Paulo 2018

CÉLULAS
VISÃO GERAL DO METABOLISMO DAS
MACROMOLÉCULAS

Lipólise Glicólise Proteólise

 * *

Isomerase
Enolase

Fosfofrutoquinase I
* Fosfoglicerato
mutase

Aldolase

Fosfoglicerato
quinase
Triose P
Isomerase Gliceraldeído 3P
Desidrogenase
 • Enzimas: catalisadoras das reações
que ocorrem nos sistemas biológicos.

• Reações químicas necessárias para o

crescimento, a restauração e a
manutenção de organismos vivos.

• Catalisador: não são consumidos

Enzima Alfa amilase podendo ser reutilizados.
 Sem a catálise as reações não ocorreriam em
velocidade útil:

• digestão de alimentos.
• envio de sinais através dos nervos.
• contração muscular.
Catalisadores: aumentam a velocidade das reações
diminuindo a energia de ativação.

Energia de ativação sem enzima

Energia de ativação com
S enzima
P

Caminho da Reação
 Rações animais

- Enzimas ultimamente são acrescentadas as rações de diversos

animais, principalmente durante o período de lactação: Xilanase,
Beta-glucanase, Alfa-amilase, Lipases, etc. (digestão de amido,
triglicerídeos e conseqüente ganho de peso e abate precoce).
 Papel e Celulose

- Remoção de depósitos em máquinas de papel:

Substituição de álcalis e ácidos fortes por enzimas (assegurar

a integridade física dos funcionários e cumprir leis ambientais).
 ALIMENTOS

- Indústria de azeite de oliva: poligalacturonase e

pectinesterase na melhoria da estabilidade a
longo prazo.

- Panificação: Melhoria de cor, sabor e estrutural

através de preparado enzimático que contém
alfa-amilase fúngica.
- Atua sobre a farinha de trigo, acelera o processo
de fermentação devido a maior formação de
açúcares para o fermento.
 Indústria de Couro
- Eliminação dos pêlos (Enzimas substituem a utilização do sulfureto de
sódio – forte cheiro desagradável e poluente dos efluentes).

Indústria têxtil
Amilase bacteriana (Bacillus subtilis e B. lichenformis), estável ao calor
para eliminar a goma dos produtos têxteis, (substituindo ácidos e
álcalis na hidrólise do amido).

Outras aplicações
• Indústria de Cosméticos.
• Produtos de Limpeza.
• Inativação Enzimática.
• Ferramentas laboratoriais.
 Quimioterapia

É o uso de agentes químicos para destruir microorganismos infecciosos e

células cancerosas sem danificar as células hospedeiras.
Esses agentes químicos funcionam inibindo certas reações enzimáticas.

Antibióticos: inibem enzimas essenciais para o crescimento bacteriano

(ex: penicilina e tetraciclina; adriamicina - tratamento da doença de
Hodgkin).

Antimetabólitos: apresentam estruturas intimamente relacionadas com a

de substratos enzimáticos, inibindo a atividade enzimática (ex:
mercaptopurinas - tratamento de leucemias).
 Diagnósticos

• Medidas dos níveis enzimáticos no plasma podem ser de grande valor

diagnóstico.

1. ↑ glutâmico pirúvico transaminase caracteriza a ocorrência de

hepatite infecciosa.
2. ↑ tripsina é indicativo de doenças agudas do pâncreas.
3. Alterações nos níveis de enzimas Lactato desidrogenases (LDH)
podem ser úteis no diagnóstico de: infarto do miocárdio, hepatite
aguda, distrofia muscular, anemia megaloblástica, anemia
falciforme e artrite com derrame nas juntas.
•Transaminase glutâmica – oxaloacética sérica (SGOT), Amilase,
Alcalino fosfatase, Creatina fosfocinase (CPK), etc.
• Enzimas são Proteínas, exceto um grupo de moléculas de
RNA (Ribozima).

• Alta especificidade pelos substratos, funcionam em soluções

aquosas sob diferentes condições de temperatura e pH.

• A maioria das enzimas apresenta uma temperatura ótima

(quando a reação em que ela está envolvida alcança seu
máximo de velocidade) em torno de 30 a 40°C,
principalmente em temperatura corporal.
 Temperatura ótima

Velocidade de formação
• Enzimas também apresentam uma
faixa ótima de pH (ex: pepsina
Ativação
encontrada no suco gástrico o pH 2,0; Desnaturação
térmica

do produto
térmica
tripsina do suco pancreático o pH 8,2).

