Manual Muestras Microbiologia

HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE ELCHE MANUAL DE TOMA DE MUESTRAS
Rev. 0 1 2 3
Fecha
3/98 1/03
Hojas/s
Causa del cambio
3/04 4/06
Realizado por: Dr. Juan Carlos Rodrguez Dra. Montserrat Ruiz Dra. Pilar Lpez Fdo.:
Revisado/Aprobado por: Dra. Gloria Royo Fdo.:
Fecha:
INDICE
INTRODUCCIN. ........................................................................................... 10 Introduccin. ................................................................................................ 11 Objetivo del manual. .................................................................................. 12 CONCEPTOS GENERALES. .......................................................................... 13 Normas bsicas generales. ........................................................................ 14 Volante de peticin. ................................................................................... 14 Obtencin de la muestra. ......................................................................... 15 Recogida de la muestra. ........................................................................... 15 Transporte. .................................................................................................... 15 Horario de recepcin de muestras y telfonos de contacto. ............. 16 Establecimiento de prioridades. ............................................................... 16 Criterio de rechazo de muestras. ............................................................. 17 UROCULTIVOS. .............................................................................................. 18 Introduccin. ................................................................................................ 19 Cultivo de bacterias: orina obtenida por miccin media. .................. 20 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 20 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 21 - Observaciones. ......................................................................................... 21 Cultivo de bacterias: orina de pacientes con catter permanente. 22 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 22 - Conservacin y transporte. .................................................................... 23 - Observaciones. ......................................................................................... 23 Cultivo de bacterias: orina vesical. .......................................................... 23 - Indicaciones . ............................................................................................ 23 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 23 Cultivo de micobacterias: orina. .............................................................. 23 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 23 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 23 - Observaciones. ......................................................................................... 23 - Criterios de rechazo de las muestras. .................................................... 23 COPROCULTIVOS. ........................................................................................ 25 Introduccin. ................................................................................................ 26 Cultivo de bacterias: heces . ................................................................... 26 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 26 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 27 - Observaciones . ........................................................................................ 27
Cultivo de bacterias: hisopos rectales. .................................................... 27 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 27 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 28 - Observaciones . ........................................................................................ 28 Estudio virolgico: heces. .......................................................................... 28 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 28 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 28 - Criterio de rechazo de las muestras. ..................................................... 29 PARASITOS INTESTINALES. ............................................................................ 30 Estudio parasitolgico: heces. .................................................................. 31 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 31 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 31 Estudio parasitolgico: aspirado duodenal. ........................................... 32 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 32 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 32 Estudio parasitolgico: oxiuros (prueba de Graham). .......................... 32 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 33 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 33 - Criterios de rechazo de las muestras. .................................................... 33 TRACTO GENITAL FEMENINO. ..................................................................... 34 Introduccin. ................................................................................................ 35 Exudados vaginales. ................................................................................... 35 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 36 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 36 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 36 - Observaciones. ......................................................................................... 36
Exudados cervicales. ................................................................................... 37 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 38 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 39 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 39 - Observaciones. ......................................................................................... 39 TRACTO GENITAL MASCULINO. .................................................................. 40 Exudados uretrales. ..................................................................................... 41 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 41 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 42 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 42 - Observaciones. ......................................................................................... 42 Muestras para el diagnstico de prostatitis. ........................................... 42 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 43 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 43 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 44 - Observaciones. ......................................................................................... 44 HEMOCULTIVOS. .......................................................................................... 45 Hemocultivos. ............................................................................................... 46 - Introduccin. .............................................................................................. 46 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 47 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 48 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 48 - Observaciones. ......................................................................................... 48 CATTERES. .................................................................................................... 50 Catteres intravasculares. ......................................................................... 51 - Introduccin. .............................................................................................. 51 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 51 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 51 Otros catteres y drenajes. ........................................................................ 52 SISTEMA OCULAR. ........................................................................................ 53 Exudados conjuntivales. ............................................................................. 54 - Introduccin. .............................................................................................. 54 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 54 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 54 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 55 Raspados corneales. .................................................................................. 55 - Introduccin. .............................................................................................. 55
- Obtencin de la muestra. ....................................................................... 55 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 55 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 55 Lente de contacto: lente intraocular. ..................................................... 56 - Introduccin. .............................................................................................. 56 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 56 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 56 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 56 TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR. ............................................................ 57 Odo externo: exudado tico. .................................................................. 58 - Introduccin. .............................................................................................. 58 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 58 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 58 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 58 Odo medio: exudado tico. .................................................................... 59 - Introduccin. .............................................................................................. 59 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 59 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 60 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 60 Exudado faringo-amigdalino. ................................................................... 60 - Introduccin. .............................................................................................. 60 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 60 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 60 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 60 - Observaciones. ......................................................................................... 61 Exudados nasofaringeos. ........................................................................... 61 - Introduccin. .............................................................................................. 61 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 61 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 61 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 61 - Observaciones. ......................................................................................... 62 Exudados de senos paranasales. ............................................................. 62 - Introduccin. .............................................................................................. 62 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 62 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 62 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 62 Exudado de la cavidad oral. .................................................................... 63
- Introduccin. .............................................................................................. 63 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 63 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 63 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 63 TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR. ............................................................. 64 Introduccin. ................................................................................................ 65 Esputo. ........................................................................................................... 65 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 66 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 66 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 67 Broncoaspirado. .......................................................................................... 67 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 67 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 67 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 68 Lavado broncoalveolar. ............................................................................ 68 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 68 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 69 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 69 Cepillado bronquial mediante catter telescopado. .......................... 69 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 69 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 70 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 70 LIQUIDOS ORGANICOS. .............................................................................. 71 Liquido cefalorraqudeo. ........................................................................... 72 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 72 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 73 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 73 - Observaciones. ......................................................................................... 73 Otros lquidos orgnicos estriles. ............................................................. 74 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 74 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 75 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 76 - Observaciones . ........................................................................................ 76 PIEL Y TEJIDOS BLANDOS. ............................................................................ 77 Ulceras y heridas superficiales. .................................................................. 78 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 78 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 78
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 79 - Observaciones. ......................................................................................... 79 lceras crnicas. ......................................................................................... 79 - Introduccin. .............................................................................................. 79 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 79 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 80 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 80 - Observaciones. ......................................................................................... 80 Exantemas. ................................................................................................... 81 - Introduccin. .............................................................................................. 81 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 81 Abscesos cerrados. ..................................................................................... 81 - Introduccin. .............................................................................................. 81 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 81 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 82 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 82 - Observaciones. ......................................................................................... 83 Fstulas y tractos. .......................................................................................... 83 - Introduccin. .............................................................................................. 83 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 83 - Conservacin y transporte. ...................................................................... 83 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 83 - Observaciones. ......................................................................................... 83 MICOSIS CUTNEAS. .................................................................................... 84 Recogida de muestras para estudio de hongos. .................................. 85 - Introduccin. .............................................................................................. 85 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 85 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 87 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 87 SEROLOGIA INFECCIOSA. ........................................................................... 88 Serologa infecciosa. .................................................................................. 89 - Introduccin. .............................................................................................. 89 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 89 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 90 - Procesamiento en el laboratorio. ........................................................... 90 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 90 MICROBIOLOGIA MOLECULAR INFECCIOSA. .......................................... 91
Microbiologia molecular infecciosa. ....................................................... 92 - Introduccin. .............................................................................................. 92 - Obtencin de la muestra. ....................................................................... 92 - Conservacin y transporte. ..................................................................... 92 - Procesamiento en el laboratorio. ........................................................... 93 - Criterios de rechazo. ................................................................................ 93 BIBLIOGRAFA. .............................................................................................. 94 ANEXOS. ........................................................................................................ 96
INTRODUCCIN
INTRODUCCIN
El diagnstico de las enfermedades infecciosas se basa en el estudio de los sntomas y signos clnicos, as como en la demostracin de la presencia de su agente productor, de sus productos o de la respuesta del sistema inmune frente a dicho agente. El diagnstico clnico es, en algunos casos bastante demostrativo pero, en la gran mayora de los casos, el diagnstico es difcil y necesita el apoyo del laboratorio. Es bien conocido que, un mismo microorganismo, puede dar una gran variedad de cuadros clnicos, en una o varias localizaciones, y que la sensibilidad a los antimicrobianos de un microorganismo es variada, dependiendo de los mecanismos de resistencia que haya desarrollado cada aislado. Por todo ello, la confirmacin de la etiologa de un proceso infeccioso, as como la ayuda para su tratamiento es una informacin necesaria aportada por el laboratorio de Microbiologa. Toda la informacin diagnstica que el laboratorio de Microbiologa puede proporcionar, depende de la calidad de la muestra recibida. El trmino calidad incluye la seleccin apropiada de la muestra, la recogida y su transporte al laboratorio. Por ello, una muestra mal tomada, escasa o mal transportada, determinar un posible fallo en la recuperacin de los agentes patgenos, que puede inducir a errores diagnsticos, e incluso a un tratamiento inadecuado del enfermo. Este hecho debe ser bien conocido por las personas que realizan las tomas en clnicas, centros de salud, salas y consultas hospitalarias, lo que hace necesaria la preparacin continuada de dicho personal sanitario, al que hay que concienciar del coste econmico intil, as como de los errores en los resultados obtenidos de una determinacin microbiolgica realizada a partir de una muestra inadecuada. La calidad de un laboratorio depende, en gran medida, de factores relativos a la recogida de muestras, y a su procesamiento inicial. As pues, se consideran indicadores del nivel de calidad en cuanto a la fase preanaltica: el nmero de muestras rechazadas, las muestras aceptadas contaminadas, la solicitud de determinaciones repetida en un perodo corto de tiempo, la adecuacin de las peticiones a las muestras enviadas, etc. Es imprescindible que la comunicacin entre los microbilogos y los clnicos sea muy fluida y que est claramente definido y asumido por todos, que el clnico DEBE preguntar al microbilogo para asesorarse sobre las muestras y tcnicas ms tiles para el diagnstico de la enfermedad que padece el paciente y que el microbilogo DEBE comunicarse con los clnicos, no slo como asesor, sino preguntando sobre aqullas cuestiones que le van a permitir realizar un diagnstico ms adecuado y rechazando las peticiones que no son rentables desde el punto de vista del diagnstico microbiolgico.
OBJETIVO DEL MANUAL

El objetivo de este manual es hacer recomendaciones sobre cuales son las muestras ms adecuadas para el diagnstico microbiolgico, su forma de recogida, transporte y conservacin, reseando el material necesario, la tcnica de obtencin, el volumen, el nmero y el modo de transporte de cada una de ellas, segn las distintas localizaciones y caractersticas especiales de aqullas o de los microorganismos a investigar.
Este manual no pretende ser exhaustivo, tan solo trata de ayudar al clnico y al personal de enfermera en la labor de eleccin, obtencin y manejo de las muestras ms adecuadas para los procesos infecciosos ms frecuentes.
CONCEPTOS GENERALES
NORMAS BSICAS GENERALES

