BIOTECNOLOGIA II - MÓDULO 1

Microbiologia básica

Microbiologia: ciência que estuda micro-organismos, seres unicelulares que possuem

relevância para a humanidade como causadores de doenças e por seu papel na alimentação e
agricultura.

A biotecnologia voltada para micro-organismos é utilizada com fins industriais, para

produção de enzimas, metabólitos secundários e vários outros bioprodutos.

Micro-organismos

Organismos excessivamente pequenos, visível apenas com microscópio, geralmente

unicelular com grande diversidade de formas, metabolismo diversificado, encontrados no ar,
solo e no ser vivo. Dividem-se em 5 grupos: vírus, bactérias, protozoários, algas e fungos.

São utilizados na produção dos setores de energia, biorefinarias, enzimas, alimentos,

biofármacos e do ambiente.

Todos os seres vivos são formados por células, necessitam de alimento, precisam respirar, são
capazes de se reproduzir e possuem uma composição química formada por substâncias
orgânicas e inorgânicas. Atualmente são divididos em cinco reinos:

1) Reino Monera: Abriga todos os seres procariontes, principalmente bactérias e

cianobactérias, não possuem núcleo organizado e nenhuma estrutura citoplasmática
membranosa. São unicelulares e a nutrição é feita por absorção (com exceção de alguns
seres quimiossintetizantes). Se reproduzem por divisão binária ou recombinação gênica.

2) Reino Protista: Formado por seres unicelulares eucariontes (núcleo organizado e

individualizado) como protozoários (giárdia, amebas, tripanossomas) e algas inferiores ou
eucariontes.

3) Reino fungi: Composto por seres eucariontes, que podem ser uni oi pluricelulares,
abriga os fungos elementares e fungos superiores (vegetais inferiores).

4) Reino plantae (ou Metaphyta): seres pluricelulares que possuem células revestidas por
uma membrana de celulose, são autótrofos (capazes de produzir sua própria energia). São:
vegetais inferiores (algas, verdes, vermelhas ou marrons), vegetais intermediários
(sabambaia) e vegetais superiores (plantas).

5) Reino animalia (ou Metazoa): Composto por organismos pluricelulares e heterótrofos

(não são capazes de produzir sua própria energia). Fazem parte desse grupo: animais
vertebrados, invertebrados, aves, mamíferos e inclusive o homem.
6) Vírus*: Não possuem classificação definida, pois passaram a realizar funções vitais
somente após invadir uma estrutura celular, sequestrando os componentes que a célula
necessita para formar novos vírus.

Os 3 domínios de Woese: Eubactérias, Archae e Eucariotos

As eubactérias (bactérias verdadeiras), são todas as bactérias que infectam o homem e fazem
parte do reino bactéria (ou Eubactéria).

Um segundo grupo de procariotos frequentemente encontrados em ambientes extremos

formam o reino Archeabactéria (ou Archea)

Morfologicamente, os membros dos reinos Eubactéria e Archea são similares pela ausência
de um núcleo, são classificados como procariotos, apesar disso, eles têm diferenças
bioquímicas importantes.

A maioria das archeas (os termoacidófilos) vivem em ambientes como fontes termais
sulforosas cujas águas tem pH = 2,0 e T = 80°C. As outras archeas vivem em ambientes
contendo metano (archeas metanogênicos) ou sob altas concentração de sal (archeas halófilos
extremos)

Procariotos e Eucariotos

Procariotos: contém membrana celular, citoplasma e nucleoide. São as bactérias, algas azuis
ou cianofíceas.

· Não é compartimentalizada, não possui diversas organelas

· Possuem um único cromossomo circular, eles se encontram ligados a um sitio

particular na membrana citoplasmática (mesossomo) formando o nucleóide.

· Os ribossomos procarióticos são 70S (Svedberg)

Eucariotos: contém membrana celular (ou carioteca), citoplasma e núcleo. São os fungos, as
plantas e os animais.

