TESTE DE PIROGNIO Escolher 3 coelhos sadios para cada amostra a ser ensaiada. Pesar e coloc-los nos contendores.

Deix-los ambientar por 30 minutos. Decorrido este perodo, medir a temperatura retal pela introduo de termmetro veterinrio numa profundidade de 7,5 cm. Deixar por pelo menos 1 minuto. Manter novamente os animais em repouso durante 30 minutos e repetir a leitura de temperatura. Anotar os pesos, temperaturas basais em fichas prprias. Calcular a mdia das temperaturas basais, iniciar a administrao da amostra pela injeo na veia marginal da orelha do animal. Injetar lentamente o volume. Deixar o animal em repouso e medir a temperatura dos animais aps 1 h; 2h e 3 horas aps a injeo. Anotar os valores da temperatura, calcular as elevaes de temperatura e emitir o resultado da anlise da amostra.
Exigncias

Peso dos coelhos = 2,0 a 3,5 Kg Temperatura basal = 38,9.C a 39,8.C Ambientados em laboratrio climatizado e controlado. Aprovado : Se a diferena das temperaturas for inferior a 0,6.C em um dos animais, e se a somatria das temperaturas for inferior a 1,4.C. Reteste : Se a diferena das temperaturas for superior a 0,6.C em um dos animais, e se a somatria das temperaturas for superior a 1,4.C. Testar com 5 novos coelhos; Aprovado : Se a diferena das temperaturas dos oito animais for superior a 0,6.C em at dois animais, e se a somatria das temperaturas dos oito animais for inferior a 3,7C. Reprovado : No atender as exigncias descritas acima.

TESTE DE INOCUIDADE
Este teste tem por objetivo a deteco de elementos txicos proveniente do material empregado na elaborao do produto. 1. Material necessrio Pool de amostra do produto; Seringas de 1 e 5 ml; agulhas de 15x5 mm( para via intraperitoneal ou endovenosa); 10x5 mm (subcutnea) e sonda gstrica (via oral), esterilizados; Camundongos pesando entre 17 a 23 g ; Cobaias de 250 a 350 g ( teste de sensibilidade cutnea, imunoterpicos); Balana 2. Tcnica

3. Registrar os pesos iniciais; 4. Inocular 0,5 ml do produto (3 vezes a dose teraputica proporcional por Kg) em 5 camundongos. Para via subcutnea inocular 0,2 ml. 5. Observar os animais por 48 horas aps inoculao Para teste com imunoterpicos Inocular 0,2 ml via subcutnea em 5 camundongos Inocular 0,5 ml via subcutnea do mesmo produto em 2 cobaias; Proceder o teste controle inoculando-se salina; Observar os animais por 7 dias e registrar o peso final no 70 dia do teste 3. Interpretao do Teste O teste considerado satisfatrio quando: 1. Todos os animais sobrevivem ao perodo mnimo de 48 horas, ou 7 dias para imunoterpicos; 2. nenhum animal apresentar qualquer resposta inespecfica e/ou inesperada; 3. O peso final dos animais (para imunoterpicos) for igual ou superior ao peso inicial. Se o produto em teste no preencher os requisitos acima citados, o teste dever ser repetido com o dobro do nmero de animais.

TESTE DE ESTERILIDADE
1. Introduo O termo Esterilidade utilizado para designar um produto livre de qualquer microrganismo vivel, excetuando-se os casos de produtos, como certas vacinas (BCG, sarampo, poliomielite e outra), que possuem microrgansimos vivos, em sua constituio. Neste caso, o teste de esterilidade visa a deteco de microrganismos viveis estranhos aos constituintes da vacina. O teste de esterilidade feito segundo as farmacopias indicadas para comprovar ausncia de microrganismos, aerbios e anaerbios, capazes de se reproduzir em um nmero definido de amostras de um lote. A probabilidade de detectar microrganismos viveis no teste de esterilidade aumenta com o nmero de organismos presentes numa determinada quantidade da preparao a ser testada e varia de acordo com a espcie de microrganismo. A amostragem, ao acaso, de um lote no pode detectar, com certeza, nveis muitos baixos de contaminao que seja uniforme em todo o lote e por conseguinte, o teste de esterilidade por si s no fornece segurana absoluta sobre a ausncia de contaminao microbiana em todas as amostras do lote. O teste de esterilidade destinado a revelar a presena de microrganismos nas amostras utilizadas no lote . A interpretao dos resultados baseada na suposio de que o contedo de cada recipiente do lote, se testados, tambm teriam resultado equivalente. Como evidente que cada recipiente do lote no pode ser testado, um nmero suficiente de recipientes deve ser analisado, de modo a fornecer um grau adequado de confiana no resultado do teste. Deve-se ter como avaliao que os resultados obtidos sem controles prvios no podem ser levados em conta.

2. Amostragem Quando um teste de esterilidade realizado em amostras cujo nmero no representa estatisticamente um dado lote, os resultados obtidos com as mesmas, no podem ser extrapolados com segurana para caracterizar a condio de esterilidade do lote. Isto significa que um nmero excessivamente pequeno de amostras serviriam apenas para detectar um alto ndice de unidades contaminadas. Em vista disso, o nmero de amostras a serem ensaiadas, deve representar uma poro estatisticamente significativa do lote final. Para cada processo de enchimento (ou envase) de cada lote, dever ser testado um nmero de amostras correspondente frmula emprica 0,4 n , onde n representa o nmero total de envase do lote. Casos em que o lote apresenta nmero inferior a 100 frascos envasados, a amostragem deve ser correspondente a 10% do total, no podendo ser inferior a cinco. A tabela I mostra valores de amostragem s serem recolhidos para os teste de esterilidade, para o controle do lote produzido. Tabela I
Nmero de amostras necessrias para teste de Esterilidade Nmero de frascos envasados no lote final 100 100-500 501- 1.000 1.001- 5.000 5.001 -10.000 10.001- 20.000 > 20.000 Quantidade de amostras o n de frascos 5 10 13 28 40 56 63

3. Tipos de medicamentos submetidos ao ensaio de esterilidade Medicamentos de uso parenteral; Oftlmicos; Medicamentos empregados nos tratamentos de queimaduras e feridas abertas; Materiais com aplicao em cirurgia, ginecologia e urologia. 4. Descrio de uma sala assptica A primeira exigncia para execuo de trabalhos asspticos uma sala propriamente estruturada e designada para funcionar corretamente para tal atividade. Isto envolve condies adequadas de paredes e pisos que possam ser de fcil limpeza e desinfetados, pr-camaras para troca de roupas da equipe, filtros biolgicos de ar e presso positiva, havendo ainda diferena de presso entre a cmara e a antecmara, esta devendo possuir presso inferior primeira. O fluxo de ar deve ser o mais direcionado possvel de modo a eliminar a turbulncia na sala. A eficincia do processo elevada atravs do uso de cabines de fluxo laminar. Para testes de esterilidade pelo mtodo de filtrao por membrana recomendado uso de cabine de fluxo laminar vertical e para o mtodo de inoculao direta, o horizontal. o uso de lmpadas U.V. nas salas asspticas, embora seja um ponto bastante discutvel com relao eficcia nos processos de descontaminao ambiental, constituem material de apoio para a reduo nos nveis de contaminao, e principalmente so