Temperatura
ºC

• Em adição aos efeitos da temperatura e do pH, a atividade

enzimática (velocidade da reação química) pode ser aumentada
com o aumento das concentrações dos reagentes.

• A velocidade da reação diminuirá quando as enzimas estiverem

saturadas.
• Com o aumento da quantidade de enzima a velocidade da
reação aumentará se houver suprimento ilimitado de
substrato.

• Enzimas podem ser desnaturadas quando expostas a altas

temperaturas, álcool, ácidos fortes e reagentes alcalóidicos
(inibidores não específicos).

• Estruturas 1ª, 2ª, 3ª e 4ª: fundamentais para a atividade

• Isozimas: enzimas que tem a mesma função mas possuem

características estruturais levemente diferentes.

• PM: 12.000 a 1 milhão Da.

 O termo: "en" = dentro "zima" = levedura

• NOMENCLATURA DAS ENZIMAS

-Nome Recomendado: Mais curto e utilizado no dia a dia;

Sufixo "ase" para caracterizar a enzima. Ex: Urease,
Hexoquinase, Peptidase.

-Nome Sistemático: Mais complexo, nos dá informações

precisas sobre a função metabólica da enzima. Ex: ATP-
Glicose-Fosfo-Transferase.

- Nome Usual: Consagrados pelo uso; Ex: Tripsina, Pepsina,

Ptialina.
 CLASSIFICAÇÃO DAS ENZIMAS

OXIDORREDUTASES: São enzimas que HIDROLASES: Catalisam reações de hidrólise

catalisam reações de transferência de elétrons, ou de ligação covalente. Ex: As peptidases;
seja: reações de oxi-redução. São as
Desidrogenases e as Oxidases

TRANSFERASES: Enzimas que catalisam reações LIASES: Catalisam a quebra de ligações

de transferência de grupamentos funcionais como covalentes e a remoção de moléculas de água,
grupos amina, fosfato, acil, carboxil, etc. Como amônia e gás carbônico. As Dehidratases e as
exemplo temos as Quinases e as Transaminases Descarboxilases são bons exemplos;
CLASSIFICAÇÃO DAS ENZIMAS

ISOMERASES: Catalisam reações de

interconversão entre isômeros ópticos ou
geométricos. As Epimerases são
exemplos;

LIGASES: Catalisam reações de

formação e novas moléculas a partir da
ligação entre duas já existentes, sempre às
custas de energia (ATP). São as
Sintetases;
 Característica Enzimas Catalisadores
Químicos
Especificidade ao substrato alta baixa
Natureza da estrutura complexa simples
Sensibilidade à T e pH alta baixa
Condições de reação (T, P e pH) suaves drástica
(geralmente)
Custo de obtenção (isolamento e purificação) alto moderado
Consumo de energia baixo alto
Formação de subprodutos baixa alta
Separação catalisador/ produtos difícil/cara simples
Atividade Catalítica (temperatura ambiente) alta baixa
Presença de cofatores sim não
Estabilidade do preparado baixa alta
Energia de Ativação baixa alta
Velocidade de reação alta baixa
 Co-fatores enzimáticos

• Co-fatores ou ativadores: 1 ou mais íons inorgânicos, uma molécula

orgânica complexa ou uma molécula metalorgânica (coenzima).

 Alguns elementos inorgânicos que servem como co-fatores para enzimas.

Citocromo oxidase
ou Citocromo oxidase, catalase, peroxidase
Piruvato quinase
Hexoquinase, glicose-6-fosfatase
Arginase, ribonucleotídeo redutase
Dinitrogenase
Urease
Glutationa peroxidase
Anidrase carbônica, desidrogenase alcoólica
• Coenzima A (CoA): essencial no metabolismo de carboidratos,
lipídios e proteínas no corpo humano.

• A hidrólise de CoA produz 1 vitamina, 1 purina, 1 açúcar, ácido

fosfórico e 1 composto sulfurado.

• Acetil CoA: age na oxidação dos alimentos no ciclo de Krebs.