● Possui diversas organelas

● Possui estruturas e organelas como membranas nucleares, mitocôndrias, retículo
endoplasmático, complexo de Golgi, fagossomos e lisossomos
● Os ribossomos eucarióticos são 80S (Svedberg)
● O RNA ribossômico é maior nos eucariotos
❖ As membranas bacterianas geralmente não contêm esteróis, como colesterol, por
exemplo.
Organelas da célula eucariótica:

Núcleo e Nucleolo

Os nucléolos são estruturas esféricas e densas que se coram intensamente, se alojam dentro
dos núcleos e tem diâmetro de 1 a 3 µm.

A parte fibrilar é constituída de DNA e a parte granular consiste em partículas precursoras

das subunidades ribossômicas no processo de maturação que migram para o citoplasma e vão
formar os ribossomos.

Citoplasma

Parte líquida e transparente que fica no interior da célula (meio aquoso).

Representa a região celular situada entre a membrana plasmática e a membrana nuclear. É

preenchido por um complexo de substâncias químicas de natureza coloidal.

Pode ser dividido em duas regiões, o ectoplasma (região mais periférica/externa) e o

endoplasma (região mais interna).

Membrana Plasmática

Formada por uma dupla camada de fosfolipídios, bem como por proteínas espaçadas em que
podem atravessar de um lado ao outro da membrana.

Algumas proteínas estão associadas a glicídios, formando as glicoproteínas.

Controla a entrada e saída de substâncias.

Retículo Endoplasmático

Atua como produtor, transportador e armazenador de substâncias. Como se origina na

membrana plasmática, apresenta também na sua constituição lipídios e proteínas. Além das
funções já citadas, atua também aumentando a superfície interna da célula.

O R.E liso é onde ocorre a produção de lipídios e o R.E rugoso, onde se encontram aderidos à
sua superfície externa os ribossomos, sendo local de produção de proteínas, as quais serão
transportadas internamente para o Complexo de Golgi.

Ribossomos

São grânulos de ribonucleoproteínas produzidos a partir dos nucléolos, sua função é a síntese
protéica pela união de aminoácidos.

Complexo de Golgi

São bolsas membranosas e achatadas que podem armazenar e transformar substâncias que
chegam via retículo endoplasmático.

Podem também eliminar substâncias produzidas pela célula, mas que irão atuar fora dela
(enzimas).

Produzem os lisossomos.

Nos vegetais se denomina dictiossomo e é responsável pela formação da lamela média da

parede celulósica.

Lisossomos

É a estrutura que apresenta enzimas digestivas capazes de digerir um grande número de

produtos orgânicos. É formado a partir do Aparelho de Golgi.

Mitocôndria

É uma organela citoplasmática formada por duas membranas lipoprotéicas, sendo a interna
formada por pregas, seu interior é preenchido por um líquido denso, denominado matriz
mitocondrial.

Dentro delas se realiza o processo de extração de energia dos alimentos (respiração celular)
que será armazenada em moléculas de ATP.

Apresenta forma de bastonete ou esférica, possuem DNA, RNA e ribossomos próprios, tendo
assim, capacidade de se auto-duplicar.

Quanto maior a atividade metabólica da célula, maior será a quantidade de mitocôndrias em

seu interior. Apresenta capacidade de movimentação, concentrando-se assim nas regiões da
célula com maior necessidade energética.
Cloroplastos

Organela formada por duas membranas e por estruturas discoidais internas.

É a sede da fotossíntese, pois contém moléculas de clorofila que capturam a energia solar e
produzem moléculas como glicose que poderá ser utilizada pelas mitocôndrias para geração
de energia.

Nutrição dos seres vivos

Fonte de Carbono
● Autotróficos: Produzem matéria orgânica (CO2 - fonte de carbono) -> Bactérias, algas
e vegetais
● Heterotróficos: Consomem matéria orgânica (C_orgânico - fonte de carbono) ->
Fungos, bactérias, protozoários e animais.
Fonte de Energia
● Fototróficos: Luz é a principal fonte de energia
■ Anabaena cylindrica (cianobactéria): Luz = Energia
● Quimiotróficos: Oxidação de compostos orgânicos ou inorgânicos.
○ Quimiolitotróficos: C=CO2
○ Quimiorganotróficos: C= orgânico
■ Nitrosomonas europaea: Amônia = nitrito + energia
■ Streptococcus lactis: Glicose = ácido lático + energia
Taxonomia:
Existe um sistema formal para organização, classificação e nomenclatura de organismos
vivos.