de extrema importncia para o processo de descontaminao externa dos materiais que sero introduzidos nas salas asspticas, atravs de tneis de lmpadas U.V. O uso de lmpadas U.V. deve ser controlado atravs de registros peridicos, quer seja de radiao emitida ou do no de horas de utilizao. importante tambm manter as lmpadas sempre limpas, pois a deposio de pelculas de poeira ir funcionar como barreiras para a radiao. A limpeza deve ser feita com gaze embebida em lcool, suavemente e com freqncia semanal. A temperatura e umidade da sala assptica devem ser devidamente controladas, pois o excesso de umidade e altas temperaturas facilitam a proliferao de microrganismos, enquanto que umidade e temperaturas baixas so prejudiciais aos operadores que trabalharo nestas reas. Recomenda-se manter a sala em torno de 20o C e 53% de umidade relativa. 5. Constituio dos meios de cultura Caldo de casena e soja : protenas e carbohidratos Caldo de tioglicolato: proteinas, carbohidratos, cido tiogliclico, cistena, resazurina e gar em baixa concentrao. Os agentes redutores (cido tiogliclico e cistena) tendem a diminuir a concentrao de oxignio. O gar tambm contribui para diminuio da tenso de oxignio, propiciando a anaerobiose. A parte superior em contato com o ar oxidado apresentando colorao avermelhada e a parte inferior reduzida, apresentando colorao amarela. 6. Controles Prvios ao teste de Esterilidade 6.1. Meios de Cultura Os meios de cultura utilizados nas provas de esterilidade bacteriana e fngica devero ser testados preliminarmente quanto sua esterilidade e viabilidade. A. Controle negativo: Para satisfazer os critrios de esterilidade, utiliza-se o meio lquido de tioglicolato, incubado na faixa de temperatura de 30 a 37oC por 7 dias, para evidenciar o crescimento de bactrias aerbias e anaerbias, e o meio de caseina e soja, incubado na faixa de temperatura de 20 a 27oC para evidenciar o crescimento de fungos. Pode-se utilizar qualquer outro meio com propriedades nutritivas equivalentes. No deve haver crescimento microbiano. B. Controle Positivo. O teste de viabilidade avaliado utilizando-se um pequeno inculo ( menos de 100 germes) de microrganismos apropriados. O meio dever ser incubado nas temperaturas utilizadas na realizao do teste propriamente dito (Tabela II). Tabela II

Microrganismos usados nos testes de fertilidade dos meios para teste de esterilidade Meio de Metabolismo Microrganismo Cultura Respiratrio B. subtilis ( Tioglicolato aerbio ATCC 6633)

B. vulgatus Tioglicolato anaerbio (ATCC 8482) C. albicans ( Caseina e aerbio ATCC10231) soja Caseina e A. niger aerbio soja
No caso destes testes resultarem positivos, o meio vivel para o teste e pode ser utilizado para o teste de rotina. 6.2. Material de Ensaio Todo material desconhecido dever ser feito exame prvio quanto ausncia de atividade bacteriosttica ou fungisttica, fazendo-se a comparao: Meio sem inculo + material de anlise Meio com inculo + material de anlise Caso no haja crescimento, elege-se um dos seguintes mtodos: a) Dilui-se o material de anlise no meio de cultura at uma concentrao inativa do inibidor; b) Adiciona-se um inativante apropriado (Tabela III); c) Utiliza-se o processo de filtrao. Tabela III

Inativantes Penicilinase, cloreto de Penicilina hidroxilamnio cistena, cloreto de hidroxilamnio, Estreptomicina penicilinase Compostos de mercriocompostos com -SH ( cistena, e chumbo glutation, dimercaptol) Sulfonamidas PABA Compostos de amnio lecitina, polisorbato 80 4ario Compostos de Arsnio cistena e tioglicolato

Substncias Inibidoras

TESTE DE ESTERILIDADE Prtica

1. Introduo O teste de esterilidade tem como finalidade comprovar a ausncia de microrganismo capazes de se reproduzirem em um nmero definido de amostras de um determinado lote.

2. Tcnicas Empregadas 3. Mtodo Indireto; este mtodo consiste na filtrao de uma amostra lquida atravs de uma membrana filtrante e esta inoculada no meio de cultura apropriado. 4. Mtodo Direto: Consiste na inoculao direta da amostra diretamente no meio de cultura apropriado. 3. 4. 5. 6. Material Necessrio Caldo de tioglicolato: preparar segundo o fabricante Caldo caseina e soja; preparar segundo o fabricante. Soluo peptonada a 0,15 (para lavagem): Dissolver quantidade de peptona correspondente a 0,1% em gua destilada; distribuir em erlenmeyer ou frasco de 100 ml e esterilizar em autoclave a 121.C por 20 minutos. Esfriar e incubar em estufa a 35.C por 48 horas para certificar que o material est estril. Soluo de cloreto de benzalconeo: Dissolver quantidade de cloreto de benzalconeo equivalente a 0,4g com 5 ml de etanol 96. G.L. Completar com gua destilada para 100 ml. Aparelhagem de filtrao: lavar cuidadosamente todos os componentes da aparelhagem, enxaguar em gua corrente e secar ao ar ou estufa a 40.C. Montar o aparelho de filtrao colocando uma membrana de porosidade de 0,22 mm. Embrulhar o conjunto em folha de papel Kraft formolizado e esterilizar em autoclave por 30 minutos a 121.C. Acessrios; os acessrios como pinas, agulhas hipodrmicas e seringas devem ser embrulhadas em papel alumnio individualmente e colocados em um nico envelope de papel Kraft. Esterilizar em autoclave. Avental, gorros, luvas, mscaras e gaze: As luvas devem ser limpas, secas e polvilhadas com talco; o avental, a gaze, mscaras, luvas e gorrosdevem ser embrulhados em envelopes de papel kraft, e esterilizar em autoclave.

7. 8.

9. 10.

4. Preparo da Sala Assptica Deve-se proceder a desinfeo da sala com soluo de cloreto de benzalconeo a 0,4% (piso,parede) no mnimo 2 horas antes do teste. Limpar o fluxo laminar e a bancada com soluo anti-sptica diferente do cloreto de benzalconeo. 5. Preparo das Amostras 6. Ampolas e Frasco-Ampolas: manter imersos em soluo de cloreto de benzalconeo a 0,4%, 30 minutos antes do incio do teste. 7. Amostras a granel: Na sala assptica, sob proteo do fluxo laminar, coletar as amostras em frascos estreis e mant-los fechados at o momento do teste. 6. Preparo do Material para Teste Colocar todo o material proveniente da autoclave, (j esterilizado), dentro da capela do fluxo laminar e dispor de forma adequada para a execuo do teste. 7. Procedimento 8. Mtodo por Filtrao em Membrana

