C U L TI V O S D E MI C O L O G I A

3.2.1. En laboratorios pequeos que tienen un bajo flujo deeste tipo de muestras y no permite tener medios es-peciales es aceptable inocular 0,5 mL de sangre hepa-rinizada directamente en la superficie de un medio decultivo.Como medio de cultivo se debe emplear una botella bi-fsica que contenga 60 mL de caldo infusin cerebrocorazn y agar cerebro corazn.Se inocula 10 mL de sangre en el medio bifsico, reci-biendo ventilacin a travs de una aguja con tapn de algodn, colocando el medio de cultivo en forma verti-cal. Se incuba a 30 C por 30 das.

3.3.1 El urocultivo convencional es el mtodo idneo para elestudio de infeccin del tracto urinario, permitiendo di-ferenciar cualitativa y cuantitativamente una contamina-cin de una candiduria significativa.3.3.2 Inocular 1 10 L de orina no centrifugada en una placaPetri que contenga agar sabouraud dextrosa con anti-bitico (ASD).

3.4.1 Transvasar la muestra a una placa Petri estril. Realizarlavados con solucin salina estril con antibiticos (clo-ramfenicol al 0,05%).3.4.2 Seccionar y triturar la muestra en trozos de 1 a 2 mmcon ayuda de pinza y bistur estril para obtener un espcimen homogeneizado. 3.4.3 Flamear al mechero cuatro lminas portaobjetos y en lacara flameada realizar improntas para hacer examen enfresco y coloraciones como Gram y Giemsa.3.4.4 Inocular la muestra, sumergindola ligeramente en lasuperficie del medio de cultivo agar Sabouraud dextrosa(ASD). Incubar un tubo a temperatura ambiente y otro a37 C.

3.6.1 Colocar la muestra de esputo en tubos de ensayo conASD y agar infusin cerebro-corazn. Emplear como m-nimo seis tubos por muestra, tres de ellos se incubarna temperatura ambiente y los otros tres a 37 C. Los me-dios de cultivo deben de contener cloramfenicol 0,5g/L.Evitar el uso de cicloheximida debido a que puede inhibirel desarrollo de mohos, principalmente Aspergillus spp.,Penicillium marneffei, y Cryptococcus neoformans.

3.6.2 El LBA se debe de colocar en recipiente estril y contapa rosca. La muestra se centrifuga (1500 g 3000rpm por 30 minutos) y a partir del sedimento se realizael cultivo.

3.7.1 La muestra se obtiene por puncin lumbar, y luego esdepositada en un tubo de vidrio o frasco estril con taparosca. El volumen requerido para un adecuado diagnstico de hongos debe ser de 5 mL. 3.7.2 Centrifugar la muestra a 1500 g 3500 rpm por 15minutos. El sobrenadante puede ser empleado para rea-lizar pruebas serolgicas de deteccin de antgeno de neoformans .3.7.3 El sedimento debe ser sembrado sobre ASD o agar in-fusin cerebro corazn o agar semilla de girasol (agar niger seed ). Emplear de cuatro a seis tubos conteniendoel medio de cultivo por muestra. Incubar a temperaturaambiente y 37 C por cuatro semanas.