Nomenclatura:
Saccharomyces cerevisae: gênero e espécie
S. cerevisae: somente espécie
Saccharomyces sp.: todas as espécies do gênero
Saccharomyces cerevisae Linhagem RN1016: gênero, espécie, linhagem
(selecionada/mutuante ou recombinante)
Características dos principais grupos de microrganismos
Protozoários:
● São unicelulares, eucarióticos com características semelhantes aos animais, incluindo
locomoção, ingestão de alimentos e ausência de parede celular rígida.
● Distribuídos em água doce, salgada e no solo. Vivem particularmente em ambientes
aquáticos e também dentro de organismos vivos onde degradam o material celulósico
da base alimentar destes animais.
● Um terço deles são parasitas e causam doenças (malária, doença de Chagas)
● Podem ser divididos em: Ciliados, Flagelados, Amebas e Esporozoários.
Algas:
● São formadas por células eucarióticas semelhantes às células das plantas, já que
contêm clorofila, que participa do processo de fotossíntese e possuem parede celular
rígida.
● Variam de tamanho e forma: podem ser unicelulares ou multicelulares
● A maioria delas são aquáticas e podem viver em ambientes terrestres úmidos.
● Sintetizam diversos produtos comercialmente interessantes como: espessantes
alimentícios, anti-inflamatórios, agar e óleos.