9. Montagem do aparelho de filtrao: Conectar a mangueira da bomba vcuo, devidamente desinfectada, ao copo de filtrao; 10. Filtrao das Amostras Ampolas: com auxlio de uma gase estril, quebrar as ampolas e retirar o lquido com o auxlio de uma seringa e verter no copo de filtrao. Frasco-Ampola: retirar a tampa com auxlio de um alicate e colocar a amostra em erlenmeyer contendo gua peptonada; dissolver e verter no copo de filtrao. No caso de amostras lquidas ou preparaes extemporneas no h necessidade de retirar as tampas. Retirar a amostragem com auxlio de uma seringa com agulha estril e perfurar a tampa de borracha. Para amostras extemporneas, injetar gua destilada estril ou diluente adequado, dissolver e retirar a amostra com seringa. Matri-prima: colocar uma quantidade representativa da amostra no erlenmeyer contendo gua peptonada, dissolver bem e verter no copo de filtrao. Reservar sempre um copo de filtrao para o controle negativo, realizando a filtrao de gua peptonada estril. Todos os copos de filtrao contendo a membrana filtrante (durante a execuo do teste) devem ser lavados com gua peptonada. Retirar, asspticamente, a membrana com auxlio de uma pina estril. Cortar a membrana e inocula-la em caldo de tioglicolato (pesquisa de bactrias) e caldo casena e soja (pesquisa de fungos). Identificar os tubos, colocando nome, lote e data de execuo do teste. Incubar em estufa. 2. Mtodo por Inoculao Direta em Meio de Cultura 3. Mostras insolveis ou lquidos: Se a amostra solvel (p), dissolver previamente em soluo peptonada estril. Se for lquida, com auxlio de seringa e agulha estril, transferir a amostra diretamente no tubo contendo meio de cultura, nunca excedendo 15 ml por tubo. 4. Amostras Insolveis: Sob proteo de fluxo laminar, retirar cuidadosamente uma amostragem mdia e transferir para os tubos com meio de cultura. Na preparao dos meios de cultura para substncias insolveis, incorporar 0,25% de polisorbato 80 antes da autoclavao. No caso de amostras com inibidores, adicionar agente inativante adequado . Ex: Penicilina - penicilinase. Aps 7 dias de incubao ou no caso de dvidas, realizar sub-cultivo em 10 tubos, inoculando-se 1,0 ml do tubo duvidoso e incubar. 8. Incubao Leitura e Interpretao dos Resultados Incubar os tubos contendo caldo de tioglicolato em estufa a 35.C e os tubos contendo caldo casena e soja em estufa a 25.C. Observar diariamente os tubos. APROVADO: Decorrido 14 dias de observao, no houve formao de filamentos, turvao ou crescimento microbiano. RETESTE: No decorrer de 14 dias houve crescimento ou turvao, realiza-se o teste com o dobro do nmero de amostras do teste original. Realiza-se identificao pelo mtodo de Gram. Aps reteste, se houver nova contaminao realiza-se nova colorao de Gram e se o microganismo

identificado for diferente do teste original, realiza-se um novo reteste. Caso o microrganismo identificado no primeiro reteste seja o mesmo do teste original, a amostra considerada reprovada. No segundo reteste se a amostra no apresentar turvao, ela considerada aprovada. REPROVADO: Aps sucessivos retestes a amostra apresentou turao ou crescimento.

CONTAGEM MICROBIANA
(ANLISE QUANTITATIVA E QUALITATIVA) INTRODUO: Este mtodo destina-se a indicar o nvel de contaminao microbiana (viveis) existentes nas reas produtivas, laboratrio de controle biolgico, no pessoal envolvido diretamente com o processo produtivo, matrias-primas, produtos acabados, guas de diversas fontes, assim como pesquisa e identificao de microrganismos existentes. MATERIAL NECESSRIO: 1. Meio de Cultura: gar Casena e soja (TSA) ou PCA ( Plate Count Agar) - preparar segundo o fabricante. gar Sabouraud: prepara segundo o fabricante. Preparar para cada placa de Petri de 100x20mm de dimenses, o equivalente a 15 ml de meio, ou 35 ml para placas de 200x20mm. Esterilizar os meios em autoclave a 121o.C por 15 minutos. 2. Diluente: gua peptonada a 0,1 % : Pesar 0,09g de peptona, em erlenmeyer ou balo de fundo chato, e diluir em 90 ml de gua destilada. gua peptonada a 0,1% com agente neutralizante para parabenos: Preparar a gua peptonada conforme descrito acima e adicionar 0,7 g de lecitina e 8g de Tween 80. Tampo fosfato pH=7,4 : Dissolver 0,5g de hidrognio fosfato dipotssio com 0,302g de dihidrognio fosfato de potssio em quantidade suficiente para 1000 ml. 3. Vidraria e Acessrios: Placas de Petri estril ; Erlenmeyer ou balo de fundo chato; Pipetas estreis;

PROCEDIMENTO: Limpar o fluxo laminar com soluo de cloreto de benzalcneo a 0,4%; Limpar todos os materiais com lcool 70% e colocar dentro da capela de fluxo laminar. Caso as amostras contenham conservantes utilizar erlenmeyer contendo gua peptonada e neutralizante. Realizar assepsia externa dos frascos do mesmo lote e realizar um pool da amostra em frasco estril.

Amostras Lqudas Pipetar um volume de 10,0 ml do pool da amostra e diluir em erlenmeyer contendo 90 ml de gua peptonada. Homogeneizar, e pipetar 3 ml da amostra diluda, sendo que 1ml ser distribudo em um tubo contendo 9,0 ml de gua peptonada 0,1%, os outros 2 ml restantes sero distribudos em duas placas de Petri, onde cada placa receber apenas 1 ml. Diluio 10-1 Realizar diluio subsequente para 10-2 e 10-3. Amostras Slidas Pesar em torno de 10,0 g da amostra e dissolver em 90 ml de gua peptonada 0,15 e seguir da mesma forma para amostras lquidas. No caso de comprimidos ou drgeas, deve-se pulverizar, asspticamente, os comprimidos utilizando gral e pistilo estril. Seguir o mesmo procedimento das amostras lquidas. INCUBAO E RESULTADO Contagem Microbiana: As placas contendo TSA + amostra devem ser incubadas em estufa a 35o.C durante 48 horas; As placas contendo SAB = amostra devem ser incubadas em estufa a 25o.C durante 120 horas. Contar as colnias formadas, anotar o nmero e multiplicar pela diluio realizada (vide exemplo abaixo). Calcular a mdia de colnias por placas e reportar o resultado final Exemplo: Diluio = 10-1 Nmero de colnias formadas (UFC) = 290 Diluio = 10-2 Nmero de colnias formadas (UFC) = 30 Diluio = 10-3 Nmero de colnias formadas (UFC) = 1 Resultado: (290 x 101) + (30 x 102) = 2950 2 Total de UFC/ml ou g de produto = 2950 Pesquisa de Microrganismos Caldo Lactosado e TSB: incubar os erlenmeyers durante 48 horas e prosseguir pesquisa em meios especficos para identificao de cada microrganismo segundo metabolismo de cada um.

LIMITES ACEITVEIS DE CONTAGEM MICROBIANA

Material Limites Microbianos (UFC / ml ou g ) Bactrias Fungos Pesquisa (ausncia) Matria-Prima vegetal e animal Produto Uso Tpico Slidos Produto Uso Tpico lquidos Uso Oral - Slidos < 1000 < 1000 < 500 < 1000 < 100 < 100 < 50 <100 < 50 < 10 < 10 < 100 < 100 <10 E. coli; Salmonella;, S.aureus; P. aeruginosa; C. albicans; A. niger; Clostridium S.aureus; Gram negativos; Enterobacteriacea S.aureus; Gram negativos; Enterobacteriacea E. coli; Salmonella; Enterobacteriacea E. coli; Salmonella; Enterobacteriacea S.aureus; Paeruginosa; A. niger S.aureus; P. aeruginosa;Enterobacteriacea E. coli; Salmonella ; S.aureus E. coli; C.albicans E. coli; Salmonella

Uso Oral - Lquidos < 500 Oftlmicos < 100

Produtos para Bebs <100 Supositrios Cremes vaginais gua potvel < 1000 < 1000 < 100

TCNICA DE CONTAGEM EM PLACAS - POUR PLATE

um procedimento para estimar o nmero de bactrias viveis em placas contendo meio de cultura slido. As colnias podem surgir em pares, cadeias ou clulas simples, sendo que todas so denominadas como Unidades Formadoras de Colnias ( UFC). 1. Materiais Necessrios 1.1. Vidrarias Pipetas graduadas de 10,0 ml e 5,0 ml e 1,0 ml: selecionar a quantidade necessria para o volume de anlise, colocar algodo em todas as pipetas (na extremidade oposta ao bico da pipeta) e acondicionar em papel Kraft; Placas de Petri 100 x 20 mm de vidro - Acondicionar as placas individualmente com papel Kraft. Preparar um nmero suficiente para o volume de amostras a serem analisadas. Todos as vidrarias devem ser esterilizadas em autoclave por 15 minutos a 121oC. 1.2. Meios de Cultura e Diluentes Caldo de peptona a 0,1 % (Diluente): Pesar 0,1 g de peptona desidratada e dissolver em 100 ml de gua recm destilada e dispor 9,0 ml em tubos. Fechar com tampo de algodo e autoclavar por 15 minutos a 121 oC.