Son muchas las consideraciones generales que deben guiar la recogida y envo de muestras microbiolgicas, con criterio didctico, ya que muchas de ellas son simultneas, podemos dividirlas en los siguientes apartados: volante o vale de peticin, obtencin de la muestra, recogida de la misma y transporte. Volante de peticin. Cada muestra deber ir acompaada de un volante de peticin, que deber ser legible y estar correcta y completamente cumplimentado. El volante de peticin para las determinaciones microbiolgicas debe ser exclusivo para el laboratorio de Microbiologa, no siendo apropiado el uso de volantes comunes con otras especialidades, ya que esto conlleva errores y retrasos en el procesamiento de las muestras, la imposibilidad de realizar comprobaciones a partir del original y deficiencias en su archivo. Todo volante o vale de peticin deber poseer las cinco reas siguientes: 1. Filiacin y datos administrativos, donde se debe especificar el nombre y apellidos, sexo y edad del paciente, el mdico solicitante (incluyendo nmero de colegiado) y el centro, servicio, o consulta al que pertenezca, as como cualquier otro dato de identificacin, como el nmero de cama, el SIP y/o el nmero de historia clnica. Debe constar el servicio de destino cuando sea distinto del de origen. 2. Datos clnicos, como fecha del comienzo de la enfermedad, diagnstico clnico de presuncin, estado inmunitario del paciente, etc. Todos estos datos son de gran inters para orientar las tcnicas que hay que realizar. 3. Datos de la muestra, como fecha de obtencin, naturaleza del producto y exacta localizacin de la toma, as como el procedimiento de extraccin, o si se ha realizado alguna tcnica especial ( puncin transtraqueal, vesical, etc.). 4. Teraputica seguida, antimicrobianos, que se han administrado y tiempo desde la ltima toma o inyeccin. El ideal es que todas las muestras se tomarn antes de empezar un tratamiento antibitico. 5. rea para la solicitud, indicando claramente el tipo o tipos de determinaciones requeridas, y en caso de que se desee la bsqueda de un microorganismo determinado, ste se resear (M. tuberculosis, micoplasma, etc.). 6. Etiquetado: es imprescindible pegar en cada volante y sus copias una etiqueta identificativa generada por ordenador. Es recomendable que las muestras estn en el laboratorio de Microbiologa lo antes posible para iniciar su procesamiento. Obtencin de la muestra. En lneas generales, es necesario que la muestra: Se obtenga del sitio exacto de la lesin y siguiendo las precauciones universales
Se recoja con las mximas condiciones de asepsia, para evitar la contaminacin Nunca se ponga en contacto con antispticos o desinfectante Se tome lo antes posible Sea recogida preferentemente por aspiracin, en lugar de tomada con hisopos Se tome en cantidad adecuada, para facilitar el estudio detallado Se recoja antes de la instauracin del tratamiento antibitico. Cuando no sea posible, se obtendr justo antes de la administracin del antimicrobiano, o tras 48 horas de su retirada, indicndolo en el volante de peticin. Sea identificada con las etiquetas correspondientes, o en su defecto, debe ser correctamente rotulada, con los datos del paciente, el lugar anatmico de procedencia de la muestra, la fecha y el servicio solicitante. La identificacin debe ser adherida al frasco y no a los tapones.
Recogida de la muestra. Cada tipo de muestra requiere un material estril para su recogida y transporte. Aunque ste se estudia con detenimiento en cada uno de los apartados correspondientes, en el anexo I se recogen los principales envases, contenedores, hisopos, tubos, etc, de uso en el laboratorio de Microbiologa. Transporte. Todas las muestras debern ser enviadas lo ms rpidamente posible al laboratorio, preferentemente antes de dos horas. La mayora de los microorganismos, salvo excepciones, resisten bien las temperaturas bajas, por lo que los productos pueden mantenerse en la nevera hasta su envo al laboratorio. En todos los casos, la forma de envo de la muestra debe evitar el vertido (y posible contaminacin) del contenido, por lo que el recipiente debe cerrarse con seguridad. Es obligatorio que las muestras sean transportadas en nevera y en recipientes homologados de contencin biolgica. En caso de envos mltiples, el vertido de una de las muestras implicar el rechazo de todas ellas. Siempre quedarn claras la identidad de la muestra, de la persona a quien pertenece, y los servicios solicitante y receptor Cuando la viabilidad de los microorganismos es muy escasa o la posibilidad de desecacin de la muestra es grande (favorecindose la destruccin bacteriana), se usarn medios de transporte especficos. Se trata de medios, tales como los de Stuart o Amies, que no son nutritivos, sino que preservan las bacterias existentes, sobre todo si son escasas, a la vez que impiden el crecimiento exagerado de otra flora bacteriana no deseada. Estos medios existentes en el comercio pueden ser para bacterias aerobias o anaerobias, y aunque pueden conseguir supervivencias de hasta 24 horas a temperatura ambiente, debern enviarse tambin lo ms rpidamente posible al laboratorio. Horario de recepcin de muestras en el laboratorio y telfonos de contacto El horario del laboratorio de Microbiologa es:
De lunes a viernes: 8-22 h Sbados: 8-15 h. Telfonos de contacto: 966679048/493 Establecimiento de prioridades Debe quedar claramente establecido qu muestras se consideran urgentes, cules son de procesamiento rutinario y cules electivas. Las muestras urgentes son aquellas que necesitan un procesamiento urgente o una pronta respuesta (en la mayora de los casos con informes preliminares va telefnica) y procedan en su mayora del servicio de Urgencias o Unidades Crticas. Las muestras rutinarias son aqullas que tienen un procesamiento especfico bien protocolizado y que corresponden a la mayora de muestras que se envan desde los centros de salud y desde las consultas externas (ejemplo: orina para cultivo, heces para cultivo...), en las que la peticin corresponde con un tipo de determinacin microbiolgica muy clara. Las muestras electivas son aqullas que se envan al laboratorio y que necesitan de la interpretacin del microbilogo para orientar su procesamiento. Todas las llamadas telefnicas sobre informacin de resultados microbiolgicos deben quedar reflejadas en el Libro de llamadas externas, donde deber anotarse la fecha, la persona que la realiza, el motivo de la llamada y el servicio y la persona que atiende y que por tanto se responsabiliza de su actuacin posterior. Criterios de rechazo de muestras Los criterios de rechazo de muestras para estudio microbiolgico son fundamentales para prevenir el informe de datos con escaso o nulo valor (o incluso motivo de confusin) para el diagnstico y el tratamiento del paciente, as como aqullas que por sus condiciones (derramamiento...) puedan atentar contra la seguridad biolgica del personal del laboratorio. El rechazo de una muestra por parte del laboratorio no debe ser interpretado como una negativa a establecer un diagnstico, ni como una dejacin de funciones por parte del laboratorio, ni tiene finalidad recriminatoria para el solicitante; sino como una simple peticin de una nueva muestra que aportar informacin de mayor relevancia clnica para el diagnstico y el tratamiento de los pacientes. De hecho, a no ser que el contenedor est roto y/o la muestra se haya derramado, la muestra debe mantenerse en el laboratorio hasta que se haya notificado al mdico peticionario la incidencia. Los criterios de rechazo son: Muestra no etiquetada o etiquetada de forma que puede llevar a confusin Transporte inadecuado Tiempo excesivo desde la obtencin de la muestra Contenedor inadecuado Contenedor no estril Contenedor roto o muestra derramada Muestras con contaminacin orofarngea evidente
Contaminacin exgena obvia Muestras duplicadas tomadas a la vez Muestras recogidas en el mismo da con la misma peticin (excepto sangre para cultivo) Muestras no adecuadas para la peticin realizada Cantidad insuficiente para el estudio solicitado Toda muestra biolgica previamente manipulada, o en caso de suero, cuando no sea tubo primario.
UROCULTIVO
INTRODUCCIN
Las infecciones del tracto urinario (ITU) son las ms frecuentes solamente superadas por las del tracto respiratorio. Son ms prevalentes y recurrentes en la mujer, y su incidencia aumenta con la edad. El cultivo de orina establece el diagnstico etiolgico de certeza de una infeccin urinaria tanto sintomtica como asintomtica (bacteriuria asintomtica) en pacientes con riesgo de infeccin. Permite a su vez la realizacin de estudios de sensibilidad. La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnstico de ITU, ya que est presente en la mayora de los casos. Una excepcin es la bacteriuria asintomtica en la que la piuria puede estar ausente. Existen varios factores que determinan la epidemiologa de la infeccin urinaria, entre ellos destacan la edad, determinadas enfermedades, cateterismos u otros tipos de instrumentacin del tracto genitourinario. Estos han de tenerse siempre en cuenta a la hora de interpretar los urocultivos. Los agentes etiolgicos predominantes son las enterobacterias siendo E.coli la causa ms importante. Otros microorganismos que con frecuencia producen infeccin de orina son Enterococcus faecalis, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus saprophyticus, etc. Indicaciones del urocultivo: No todas las ITU requieren la prctica sistemtica del urocultivo. En el primer episodio de cistitis no complicada en mujeres jvenes no se recomienda la practica del urocultivo aconsejndose tratamiento antibitico emprico segn epidemiologa y resistencias en ese medio. Se debe realizar urocultivo en los siguientes casos: Sospecha de pielonefritis Sospecha de ITU en neonatos, lactantes y nios Sospecha de ITU en varones ITU recurrente en mujeres Sospecha de ITU complicada en mujeres: anomalas estructurales y funcionales del tracto urinario, cuerpo extrao en el tracto urinario, manipulacin urolgica reciente, estados de inmunodepresin y tratamientos antibiticos prolongados Sospecha de ITU en portadores de sonda permanente Sospecha de sepsis de origen urinario Bacteriemia de origen desconocido Obstruccin del tracto urinario Despus de retirar una cateterizacin Como control de tratamiento en todos los casos anteriores Como screening en 1er trimestre del embarazo (16 semanas) Antes de instrumentalizacin o ciruga de vas urinarias
CULTIVO DE BACTERIAS: ORINA OBTENIDA POR MICCIN MEDIA

Obtencin de la muestra La muestra idnea es la primera miccin de la maana en pacientes adultos y no sondados, ya que permite la multiplicacin de bacterias durante la noche. 1. Material necesario Gasas estriles. Jabn neutro. Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermtico y estril. Bolsas de plstico o colectores estriles para nios.
2. Tcnica 2.1. Tcnica para mujeres La paciente debe quitarse la ropa interior. Se lavar las manos cuidadosamente con agua y jabn, las enjuagar con agua y las secar con una toalla limpia. Se separarn los labios mayores y menores, y los mantendr separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina. Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasndola de delante hacia atrs. Enjuagar cuidadosamente con agua para eliminar los restos de jabn. Se indicar a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros, tras lo cual y sin interrumpir la miccin, se recoger la orina media en el recipiente, desechando la ltima parte. El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva o ropa del paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior. 2.2. Tcnica para hombres Lavado de las manos con agua y jabn. Retraer completamente el prepucio, que se mantendr as en todo momento, hasta que se haya recogido la orina. Limpiar el glande con jabn neutro. Eliminar los restos de jabn enjuagndolo con agua. Se pedir al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros para, sin interrumpir la miccin, recoger la orina media en el recipiente estril, despreciando la ltima parte. 3. Tcnica para nios En nios y nias mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos. En nios y nias ms pequeos, la orina se recoger en colectores o bolsas estriles especialmente diseadas para ellos
Debe realizarse un lavado cuidadoso de los genitales y del rea donde colocar la bolsa de plstico o el colector. Se debe vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nio haya orinado, debe retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento. Si la miccin no se ha realizado en una hora, se repite la operacin colocando una nueva bolsa.
3. Volumen mnimo Es suficiente un volumen de orina de 1-10 ml ( ver Tabla n 1). Conservacin y transporte La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Si no es posible, mantener a 4 C durante un tiempo mximo de 24 horas o utilizar un medio de transporte. Observaciones Para la investigacin de anaerobios es necesario que la orina se obtenga por puncin suprapbica. Cuando se sospecha la presencia de hongos, virus y parsitos ver Tabla 1.
Tabla 1: Recomendaciones sobre el volumen de orina Determinacin BACTERIAS HONGOS MICOBACTERIAS ANAEROBIOS Volumen 1-10 ml >20 ml >20 ml 1 ml Comentarios Primera orina de la maana. Primera orina de la maana. Primera orina de la maana 3 das consecutivos. Aspirado suprapbico, enviar inmediatamente o usar sistema de transporte de anaerobios . Primera orina de la maana, enviar con hielo y transportar al laboratorio inmediatamente. En caso de sospecha de Schistosoma, debe tomarse despus de hacer un ejercicio moderado, como subir y bajar escaleras durante 10 minutos
VIRUS
10-15 ml
PARASITOS
>50 ml
CULTIVO DE BACTERIAS: ORINA DE PACIENTES CON CATTER PERMANENTE

Obtencin de la muestra 1. Material necesario Gasas. Alcohol 70 C o solucin yodada. Jeringa o aguja estril. Recipiente estril.
2. Tcnica Se limpiar el catter con una gasa humedecida en alcohol o solucin yodada. Dejamos secar unos minutos. Pinchar directamente con aguja estril el catter por la zona desinfectada, aspirando entre 3-5 ml.
Conservacin y transporte Puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente estril. Si no puede llevarse al laboratorio, se debe refrigerar a 4C.
Observaciones Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una muestra adecuada para estudio microbiolgico y que est justificado rechazar su procesamiento.
CULTIVO DE BACTERIAS: ORINA VESICAL

Indicaciones Evidencia clnica del cuadro urinario con recuentos bajos o nulos. Neonatos y lactantes. Cateterizacin contraindicada o dificil. Bsqueda de anaerobios. Urocultivos repetidos con dos o ms bacterias.
Obtencin de la muestra Es la orina obtenida por puncin suprapbica o por cistoscopia. Requiere un buen conocimiento de la tcnica y de las precauciones que hay que adoptar, con rigurosa asepsia, descartando problemas de hemostasia y con la vejiga palpable y previa desinfeccin y anestesia local. Se punciona la vejiga a 1,5 cm de la snfisis pubiana, en la lnea media, estando el paciente en decbito supino. Se aspira el contenido vesical con una jeringa de 10 ml. con una aguja larga (calibre 19). Enviar al laboratorio lo antes posible en la misma jeringa de la extraccin, tras expulsar el aire de su interior y con la aguja pinchada en un tapn de goma estril. Indicar en el volante la procedencia de la muestra o tcnica empleada para su recogida (dato importante a la hora de valorar el recuento de colonias).
CULTIVO DE MICOBACTERIAS: ORINA

Obtencin de la muestra 1. Material necesario Envase estril de al menos 20 ml de capacidad, de boca ancha y cierre hermtico.
2. Tcnica Deben mantenerse las normas generales correspondientes a la obtencin de muestras para el cultivo Recogida por miccin estril de la primera orina de la maana. En cada miccin se recoge toda la orina desechando en el WC slo los primeros mililitros.
3. Nmero de muestras y volumen mnimo 3 muestras obtenidas en das consecutivos. >20 ml.
Conservacin y transporte. Envo inmediato al laboratorio. Si no es posible, conservar a 4C.
Observaciones. Lavado minucioso de los genitales como se indica en el apartado de toma de muestras para cultivo de bacterias. Es recomendable suspender cualquier tratamiento antimicrobiano de 3 a 5 das antes de la toma.
CRITERIOS DE RECHAZO DE MUESTRAS

