que proporcional a concentrao de colesterol existente na amostra.

Resultados e discusses Tabela 7. Resultados obtidos deteco do colesterol Amostras Extrato de gema de ovo Colesterol Observaes Verde-azulado verde

Este experimento teve como objetivo identificar a presena/ausncia do colesterol na gema de ovo. Pela semelhana das coloraes podemos confirmar que o extrato de gema de ovo contm colesterol.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS