Extrao de DNA

Fundamentos Tericos,

A cromatina formada por molculas de DNA ( polmeros de desoxi-ribonucleotdeos fosfatados) associadas protenas, localizada no ncleo das clulas. Para a extrao de DNA, necessrio que ocorra a lise das membranas plasmticas e nucleadas, remoo das protenas e isolamento do DNA purificado. Em geral, as protenas transmembrana s podem ser solubilizadas por agentes que rompa associaes hidrofbicas e destruam a bicamada lipdica. Entre esses, os mais teis para o bioqumico que estuda membranas so detergentes, os quais so molculas anfipticas que tendem a formar micelas em gua. Quando misturados com membranas, as extremidades hidrofbicas dos detergentes ligam-se s regies hidrofbicas das protenas das membranas, deslocando as molculas lipdicas. Como a outra extremidade da molcula de detergente polar, esse ligao tende a solubilizar as protenas da membrana como complexos de detergentes-protena. Com detergentes inicos fortes, mesmo as protenas de membrana mais hidrofbicas podem ser solubilizadas. A molcula de DNA no solvel em lcool e desta maneira tende a formar um aglomerado de molculas quando em meio alcolico.

Atividade 1 - Extrao de DNA de clulas de banana.

MATERIAL 1 banana Estilete NaCl (sal de cozinha) Detergente gua destilada lcool etlico 95% gelado Pipeta Pasteur

Tudo de ensaio Banho-maria a 60C Proveta 100ml Erlenmeyer de 100ml Placa de Petri pequena Filtro de papel METODOLOGIA 1 Picar em pedaos bem pequenos ou triturar cerca de 1/4 de uma banana em placa de Petri utilizando o bisturi. 2 Preparar a soluo de estrao em um elenmeyer, misturar 5 ml de detergente, 1g de sal de cozinha e complementar at 50 ml de gua destilada. 3 Adicione a banana triturada, misture e coloque 7 ml de soluo em um tubo de ensaio. Colocar o tubo em banho-maria a 60C por 30 mim. 4 Resfriar rapidamente a soluo colocando-a num recepiente com gelo e mexendo cuidadosamente. 5 Coar a mistura em filtro de papel, transferindo 7 ml da soluo para o tubo de ensaio limpo. 6 Adicionar a soluo 7 ml de lcool etlico 95% vagarosamente. 7 Inverter o tubo com cuidado at o surgimento do DNA precipitado.