Muestra no identificada correctamente: Las muestras de orina que no lleguen al laboratorio correctamente identificadas y sea imposible averiguar el paciente a que pertenecen sern excluidas. Se informar al servicio responsable de la peticin y se desechar la muestra. Muestra en contenedor NO estril. Muestra no adecuada: Catteres de Foley (sonda vesical), orina obtenida por miccin espontnea o de catter para cultivo de anaerobios. Se informar igualmente al servicio responsable de la peticin y se desechar la muestra. Muestras que no hayan llegado al laboratorio en 2 horas desde su recogida y no hayan sido correctamente conservadas en nevera a 4 C. Se informar igualmente al servicio responsable de la peticin y se desechar la muestra. Slo en el caso de que la muestra lleve conservante, el cultivo podr retrasarse hasta 24 horas.
COPROCULTIVO
INTRODUCCIN
La diarrea es el proceso que se acompaa de la eliminacin frecuente de heces, disminucin de su consistencia o ambas cosas. El nmero de microorganismos implicados en cuadros entricos ha aumentado mucho en los ltimos aos. Ante la sospecha de un cuadro de infeccin gastrointestinal debe hacerse una detallada historia clnica y un correcto estudio microbiolgico. Los antecedentes epidemiolgicos (edad, historia reciente de viajes, aparicin espordica o como parte de un brote, tipo de alimento sospechoso, perodo de incubacin), la existencia de factores predisponentes (SIDA, inmunosupresin), la presencia de signos y sntomas clnicos (fiebre, dolor abdominal, manifestacin de nauseas y vmitos) y el tipo de diarrea (acuosa, mucosa o sanguinolenta) pueden orientar acerca del microorganismo implicado. No obstante, el diagnstico etiolgico definitivo se debe obtener mediante pruebas de laboratorio. Los agentes etiolgicos ms frecuentes en nuestro medio son Salmonella spp Campylobacter spp Shigella spp Yersinia spp. Aeromonas spp. Rotavirus y adenovirus
Otros agentes etiolgicos que pueden identificarse asociados a determinadas situaciones clnicas y/o epidemiolgicas son: Clostridium difficile Vibrio spp. Escherichia coli enterohemorrgico (O157: H7)
CULTIVO DE BACTERIAS: HECES

Obtencin de la muestra 1. Material necesario Recipiente de boca ancha para recoger las heces (tipo orinal o similar). No es necesario que est estril, slo es preciso que est limpio. Recipiente estril de boca ancha y cierre hermtico para enviar la muestra, si es posible con cucharilla o, facultativamente, a criterio del laboratorio, escobilln con medio de transporte de Cary Blair.
2. Tcnica Si son formadas o pastosas, se seleccionan zonas donde haya sangre, moco o pus.
El volumen mnimo es de 1-2 g de heces formadas o pastosas y de 5-10 ml de heces lquidas.
Conservacin y transporte Si el procesamiento se retrasa ms de dos horas, se debe mantener en refrigeracin a 4C para evitar el sobrecrecimiento de la flora normal que puede enmascarar o destruir a los enteropatgenos. Sin embargo, el fro puede afectar la viabilidad de Shigella spp, por lo que en caso de sospecha clnica de infeccin por este patgeno, la muestra debe procesarse lo ms pronto posible y debe mantenerse a temperatura ambiente.
Observaciones Las muestras para coprocultivo, debern tomarse antes de la administracin de antimicrobianos o agentes antidiarricos. Indicar siempre el juicio diagnstico de presuncin y la edad del paciente. Solicitar las investigaciones especiales explcitamente (C. difficile, Vibrio spp. E. coli enterohemorrgico (O157: H7), etc.), acompaada de datos clnicos y epidemiolgicos. Si con la primera muestra no se detecta la presencia de enteropatgenos, es necesario enviar en los das siguientes, dos muestras adicionales.
CULTIVO DE BACTERIAS: HISOPOS RECTALES

Obtencin de la muestra 1. Material necesario Hisopos rectales con medio de transporte. Guantes.
2. Tcnica En general debe desaconsejarse su uso, aunque hay que recurrir a l si no se puede disponer de heces, como en neonatos o adultos debilitados. Se ha demostrado eficaz en el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae, Campylobacter spp., Shigella spp. y en portadores anales de Streptococcus agalactiae. No es vlido para la bsqueda de antgenos. Para realizar la toma se introduce el hisopo sobrepasando un poco el esfnter anal y se rota para hacer la toma de las criptas anales, dejar 10 a 30 segundos para que se absorban los microorganismos y retirar. Una vez realizado se introduce en un medio de transporte.
Conservacin y transporte Se introducen inmediatamente en medio de transporte adecuado, pues as se protege a las bacterias de la desecacin.
Se enva rpidamente al laboratorio.
Observaciones Son vlidas las referentes a las heces. Son muestras inadecuadas los hisopos rectales secos, sin medio de transporte
ESTUDIO VIROLGICO: HECES

Obtencin de la muestra 1. Material necesario. Recipiente estril de boca ancha y cierre hermtico para enviar la muestra, si es posible con cucharilla
2. Tcnica Se seguir el mismo procedimiento que para cultivo bacteriolgico.
3. Volumen mnimo. Si las heces son formadas o pastosas, para cultivo de virus se aconseja un mnimo de 3 a 6 gr de heces. Si las heces son lquidas: 5-10ml.
Conservacin y transporte Es preferible enviar las muestras para estudio virolgico sin medio de cultivo, pues ste diluye la partculas virales disminuyendo la sensibilidad. Si el envo se retrasa mucho, es necesario utilizar un medio de transporte para virus. Se enviarn en recipientes colocados en hielo.
CRITERIOS DE RECHAZO DE MUESTRAS

Muestras no identificadas correctamente Heces transportadas inadecuadamente Heces contaminadas con orina o agua Heces recogidas con papel higinico, ya que contiene sales de bario que inhiben el crecimiento de enteropatgenos Heces que no han sido refrigeradas despus de 2 horas post-emisin Varios coprocultivos del mismo da Torundas secas o sin medio de transporte
PARSITOS INTESTINALES
ESTUDIO PARASITOLGICO: HECES

Obtencin de la muestra 1. Material necesario Recipiente (orinal o similar) lo ms amplio posible. Recipiente estril de boca ancha, a ser posible con cucharilla, con o sin conservante.
2. Tcnica En los tres das previos al estudio parasitolgico, el enfermo seguir una dieta en la que no podr tomar: medicamentos, papilla de bario, patatas, verduras, legumbres y frutas, pan tostado, pastas, arroz, huevos, hgado y sesos. En algunos casos es preferible y necesario administrar un purgante, con el fin de aumentar la posibilidad del hallazgo de parsitos. Ser un purgante salino, como sulfato de sodio o fosfato y carbonato de sodio; no deben usarse aceites minerales o compuestos de bismuto o magnesio, ya que las gotas o cristales procedentes de ellos pueden enmascarar los parsitos o confundirse con trofozotos. Con una cucharilla se recoger una pequea cantidad de heces recin emitidas y se enviarn en un recipiente estril con tapa de rosca. Cuando macroscpicamente se hayan visto formas compatibles con parsitos en el ano o en las heces, se recogern en el recipiente y se aadir una pequea cantidad de suero fisiolgico.
3. Volumen mnimo Es suficiente un volumen de 2-4 g. de heces. Un estudio parasitolgico completo debe constar de tres muestras recogidas en das sucesivos, ya que la eliminacin de parsitos puede ser intermitente.
Conservacin y transporte Las muestras lquidas deben ser procesadas inmediatamente, puesto que los trofozoitos de algunos parsitos se deterioran rpidamente. Esto es fundamental en el diagnstico de las diarreas por Entamoeba histolytica ya que es imprescindible procesar las muestras en menos de 30 minutos. La muestra no lquida pueden mantenerse a temperatura ambiente o a +4C. Si se observan parsitos de forma macroscpica (gusanos adultos o anillos de tenias), deben enviarse al laboratorio a temperatura ambiente en solucin fisiolgica.
ESTUDIO PARASITOLGICO: ASPIRADO DUODENAL

Ser la muestra adecuada para la bsqueda de Giardia intestinalis, Strongyloides stercolaris, y Ascaris lumbricoides cuando los exmenes de heces hayan sido repetidamente negativos. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Recipientes estriles de boca ancha, tubo de tapn de rosca, tubo de vaco. Medio de transporte para parsitos. Solucin salina.
2. Tcnica Introducir el tubo a travs de la boca hasta alcanzar el duodeno y aspirar. Para la bsqueda de G. intestinalis es necesario llegar a la tercera porcin del duodeno. Como mtodo alternativo, existe la posibilidad de la cpsula duodenal (entero-test).
3. Volumen mnimo De 0,5 a 3 ml de aspirado duodenal.
Conservacin y transporte En un recipiente estril de boca ancha, tubo de vaco o tubo de tapn de rosca, si se enva y procesa rpidamente. Fijado en PVA o formalina al 5% si hay demora en el transporte o procesamiento. Mantener las muestras a temperatura ambiente.
ESTUDIO PARASITOLGICO: INVESTIGACIN DE OXIUROS (PRUEBA DE GRAHAM)

En la parasitacin por Enterobius vermicularis. no se buscarn los huevos en las heces sino en los mrgenes del ano, que es donde la hembra va a depositarlos Obtencin de la muestra Se utiliza un pedazo de celofn transparente. Por la maana, antes de levantarse el paciente, se separan las nalgas y se hace presin hacia ambos mrgenes, para que en la cara engomada queden adheridos los huevos. La cinta adhesiva se coloca sobre un portaobjetos con la cara engomada hacia el cristal, y se enva al laboratorio en un sobre o envuelto en varias capas de papel (Figura 1).
Conservacin y transporte Mantener a temperatura ambiente hasta su envo al laboratorio de Microbiologa
CRITERIOS DE RECHAZO DE LAS MUESTRAS