 Agar Caseina e soja (TSA ou Agar Casoy): Preparar (segundo indicao do fabricante) quantidade de meio de cultura suficiente para o volume de amostras a serem analisadas. Esterilizar em autoclave a 121oC por 15 minutos gar Sabouraud: Preparar (segundo indicao do fabricante) quantidade de meio de cultura suficiente para o volume de amostras a serem analisadas. Esterilizar em autoclave a 121oC por 15 minutos. 2. Procedimento 2.1. Procedimento de Anlise para Contagem de Bactrias Viveis ( Figura 1) Identificar em cada placa de Petri, o nome da amostra, lote, data, meio de cultura e temperatura de incubao. Preparar as placas em duplicata para cada diluio. Realizar asspticamente as diluies de 10-1 , 10-2 e 10-3 . - Matria-Prima: Pesar 10,0g da amostra slida finamente pulverizada e dissolver em erlenmeyer contendo 90 ml de gua peptonada a 0,1%. - Produto: Utilizando-se pipeta ou esptula estril, dispor uma quantidade de 10,0 ml ou g de amostra em um erlenmeyer contendo 90 ml de caldo Letheen, homogenizar e deixar em repouso por 15 minutos para que possa ocorrer a neutralizao do agente conservante. Asspticamente, pipetar 2,0 ml de amostra e dispor 1,0 ml em 2 placas de petri estreis identificadas como diluio de 10-1. Pipetar 1,0 ml do erlenmeyer com a amostra para um tubo contendo 9 ml de gua peptonada. Homogenizar e dispor 1,0 ml da amostra nas placas de petri identificadas como diluio 10-2 , e 1,0 ml para um tubo de ensaio contendo 9,0 ml de gua peptonada 0,1%. Homogenizar a diluio do tubo de ensaio e transferir 1,0 ml para as placas identificadas como diluio 10-3. Utilizando o diluente como controle negativo, pipetar 2,0 ml do diluente e dispor 1,0 ml em 2 placas de petri estreis. Resfriar o meio de cultura de Caseina e soja (TSA ou gar Casoy) esterilizado temperatura entre 44 a 48oC e verter sobre as placas num volume aproximado de 12 a 15 ml. Homogenizar cuidadosamente a amostra e o meio de cultura por rotao em forma 8. Deixar as placas em repouso durante 10 a 15 minutos e inverte-las aps completa solidificao do meio de cultura. Incubar em estufa. 2.2. Procedimento de Anlise para Contagem de Bolores e Leveduras: Proceder segundo descrita acima, conforme figura 1. Ass&eacute;pticamente, pipetar 2,0 ml de amostra dissolvida e dispor 1,0 ml em 2 placas de petri estreis identificadas como diluio de 10-1. Resfriar o meio de cultura Sabouraud esterilizado temperatura entre 44 a 48oC e verter sobre as placas num volume aproximado de 12 a 15 ml. Homogenizar cuidadosamente a amostra e o meio de cultura por rotao em forma 8. Deixar as placas em repouso por 10 a 15 minutos e inverte-las aps completa solidificao do meio de cultura. Incubar em estufa. Checar esterilidade do diluente e meio de cultura pipetando-se 2,0 ml do diluente em 2 placas de petri estreis. Recobrir as placas com meio de TSA ou Sabouraud. Observao: Caso haja suspeita de alta contagem microbiana na amostra, realizar diluies maiores.

3. Condies de Incubao Para contagem total de bactrias incubar as placas contendo as amostras e meio de cultura temperatura de 35-37oC, durante um perodo de 24 a 48 horas. Para contagem total de fungos (bolores e leveduras) incubar as placas contendo as amostras com Sabouraud temperatura de 22-25oC, durante um perodo de 120 horas ou 5 dias. 4. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Contar o nmero de colnias formadas nas placas, multiplicar pela diluio realizada e calcular a mdia de colnias por ml de amostra. Reportar na ficha de anlise a mdia da contagem total. Contar somente as placas que tiverem nmero de colnias entre 30 a 300 colnias. Caso a contagem d menor que 30 reportar o valor encontrado. Anlise Microbiolgica de gua Referncia Bibliogrfica: U.S. Pharmacopoeia XXIII Farmacopia Brasileira 4a. Edio Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 17ed., 1989. 1. AMOSTRAGEM 1.1. Frasco de Coleta Os frascos de coleta para anlise microbiolgica da gua devem ser de vidro ou Nalgene e capacidade mnima de 500 ml. Lavar cuidadosamente, sendo o ltimo enxague feito com gua destilada. Esterilizar o frasco de vidro por calor seco a 170oC por 60 minutos (ou 105oC por no mnimo 4 horas), ou por calor mido em autoclave a 121oC por 15 minutos o frasco de vidro ou Nalgene. 1.2. Remoo do Cloro ativo: Para amostras cloradas adicionar quantidade suficiente de tiosulfato de sdio (Na2S2O3) para obter uma concentrao final de 100 mg/L na amostra, ou seja, adicionar 0,1 ml de tiossulfato de sdio a 10% para cada 100 ml de amostra. 1.3. Procedimento de Coleta de Amostra: -Antes de iniciar o trabalho, limpar as superfcies externas da torneira com soluo antissptica (lcool 70 % ou Hipoclorito de sdio 0,1%); -Abrir a torneira e deixar escorrer durante 2-3 minutos ou em torno de 500 ml de gua; - Reduzir o fluxo de saida de gua, abrir o frasco de coleta somente no momento em que for colher a amostra; -Coletar a amostra de gua (em torno de 300 ml) em frasco de 500 ml e fechar imediatamente com o lacre de alumnio ou tampa; -Anotar o ponto, data e horrio de coleta, volume amostrado, nome do amostrador e levar ao laboratrio para anlise;

Observao: A amostra deve ser submetida anlise dentro de um perodo de 8 horas aps a coleta. Caso no seja possvel, armazenar a amostra em geladeira a 10oC. No exceder o perodo mximo de 24 horas para a conduo da anlise. 2. PROCEDIMENTO GERAL DE ANLISE -Abrir uma ficha de anlise preenchendo os dados da amostra a ser analisada (assegurar que a ficha de anlise seja preenchida em duplicata utilizando folha de carbono); -Limpar a bancada ou a capela de Fluxo laminar com soluo antisptica onde ser executada o ensaio; - Realizar a assepsia externa do frasco contendo a amostra e de todo material no estril que ser utilizado para anlise; -Executar as anlises asspticamente, sob a proteo de chama (Bico de Bunsen) ou dentro da capela de Fluxo laminar; 2.1. Tcnicas analticas: A. Mtodo de Tubos Mltiplos ou Nmero Mais Provvel (NMP) Consiste na inoculao de amostras em 3 sries de diluies em triplicata contendo meio de cultura lquido estril, onde o resultado dado pela turvao ou formao de gs nos tubos devido ao crescimento microbiano. A.1. Materiais Necessrios: A.1.1. Vidraria Pipetas graduadas de 10,0 ml e 5,0 ml e 1,0 ml: selecionar a quantidade necessria para o volume de anlise, colocar algodo em todas as pipetas (na extremidade oposta ao bico da pipeta) e acondicionar em papel Kraft; Esterilizar em autoclave por 15 minutos a 121 oC. Preparar o caldo lauriltriptose segundo fabricante e distribuir o meio de cultura em tubos da seguinte forma: 1a. srie: 18 ml de caldo lauriltriptose em dobro da concentrao normal indicado pelo fabricante e dispor 5 ml em 3 tubos de 150 x 20 mm. 2a. srie: 40 ml de caldo lauriltriptose na concentrao indicada pelo fabricante e dispor 9 ml em 3 tubos de 150 x 20 mm. 3a. srie: 40 ml de caldo lauriltriptose na concentrao indicada pelo fabricante e dispor 9,9 ml em 3 tubos de 150 x 20 mm - O volume restante de meio de cultura da 2a e 3a srie devero ser distribuidos em tubos de 150 x 20 mm para realizao do controle negativo (1 ml); - Em todos os tubos introduzir tubos invertidos de Durhan; - Fechar com tampo de algodo e autoclavar por 15 minutos a 121oC. Observao: Caso no tenha disponvel todos os componentes do meio de cultura Lauriltriptose, substituir pelo Caldo Lactosado, preparado segundo descrio a seguir: A.2. Procedimento A.2.1. Procedimento de Anlise para Contagem de Bactrias Viveis:

- Com pipeta estril, dispor um volume de 10,0 ml de amostra em cada tubo da 1a srie de tubos contendo caldo de lauriltriptose, obtendo-se assim a diluio de 101; - Com pipeta de 5 ml, dispor 1,0 ml de amostra em cada tubo da 2a srie, obtendo-se assim a diluio 100; - Com pipeta estril de 1,0 ml , dispor um volume de 0,1 ml em cada tubo da 3a srie, obtendo-se assim a diluio de 10-1; - Homogenizar todos o tubos e incubar em estufa ou banho-maria. A.2.2 Procedimento de Anlise para Contagem de Bolores e Leveduras: - Identificar em cada placa o nome da amostra, lote, data, meio de cultura e temperatura de incubao. Preparar as placas em duplicata para cada diluio utilizada; - Asspticamente, pipetar 2,0 ml de amostra e dispor 1,0 ml em 2 placas de petri estreis identificadas como diluio de 100; - Resfriar, o meio de cultura Sabouraud esterilizado, temperatura entre 44 a 48oC e verter sobre as placas num volume aproximado de 12 a 15 ml; - Homogenizar cuidadosamente a amostra e o meio de cultura por rotao em forma 8, evitando a formao de bolhas; - Deixar as placas em repouso por 10 a 15 minutos e inverte-las aps completa solidificao do meio de cultura; - Incubar em estufa; - Checar esterilidade do diluente e meio de cultura pipetando-se 2,0 ml do diluente em 2 placas de petri estreis. Recobrir as placas com meio de TSA ou Sabouraud; Observao: Caso haja suspeita de alta contagem microbiana na amostra, realizar diluies maiores. 3. CONDIES DE INCUBAO - Para contagem total de bactrias incubar as placas ou os tubos contendo as amostras e meio de cultura temperatura de 35-37oC, durante um perodo de 24 a 48 horas; - Para contagem total de fungos (bolores e leveduras) incubar as placas contendo as amostras com Sabouraud temperatura de 22-25oC, durante um perodo de 120 horas ou 5 dias; 4. INTERPRETAO DOS RESULTADOS 4.1. Mtodo de NMP Decorrido o perodo de incubao de 24h, verificar os tubos turvos ou com filamentos e anotar o nmero de tubos positivos na ficha de anlise, comparar na tabela de NMP e calcular o nmero total de colnias, segundo a frmula a seguir: NMP tabelado x diluio do tubo mdio 100 Se houver formao de gs ou turbidez nos tubos dentro de 24h, deve-se proceder imediatamente pesquisa para coliformes totais e fecais. Proceder o mesmo teste caso ocorra turbidez, formao de gs ou cido aps 48 h de incubao. 5. PESQUISA DE COLIFORMES TOTAIS E FECAIS

O grupo coliforme inclui todas as bactrias aerbias, anaerbias facultativas, gram-negativas, formas no esporuladas, com formato circular que fermentam lactose com produo de gs e formao de cido aps incubao por 48 h 35oC. Teste Presuntivo: O teste de tubos mltiplos utilizado em rotina pode ser considerado como teste presuntivo. Procedimento: - Pipetar 10,0 ml de amostra em 5 tubos contendo lauriltriptose e tubos invertidos de Durhan, incubar por 48 h a 35 0,5oC; - Decorrido este perodo, caso haja produo de gs ou formao de cido, considera-se reao presuntiva positiva para coliformes. Deve-se proceder ao teste confirmatrio; Teste Confirmatrio: Usar tubos de fermentao contendo caldo de lactose-bile-verde brilhante para a fase confirmatria. Procedimento - Introduzir os tubos invertidos de Durhan e quantidade de meio BGLBB suficiente para cobr-los. Esterilizar em autoclave a 121oC por 15 minutos; - Submeter todos os tubos (tubos positivos) do teste presuntivo que mostraram formao de gs ou cido ao teste confirmatrio; - Agitar levemente o tubo positivo para ressuspender os organismos. Com uma ala de Coli estril, transferir uma alada da cultura para o meio de fermentao contendo BGLBB; - Repetir este procedimento com todos os tubos positivos; - Incubar os tubos de fermentao BGLBB por 48 3 h a 35 0,5 oC; - A formao de gs em qualquer tubo de fermentao dentro de 48 horas consiste em resultado positivo para o teste confirmatrio; 6. LIMITES MICROBIANOS: gua Destilada: contagem bacteriana menor que 1,5 CFU/ml e ausncia total fungos.Ausncia de Coliformes totais e fecais gua Potvel : contagem bacteriana menor que 2,2 CFU de coliformes / ml, e contagem de fungos menor que 10 CFU/ml. Aprovado: As amostras que apresentarem contagem inferior aos limites acima sero aprovadas e a ficha de anlise orignal deve ser encaminhada ao Controle fisico-qumico, a ficha carbonada deve ser arquivada Reprovado: As amostras que apresentarem contagem superior aos limites acima devem ser realizada reanlise. reanlise Caso a contagem de bactrias ou de fungos seja superior aos limites permitidos, realizar uma nova amostragem. Verificar todos os controles ambientais e os controles negativos.