Fungos:
● São organismos eucariotos, heterotróficos e não fotossintetizantes.
● Possuem parede celular (quitina)
● Dentro do grupo dos fungos, existem as leveduras que são unicelulares e os
cogumelos que são pluricelulares.
● Fungos mais conhecidos: bolores, cogumelos e levedura de panificação
 ● O reino Fungi pode ser dividido em três grupos: Fungos limosos, inferiores flagelados
e terrestres
● Vivem principalmente em ambientes úmidos, podem ser encontrados no ar, no solo,
na água , dentro de vegetais e animais.
● Sua função ecológica é ser um decompositor.
Fungos terrestres: (espécies mais conhecidas dos fungos)
● Inclui leveduras, bolores, mofos e cogumelos; não existem células móveis
● A nutrição é realizada por absorção de matéria orgânica
● Com exceção das leveduras, forma micélio constituído por hifas septadas ou
cenocíticas
● Existem diversos grupos de fungos terrestres: Zygomycetes, ascomycetes,
basidiomycetes, deuteromycetes, etc.
○ Zigomicetos:
■ Hifas não septadas
■ Parede celular de quitina e B-glucanas
■ Saprófitas
■ Esporos imóveis em uma haste
○ Ascomicetos
■ Classe mais numerosa de fungos, podem ser uni ou pluricelulares
■ Esporos = Acósporos
■ Hifas septadas
■ Mofos, bolores e leveduras
❖ Morfologia dos fungos:
➢ Filamentoso (Multicelular): bolores ou fungos filamentosos
■ Metabolismo essencialmente aeróbio
■ Formam células longas, filamentosas, multinucleadas contínuas ou
septadas, geralmente são muito ramificadas (hifas)
■ As hifas são geralmente invisíveis a olho nu, porém ao se aglomerar a
massa hifal, pode variar de alguns milímetros até 2 m, tornando-se
visível. (micélio = conjunto de hifas)
● Tipos de hifas
 ◆ Cenocíticas: possuem massa citoplasmática com
centenas de núcleos. sem divisão transversal - tubos
contínuos
◆ Septadas: a massa citoplasmática apresenta paredes
transversais (septos) possuindo 1 ou 2 núcleos (mono
ou dicariótica.
➢ Leveduriforme (unicelular): leveduras
■ São classificadas como ascomycetes, geralmente são unicelulares de
forma esférica, elíptica ou filamentosa
■ Seu tamanho varia de 1 a 5 µm de diâmetro e 5 a 30 µm de
comprimento
■ Se reproduzem por crescimento vegetativo - gemulação e podem ter
crescimento aeróbio, anaeróbio e facultativo.
■ Suas paredes celulares são compostas por mananas e glucanas
■ O gênero Saccharomyces é o mais conhecido e utilizado
industrialmente para panificação, cervejarias, vinícolas, destilados e
etanol combustível.
Bactérias
● São procariotos, vivem em ambientes aeróbios e anaeróbios
● Podem ser autotróficas ou heterotróficas
● Tem habilidades degradativas
● Podem se apresentar três formas diferentes
○ Esféricas ou Cocos: Diâmetro de 0,5 a 4 µm
○ Cilíndricas ou bastonetes: 0,5 a 20 µm de comprimento e 0,5 a 4 µm de
diâmetro
○ Espiraladas: >10 µm de largura e 0,5 µm de diâmetro
Microrganismos em bioprocessos
Os bioprocessos possuem quatro pontos principais: o microrganismo, o meio de cultura, a
forma de condução do processo e as etapas de recuperação do produto.
Exemplo de bioprocesso: Produção de Biofármacos
Biofármacos são compostos muito importantes tais como hormônios e proteínas usados para
o tratamento de várias doenças e disfunções, também são chamados de bioterapêuticos e são
obtidos de fontes biológicas ou produzidos por processos biotecnológicos.
Microrganismos na produção de biofármacos
● Pesquisa genética - métodos da descoberta de genes
● Recombinação genética e expressão de genes
● Uso de organismos geneticamente modificados (OGM) para a produção
Biofármacos importantes produzidos por tecnologia de DNA recombinante
● Insulina humana
● Hormônio de crescimento
● Vacinas: Hepatite B
● Antibióticos
● Beta-endorfinas, etc.
Por que usar microrganismos?
● São uma tecnologia relativamente simples
● Manutenção in vitro não requer muitos componentes
● Natureza unicelular, genomas mais simples, biodiversidade
● São capazes de crescer em uma variedade ampla de substrato e podem produzir um
espectro vasto de produtos
● A maioria das espécies de microrganismos são úteis:
○ Procariotos: bactérias e cianobactérias
○ Eucariotos: Fungos, leveduras e algas
Onde obter microrganismos ou células para desenvolver ou aprimorar um determinado
processo?
Podem ser obtidos por:
● Isolamento de culturas a partir de recursos naturais
● Compra de coleções de culturas
● Obtenção de mutantes naturais ou induzidos
● Obtenção de microrganismos recombinantes por técnicas de engenharia genética
Quais características um microrganismo deve apresentar de maneira a torná-lo inetressante
para a utilização em processo industrial?
● Elevada eficiência de conversão de substrato em produto
● Permitida o acúmulo de produto no meio
● Não produzir substâncias incompatíveis ao produto
● Ser fisiologicamente constante
● Não exigir meio de cultura extremamente complexo
○ Baixo custo
○ Atender às necessidade nutricionais do microrganismo
○ Auxiliar no controle do processo (pH, espuma)
○ Não provocar problemas na recuperação do produto
○ Permitir algum tempo de armazenagem
○ Ter composição razoavelmente fixa
○ Não causar dificuldades no tratamento final do efluente
● Não exigir condições de cultivo extremamente complexas
● Permitir a rápida liberação de produto ao meio
● Não ser patogênico
Microrganismos e meios de cultura de interesse industrial
Meio de cultura: Associação qualitativa e quantitativa de substâncias que fornecem os
nutrientes necessários ao desenvolvimento (cultivo) de microrganismos fora do seu meio
cultural. Tendo em vista a ampla diversidade metabólica dos microrganismos, existem vários
tipos de meio de cultura para satisfazer as variadas exigências nutricionais.
Além dos nutrientes, é preciso fornecer condições ambientais favoráveis ao desenvolvimento
dos microrganismos, tais como pH, pressão osmótica, umidade, temperatura, atmosfera, etc,
suprindo as necessidades básicas do microrganismo. Muitas vezes as condições necessárias
ao crescimento máximo não coincidem com a condição de máxima produtividade do produto,
então deve-se projetar sistemas para obter máxima produtividade.
Exigências nutricionais:
● Fonte de energia
● Fonte de material plástico
● Fonte de minerais e vitaminas
● Composição (substrato e nutrientes)
Formulação:
● Crescimento
● Manutenção
 ● Isolamento
● Produção de produto
● Laboratório ou Industrial

Classificação quanto ao estado físico

● Sólidos: quando contém agentes solidificantes, principalmente o ágar (de 1 a 2%)
● Semi-sólidos: quando possuem consistência sólida ou pastosa com teor de água de
modo a permitir o crescimento de de microrganismos em tensões variadas de oxigênio
● Líquidos: sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo, muito utilizado
em biorreatores.