Figura 1: Tcnica de Graham Muestras no identificadas correctamente Heces transportadas inadecuadamente Heces contaminadas con orina o agua Ms de una muestra tomada el mismo da Torundas
TRACTO GENITAL FEMENINO
INTRODUCCIN
Las muestras genitales se obtienen de zonas altamente colonizadas por flora comensal por lo que la seleccin de las muestras y los mtodos de obtencin son crticos . El estudio de anaerobios debe limitarse a ciertas muestras, las muestras habituales (exudados vaginales, cervicales etc.) no son validas. Tipo de muestras: Exudados vaginales, Exudados cervicales, Exudados uretrales, Exudados rectales, Endometrio.
EXUDADOS VAGINALES
Muchos de los agentes productores de infecciones genitales (vaginitis, cervicitis, uretritis.) en la mujer tienen un rea especifica donde la rentabilidad diagnstica es mayor. Las muestras para investigacin de Virus herpes simple (VHS) y Papilomavirus (VPH) necesitan de protocolos y material especifico. Los principales microorganismos productores de infecciones vaginales en la mujer son los siguientes Vagintis: Frecuentes Cndida spp Trichomonas vaginalis Infec. polimicrobianas (Vaginosis bacteriana) Gardnerella vaginalis Virus herpes simple (VHS) Papilomavirus (VPH) Raros
Obtencin de la muestra 1. Material necesario Camilla ginecolgica. Espculo estril Torundas de alginato clcico o Dracon, con medio de transporte
2. Tcnica Explicar a la paciente la exploracin a realizar Colocar a la paciente en posicin ginecolgica e introducir un espculo "sin lubricante" (utilizar agua templada si es necesario). Recoger la muestra, bajo visin directa, con una torunda, hacindola rotar durante unos segundos sobre la zona con mayor exudado, o en su defecto, del fondo del saco vaginal posterior. Repetir la operacin con la segunda torunda.
3. Nmero de muestras Se obtendrn al menos dos torundas, una destinada al estudio microscpico y el resto para los cultivos. Para cultivo de micoplasma/ureaplasma y/o clamidias obtener muestras complementarias con las torundas apropiadas.
Conservacin y transporte El envo de la muestra debe ser inmediato, siempre que sea posible. Cuando la muestra NO pueda procesarse antes de 15 minutos, debern emplearse torundas con medio de transporte tipo Stuart-Amies, que se mantendrn a temperatura ambiente, o preferentemente, en estufa 35-37C hasta su procesamiento. En todo caso la siembra se realizar antes de 3-6 horas.
Criterios de rechazo No son validos las torundas secas sin medios de transporte. Muestras de ms de 1 horas a partir de la hora de obtencin sin medio de transporte adecuado.
Observaciones Los exudados vaginales no son muestras adecuada para la investigacin de Neisseria gonorrhoeae. Si se sospecha infeccin por Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum, las muestras mas adecuadas son el exudado endocervical.
Si se sospecha una vaginosis bacteriana es imprescindible realizar en el momento de la misma, la determinacin de pH vaginal, la produccin de aminas voltiles por la adicin de KOH al 10% y observar caractersticas del flujo, todos estos datos consignarn en el volante. La investigacin de Streptococcus agalactiae o Listeria monocytogenes slo se realizara con peticin especifica y motivada No deben utilizarse en los das previos a la recogida de la muestra, soluciones antispticas vaginales, vulos ni pomadas.
EXUDADOS CERVICALES
Los exudados cervicales son las muestras ms adecuadas cuando se sospecha infeccin por N. gonorrhoeae y C. trachomatis. Los principales microorganismos productores de infecciones cervicales (cervicitis) en la mujer son los siguientes: Frecuentes C. trachomatis N. gonorrhoreae Menos frecuentes Virus herpes simple (VHS) Papilomavirus (VPH) Raros T. vaginalis C. albicans U. urealyticum
Obtencin de la muestra 1. Material necesario Camilla ginecolgica. Espculo estril. Torundas secas sin medio de transporte (para limpieza de exocrvix). Torundas de alginato clcico o Dracon con medio de transporte tipo StuartAmies. Torundas con medios de transporte especficos para micoplasmas y clamidias (consultar con el Laboratorio de Microbiologa).
2. Tcnica. Con la paciente en posicin ginecolgica se introduce suavemente el espculo sin lubricar (o lubricado con agua templada). Limpiar el exocrvix de secreciones vaginales, con una torunda seca. Comprimir cuidadosamente el crvix con las palas del espculo e introducir una torunda en el canal endocervical con un suave movimiento de rotacin. Se repetir la operacin con las diferentes torundas.
3. Nmero de muestras y volumen Debern recogerse dos torundas, una destinada al examen microscpico y otra al cultivo. Para investigacin de Mycoplasma y Chlamydia se recoger con las torundas correspondientes, con medio de transporte especfico.
4. Etiquetado Incluir en la etiqueta el tipo de muestra y los datos del paciente Indicar el diagnostico de sospecha
Conservacin y transporte El envo de la muestra debe ser inmediato, siempre que sea posible. Cuando la muestra NO pueda procesarse antes de 15 minutos, debern emplearse torundas con medio de transporte tipo Stuart-Amies, que se mantendrn a temperatura ambiente, o preferentemente, en estufa 35-37C hasta su procesamiento. En todo caso la siembra se realizar antes de 3-6 horas. No puede garantizarse la viabilidad de Neisseria gonorrhoeae transcurridas 6-8 horas.
Criterios de rechazo No son validas las torundas secas sin medios de transporte Demora de ms de 1 hora a partir de la hora de obtencin de la muestra sin medio de transporte adecuado.
Observaciones Debe evitarse el uso de torundas de algodn ya que contienen cidos grasos instaurados que pueden inhibir el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae.
TRACTO GENITAL MASCULINO
EXUDADOS URETRALES
Las muestras genitales se obtienen de zonas altamente colonizada por flora comensal por lo que la seleccin de las muestras y los mtodos de obtencin son crticos. La supuracin espontnea no es una muestra valida por el alto numero de comensales y las dificultades de la interpretacin de los cultivos. Los agentes productores de infecciones genitales en el hombre tienen un rea especifica (2-3 cm en el interior de la uretra) donde la rentabilidad es mayor. Los principales microorganismos productores de uretritis son los siguientes: Frecuentes N. gonorrhoreae C. trachomatis Menos frecuentes U. urealyticum Bacilos gramnegativos Raros T. vaginalis M. genitalium
Obtencin de la muestra 1. Material necesario Torunda uretrales finas, de alginato clcico o Dracon con medios de transporte tipo Stuart-Amies. Gasas estriles. Asa de siembra de platino. Torunda y medio de transporte especial para C. trachomatis (consultar con el Laboratorio de Microbiologa)
2. Tcnica Cuando exista exudado franco puede recogerse con una torunda o con un asa de siembra de platino/ iridio. El exudado puede estimularse exprimiendo la uretra. Cuando no se obtenga exudado se introducir una torunda suavemente con un movimiento de rotacin hasta penetrar unos 2 cm. dentro de la uretra (3-5 cm para investigacin de C. Trachomatis torunda especial). Repetir la operacin con una segunda y una tercera torunda.
3. Nmero de muestras Debern enviarse tres torundas, una destinada al examen microscpico otra para cultivo y otras para la investigacin de clamidia/micoplasma.
Conservacin y transporte No refrigerar las muestras, especialmente si se sospecha N.gonorrhoeae. El transporte debe ser inmediato.
Cuando no puedan procesarse las muestras antes de 15 minutos, se utilizarn torundas con medio de transporte Stuart-Amies que se mantendrn a temperatura ambiente o preferentemente en estufa a 35-37C. Las muestras se procesarn siempre que se pueda antes de 3 horas, y como mximo en un plazo de 6-12 horas.
Criterios de rechazo No son validos las torundas secas sin medios de transporte Muestras de ms de 1 hora a partir de la hora de obtencin sin medio de transporte adecuado
Observaciones La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera miccin de la maana. Si es imposible, esperar al menos una hora tras la ltima miccin para recogerla.
MUESTRAS PARA EL DIAGNSTICO DE PROSTATITIS CRONICA(TCNICA DE MEARESSTAMEY)

La obtencin de muestras de secreciones prostticas obtenidas tras masaje esta indicado en el diagnostico de las prostatitis crnicas y se deben acompaar de muestras de orina pre- y postmasaje. El masaje prosttico est contraindicado el los casos de prostatitis aguda. Los principales microorganismos productores de prostatitis son los siguientes: Frecuentes E. coli Otras enterobacterias Menos frecuentes Enterococcus spp. S. aureus Raros N. gonorrhoreae; H. influenzae M. tuberculosis; C. trachomatis U. urealyticum; T. vaginalis
Obtencin de la muestra 1. Material necesario Se preparar el mismo material que para un urocultivo y cuatro contenedores estriles que debern ir identificados de la siguiente forma: "F-1" o "Frasco-1" (primera orina). "F-2" o "Frasco-2" (miccin media premasaje). "F-3" o "Frasco-3" (masaje prosttico). "F-4" o "Frasco-4" (orina post-masaje).
2. Tcnica Retraer el prepucio y limpiar el meato y el glande igual que para un urocultivo.
Pedir al paciente que orine, recogiendo los primeros 10 ml. en el primer contenedor "F-1". Recoger los siguientes 10 ml. en el segundo contenedor "F-2". Esta porcin corresponde a la "miccin media". Interrumpir la miccin antes de que se haya vaciado totalmente la vejiga Hacer un masaje prosttico y recoger el fluido en el tercer contenedor ("F-3" masaje prosttico). Si no se produce fluido, presionar la uretra en su totalidad 30 segundos. Tras el masaje, acabar saliendo fluido prosttico por el meato. Finalmente se pedir al paciente que orine y se recogern los 10 ml. primeros de orina en un cuarto recipiente ("F-4" orina postmasaje).
3. Nmero de muestras y volumen mnimo Frasco 1: 10 ml. Frasco 2: l0 ml. Frasco 3: Toda la muestra que se obtenga. Frasco 4: 10 ml. Incluir en cada uno de los frascos etiquetas con informacin del paciente y el nmero de frasco.
Conservacin y transporte Las muestras debern procesarse antes de 1 hora. Para perodos ms prolongados se debern mantener en nevera a 4C hasta un mximo de 24 horas.
Criterios de rechazo Las muestras de semen no son adecuadas para cultivo, al estar sistemticamente contaminadas, y los resultados obtenidos no son representativos de los microorganismos aislados en prstata.
Observaciones Se realizarn cultivos cuantitativos. Cuando el nmero de bacterias del frasco-1 es mayor que el del frasco-2 y frasco-4, se considera que las bacterias son de origen uretral. Cuando el nmero de bacterias de los frascos 3 y 4 es, por lo menos, 10 veces superior al de los frascos 1 y 2, se atribuye a colonizacin prosttica.
HEMOCULTIVOS
HEMOCULTIVOS
Introduccin La sangre de los individuos sanos es estril. En el caso de infecciones graves o en complicaciones de una infeccin primaria puede haber una afluencia de bacterias al torrente sanguneo. Esta afluencia puede ser eliminada en un periodo de tiempo corto, minutos u horas, o bien persistir cuando existe una infeccin masiva o est presente un foco intravascular infectado. BACTERIEMIA o FUNGEMIA son los trminos empleados para designar la presencia de bacterias u hongos en el torrente sanguneo. La entrada de grmenes en el torrente sanguneo se produce desde: Un foco primario, va linftica (abscesos, colangitis, neumona, etc.) Infecciones intravasculares- (endocarditis) Infecciones por manipulaciones mdicas (catteres, agujas, prtesis, etc.)
Siempre que exista una sospecha de bacteriemia, debe realizarse un cultivo de sangre ya que es la nica forma de establecer el diagnstico etiolgico y permite un tratamiento ms eficaz. Las principales indicaciones para realizar un hemocultivo son: Fiebre alta, aunque en ancianos y nios puede existir una bacteriemia con hipotermia y deterioro general. Shock no explicado. Infecciones localizadas (neumonas, pielonefritis, meningitis). Leucopenia, leucocitosis o trombopenia no hematolgica. Microorganismos mas frecuentes: Se puede encontrar cualquier tipo de microorganismo patgeno. Microorganismos habituales de piel como estafilococos coagulasa negativos, corynebacterias, estreptococos alfa hemolticos, etc. aislados en un solo frasco seriado pueden ser considerados como probable contaminacin durante la extraccin o la manipulacin del hemocultivo. Solamente en el caso de ser aislados en ms de un frasco y en pacientes inmunodeprimidos, portadores de catteres, prtesis, hemodializados, etc. se podrn valorar como infeccin dependiendo del historial clnico del paciente.
Obtencin de la muestra 1. Situaciones a tener en cuenta Efectuar siempre la extraccin antes de iniciar la terapia antibitica; en pacientes en los que ya se haya iniciado el tratamiento antibitico y en los que no se considere conveniente retirarlo, deber realizarse la extraccin justo antes de la administracin de una dosis.
En bacteriemias intermitentes debe realizarse cuando el paciente tiene escalofrios o durante el pico febril. En bacteriemias continuas de origen intravascular, en cualquier momento. En sepsis agudas y en pacientes en situacin crtica se considerar como un procedimiento de urgencia.
2. Material necesario Frascos de hemocultivo . Garrote de goma. Jeringas y agujas de puncin IV o sistema de vacio. Gasas estriles. Guantes estriles. Alcohol etlico o isoproplico al 70% Solucin yodada.
3. Tcnica de obtencin Explicar al paciente el procedimiento bsico de la extraccin. Lavado de manos y utilizacin de guantes estriles Retirar los tapones externos de los frascos Desinfectar los tapones de goma con alcohol iodado o con iodforo, dejar secar al menos un minuto. Localizar por palpacin la vena que se va a puncionar. Debe de utilizarse una vena distinta para cada extraccin. Desinfectar con alcohol la zona de unos 10 cm de dimetro, repetir el paso anterior con alcohol iodado, dejar secar durante un minuto. Extraer la sangre sin tocar el campo desinfectado, si fuese necesario palpar la vena, deber desinfectarse la zona nuevamente y los dedos. Introducir la sangre en los frascos evitando que entre aire en el frasco anaerobio, mover los frascos para que la sangre se mezcle con el medio de cultivo.
4. Numero de muestras y volumen mnimo Siempre se deben realizar un mnimo de 2 extracciones y es preferible realizar 3, con un intervalo de una hora, si existe gran urgencia de iniciar el tratamiento puede acortarse hasta 15 a 30 minutos entre ellas. En adultos cada extraccin debe de llevar dos frascos, aerobio (frasco de tapn azul) y anaerobio (frasco de tapn rojo). En nios pequeos en que no se pueden obtener volmenes grandes de sangre es suficiente una cantidad de 1-5 ml que se introduce en un solo frasco aerobio. En caso de sepsis o endocarditis subagudas las extracciones se reparten en 24 horas y si al da siguiente son negativos, se realizan tres nuevos hemocultivos. La cantidad de sangre a introducir en cada frasco es de 5-10 ml en adultos por frasco y 1-5 ml en los nios.
Como norma general es adecuado que la sangre mantenga una proporcin 1/10 con el medio de cultivo. Es decir si el frasco tiene 80 ml de medio de cultivo, como es nuestro caso, introducir 8 ml de sangre. En neonatos o lactantes, de 0,5 a 1ml en frasco aerobio.
5. Etiquetado Los frascos de hemocultivo deben de ir etiquetados de forma correcta, si se remiten todas las extracciones al mismo tiempo al laboratorio debe indicarse si es 1, 2 3 extraccin en cada frasco.
Conservacin y transporte El transporte debe de ser inmediato o en el menor tiempo posible. Cuando lleguen al Laboratorio de Microbiologa, mantener a temperatura ambiente. NUNCA DEBEN DE REFRIGERARSE.
Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.
Observaciones Se deber incluir en la peticin la mxima informacin clnica. En el caso de sospecha de determinados organismos (Brucella spp, Neisseria meningtidis, hongos, micobacterias, etc.), indicadlo en el volante para que el laboratorio de Microbiologa aplique las tcnicas necesarias. Cuando no haya venas accesibles puede realizarse la extraccin de sangre arterial. No son adecuadas las muestras procedentes de catter, solamente en el caso de que se sospeche infeccin del propio catter, se recomienda tomas del brazo opuesto y del brazo del catter, para saber si es intra o extraluminal.
CATTERES
CATTERES INTRAVASCULARES
Introduccin Un 80% de las bacteriemias nosocomiales se relacionan con la presencia de catteres. Su estudio bacteriolgico permitira filiar el origen de gran parte de las bacteriemias. Microorganismos mas frecuentes: Los microorganismos ms frecuentes causantes de la colonizacin e infeccin del catter son: S. epidermidis, S. aureus, Candida spp, enterobacterias y Acinetobacter spp. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Guantes de goma estriles Gasas estriles Pinzas y tijeras estriles Recipiente estril con tapa de rosca Alcohol etlico o isoproplico al 70% Alcohol iodado al 2% o un iodforo al 10%
2. Tcnica Lavado de manos y utilizacin de guantes estriles. Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 10 cm correspondiente a la zona de entrada del catter. Hacerlo de forma circular comenzando por el centro. Repetir la misma operacin, pero con el alcohol iodado o iodforo, dejando que se seque un minuto. Retirar el catter con la mxima asepsia, una vez extrado, con la ayuda de las pinzas y las tijeras estriles cortar 3-4 cm de la porcin intravascular e introducirlo en el recipiente estril.
Conservacin y transporte La muestra deber enviarse al laboratorio en un periodo inferior a 30 minutos. Cuando esto no sea posible conservar en nevera a 4C.
OTROS CATTERES Y DRENAJES