Tabela de Contagem do Mtodo de Tubos Mltiplos (NMP) 95% de confiao

Nmero de Combinaes observadas de tubos apresentando turvaoem cada srie. Nmero de mg ( ou mL) de espcies por tubo 100 mg ou 100 mL 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 10 mg ou10 mL 0 0 1 0 0 1 1 2 0 0 1 1 2 2 0 0 0 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 1mg ou 1 mL 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 1 0 1 2 0 1 2 0 1 2 0 1 2 3 Nmero mais provvel de microrganismos por grama ou mL <3 3 3 4 7 7 11 11 9 14 15 20 21 28 23 39 64 43 75 120 93 150 210 240 460 1.100 > 2.400

PRODUTO: SOLUO ORAL - GOTAS

1. AMOSTRAGEM Recolher durante a fase de envase 10 frascos dos produtos a serem analisados. Caso haja histrico de contaminao, realizar amostragens nas etapas de incio, meio e fim de envase, recolhendo 10 frascos em cada etapa. 2. PROCEDIMENTO GERAL Abrir uma ficha de anlise, registrar o nmero de anlise segundo a sequncia de codificao e preencher os dados da amostra a ser analisada (assegurar que a ficha de anlise seja preenchida em duplicata utilizando folha de carbono). 3. PROCEDIMENTO DE ANLISE Seguir tcnica descrita no Procedimento Geral de Contagem Microbiana para amostras lquidas. 4. PESQUISA DE COLIFORMES TOTAIS E FECAIS O grupo coliforme inclui todas as bactrias aerbias, anaerbias facultativas, gram-negativas, formas no esporuladas, com formato circular que fermentam lactose com produo de gs e formao de cido aps incubao por 48 h 35oC. Teste Presuntivo: O teste de tubos mltiplos utilizado em rotina pode ser considerado como teste presuntivo. Procedimento: Pipetar 10,0 ml de amostra em 5 tubos contendo lauriltriptose e tubos invertidos de Durhan, incubar por 48 h a 35 0,5oC. Decorrido este perodo, caso haja produo de gs ou formao de cido, considera-se reao presuntiva positiva para coliformes. Deve-se proceder ao teste confirmatrio. Teste Confirmatrio: Usar tubos de fermentao contendo caldo de lactose-bile-verde brilhante para a fase confirmatria. Composio do caldo lactose-bile-verde brilhante (BGLBB): Peptona................................10,0 g Lactose.................................10,0 g Oxgall .................................20,0 g Verde Brilhante ....................0,0133 g gua destilada ......................1 L pH final de 7,2 0,2 aps esterilizao. Procedimento Introduzir os tubos invertidos de Durhan e quantidade de meio BGLBB suficiente para cobr-los. Esterilizar em autoclave a 121oC por 15 minutos. Submeter todos os tubos (tubos positivos) do teste presuntivo que mostraram formao de gs ou cido ao teste confirmatrio.

Agitar levemente o tubo positivo para ressuspender os organismos. Com uma ala de Coli estril, transferir uma alada da cultura para o meio de fermentao contendo BGLBB. Repetir este procedimento com todos os tubos positivos. Incubar os tubos de fermentao BGLBB por 48 3 h a 35 0,5 oC. A formao de gs em qualquer tubo de fermentao dentro de 48 horas consiste em resultado positivo para o teste confirmatrio. 5. LIMITES MICROBIANOS Soluo oral : contagem bacteriana menor que 100 CFU/ml e 10 CFU/ml de fungos. Ausncia de Coliformes totais e fecais. Aprovado: As amostras que apresentarem contagem inferior aos limites acima sero aprovadas e a ficha de anlise orignal deve ser encaminhada ao Controle fisico-qumico, a ficha carbonada deve ser arquivada Reprovado: As amostras que apresentarem contagem superior aos limites acima devem ser realizada reanlise. reanlise Caso a contagem de bactrias ou de fungos seja superior aos limites permitidos, realizar uma nova amostragem com o dobro de frascos da amostragem inicial. Verificar todos os controles ambientais e os controles negativos.

CONTROLE DE PROCESSO ESTERILIZANTE

1. Filtrao : Remoo e separao de partculas de uma soluo ou gs que dependem da natureza dos materiais. Amostragem antes e depois dos processos (Teste de Caldo ou mdia fill) para verificar todo o percurso do lquido - mximo 0,1 %. Para 3000 unidades = 14 dias Ponto de Bolha = Quanto > presso < porosidade P= k.4v.cs.j D j=ngulo lquido/parede do capilar k= fator de correo v= tenso superficial 2 litros de gua destilada d = dimetro N2= 3,5 kg/cm2 = 5 min 2. Autoclavao: Alterao da estrutura gentica, inativao de enzima, coagulao de protena. Controle de presso Indicadores Qumicos: induz alterao de cor, entretanto no garante por quanto tempo se mantm a exposio. Indicadores Biolgicos: cepa B.stearothermophillus. 3. Esterilizao Qumica Gasosa por xido de Etileno (pode deixar resduos), extremamente explosivo, misturado um gs inerte (10-12 %) com gs freon ou dixido de carbono.

 Indicadores Fsicos { Temperatura 55oC ( t=0 ) Umidade Relativa = 60-70 %} Indicadores Qumicos: substncias submetidas ao efeito alquilante muda de cor. Indicador Biolgico: B. subtilis 4. Radiao { g , cobalto, eltron acelerado): Absorve energia radiante, altera a molcula do DNA. Dose de radiao 2,5 Mrad Indicadores Qumicos Indicadores Biolgicos : Bacillus pumilus
Esporos B. stearothermophilus B. subtilis B. pumilus C. sporogens B. subtilis Brevundimonas diminuta Condio o Vapor saturado, 121 .C o 121 .C o 171 .C g - via mida Via seca o vapor saturado 112 .C o vapor saturado 121 .C o ETO 54 .C 600 mg/L 50%U.R. Filtrao Tempo 15 minutos 60 minutos 1 minuto 0,2 Mrad 0,15 Mrad 3,5 minutos 0,7 minutos 3 minutos 10 7 cel/ cm 2 area

filtrante

MONITORAMENTO AMBIENTAL
1. Introduo Desenho de Instalao de Processos Asspticos - salas limpas Processamento Assptico (Manter fora da barreira primria - fonte de contaminao) 2. Monitoramento do Ar: microrganimos aerbios ( bactrias e fungos) Partculas viveis: 1. Passivo (Ensaio qualitativo): periodicidade diria, quando h produo Classe 100 = nmero de partculas viveis de 0,1 CFU/ft3. Tempo de exposio 30 minutos a 60 minutos incubao em estufa e leitura aps 48 horas 2. Ativo (Ensaio quantitativo): Captao ativa de ar (mensalmente) A . Impacto com lquido liquid Impingement : captao do ar atravs de orifcio limitado sobre a unidade de vcuo. Contagem = n de CFU / volume de ar amostrado Volume do ar amostrado = tempo de amostragem / fluxo de ar atravs do orifcio Contagem Microbiana = Microscopia, Ensaio de ATP ; Impedncia; filtrao em membrana

B. Impacto com o gar: impacto de microrganismos sobre o gar: Slit to Agar (1ft3/min = 28L/min) impacto rotatrio sobre a placa a uma velocidade constante. Risco de ressecamento a perodos longos Amostrador Centrfuga (Reuter Centrifugal Sampler): Impactao de ar diretamente em meio de cultura por sistema de centrifugao. Sistema porttil a bateria. Contagem Microbiana - Incubao em estufa durante 48 horas e contagem/ m2 ou volume de ar amostrado. C. Impacto em Membrana Filtrante ( Sistema de rotmetros) Contagem Microbiana - meio slido- incubao em estufa durante 48 horas meio lquido Microscopia, Ensaio de ATP, impedncia III. Monitoramento de Superfcies ( Aps manuteno e limpeza ) 1. Placas de Contato (RODAC) 2. Swabb : esfregar um quadrante de 2,54 cm aproximadamente de uma polegada, primeiro lado a lado, acima e abaixo e novamente, lado a lado. Embeber em 1 ml de salina estril. IV. Monitoramento de Pessoal A. Placas de Contato (RODAC): periodicidade mensal e quinzenal para o pessoal envolvida diretamente na rea assptica. B. Swabb TCNICAS RPIDAS DE DETERMINAO DE MICRORGANISMOS VIVEIS 1. Microscopia: Contagem direta com alaranjado de acridina (1:60 diluido de 300 mg/ml de soluo de alaranjado de acridina em tampo fosfato pH=8,2. Lente de aumento de 1000 , microscpio de epifluorescncia (melhor para superfcies). 2. Ensaio de ATP ou bioluminescncia ATP + D-luciferina + O2 Oxiluciferina + AMP + CO2 + LUZ image Contagem de 1000 Clulas aproximadamente 3. Impedncia A resistncia de uma corrente em um lquido contendo microrganismo vivel medida conforme as clulas respiram e se reproduzem, alterando a resistncia pela formao de cidos orgnicos. Medio pela introduo de dois eletrodos. 4. Contagem Direta do Nmero de Colnias em Placas Eficincia de Conservantes Microrganismo : S. aureus