Classificação quanto à procedência dos constituintes

● Naturais ou complexos: quando são usados ingredientes com composição química não
definida, tais como extratos vegetais, de animais e de microrganismos
● Artificiais, sintéticos ou químicamente definidos: quando a composição química é
conhecida e seus componentes servem para suprir as exigências nutritivas dos
microrganismos em fontes de carbono, nitrogênio, vitaminas, energia, sais minerais,
quando são conhecidas as necessidades nutricionais específicas.

Classificação quanto à composição química

● Simples: permitem o crescimento bacteriano, contudo, não satisfaz nenhuma
exigência em especial
● Especiais ou complexos: cumprem com as exigências vitais de determinados
microrganismos, podem ser classificados também em:
○ Diferenciais: contém substâncias que permitem estabelecer diferenças entre
microrganismos muito parecidos.
○ Seletivos: contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados
grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros.
○ Contagem: empregados para a determinação quantitativa da população
microbiana
○ Estocagem ou manutenção: utilizados para conservação de microrganismos no
laboratório.

Categorias dos nutrientes necessários para o crescimento microbiano

● Fontes de energia - crescimento
○ Compostos orgânicos indispensáveis a um microrganismo, mas que ele não
consegue sintetizar: vitaminas, aminoácidos, nucleotídeos e ácidos graxos.
○ Fatores ambientais: oxigênio, água, temperatura e pH.
● Fontes de matérias plásticas - construção molecular
○ Produtos necessários para multiplicar e renovar a matéria viva: carbono,
hidrogênio, oxigênio, nitrogênio, enxofre e fósforo.
Processo Biotecnológico Industrial Genérico (bioprocesso)
● Processo bioquímico ou enzimático
● Processo biológico (fermentação e cultivo microbiano) compreendem as seguintes
 etapas:
○ Tratamentos iniciais - Upstream Processes
○ Fase de transformação - biorreator
■ Produção: fase de transformação do produto de interesse industrial
■ No biorreator, um equipamento controlado e automatizado são
compreendidos fenômenos físicos, químicos, biológicos a ótimas
condições ambientais no meio de cultivo
○ Tratamentos finais - Downstream processes
■ Processos de separação e purificação dos bioprodutos (células e
biomoléculas)
■ Acondicionamento e transporte
■ Tratamento de resíduos
Reações químicas e bioquímicas
● Processos químicos: realizados entre compostos químicos usando-se catalisadores
químicos
● Processos enzimáticos: transformação química realizada por catalisadores biológicos
(enzimas) na ausência de seres vivos
● Processos fermentativos (anaerobiose) ou biológicos: transformação realizada pelos
microrganismos (biocatalisadores -> agentes de transformação do substrato em
bioproduto) que metaboliza o composto químico
● Cultivo microbiano: aerobiose, realizado por microrganismos vivos, células animais e
vegetais
Pontos fundamentais de um bioprocesso
● Microrganismo
● Meio de cultura
● Esterilização e desinfecção: equipamentos, meios e ar
● Equipamentos: construção e aumento da escala
● Processo: forma de operação, cinética e termodinâmica
● Aeração: aerobiose e anaerobiose
● Separação dos bioprodutos: células, proteínas, enzimas, Antibióticos, Vacinas,
biocombustíveis, pesticidas, esteroides, polissacarídeos e polímeros
● Tratamento de resíduos
Bioprocessos importantes
● Produção industrial de penicilina
● Produção de etanol
● Produção de ácido lático
● Produção de acetona-butanol
● Produção de ácido cítrico
● Produção de levedura e panificação
● Bebidas fermentadas (cerveja e vinho)
● Produção de enzimas
● Produção de biodiesel