Son muestras que no se procesan habitualmente. En casos especiales, se recomienda contactar con el servicio de Microbiologa, antes de remitirlas.
SISTEMA OCULAR
EXUDADOS CONJUNTIVALES
Introduccin Las muestras conjuntivales estn indicadas para filiar la etiologa de las conjuntivitis infecciosas en las que mayoritariamente se observan signos inflamatorios a este nivel. La etiologa ms habitual es bacteriana o vrica. Los cultivos conjuntivales preoperatorios no estn indicados porque el nmero y microorganismos de la conjuntiva normal varan diariamente. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Torundas de alginato clcico o Dacron con medio de transporte Stuart-Amies. Suero salino estril. Medio de transporte para Chlamydia y virus, si procede (consultar con el laboratorio de Microbiologa).
2. Tcnica Debe obtenerse la muestra antes de la instilacin de los analgsicos locales, colirios o antibiticos. Con una torunda mojada en un suero fisiolgico frotar sobre la conjuntiva tarsal inferior y el frnix. Para la investigacin de Chlamydia trachomatis, everter el prpado y frotar con una torunda especial la superficie conjuntival.
3. Nmero de muestras Deber utilizarse una torunda para cada ojo. Conservacin y transporte El transporte deber ser inmediato. Cuando no sea posible, se utilizaran hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies, que se mantendr a temperatura ambiente. Para Chlamydia o virus se utilizar medio de transporte especfico.
Conservacin y Transporte Es especialmente importante remitir la muestra inmediatamente al Laboratorio de microbiologa. Si hay demora, mantenerla en estufa 35-37C.
RASPADOS CORNEALES.
Introduccin Los raspados conrneales estn indicados en las queratitis y lceras corneales. Su toma la debe realizar el especialista de oftalmologa. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Esptula de platino flexible de Kimura. Anestsico local (clorhidrato de propacana al 0,5%). Portas limpios con crculos marcados. Vaso de Koplin con metanol al 95% o fijacin por calor. Medios de transporte y/o cultivo especfico
2. Tcnica Instilar uno o dos gotas de anestsico. Preferentemente se utilizar clorhidrato de propacana, ya que es el anestsico local que inhibe menos el crecimiento bacteriano. Raspar suavemente con la esptula de Kimura la conjuntiva tarsal inferior, sin inducir el sangrado. Realizar el raspado de mltiples reas de ulceracin. Es importante que cada raspado se inocule directamente en el medio de cultivo, por lo que se avisar previamente al Servicio de Microbiologa Clnica que desplazar al personal y/o material necesario para ello.
Conservacin y transporte Los medios de cultivo inoculados sern transportados inmediatamente al laboratorio de microbiologa.
LENTES DE CONTACTO - LENTE INTRAOCULAR

Introduccin Ante la sospecha de infeccin ocular producida por una lente de contacto se remitir la lente completa y se complementar con un raspado corneal de la lcera.
Obtencin de muestras 1. Material necesario Tubo o tarro estril.
2. Tcnica Remitir la lente y/o cuerpo extrao. Las soluciones de las lentes de contacto se debe enviar en la mayor cantidad posible. Si la lente de contacto ha provocado una lcera, la realizacin de raspado corneal con esptula estril es indispensable. La muestra se debe tomar del lecho y borde de la lcera previa limpieza de la lesin.
Conservacin y transporte Enviar inmediatamente al Laboratorio de Microbiologa. Mientras tanto mantener placas y tubos inoculados en estufa 35-37C.
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
ODO EXTERNO: EXUDADO TICO

Introduccin Los exudados ticos estn indicados en las otitis externas. Los principales agentes causales son bacterias y hongos. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Torundas de algodn o esptulas. Un antisptico suave (ej. Cloruro de Benzalconio al 1/100)
2. Tcnica Limpieza del odo externo con un antisptico suave. Se tomar la muestra mediante frotis con torunda, raspado o aspiracin del fluido en caso de abscesos. Se obtendr la muestra del borde activo y el exudado o las secreciones de las zonas profundas.
3. Nmero de muestras Una torunda para cada odo.
Conservacin y transporte Si las muestras no pueden enviarse inmediatamente se emplearn medios de transporte para bacterias tipo Stuart-Amies, que se mantendrn a temperatura ambiente. Criterios de rechazo No se aceptarn estas muestras para el diagnstico de la otitis media. Suele tratarse de muestras de mala calidad y en ningn caso resultan representativas de los microorganismos existentes en odo medio. Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.
ODO MEDIO: EXUDADO TICO

Introduccin La muestra ms adecuada es el aspirado del odo medio, obtenida por timpanocentesis. No conviene usar escobilln, pues habitualmente se contamina con la flora normal del odo externo, haciendo la interpretacin de resultados difcil y confusa.
Obtencin de la muestra 1. Material necesario El de una miringocentesis (Timpanocentesis). Torundas estriles. Contenedor estril. Medio de transporte para anaerobios. Povidona iodada al 10%.
2. Tcnica a) Timpanocentesis: Debe obtener la muestra un especialista en O.R.L. o personal entrenado para ello. Se limpiar el canal auditivo externo con una torunda impregnada en Povidona iodada. Se puncionar el tmpano a travs de un otoscopio estril. La muestra se enviar en un contenedor estril. Cuando sea escasa se tomar con torunda, aunque no es lo ms recomendable. Si se desea la investigacin de anaerobios, se enviar el fluido en un medio de transporte especfico. Las muestras en torunda no sirven para cultivo de anaerobios. b) Muestras con tmpano roto: Tras la limpieza del canal externo se tomar la muestra con torunda a travs de un otoscopio estril. Estas muestras no son vlidas para anaerobios. El fluido suele colonizarse con flora de CAE, con lo que la interpretacin de los resultados es siempre complicada.
3. Nmero de muestras y volumen mnimo Se intentar obtener la mayor cantidad de exudado posible.
Conservacin y transporte El transporte deber ser inmediato. Cuando exista demora se utilizar un medio de transporte.
EXUDADO FARINGO-AMIGDALINO
Introduccin Es la muestra adecuada en caso de faringo-amigdalitis. Se investigar sobre todo la presencia de estreptococos hemolticos. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Depresor lingual. Torunda de algodn con medio de transporte
2. Tcnica Con la ayuda de un depresor lingual, bajo visin directa, se tocar con la torunda en todas las partes con exudado, membranas o inflamacin. Se deben frotar las criptas tonsilares y la faringe posterior. No tocar nunca la mucosa oral, lengua o vula.
3. Nmero de muestras Slo una torunda.
Conservacin y transporte No requiere medidas especiales para su transporte y conservacin ( temperatura ambiente ).
Observaciones Se investigar rutinariamente la presencia de S. pyogenes. En las sospechas de difteria debern mandarse porciones de membrana, una torunda farngea, y una torunda nasofarngea por va pernasal.
EXUDADOS NASOFARINGEOS
Introduccin Es la muestra indicada para la investigacin de Bordetella pertussis, Mycoplasma pneumoniae, Corynebacterium diphteriae y virus respiratorios o para la deteccin de portadores de Staphylococcus aureus o Neisseria meningitidis. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Torundas flexibles de alginato clcico.
Para aspirados: Tubo aspirador de Tefln o jeringa y catter.
2. Tcnica Frotis: pasar la torunda a travs de la nariz suavemente, hasta llegar a la nasofaringe. Hay que mantener la torunda cerca del septum y suelo de la fosa. Rotar la torunda y extraerla. Aspirado: Aspirar el moco, pasando el tubo de tefln o un catter conectado a una jeringa por va pernasal, de igual forma que la torunda.
3. Nmero de muestras Se obtendr una muestra.
Conservacin y transporte Remitir lo antes posible al laboratorio de Microbiologa. Las muestras deben procesarse antes de 2 horas, conservar a t ambiente.
Observaciones Los microorganismos encontrados en fosa nasal no tienen por que ser los mismos que se aslan en el seno en caso de sinusitis, por lo que los cultivos de exudados nasales no sirven para el diagnstico etiolgicos de las sinusitis y no pueden sustituir nunca a la puncin del seno.
EXUDADOS DE SENOS PARANASALES

Introduccin La muestra se obtendr por puncin-aspiracin, y la realizar el especialista en O.R.L. o personal especializado en dicha tcnica. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Povidona iodada al 10%. Contenedor estril. Medio de transporte para anaerobios. Material quirrgico de O.R.L.
2. Tcnica Desinfectar el lugar de la puncin con povidona iodada. Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior, o en el seno frontal por debajo del marco supraorbital del ojo. Aspirar el lquido del seno. Cuando no se obtenga lquido, instilar 1 ml. de suero salino estril y aspirarlo nuevamente. Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en un contenedor estril o en la propia jeringa.
3. Nmero de muestras y volumen mnimo Se intentar obtener al menos 1 ml. de muestra.
Conservacin y transporte Enviar inmediatamente al laboratorio o utilizar un medio de transporte.
EXUDADOS DE CAVIDAD ORAL