Preparo do Inculo : Semear em estrias em tubo inclinado contendo Antibiotic Medium 1 (AM1). Incubar por 48 horas em estufa a 350C. Recolher o crescimento com 3 ml de gua peptonada 0,1% . Ressuspender para 10 ml em tubo e diluir at turbidez 0,5 da Escala de MacFarland (106 UFC). Adicionar para cada 20 ml de produto ou controle, um volume de 0,2 ml de inculo. Amostra: Selecionar os frascos do produto na embalagem final. Identificar cada frasco com o tempo a que ser submetido o contato do microrganismo com o conservante. Tempos a serem pesquisados : 0 h de contato, 6 horas, 24 horas, 48 horas, 7 dias, 14 dias e 28 dias. Armazenar os frascos em estufa a 22 - 250 C Realizar o mesmo procedimento com amostra sem conservante e com diluente como controle positivo. Realizar contagem pelo mtodo Pour Plate, utilizando Caldo Letheen para neutralizar o conservante, gua peptonada 0,1% como diluente e gar Casena e Soja para o plaqueamento. Incubar as placas em estufa a 350C durante 48 horas. Teste de Eficcia de Conservantes
Critrio USP XXII C. albicans (# 10231) A. niger (# 16404) Organismo Teste E. coli (# 8739) P. aeruginosa (# 9027) S.aureus (# 6538) Meio de Cultura Agar Casena e Soja 0 Crescimento de Inculo Bactria: 37 C, 18 a 24 h 0 preparao e densidadeC.albicans: 25 C, 48h 0 -8 final de inculo A. niger: 25 C, 1 semana 1x 10 Conduzir o teste, se possvel, em 5 frascos originais. Por outro lado, Procedimento do Teste transferir 20 ml para cada 5 tubos estreis. Cada frasco ou tubo inoculado com 10 6 0 -10 org/ ml. Incubar a 20-25 C Resultado requerido paraniger. aprovao inicial permanecendo por 14 dias e 6 10 org./ ml de produto (20 ml) Usar neutralizantes: Tween 80, lecitina, CTFA C. albicans (# 10231) A. niger (# 9642) E. coli (# 8739) P. aeruginosa (# 15442) S.aureus (# 8538) P. luteum # 9644 B.subtilis # 6633 Agar Casena e Soja Clulas em produtos sem conservantes: 0 0 32-37 C para bactria e 25-30 C para fungos

5Triton-X-100

No aumentar em C.albicans ou A. Amostragem em 0, 1-2, 7, 14, 28, > 28 dias; 0,1% da concentrao bacterianaEfetividade em 7 dias e reinocular.

manter ou abaixar os nveis durante o perodo do teste.

Condies de Teste para Mtodo de Eficcia de Conservantes

Condio de Teste Tamanho do Inculo (CFU/ml ou g) Volume de Inculo Armazenamento do produto Britanica 10 6 Alem 5 6 10 -10 1% 0 0 25 C 1 C Americana 5 6 10 -10 1% 0 20-25 C Italiana 10 5

1% 0 20-25 C

1% 0 0 25 C 1 C

Microrganismos Desafiados para Produtos Tpicos com Conservantes

Produto Cremes e Loes Pasta de dente Shampoos Cosmticos para Microrganismo P. aeruginosa, Klebsiella, S.faecalis, S.aureus, coliformes, Aspergillus, cladosporium, Candida Streptococci, Pseudomonas, Herpes virus, enterovirus Pseudomonas, Cladosporium osP. aeruginosa, P.stutzeri, P.putida, S.aureus, S. faecalis, Aspergillus, Penicilium, cladosporium P.aeruginosa, Pseudomonas KO-1, E.coli, E.faecalis, Klebsiella, Proteus, Candida albicans Klebsiella, coliformes, Proteus, Alcaligens, Acinetobacter,

olhos e pomadas Produtos vaginal

Critrios para Interpretao do Resultado do Teste de Eficcia de Conservantes

Farmacopia Alem (1986) Tipo produto de Organismo Hora Reduo de contagem Farmacopia Britnica (1988) Reduo Organismo P.aeruginosa 6 h, 24 h, 7d; S.aureus 14 d; 28d Hora de contagem 24 h 10 7d 10 28 d 10 2 3 3 10 3 (6h)

Parenterais e Oftlmicos

P.aeruginosa S.aureus

ND ND 10 2

C. albicans A. niger Formulao P.aeruginosa Tpico S.aureus

14 d 10 28 d 10 14 d 10 28 d 10

1 1 3 3

C. albicans A. niger P.aeruginosa S.aureus

7d 14 d 28 d 48 h; 7d; 14d; 28d

NA NA 3 10 (48h) ND

C. albicans

14 d 10 28 d 10

1 1

C. albicans A. niger

14 d; 28 d

10

NA 2

A. niger Soluo Oral P.aeruginosa S.aureus C. albicans A. niger 14 d 10 28 d 10 14 d 10 28 d 10 3 3 P.aeruginosa S.aureus C. albicans A. niger 7 d; 14 d; 28 d 14 d; 28 d 10 NA NA

Farmacopia Americana (1990) Tipo de produto Parenterais e Oftlmicos Organismo P.aeruginosa S.aureus C. albicans 14 d A. niger Formulao Tpico Nenhuma recomendao 28 d NA NA Hora 14 d 28 d Reduo de contagem 10 3

Farmacopia Italiana (1985) Organismo P.aeruginosa S.aureus Hora Reduo de contagem 10 2; 3 5 10 e 10

NA

6 h, 24 h, 7d;

C. albicans A. niger

24 h 7d 14 d

NA 2 10 NA 2 3 NA,10 ; 10 NA 10 2

P.aeruginosa 48 h; 7d; 14d; S.aureus C. albicans A. niger P.aeruginosa S.aureus E.coli C. albicans A. niger 28d 7 d; 28 d 48 h; 7 d; 21d; 42d 21 d; 42 d

NA 2 3 10 ; 10 NA,NA 10 1

Soluo Oral

Nenhuma recomendao

NA

MTODO DE TURBIDIMETRIA - DOSEAMENTO DE TETRACICLINA

Padro de Tetraciclina = Teor declarado = 968 mg/mg Tomada de ensaio = 103,3 mg = 968 x 103,3 = 100.000 mg Amostra de cpsula de Tetraciclina = 250 mg de princpio ativo Peso mdio cpsula cheia = 365,7 mg Peso mdio capsula vazia = 55,2 mg Tomada de ensaio = 310,5 mg de p (250 mg de p.a)
Diluio do Padro Diluio da Amostra

103,3 mg (100 mg) / 100 ml = 1 mg / ml 1 ml (1000mg) / 100 ml = 10 mg/ ml 10 ml (10 mg) /100 ml = 1mg / ml P1= 1,0 ml (1mg) / 20 ml = 0,05 mg / ml P2= 2,0 ml (1mg) / 20 ml = 0,10 mg / ml P3= 3,0 ml (1mg) / 20 ml = 0,15 mg / ml P4= 4,0 ml (1mg) / 20 ml = 0,20 mg / ml P5= 5,0 ml (1mg) / 20 ml = 0,25 mg / ml