• NAD+ e NADP+ : estão envolvidas na maioria das reações de

oxirredução na mitocôndria além de atuarem no ciclo de Krebs.
 A ESTRUTURA DO NAD
(Nicotinamina Adenina Dinucleotídeo)
VITAMINAS B3 NAD+ (oxidada) NADH (reduzida)

Àcido Nicotínico

Nicotinamida

NICOTINAMIDA ADENINA DINUCLEOTÍDEO

Uma dieta deficiente em niacina provoca glossite, dermatite, perda de peso, diarréia, depressão e
demência (pelagra)
 A ESTRUTURA DO FAD
(Flavina Adenina Dinucleotideo)

Riboflavina
Vit-B2
A ESTRUTURA DA COENZIMA A

VIT. B5
 Complexo enzima-
substrato

Modelo chave/fechadura

Modelo de ajuste induzido

INTERAÇÃO ENZIMA-SUBSTRATO
 E – pode sofrer mudanças conformacionais induzidas
pelas múltiplas interações fracas com o S

[S] – afeta a velocidade das reações catalisadas pelas E

E + S  ES (reação rápida)

 V0 proporcional  [S] -  formação ES

• Quando todas as E estão na forma combinada ES, pode-se
aumentar [S] que não haverá aumento V0
• A Vmáx será atingida quando praticamente todas as E
estiverem combinadas (ES)
•
 Inibidores: agentes moleculares que interferem com a
catálise diminuindo ou interrompendo as reações.

Reversíveis:
- Competitiva: compete com o substrato pelo sítio ativo
da enzima. Seu desligamento pode ser obtido com o
aumento do substrato.

E+S ES E+P
+
I - Incompetitiva: se liga a 1 sítio diferente, liga-
se apenas ao complexo ES formando ESI.

EI
- Mista: o I também se liga a 1 sítio diferente
mas pode se ligar a E ou a ES formando ESI.
 CINÉTICA ENZIMÁTICA

É a abordagem utilizada para estudar o mecanismo de uma reação

catalisada por uma enzima e Determinar a função de uma enzima em
uma rota metabólica.

 Determinar a velocidade da reação e como ela se altera em

função de mudanças nos parâmetros experimentais;
 Determinar as constantes de afinidade do S e dos inibidores;
 Conhecer as condições ótimas da catálise;
 Km = constante de Michaelis-Menten

• Km é a concentração de substrato que produz metade da

velocidade máxima de uma reação.

• Km é característica para cada enzima agindo sobre um

determinado substrato.

• A equação relaciona a velocidade inicial (V0) de uma reação

enzimática com a concentração de substrato e a velocidade
máxima (Vmáx) pela constante Km.
 CINÉTICA DA REAÇÃO ENZIMÁTICA
DIFERENTES SUBSTRATOS

V0 = Vmáx [S]
Km+ [S]
LEONOR MICHAELIS MAUD MENTEN
1875 - 1949 1879 - 1960
CINÉTICA DA REAÇÃO ENZIMÁTICA

 Reação enzimática processa-se em duas etapas:

Enzima (E) liga-se reversivelmente ao substrato

(S), formando o complexo enzima-substrato (ES).
E + S  ES

É liberado o produto
E + S  ES  E + P
CINÉTICA DA REAÇÃO ENZIMÁTICA CATALISADA
EM PRESENÇA DE INIBIDOR COMPETITIVO
CINÉTICA DA REAÇÃO ENZIMÁTICA CATALISADA
EM PRESENÇA DE INIBIDOR NÃO-COMPETITIVO
 ZIMOGÊNIO
• A fosforilação de resíduos de aa específicos é um meio muito
comum de regular a atividade da enzima.

• Muitas enzimas proteolíticas apresentam precursores inativos

chamados zimogênio.

• Pequenos peptídeos são quebrados do zimogênio para formar a

protease ativa.
Ex: Pepsinogênio – pepsina
Tripsinogênio-tripsina
Protrombina-trombina
 • E reguladora: inibida pelo P (sempre que [P] > as
necessidades celulares), inibição por retroalimentação.

Toxicologia e Farmacologia

Venenos metabólicos Drogas terapeuticamente

importantes

Inibir ou abolir reações

metabólicas essenciais. Inibir a atividade de enzimas.