Introduccin Esta muestra se emplea habitualmente para el diagnstico de candidiasis y de la "Angina de Vincent". Obtencin de la muestra 1. Material necesario Torundas de algodn sin medio de transporte. Portas limpios.
2. Tcnica Se pedir al paciente que se enjuague la boca con agua. Tras enjuagar la boca, frotar o raspar las lesiones con una esptula o con una torunda y hacer una extensin sobre un porta.
3. Nmero de muestras 1 extensin en porta + 1 torunda. Se repetir la toma con una segunda torunda para cultivo (slo para la investigacin de Candida albicans).
Conservacin y transporte No requiere medidas especiales para su transporte y conservacin.
TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR
INTRODUCCIN
Una muestra de esputo bien recogida puede ser muy til para establecer el diagnstico etiolgico de una infeccin del tracto respiratorio inferior (neumona, bronquitis, tuberculosis pulmonar, etc.). En ocasiones el paciente no consigue expectorar, por lo que puede ser necesario inducir el esputo mediante nebulizadores o realizar un estudio broncoscpico para obtener secreciones del tracto respiratorio inferior. Es importante una cuidadosa recoleccin de las muestras, ya que es muy fcil la contaminacin con flora orofarngea, lo que hara que los resultados sean clnicamente irrelevantes. La calidad de las muestras se debe establecer por examen microscpico directo. Una muestra recogida de forma adecuada contiene un mnimo de clulas epiteliales escamosas y un nmero significativo de leucocitos polimorfonucleares. Indicaciones: Se debe solicitar estudio microbiolgico de esputo en pacientes con sospecha de bronquitis o neumona bacteriana. Cuando el diagnstico clnico y/o radiolgico sea de neumona atpica, o las circunstancias epidemiolgicas hagan probable un determinado patgeno, este hecho debe ser expresado en el volante de peticin. Ello permite incluir tcnicas para la bsqueda de Legionella spp, (que requiere medios de cultivo selectivos) o los distintos virus respiratorios. El estudio microbiolgico del esputo est tambin indicado ante toda sospecha de tuberculosis pulmonar. Las muestras broncoscpicas deben ser obtenidas de pacientes graves que no expectoran o cuando los resultados del esputo no son significativos o de fcil interpretacin. En cualquier caso, la indicacin de la broncoscopia debe establecerla siempre el especialista.
ESPUTO
Si el esputo contiene gran proporcin de saliva, no constituye una muestra representativa de la situacin existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con secreciones procedentes de todo el tracto traqueo-bronquial y con la flora saprofita de la orofaringe. La presencia en la muestra de gran nmero de clulas epiteliales indica contaminacin con flora orofarngea, por lo que estas muestras no deben ser cultivadas, excepto para cultivo de Legionella spp. Por lo tanto: Se debe instruir correctamente al paciente para reducir el nmero de muestras inadecuadas. La muestra mejor es la obtenida de la primera expectoracin de la maana.
Todos las muestras del tracto respiratorio inferior deben manejarse con las precauciones necesarias para trabajar con Mycobacterium tuberculosis. Las muestras de esputo no son tiles para el cultivo de anaerobios. Una muestra nica, recogida adecuadamente, suele ser suficiente para el diagnstico de infeccin bacteriana del tracto respiratorio inferior. Para el estudio de micobacterias (diagnstico de tuberculosis) es conveniente obtener 2 3 de muestras de das diferentes. Si el paciente no est ingresado, puede mantener las muestras en la nevera hasta obtenerlas todas, y llevarlas a la vez al laboratorio.
Obtencin de la muestra 1. Material necesario Frasco estril de boca ancha y tapn de rosca. Suero fisiolgico estril y nebulizador (slo para esputo inducido).
2. Tcnica Instruir al paciente sobre la diferencia entre expectoracin (esputo) y saliva. Hacer que el paciente se enjuague la boca con agua. Para pacientes con dentaduras postizas, stas deben ser quitadas primero. Explicar al paciente que debe obtener un esputo tras una expectoracin profunda, preferentemente la primera de la maana. Recoger el esputo directamente en el contenedor (frasco estril), y tapar bien con el tapn de rosca. Si el paciente no consigue expectorar espontneamente puede inducirse el esputo con nebulizaciones de suero fisiolgico estril (15 ml en 10 minutos), (esputo inducido), siendo til adems realizar un drenaje postural o fisioterapia respiratoria. Rotular el frasco con los datos del paciente.
Conservacin y transporte Transportar la muestra rpidamente al laboratorio de microbiologa. Si el transporte no puede hacerse de forma inmediata (retraso de ms de 2 horas) la muestra debe mantenerse refrigerada (nunca congelada!).
Criterios de rechazo. Muestra no identificada o incorrectamente rotulada (los datos de la muestra no son coincidentes con los del volante de peticin). Muestra conservada de modo inapropiado o excesivo tiempo en el transporte. Contenedor inapropiado, contenedor roto, mal cerrado o con signos de contaminacin externa (muestra derramada). Muestras duplicadas (excepto para estudio de micobacterias).
BRONCOASPIRADO
Su obtencin es a travs de un broncoscopio, por lo que es una muestra ms representativa que el esputo del tracto respiratorio inferior. El rea afectada del pulmn puede ser directamente accesible. En ocasiones los lavados bronquiales estn excesivamente diluidos, por lo que son preferibles los cepillados bronquiales. Los broncoaspirados contienen tambin flora saprofita de la orofaringe, aunque en menor grado que el esputo, por lo que no son tiles para el cultivo de anaerobios. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Lidocana (2%) (preferentemente), para anestesia. Solucin salina o lactato de Ringer. Fibrobroncoscopio. Contenedor tipo Lukens. Jeringa de 20 ml. Lubricante.
2. Tcnica A realizar por un especialista debidamente entrenado. Rotular con la informacin del paciente. Indicar el procedimento de obtencin realizado.
Conservacin y transporte Transportar rpidamente al laboratorio de microbiologa. Estas muestras no deben ser refrigeradas. La inhibicin de las bacterias por la solucin anestsica puede ser un problema, por lo que es muy importante procesar rpidamente estas muestras para cultivo.
Criterios de rechazo. Las muestras broncoscpicas tienen la consideracin de muestras invasivas y por tanto no pueden ser rechazadas sin consultar previamente con el mdico responsable de su obtencin a fin de subsanar, en lo posible, el motivo del rechazo. Si esto fuera imposible, la muestra debe procesarse anotando el problema en el informe y avisando de las posibles consecuencias que ello pudiera haber tenido en la interpretacin de los resultados. Muestra no identificada o incorrectamente rotulada (los datos de la muestra no son coincidentes con los del volante de peticin). Muestra conservada de modo inapropiado o excesivo tiempo en el transporte.
Contenedor inapropiado, contenedor roto, mal cerrado o con signos de contaminacin externa (muestra derramada).
LAVADO BRONCOALVEOLAR
Igual que el broncoaspirado se obtiene a travs de un broncoscopio. Consiste en el lavado de un segmento pulmonar, previo anclado del broncoscopio, introduciendo de 20 a 50 ml de suero fisiolgico estril. Es til sobre todo en procesos pulmonares intersticiales. Constituye la mejor muestra para deteccin de P. jiroveci. Los resultados de los cultivos cuantitativos suelen ser ms tiles para interpretar los resultados. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Lidocana (2%) (preferentemente), para anestesia. Solucin salina o lactato de Ringer. Fibrobroncoscopio. Contenedor tipo Lukens. Jeringa de 50 ml. Lubricante.
2. Tcnica Mediante broncoscopia, hecha por un especialista debidamente entrenado. Rotular con la informacin del paciente. Indicar el procedimento de obtencin realizado.
Conservacin y transporte Transportar rpidamente al laboratorio de microbiologa. Estas muestras no deben ser refrigeradas.
Criterios de rechazo Las muestras broncoscpicas tienen la consideracin de muestras invasivas y por tanto no pueden ser rechazadas sin contactar previamente con el mdico responsable de su obtencin a fin de subsanar, en lo posible, el motivo del rechazo. Si esto fuera imposible, la muestra debe procesarse anotando el problema en el informe y avisando de las posibles consecuencias que ello pudiera haber tenido en la interpretacin de los resultados. Muestra no identificada o incorrectamente rotulada (los datos de la muestra no son coincidentes con los del volante de peticin). Muestra conservada de modo inapropiado o excesivo tiempo en el transporte.
CEPILLADO BRONQUIAL MEDIANTE CATTER TELESCOPADO

Consiste en un cepillado de la mucosa bronquial del lbulo afectado a travs de un fibrobroncoscopio, usando un cepillo telescopado protegido por un doble catter ocluido distalmente. Permite evitar la contaminacin con flora de las vas altas, por lo que la muestra obtenida es til para el cultivo de anaerobios. Los resultados de los cultivos cuantitativos suelen ser ms tiles para interpretar los resultados. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Lidocana (2%) (preferentemente), para anestesia. Solucin salina o lactato de Ringer. Fibrobroncoscopio. Catter telescopado. Tubo con 1 ml de suero salino estril. Lubricante.
2. Tcnica Mediante broncoscopia hecha por un especialista debidamente entrenado. Enviar al laboratorio de microbiologa el cepillo en un tubo que contenga 1 ml de suero fisiolgico estril. Rotular con la informacin del paciente. Indicar el procedimiento de obtencin realizado.
Conservacin y transporte: Transportar rpidamente al laboratorio de microbiologa. Estas muestras no deben ser refrigeradas.
Criterios de rechazo. Las muestras broncoscpicas tienen la consideracin de muestras invasivas y por tanto no pueden ser rechazadas sin consultar previamente con el mdico responsable de su obtencin a fin de subsanar, en lo posible, el motivo del rechazo. Si esto fuera imposible, la muestra debe procesarse anotando el problema en el informe y avisando de las posibles consecuencias que ello pudiera haber tenido en la interpretacin de los resultados. Muestra no identificada o incorrectamente rotulada (los datos de la muestra no son coincidentes con los del volante de peticin). Muestra conservada de modo inapropiado o excesivo tiempo en el transporte.
LQUIDOS ORGNICOS
LQUIDO CEFALORRAQUDEO
El procesamiento del LCR representa un problema particularmente difcil para el laboratorio, ya que los organismos que causan meningitis son diversos (incluyen bacterias, micobacterias, hongos y virus) y lbiles (ej. S. pneumoniae, N. meningitidis y H. influenzae). Una demora o una mala conservacin de la muestra puede condicionar un diagnstico errneo. El lquido cefalorraqudeo (LCR) es la muestra de eleccin para realizar el diagnstico etiolgico de meningitis infecciosa. Obtencin de la muestra La muestra debe recogerse utilizando una tcnica estrictamente asptica. En caso de que sea posible, el paciente debera estar en ayunas. 1. Material necesario Batea Guantes estriles Desinfectante cutneo (tintura de yodo al 2 %) Paos estriles Novocana (0.5 a 1 %), aguja y jeringa Dos agujas de puncin lumbar de pequeo calibre (20-22) Manmetro de agua Tres tubos estriles con tapn de rosca de 10 ml.
2.Tcnica Asegurarse de que el paciente estar inmvil durante el procedimiento. Sujetarlo si es necesario. Explicarle que es inevitable cierto dolor. La anestesia local alcanza raramente las meninges, y el dolor se produce cuando la aguja llega a la duramadre y tira del tejido conectivo que rodea las vrtebras. Mantener al paciente con la espalda arqueada de manera que la cabeza casi alcance las rodillas. Desinfectar la piel a lo largo de una lnea que una las dos crestas ilacas. Con jeringa y aguja, introducir bajo la piel una pequea cantidad de anestsico local, hasta que se haga un pequeo botn subcutneo. Dejar pasar unos instantes para que el anestsico acte. Introducir la aguja de puncin lumbar. La insercin ser en el espacio entre L3L4, L4-L5 o L5-S1. Al llegar al espacio subaracnoideo, retirar el estilete interior. Tan pronto como el lquido empieza a gotear, sabemos que la punta de la aguja se encuentra en el espacio subaracnoideo. Medir en este momento la presin del LCR. Recoger el lquido en los tubos estriles con tapn de rosca.
Conservacin y transporte Etiquetar adecuadamente los tubos que contienen la muestra. Bajo ningn concepto la muestra debe ser refrigerada. Si no se dispone de estufa a 35-37C , se mantendr a temperatura ambiente hasta su envo al laboratorio. Slo los tubos para cultivo de virus se deben refrigerar a +4 grados. La muestra debe ser enviada al laboratorio lo antes posible desde el momento de su obtencin. Si el laboratorio est cerrado, la muestra se debe dejar en estufa a 35-37C (salvo en el caso de que se desee cultivo de virus).
Criterios de rechazo La muestra se rechazar si se recibe en un recipiente no estril o siempre que conste que se ha manipulado previamente en condiciones inadecuadas.
Observaciones La muestra se recoger, preferentemente, antes de instaurar cualquier teraputica antibitica. Se debe recoger una cantidad adecuada del LCR para asegurar la recuperacin del organismo infectante. Generalmente, los organismos se encuentran en concentraciones de 104 a 107 organismos por mililitro de LCR, por lo que resultan adecuados de 1 a 2 ml para cultivo convencional. En caso de sospechar una meningitis por micobacterias o por hongos, se deber obtener una cantidad mayor de LCR (2 o ms ml. en cada caso), ya que la concentracin de microorganismos es inferior. En el caso de que se desee procesamiento para diagnstico de virus, la cantidad ser de al menos 1 ml. Si se recibe una cantidad de muestra inferior a la necesaria para realizar todas las pruebas solicitadas, el microbilogo debe contactar con el peticionario para determinar las pruebas que se van a realizar. Si a pesar de la escasa cantidad se siguen pidiendo las mismas pruebas, stas se deben realizar, pero advirtiendo que el volumen recibido es inadecuado. Si la extraccin de la muestra se ha realizado en un solo tubo y se solicitan pruebas para distintos laboratorios, ser imprescindible remitirlo en primer lugar al laboratorio de Microbiologa, para evitar su contaminacin. Si hay ms de una muestra, Microbiologa puede recibir cualquiera de ellas, aunque contenga sangre, ya que sta no interfiere en el cultivo. En el caso de que se sospeche una meningitis bacteriana, es muy importante extraer tambin hemocultivos. Ciertas poblaciones peditricas llevan derivaciones ventriculares para el drenaje del exceso de LCR. Es importante que estas muestras se etiqueten como Lquido de derivacin ventricular y no Lquido Cefalorraqudeo, ya que aislamientos que podran considerarse contaminantes si se hubieran obtenido de puncin lumbar pueden ser serios patgenos en infecciones de la derivacin ventricular.
OTROS LIQUIDOS ORGNICOS ESTRILES

