UDES UNIVERSITARIA DE SANTANDER ASIGNATURA: LABORATORIO DE CONTROL Y SEGURIDAD ALIMENTARIA

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Abril 24 de 2.009

PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO Cdigo: 33447 ANALISIS MICROBIOLOGICO DE AGUAS Elaborado por: Revisado por: KAREN P. MARTINEZ MARCIALES CLAUDIA MONTEJO Microbiloga Coordinadora de Bacteriologa Docente - UDES UDES OBJETIVOS:

Gua Practica No 11

Conocer el procedimiento de anlisis de aguas por la tcnica de Filtracin por membrana. Aplicar la normatividad vigente actual sobre anlisis microbiologico de aguas. Establecer comparaciones entre los mtodos tradicionales y los mtodos actuales de anlisis microbiologico de aguas. Adquirir destreza en el montaje del equipo de filtracin por membrana. Realizar los montajes en placas de Petrifilm, para establecer comparaciones de crecimiento mediante el uso de tcnicas diferentes.

FILTRACION

POR

MEMBRANA

La filtracin es el proceso que consiste en separar un slido suspendido del liquido en el que esta suspendido al hacerlos pasar a travs de un medio poroso por el cual el liquido puede penetrar fcilmente. El lquido a filtrar se denomina suspensin, el lquido que se filtra, el filtrado, y el material slido que se deposita en el filtro se conoce como residuo. Esta tcnica de filtracin por membrana es eficaz para analizar la presencia de contaminacin microbiana o por partculas en las soluciones acuosas. Se empleara para su crecimiento el medio de cultivo especfico Agar Plate Count, Agar Chromoculth y agar Cetrimide, en donde se manifestar su presencia o ausencia en el anlisis Microbiolgico de agua apta para el consumo humano.

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Realizar limpieza y desinfeccin del rea de procedimientos Mezclar muy bien la muestra para asegurar de esta forma la homogeneizacin antes de preparar las diluciones correspondientes. En el archivo de toma de muestras debe aparecer el nombre de la muestra, con una descripcin detallada de la misma, teniendo en cuenta procedencia de la muestra, pH, cloro residual, etc. Registrar la muestra en el cuaderno con el nmero consecutivo correspondiente. Marcar el material a emplear con el cdigo de la muestra: frascos de dilucin y cajas de petri con el medio de cultivo. Agitar vigorosamente la muestra de agua para homogeneizar la flora que pueda contener. Preparar la dilucin 10-1, midiendo 10 ml de la muestra, y transferirlos a un frasco que contenga 90 ml de agua destilada estril. Segn el agua se realizan ms diluciones o solo se llega hasta 10-1, ya que son aguas tratadas.

Equipos y material

Pipetas estriles de 10 ml. Cajas de petri estriles con agar plate count, Membranas de 0.45 m. Pinzas metlicas. Equipo completo de filtracin por membrana. Incubadora de 37C +/- 2C.

Medios de cultivo y reactivos

Agar plate count, agar chromoculth y agar cetrimide., servido y solidificado en cajas de petri estriles.

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Procedimiento Preparar la muestra y las diluciones necesarias. El equipo de filtracin por membrana debe estar completamente estril. Retirar del embudo receptor, la tapa y soltarlo de la unidad base.(erlenmeyer) Colocar la unidad base dentro del erlenmeyer ajustndola muy bien y colocar con ayuda de pinzas estriles la membrana en forma precisa sobre el disco negro. Colocar suavemente el embudo receptor que es atrado magnticamente a la base. Conectar la manguera de la bomba de vaco a la salida del recipiente base. (erlenmeyer) Verter la muestra en el embudo colector y aplicar vaco para que se filtre la muestra. Se miden 100ml, 50 ml, 25 ml, o 10 ml dependiendo del grado de contaminacin del agua. Si una vez se realiza lectura y el crecimiento es incontable, se miden por lo general 50 o 25 ml de la dilucin 10-1. Al finalizar la filtracin, se debe desconectar la bomba de vaco, separar el embudo colector del recipiente base, retirar la membrana con ayuda de pinzas estriles, y colocarla sobre la caja de petri con agar . Invertir e Incubar las cajas a 37C+/- 2C. Por 24-48 horas. Para Pseudomona dejar incubado hasta 72 horas.

Clculo e interpretacin de los resultados. Se observa el crecimiento y se hace el conteo total de la caja sembrada. Las colonias tpicas de coliformes totales tienen color rojo. Las colonias de coliformes fecales son de color violeta azulado. Las colonias de Pseudomona son de color verde, se deben confirmar con la prueba de oxidasa.

El calculo de resultados se expresa mediante la siguiente formula: Ufc / 100 ml = numero de colonias ---------------------------------- X 100 Volumen de muestra filtrada

Si se filtro la muestra a partir de una dilucin, tener en cuenta este factor al final del clculo de los resultados. Expresin de resultados Los resultados se expresan como UFC( unidades formadoras de colonias ) por cada 100 mililitros de muestra

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Consultar: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Cual es el decreto y resolucin actuales por las cuales se debe regir para el control de calidad de agua potable? Cuales son las caractersticas fsicas y qumicas que debe reunir un agua para consumo humano Cuales son las caractersticas qumicas de sustancias que tienen implicaciones sobre la salud humana? Mencione las tcnicas que se deben emplear para el anlisis microbiologico de agua, segn la normatividad vigente actual. Que es el IRCA? En que consiste la prueba PICCAP? Porque es importante? ESCRIBA 5 DEFINICIONES QUE SE MENCIONEN EN LA RESOULICON ACTUAL DE AGUAS. Cuales se consideran pruebas bsicas y cuales complementarias en cuanto a anlisis microbiologico y fisicoqumico de aguas de acuerdo a la normatividad vigente?