Competem com o substrato pelo

sítio ativo da enzima.
EXPERIMENTOS COM A SACARASE
 ESPECTROFOTOMETRIA

faixa de cores - faixa de comprimento de onda em nanômetros

Raio-X e Radiações nucleares (invisível) 0-8nm
Ultravioleta no vácuo (invisível) 8-180nm
Ultravioleta (invisível) 180-400nm
Violeta 400-450nm
Azul 450-500nm
Verde 500-750nm
Amarelo 570-590nm
Alaranjado 590-620nm
Vermelho 620-750nm
Infravermelho (invisível) 750-100.000nm
Microonda 100.000-1.000.000
ESPECTROFOTOMETRIA
ENZIMA - SACARASE
 EFEITO DO pH NA ATIVIDADE DA SACARASE DE FERMENTO

Tubos Enz. Tampão Sacarose Tempo DNS Água

Abs 550nm Atividade
mL Vol pH mL Min. mL mL
1 0,2 0,1 3 0,1 20 0,4 1,0 0,520 57,8
E
2 “ “ 3,5 “ “ “ “ 0,660 73,3
B
3 “ “ 4 “ “ “ “ 0,790 87,8
U
4 “ “ 4,5 “ “ “ “ 0,900 100
L
5 “ “ 5 “ “ “ “ 0,870 95,8
I
6 “ “ 5,5 “ “ “ “ 0,800 90.3
Ç
7 “ “ 6 “ “ “ “ 0,770 85,5
Ã
8 “ “ 6,5 “ “ “ “ 0,680 65,5
O
9 “ “ 7 “ “ “ “ 0,410 45,5
5’
B 0,4 mL de água “ “
 DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE (VELOCIDADE) DA
SACARASE DE FERMENTO

Tubos Enz. Subst. Tempo Temp. DNS Água Abs

mL mL Min. oC mL mL 550nm
1 0,2 0,2 5 20 0,4 E 1,0 0,21
2 “ “ 10 “ “ B “ 0,30
3 “ “ 15 “ “ U “ 0,43
4 “ “ 20 “ “ L “ 0,58
I
5 0,2 0,2 5 40 0,4 Ç 1,0 0,34
6 “ “ 10 “ “ Ã “ 0,55
7 “ “ 15 “ “ O “ 0,88
8 “ “ 20 “ “ 5’ “ 1,12
B 0,4 mL de água “ “

1 ,2

1 ,0 20oC
40oC

0 ,8
Abs 550nm

0 ,6

0 ,4

0 ,2

4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Tem po
 COLORIMETRIA

PADRÃO DE
GLICOSE ABS Ke
TUBOS ÁGUA DNS ÁGUA
0,5 mg/mL 550nm Kmédio

1 0,05 mL (0,14 μmol) 0,35 mL 0,40 mL E 1,0mL

2 0,10 mL (0,28 μmol) 0,30 mL “ B “
3 0,15 mL (0,42 μmol) 0,25 mL “ U “
4 0,20 mL (0,56 μmol) 0,20 mL “ L “
5 0,25 mL (0,70 μmol) 0,15 mL “ I “
6 0,30 mL (0,84 μmol) 0,10 mL “ Ç “
7 0,35 mL (0,98 μmol) 0,05 mL “ Ã “
8 0,40 mL (1,12 μmol) 0,00 mL “ O “
B 0,40 mL “ 5’ “

Calcular a inclinação da curva

para cada ponto, utilizando a
equação de Lambert-Beer
(A=KC), onde A é a absorbância e
C a concentração de glicose em
micromol.
EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DE SUBSTRATO NA ATIVIDADE
DA SACARASE DE FERMENTO
Tubos Enz Substrato Tempo DNS Água
mL [M] mL Min. mL mL
1 0.2 0,02 0,2 20 0,4 E 1,0
2 “ 0,03 “ “ “ B “
3 “ 0,04 “ “ “ U “
4 “ 0,05 “ “ “ L “
5 “ 0,06 “ “ “ I “
6 “ 0,08 “ “ “ Ç “
7 “ 0,10 “ “ “ Ã “
B 0,4 mL de água “ O “
 Reações V0 sem alopurinol V0 com alopurinol V0 com Hg2+

Xantina xantina oxidase Ácido úrico 70moles/min 47moles/min 24moles/min

Frutose 6P fosfofrutoquinase Frutose1,6-bisP 100moles/min 100moles/min 50moles/min

Succinato succinato desidrogenase Fumarato 42moles/min 42moles/min 12moles/min

 BONS ESTUDOS!!!

Assim como as proteínas, as enzimas

são fundamentais para a maquinaria
dos seres vivos, atuando na
fotossíntese, na respiração celular, nas
vias metabólicas e na maioria dos
processos, em tudo que nasce, cresce,
desenvolve e morre.