El resto de los lquidos orgnicos estriles incluyen lquido abdominal (peritoneal, paracentesis, ascitis, dilisis), amnitico, pleural, pericrdico y sinovial. Estos lquidos orgnicos se cultivan para determinar el agente etiolgico cuando existe sospecha de infeccin en sus correspondientes localizaciones anatmicas (cavidad abdominal, cavidad pleural, cavidad pericrdica o articulacin). Obtencin de la muestra La muestra debe recogerse utilizando una tcnica estrictamente asptica. Lo ms habitual es que la muestra se deba recoger mediante aspiracin percutnea, en cuyo caso se exponen a continuacin los materiales necesarios y el procedimiento utilizado. 1. Material necesario Batea Guantes estriles Desinfectante cutneo (tintura de yodo al 2 %) Paos estriles Novocana (0.5 a 1 %), aguja y jeringa de 5 ml. Aguja y jeringa para obtencin de la muestra. Tubo o bote estril con tapn de rosca. Capacidad segn la cantidad que se prevea obtener.
2.Tcnica Asegurarse de que el paciente estar inmvil durante el procedimiento. Sujetarlo si es necesario. Desinfectar la piel en la zona en la que se va a hacer la puncin. Con jeringa y aguja, introducir bajo la piel una pequea cantidad de anestsico local, hasta que se haga un pequeo botn subcutneo. Dejar pasar unos instantes para que el anestsico acte. Introducir la aguja de toma de muestra. Aspirar y recoger la cantidad requerida de muestra. Recoger el lquido en el recipiente estril o en la misma jeringa. Lquido pleural: la muestra debe recogerse mediante aspiracin percutnea en condiciones de asepsia, colocndola en un tubo limpio y estril. Lquido peritoneal: las muestras se recogen mediante aspiracin percutnea en condiciones de asepsia, o en el curso de una laparotoma, colocndolas en un tubo limpio y estril. Es conveniente coger una cantidad superior a 10 ml. Lquido de dilisis peritoneal: el lquido de dilisis se drena directamente desde el abdomen del paciente a bolsas, que se deben transportar enteras al laboratorio tan pronto como sea posible. Lquido sinovial, pericrdico y otros: la muestra se recoge por aspiracin percutnea asptica y se transporta en un contenedor limpio y estril.
Lquido amnitico: el lquido se recoge mediante amniocentesis, en el curso de una cesrea o mediante aspiracin con un catter transcervical intrauterino, y debe transportarse en un contenedor limpio y estril.
Conservacin y transporte Etiquetar adecuadamente el recipiente que contiene la muestra. La muestra debe ser enviada al laboratorio lo antes posible desde el momento de su obtencin. Lquido pleural, peritoneal, dilisis peritoneal, sinovial, amnitico y otros: si va a haber retraso en el transporte o en el procesamiento, la muestra se introducir en estufa a 35-37C. Si no se dispone de estufa mantener a temperatura ambiente. Lquido pericrdico: si va a haber retraso en el transporte o en el procesamiento, es importante que la muestra se mantenga en frigorfico a +4 C.
Criterios de rechazo La muestra se rechazar si se recibe en un recipiente no estril o siempre que conste que se ha manejado en condiciones inadecuadas.
Observaciones Las muestras se recogern siempre antes de instaurar cualquier teraputica antibitica. No existe una situacin tan urgente que impida tomar la muestra antes de iniciar el tratamiento. El volumen mnimo para estudio bacteriano rutinario es de 1 ml, si bien es preferible una cantidad superior. En el caso de que se requiera investigacin de M. tuberculosis o de hongos, se enviar un volumen superior a los 10 ml. En el caso de que sea necesario prevenir la coagulacin de alguno de estos lquidos, se usar heparina sin conservantes; otros anticoagulantes pueden resultar antibacterianos. Si se usa para el transporte la jeringuilla utilizada en la toma de la muestra, se deber sustituir la aguja por una estril tapada con el correspondiente protector. Los recipientes adecuados son tubos o botes estriles con tapn de rosca, sin conservantes. Los frascos de hemocultivo como sistema de envo de este tipo de muestras deben ser siempre ADICIONALES, y no el nico sistema utilizado, ya que en este caso eliminamos la posibilidad de hacer tinciones u otras pruebas, que pueden resultar de gran utilidad para orientar el diagnstico. Por otra parte, no hay que olvidar que las infecciones polimicrobianas en cavidad pleural o abdominal son frecuentes, por lo que, si usamos frasco de hemocultivo solamente, un organismo puede crecer sobre los dems, enmascarando su presencia. Siempre que sea posible se debe evitar el uso de escobillones.
Las muestras se enviarn inmediatamente al laboratorio, y en caso de que sea imposible o se prevea una demora del procesamiento (muestras tomadas por la tarde, noche o fin de semana), se mantendrn a temperatura ambiente. Se mantendrn en frigorfico cuando se solicite procesamiento para hongos o micobacterias. Los frascos de hemocultivo se debern mantener en estufa a 35-37C, y si no es posible, a temperatura ambiente. Si se recibe una cantidad de muestra inferior a la necesaria para realizar todas las pruebas solicitadas, el microbilogo debe contactar con el peticionario para determinar las pruebas que se van a realizar. Si a pesar de la escasa cantidad se siguen pidiendo las mismas pruebas, stas se deben realizar, pero advirtiendo que el volumen recibido es inadecuado.
PIEL Y TEJIDOS BLANDOS
Se basa en la bsqueda de los microorganismos patgenos u oportunistas causantes de infeccin de piel, partes blandas y abscesos. Dadas las caractersticas de estos tejidos, los cultivos polimicrobianos pueden ser de difcil interpretacin.
ULCERAS Y HERIDAS SUPERFICIALES

La perdida de continuidad de la piel determina que su flora microbiana la colonice y posteriormente infecte los tejidos normalmente estriles. Microorganismos ms frecuentes: Estafilococos coagulasa negativos Enterobacterias Microorganismos nosocomiales.
Obtencin de la muestra 1.Material necesario Guantes estriles Suero fisiolgico o solucin de Ringer lactato Jeringa y aguja estriles Torundas con medio de transporte tipo Stuart-Amies
2. Tcnica Lavar cuidadosamente la superficie de la herida. Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas. Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solucin de Ringer lactato y aspirarlo nuevamente en la jeringa. Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles, podr utilizarse una torunda, frotando en las zonas profundas.
3. Nmero de muestras y volumen mnimo Para muestras lquidas se intentar obtener de 1 a 10 ml. En el resto de las ocasiones la muestra debe ser de suficiente volumen como para poder procesarla en aerobiosis y anaerobiosis. En el caso de remitir torunda, es aconsejable enviar dos escobillones.
Conservacin y transporte El transporte de la muestra es determinante en el resultado final. El envo al laboratorio debe de ser inmediato, o antes de las dos horas de su obtencin. Se remite en la misma jeringa de la extraccin pero si no puede enviarse de inmediato se utilizar un vial con medio de transporte anaerobio. El remitir la muestra mas tardiamente enmascara el verdadero agente causal por la proliferacin ms rpida de la flora exgena contaminante.
Observaciones Las muestras recibidas con torunda son de escasa rentabilidad y deben obtenerse solo en circunstancias muy excepcionales, ya que es un mtodo poco deseable por recoger menor volumen de muestra y tener mayor riesgo de contaminacin.
LCERAS CRNICAS
Introduccin Dado el aumento de la patologa geritrica, las lceras crnicas son ms frecuentes en este tipo de pacientes, aunque pueden darse a cualquier edad, las ms frecuentes son las lceras varicosas, las lesiones por presin y el sndrome del pie diabtico. Microorganismos ms frecuentes: Este tipo de lceras suelen ser profundas, por lo que los microorganismos aislados son muy variables, Staphylococcus aureus es el mas frecuentemente aislado, seguido de Streptococcus spp, bacilos gramnegativos como Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y anaerobios sobre todo Streptococcus y Bacteroides spp. Obtencin de la muestra 1.Material necesario Guantes estriles Gasas estriles Jeringa y aguja estriles Suero fisiolgico o solucin de Ringer lactato Cureta bistur estriles Jeringa y aguja estriles Medio de transporte para anaerobios
2. Tcnica Lavar cuidadosamente la lcera. La recogida se har de la zona ms profunda, se prefiere el curetaje o raspado. Cuando la muestra sea insuficiente, instilar solucin de Ringer lactato y aspirarlo mediante la jeringa. En caso de absceso se har aspiracin mediante jeringa o aguja en la zona central y la interfase entre tejido viable y el absceso.
Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles, podr utilizarse una torunda, frotando en las zonas ms profundas. La biopsia de la lcera puede ser necesaria cuando se sospecha degeneracin maligna y debe incluir todo el espesor de la base. Si se sospecha osteomielitis contigua, la biopsia del hueso debe realizarse.
3. Nmero de muestras y volumen mnimo Para muestras lquidas se intentar obtener de 1 a 10 ml. En el resto de las ocasiones la muestra debe ser de suficiente volumen como para poder procesarla en aerobiosis y anaerobiosis. En el caso de remitir torunda, es aconsejable enviar dos escobillones.
Conservacin y transporte El transporte de la muestra es determinante para el resultado, el aislamiento del agente causal es inversamente proporcional al tiempo transcurrido entre la obtencin y el procesamiento. El envo debe ser inmediato o antes de las dos horas de la obtencin( T ambiente ) Se utilizar la misma jeringa de la extraccin si se enva antes de las dos horas, si no usar medio de transporte para anaerobios.
Observaciones La toma se debe de realizar antes de la administracin de antibiticos o tras un periodo libre de al menos 48 horas.
EXANTEMAS
Introduccin La toma de muestras en exantemas y heridas superficiales puede superponerse aunque conviene diferenciar la toma en casos de pstulas, vesculas, petequias y otras lesiones especficas, ya que puede haber ligeras variaciones. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Gasas estriles Alcohol etlico o isoproplico al 70% Povidona iodada al 10% Jeringa estril Aguja IM Medio de transporte para anaerobios
2. Tcnica Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones. Cuando no sea suficiente, instilar una pequea cantidad de suero salino estril y aspirarlo.
ABSCESOS CERRADOS
Introduccin Los microorganismos causales pueden llegar al parnquima por extensin directa desde un foco contiguo de infeccin o por va hematgena desde un foco distante. Microorganismos ms frecuentes: Varan en funcin de la localizacin de los mismos. As en colecciones de origen abdominal suelen ser polimicrobianos con presencia de flora aerobia y/o anaerobia. En pacientes inmunocomprometidos pueden encontrarse otros agentes de crecimiento predominante intracelular como Listeria monocytogenes, Nocardia asteroides o Salmonella spp. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Gasas estriles Alcohol etlico o isoproplico al 70% Povidona iodada al 10% Jeringa estril Aguja IM Medio de transporte para anaerobios
2. Tcnica Desinfectar la piel, limpiando la zona con alcohol, de forma concntrica comenzando por el centro. Abarcar una zona de unos 10 cm. Repetir la operacin con Povidona. En pacientes con hipersensibilidad al yodo, en lugar de Povidona se utilizar alcohol dos veces consecutivas. Dejar secar al menos 1 minuto para que la Povidona ejerza su accin antisptica. Realizar una puncin-aspiracin del absceso con jeringa y aguja. Desinfectar la superficie de goma del tapn del medio de transporte para anaerobios con Povidona e inyectar con la misma jeringa, introduciendo una pequea cantidad de la muestra. Si el medio tiene una coloracin azul deber desecharse. El resto de la muestra se remitir al laboratorio en la jeringa o bien en un contenedor estril.
3. Nmero de muestras y volumen mnimo Deber enviarse un volumen de muestra entre 1 y 5 ml.
4. Etiquetado Deber etiquetarse correctamente tanto el medio de transporte como la jeringa, en el caso de aspirar de sitios diferentes deber reflejarse correctamente para su posterior interpretacin.
Transporte y conservacin Las muestra debern enviarse al laboratorio lo mas pronto posible, antes de dos horas. Hasta que esto suceda, mantener la muestra y el medio de transporte a temperatura ambiente.
Observaciones Es muy importante especificar en el volante de peticin la localizacin del absceso y el estado inmunitario del paciente con vistas a la bsqueda e interpretacin de los resultados. La recogida de la muestra con escobilln es poco deseable, por tener mayor riesgo de contaminacin, y ser poco representativo.
FSTULAS Y TRACTOS SINUSALES

Introduccin Los trayectos fistulosos y sinusales suelen estar colonizados por distintos microorganismos que no estn implicados en la patogenia del proceso por lo que estas muestras son poco rentables, y los resultados deben evaluarse con precaucin. Obtencin de la muestra 1. Material necesario Gasas estriles Alcohol etlico o isoproplico al 70% Povidona iodada al 10% Jeringa y aguja
2. Tcnica Limpiar cuidadosamente la superficie cutanea con alcohol y luego con Povidona. Aspirar el exudado de la parte profunda de la fstula con jeringa y aguja.
3. Volumen mnimo El volumen ptimo para el cultivo es de 1-5 ml
Conservacin y transporte Enviar las muestras al laboratorio antes de dos horas, mantener a temperatura ambiente en este intervalo.
Observaciones Estos tipos de muestras son inadecuados para la investigacin de anaerobios.
MICOSIS CUTNEAS
RECOGIDA DE MUESTRAS PARA EL ESTUDIO DE HONGOS