310,5 (250 mg) / 250 ml = 1mg / ml 1 ml (1000 mg) / 100 ml = 10 mg / ml 10 ml (10mg) / 100 ml = 1m / ml

A2= 2,0 ml (1mg) / 20 ml = 0,10 A3= 3,0 ml (1mg) / 20 ml =0,15 A4= 4,0 ml (1mg) / 20 ml = 0,20

Curva Padro
Concentrao (mg/ml) P1 = 0,05 P2 = 0,10 P3 = 0,15 P4 = 0,20 P5 = 0,25 Concentrao (mg/ml) A1 = 0,10 A2 = 0,15 A3 = 0,20 53,0 62,0 71,0 45,0 52,0 60,0 70,0 80,0 Leitura a 580 nm 44,0 52,5 61,0 71,5 81,0 Amostra Leitura a 580 nm 51,5 61,0 70,8 52,0 60,5 70,5 Mdia 52,17 61,17 70,77 45,0 53,0 59,0 70,5 80,5 Mdia 44,67 52,50 60,00 70,33 80,5

Relao Leitura vs Concentrao A1 = 0,09875= 0,9875 A2 = 0,1508 = 1,0053 0,1 0,15 0,20 A3= 0,2016 = 1,008

Mdia L vs C ( Fc ) = (0,985 + 1,0053 + 1,008) = 1,003 3 Potncia da Amostra = Potncia P x LvsC x PP x DA x 100 = DP x PA onde, Potncia P = Potncia declarada do Padro L vs C (Fc) = Mdia Fc PP = Peso do Padro PA = Peso da amostra DP = Diluio do Padro DA = Diluio da Amostra Potncia da Amostra

= 968 x 1,008 x 103,3 x 1 x 10 x 250 x 100 x 100 = 999,9 mg/ml 100 x 100 x 100 x 250 x 1 x 10

FICHAS DE ANLISE E CONTROLES DE PROCESSOS

TESTE DE PIROGNIO Produto: N. Anlise: N. coelho 1 2 3 Observao: Resultado: Data de sada: Analista: Chefe: Peso Volume Lote: Data de anlise: 1. T.C 2. T.C 1h 2h 3 h Dt

Protocolo para Teste de Inocuidade 0 Produto:_______________________ Lote n _______________N. Anlise:_________ Volume de inculo para cobaias:_ _mL/ Via:____________________ Volume de inculo para camundongos: ml/ Via:____________________ Data de Incio: ____/____/____ Data de trmino: ____/____/____ Lote N.:_______Caixa N.:__ Controle N. :________ Caixa N. _____

CONTROLE DE REA ASSPTICA - PROCESSO PASSIVO

PRODUO

Pontos de Amostragem Dia/Ms 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

HISTRICO DAS REAS ASSPTICAS - SLIT TO AGAR PRODUO Data: PLACA HORRIO rea: N COLNIAS COLNIA / M3 GERMES IDENTIFICADOS

OBSERVAES

Meio: Incubao: Temp. Ambiente: Umidade Ambiente: No. Pessoas: Analista: Data: / /

CONTROLE BIOLGICO - PROCESSO PASSIVO

BIOLGICO

Data: No. da Placa T.exposio

Perodo: No. Colnias Germes Identificados - Gram MEIO: TC Incubao Tempo Incubao: Umidade Relativa: No.Pessoas Total de Colnias: Resultados:

HISTRICO DAS REAS ASSPTICAS - SLIT TO AGAR BIOLGICO Data rea

PLACA

HORRIO

N COLNIAS

COLNIA / M3

GERMES IDENTIFICADOS

OBSERVAES

Meio: Incubao: Temp. Ambiente: Umidade Ambiente: No. Pessoas: Analista: Data: / /

CONTROLE DE AUTOCLAVE PRODUO x CONTROLE o Lote N : Temperatura de Exposio: Temperatura de incubao; Horrio: RESULTADOS

Bioindicador:B. stearothermophillus Tempo de Exposio: Tempo de incubao: Data: PONTOS AMOSTRADOS

PRODUO

CONTROLE

x o Lote N : Temperatura de Exposio: Temperatura de incubao; Horrio: RESULTADOS

Bioindicador: B. stearothermophillus Tempo de Exposio: Tempo de incubao: Data: PONTOS AMOSTRADOS

TREINAMENTO DE PESSOAL: NORMAS HIGINICAS CONTROLE DE PESSOAL - TCNICA DE SWAB

CONTROLE DOS SUBSTRATOS NUTRITIVOS PARA O TESTE DE ESTERILIDADE Substrato: Controle Negativo Controle Positivo Data Data Lote Germe UFC Diluio Crescimento UFC/ crescimento

AFERIO DE TEMPERATURA E UMIDADE RELATIVA

PRODUO Aparelho: Termohigrmetro SUNDO Modelo: 4463 HT - 100 mm dimetro O Data Hora T C UR % Responsvel

BIOLGICO Aparelho: Termohigrmetro SUNDO Modelo: 4463 HT - 100 mm dimetro O Data Hora T C CONTROLE DO BANHO AZUL Data da Preparao: Data da Coleta: Horrio de Coleta: RESULTADOS: Bactrias: Fungos: OBSERVAO: Troca do Banho: Quando apresentar microrganismo patognico; Quando apresentar contagem microbiana acima do especificado; Aps fabricao de hormnios Patognicos: P.aeruginosa: E. coli: Salmonella: Temperatura do Banho: Data do Ensaio: Analista: UR % Responsvel

TESTE DE CALDO: EFICINCIA DE FILTRAO

Inculo:Pseudomonas diminuta Caldo Nutriente: TSB Temperatura de Incubao: 35.C Volume Envasado: 20 ml Data: Resultado:

7 Bioburden: 10 CFU Volume Total: 30 L Tempo de Incubao: 48 horas Nmero de frascos: 1500 Analista: Nenhum frasco contaminado

TESTE DE CALDO: ENVASE ESTRIL Caldo Nutriente: TSB Temperatura de Incubao: 35.C Volume Envasado: 20 ml Volume Total: 30 L Tempo de Incubao: 48 horas Nmero de frascos: 1500

Data: Resultado: TESTE DE ESTERILIDADE Produto: N. Anlise: Bactrias Meio de cultura: Tempo de incubao: Temperatura de incubao: o 1 . Teste: Colorao de Gram: o 2 . Teste Colorao de Gram: Resultado:

Analista: Nenhum frasco contaminado

Lote: Data de anlise: Bolores e Leveduras Meio de Cultura: Tempo de incubao: Temperatura de incubao: o 1 . Teste: Colorao de Gram: o 2 . Teste: Colorao de Gram: Resultado

TESTE BIOLGICO Produto: N. Anlise: TESTE DE PIROGNIO gua para injeo (In vitro) gua para injeo ( In vivo) Produto envasado ( In vivo) TESTE DE INOCUIDADE Produto envasado ( camundongos ) Lote: Data de anlise: RESULTADO Negativo Negativo Negativo RESULTADO Negativo

CONTROLE DOS FILTROS (FLUXO LAMINAR) : Controle de partcula: DOP Velocidade de fluxo: 90 ft/min Classe : 100 Data: Tamanho poros: 0,3 mm Temperatura de disperso: 398,89 C ou 750 F Temperatura da sala assptica: 21,0 C ou 70F Periodicidade: 3 meses APOSTILA DE CONTROLE MICROBIOLGICO UEM DFF -KIMURA