Introduccin El tipo y calidad de la muestra es primordial para el subsiguiente aislamiento e identificacin del agente etiolgico. La muestra se recoger antes de instaurar el tratamiento y siempre de la parte activa de la lesin. Los requisitos son: Recogida adecuada y asptica. Transporte rpido al laboratorio (en menos de 2 horas) en recipiente estril. Otra opcin es la recogida de la muestra en el laboratorio de Microbiologa. Es importante evitar las contaminaciones. Antes de la toma es necesario asegurar que no haya sido aplicado ningn producto antifngico por va local o general, al menos en los cuatro das precedentes. Se limpiar la piel con alcohol etlico al 70% Indicaciones: Sospecha de infeccin fngica. Obtencin de muestras 1. Material necesario Recipiente estril hermtico Placas de Petri estriles Lancetas, bistur, esptulas, pinzas de depilar, tijeras, cortauas, tijeras curvas y finas. Todo el material estar preferiblemente estril. Cinta de celofn transparente Portaobjetos Tubos estriles Jeringas y agujas estriles Medio de cultivo apropiados.
2. Tcnica de la obtencin del producto Segn la zona afectada y el diagnstico clnico el tipo de muestra ser: Escamas Pelos Fragmentos de ua y tejido periungueal Mucosas lceras Biopsias cutneas
2.1. Escamas Raspar con ayuda de una lanceta, portaobjetos, bistur, sobre todo en la periferia de la lesin, por el desarrollo centrfugo del hongo a partir del punto de inoculacin. Si la lesin es pequea se raspa en su totalidad. Las escamas se hacen caer en una placa de Petri. En el caso de pitiriasis versicolor, se aplica sobre la lesin un fragmento de celofn transparente que se fija sobre un portaobjetos. En caso de lesiones cutneas rezumantes se hace la toma con un escobilln estril humedecido con solucin salina fisiolgica. 2.2. Pelos Elegir los pelos parasitados. Los cabellos y/o pelos rotos o contorneados deben ser arrancados del folculo piloso. Recoger el material en una placa de Petri estril. 2.3. Fragmentos de ua y tejido periungueal Micosis ungueales La toma se realiza en la base de la ua / surco periungueal (en onixis por Candida), o en la extremidad de la misma, (en onicomicosis por dermatofitos). Hay que coger las escamas por debajo de las uas introduciendo un bistur o lanceta en el lecho subungueal anterior, que suele estar despegado, raspando pacientemente hasta llegar a la zona dolorosa, donde extraeremos el material de mejor calidad. Posteriormente se cortan con una tijera fina y curva fragmentos de la ua afectada. El material obtenido se recoge en una placa de Petri y/o frasco estril. Perionixis En caso de lesiones supuradas de perionixis, se extrae el pus mediante presin y se recoge con un escobilln estril. 2.4. Exudados de mucosas La toma a nivel de mucosas se realiza por raspado con el borde romo del bistur, portaobjetos o escobilln estril. 2.5. Exudados de lceras En las lceras de piel y mucosas, la toma se realiza raspando con bistur los bordes y fondo de la misma, poniendo especial inters en los bordes, para obtener escamas drmicas, as como las costras o porciones vegetantes si las hubiera, ayudndose con las pinzas. En todas las lesiones ulcerosas o vegetantes es muy til la biopsia que debe tratarse como se seala posteriormente. 2.6. Biopsia cutneas La biopsia es uno de los procedimientos ms seguros para el diagnstico de una micosis. La pieza de biopsia se introduce en un tubo estril con suero fisiolgico estril o agua glicerinada al 25% estril.
Conservacin y transporte El almacenamiento prolongado puede afectar a la viabilidad del hongo.
Se transporta en contenedor seco, evitando contenedores con medio de transporte. Las muestras dermatolgicas se guardaran a 15-30C. Las biopsias se remiten de inmediato al Laboratorio de Microbiologa. Si el procesamiento se retrasa ms de dos horas refrigerar la muestra a 4C.
Criterios de rechazo Administracin de antifngicos los das previos a la toma de muestra, ya que pueden dar lugar a cultivos falsamente negativos. Toma de muestra mediante escobilln, excepto en perionixis. Las muestras recogidas, transportadas o almacenadas incorrectamente, ya que pueden inducir a resultados falsamente negativos o a aislamientos de dudosa significacin etiolgica.
SEROLOGA INFECCIOSA
SEROLOGA INFECCIOSA
Introduccin Los mtodos serolgicos permiten determinar el estado inmune del paciente y el diagnstico de infecciones en aquellos casos en que los microorganismos implicados son de cultivo dificultoso o no cultivables, mediante la deteccin tanto de antgenos como de anticuerpos microbianos especficos. En general, los anticuerpos de la clase IgM aparecen inicialmente durante la infeccin, su presencia es transitoria e indican infeccin reciente permitiendo el diagnstico con una nica muestra de suero. Sin embargo, en determinadas infecciones persisten durante perodos largos por lo que su utilidad debe ser evaluada para cada agente infeccioso. Los anticuerpos de la clase IgG aparecen ms tardamente, alcanzando niveles mximos en suero a las 4-6 semanas despus del inicio de la infeccin y persistiendo de por vida. El diagnstico de infecciones basado en la determinacin de IgG requiere el procesamiento de dos sueros en paralelo, uno tomado en la fase aguda de la enfermedad, preferiblemente dentro de los 5-7 das del inicio de los sntomas, y una segunda muestra durante la convalecencia, 3-4 semanas ms tarde. Un aumento de 4 veces en el ttulo de anticuerpos IgG se considera evidencia de infeccin reciente. Obtencin de la muestra 1. Material Guantes estriles Gasas estriles Tubos de presin negativa estriles Alcohol etlico o isoproplico al 70% Sistema de toma de sangre para tubos de presin negativa o sistema tradicional
2. Tcnica Desinfectar la piel con alcohol Dejar secar la piel para evitar la produccin de hemlisis en la muestra de sangre Extraer la sangre en un tubo seco con gel separador, sin anticoagulantes ni conservantes.
3. Etiquetado Se identificarn las muestras con la etiqueta correspondiente.
Conservacin y transporte Dejar los tubos a temperatura ambiente para favorecer la coagulacin hasta su transporte. Transportar las muestras al laboratorio refrigeradas el mismo da de la extraccin. En caso de que se produzca una demora en el envo de muestras al laboratorio, stas pueden conservarse refrigeradas durante 24-48 horas
Procesamiento en el laboratorio Centrifugar el tubo con la sangre a 1200 rpm durante 10 minutos y mantener a 4C. Trabajar siempre que sea posible con tubo primario Si es posible se guardar una alcuota para seroteca a 70C
MICROBIOLOGA MOLECULAR INFECCIOSA
MICROBIOLOGA MOLECULAR INFECCIOSA

Introduccin Los mtodos de biologa molecular permiten la deteccin directa del genoma del microorganismo implicado en el proceso infeccioso bien sea DNA o RNA. Las tcnicas de biologa molecular estn indicadas para la deteccin de microorganismos que no pueden cultivarse in vitro o para aquellos de lento crecimiento, con importantes requerimientos nutricionales o de difcil cultivo, en cuyo caso los mtodos moleculares mejoran la rapidez, sensibilidad y especificidad del diagnstico etiolgico. Obtencin de la muestra 1. Recomendaciones generales Es aconsejable obtener y procesar las muestras para biologa molecular con las mismas precauciones de esterilidad que para las tcnicas de cultivo. Las muestras de LCR, biopsias, orina, muestras respiratorias se obtendrn siguiendo los procedimientos indicados en las correspondientes secciones del manual de toma de muestras en funcin del proceso infeccioso implicado, mientras que la obtencin de la muestra de sangre difiere segn el microorganismo implicado y son mencionadas a continuacin. Indicaciones de las muestras de sangre: Plasma para carga viral de VIH, VHC, VHB y, estudio de resistencias de VIH Leucocitos de sangre perifrica: PCR de virus y bacterias intracelulares
2. Tcnica Para la obtencin de plasma, linfocitos o leucocitos de sangre perifrica Extraer la sangre en un tubo de 10 ml con EDTA y gel separador. Mezclar invirtiendo el tubo 10-15 veces. La separacin del plasma, linfocitos y leucocitos debe realizarse en el Laboratorio de Microbiologa antes de las 6 horas de obtener la muestra para evitar su hemlisis.
Conservacin y transporte Las muestras, desde el momento de su obtencin hasta la llegada al laboratorio (incluido transporte), deben mantenerse refrigeradas. Una vez recibidas, en caso de no ser procesadas inmediatamente, sern congeladas.
Procesamiento en el laboratorio Centrifugar el tubo con la sangre a 1200 rpm durante 10 minutos. Con ayuda de una pipeta de aspiracin estril transferir el plasma a un tubo estril de 1.5-2 ml con tapn de rosca. Es conveniente obtener varias alcuotas y congelar si es posible a 70C. No se aconseja conservar las muestras a 20 C durante tiempos prolongados, mximo 1 ao. Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.
BIBLIOGRAFA
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ANEXOS
REFERENCIAS
PRODUCTO REFERENCIA LOCALIZACIN Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Solicitar almacn Solicitar almacn Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Transporte anaerobios en Portagerm (Biomerieux) torunda Ref: 42105 Transporte anaerobios en Portagerm (Biomerieux) muestras lquidas Ref: 41995 Torundas para VIDAS Chlamydia male Chlamydias (hombres) Ref: 30527 Torundas para VIDAS Chlamydia female Chlamydias (mujeres) Ref: 30528 Tubo carga viral (EDTA BD PPT Vacutainer con tapn blanco) Ref: 288217 Tubo para serologa BD SST Vacutainer (tapn amarillo) Ref: 367783 Tubo de orina conservante Tubo lisis (adulto) Tubo lisis (nio) con Vccuette
centrifugacin AISBACT-A centrifugacin AISVACT-I
Medios de cultivo para Agar sangre, agar Solicitar en el Laboratorio raspados corneales chocolate y Sabureaud de Microbiologa Torunda con medio de ANALIZER. Cdigo transporte almacn: 1923 Medio de transporte de VIRALPACK. Ref: 80100 virus Frascos de hemocultivos Aerobio (Azul) para microorganismos Anaerobio (rojo) aerobios y anaerobios de Solicitar almacn Solicitar en el Laboratorio de Microbiologa Solicitar almacn
CATALOGO DE MATERIAL DE TOMA DE MUESTRAS DE MICROBIOLOGA CLNICA
Frasco estril para obtencin y transporte de muestras de orina para urinocultivo y tubo de transporte con conservante
Frasco estril, obtencin de muestras de esputos, etc.
Frasco con cuchara para muestras de heces para coprocultivo.
Medio de transporte de AMIES para transporte de muestras purulentas
Tubo de serologa para la extraccin de suero
Tubo de serologa para la extraccin de suero (San Fermn)
TOMA DE MUESTRAS PARA CULTIVO DE ORINA

Toma de muestras de orina en la mujer
1 2 3 4 5 6
Toma de muestra de orina en el hombre.
1 2 3 4 5 6
RECOGIDA DE MUESTRA PARA DETERMINACION DE CARGA VIRAL

1. EXTRAER LA MUESTRA POR SISTEMA DE VACO, CON EL TUBO VACUTAINER (REFERENCIA 362795. COD. CONSELLERIA SANIDAD)
PROCEDIMIENTO DE OBTENCIN DE HEMOCULTIVOS
1.- Rotular los frascos (tapn azul y tapn dorado) con las etiquetas del paciente, indicando si es la 1 o la 2 extraccin 2.- Desinfeccin de los tapones de los frascos con etanol 3.- Seleccionar la vena y desinfectar la zona de venipuncin en crculos excntricos, primero con etanol (30 segundos), luego con povidona iodada (1 minuto). Dejar secar un minuto 4.- Utilizar guantes estriles para la extraccin de sangre 5.- Inocular en cada frasco: aerobio (color azul) y anaerobio (color dorado) el volumen adecuado de sangre (8 ml) comenzando por el frasco anaerbico 6.- Agitar suavemente el frasco y enviarlo inmediatamente al servicio de Microbiologa. En el laboratorio de Microbiologa se deben dejar a temperatura ambiente.

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HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE ELCHE MANUAL DE TOMA DE MUESTRAS

Causa del cambio

Revisado/Aprobado por: Dra. Gloria Royo Fdo.:

OBJETIVO DEL MANUAL

NORMAS BSICAS GENERALES

CULTIVO DE BACTERIAS: ORINA OBTENIDA POR MICCIN MEDIA

CULTIVO DE BACTERIAS: ORINA DE PACIENTES CON CATTER PERMANENTE

CULTIVO DE BACTERIAS: ORINA VESICAL

CULTIVO DE MICOBACTERIAS: ORINA

Conservacin y transporte. Envo inmediato al laboratorio. Si no es posible, conservar a 4C.

CRITERIOS DE RECHAZO DE MUESTRAS

CULTIVO DE BACTERIAS: HECES

El volumen mnimo es de 1-2 g de heces formadas o pastosas y de 5-10 ml de heces lquidas.

CULTIVO DE BACTERIAS: HISOPOS RECTALES

Se enva rpidamente al laboratorio.

ESTUDIO VIROLGICO: HECES

2. Tcnica Se seguir el mismo procedimiento que para cultivo bacteriolgico.

CRITERIOS DE RECHAZO DE MUESTRAS

ESTUDIO PARASITOLGICO: HECES

ESTUDIO PARASITOLGICO: ASPIRADO DUODENAL

3. Volumen mnimo De 0,5 a 3 ml de aspirado duodenal.

ESTUDIO PARASITOLGICO: INVESTIGACIN DE OXIUROS (PRUEBA DE GRAHAM)

Conservacin y transporte Mantener a temperatura ambiente hasta su envo al laboratorio de Microbiologa

CRITERIOS DE RECHAZO DE LAS MUESTRAS

TRACTO GENITAL FEMENINO

TRACTO GENITAL MASCULINO

MUESTRAS PARA EL DIAGNSTICO DE PROSTATITIS CRONICA(TCNICA DE MEARESSTAMEY)

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

OTROS CATTERES Y DRENAJES

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

LENTES DE CONTACTO - LENTE INTRAOCULAR

Obtencin de muestras 1. Material necesario Tubo o tarro estril.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

ODO EXTERNO: EXUDADO TICO

3. Nmero de muestras Una torunda para cada odo.

ODO MEDIO: EXUDADO TICO

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

3. Nmero de muestras Slo una torunda.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

Para aspirados: Tubo aspirador de Tefln o jeringa y catter.

3. Nmero de muestras Se obtendr una muestra.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

EXUDADOS DE SENOS PARANASALES

3. Nmero de muestras y volumen mnimo Se intentar obtener al menos 1 ml. de muestra.

Conservacin y transporte Enviar inmediatamente al laboratorio o utilizar un medio de transporte.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

EXUDADOS DE CAVIDAD ORAL

Conservacin y transporte No requiere medidas especiales para su transporte y conservacin.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR

CEPILLADO BRONQUIAL MEDIANTE CATTER TELESCOPADO

OTROS LIQUIDOS ORGNICOS ESTRILES

PIEL Y TEJIDOS BLANDOS

ULCERAS Y HERIDAS SUPERFICIALES

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

FSTULAS Y TRACTOS SINUSALES

3. Volumen mnimo El volumen ptimo para el cultivo es de 1-5 ml

Criterios de rechazo Se aplicarn los criterios generales de rechazo de muestras.

Observaciones Estos tipos de muestras son inadecuados para la investigacin de anaerobios.

RECOGIDA DE MUESTRAS PARA EL ESTUDIO DE HONGOS