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UNIVERSIDADE DE SO PAULO ESCOLA SUPERIOR DE AGRICULTURA LUIZ DE QUEIROZ DEPTO.

DE CINCIAS BIOLOGICAS

METABOLISMO DE CARBOIDRATOS

Trabalho apresentado disciplina LQI-725 Fundamentos Bsicos de Bioqumica Vegetal, coordenada pelo Prof. Dr. Luiz Antnio Gallo.

PIRACICABA Estado de So Paulo Brasil Dezembro 2000

1. INTRODUO A respirao aerbica comum em todos os organismos eucariticos, o processo respiratrio nas plantas bem similar ao encontrado nos animais. No entanto a respirao em vegetais distingue em alguns pontos da respirao animal. A respirao aerbica um processo biolgico pelo qual compostos orgnicos reduzidos so mobilizados e oxidados de uma maneira controlada. Durante a respirao, energia livre liberada e incorporadas na forma de ATP, que pode ser facilmente utilizado para a manuteno e desenvolvimento da planta. A respirao comumente expressa em termos de oxidao de um acar de 6 carbonos: C6H12O6 + 6 O2 + 6 H2O 6 CO2 + 12 H2O Esta equao oposta a equao usada para descrever o processo fotossinttico, e representa uma reao duplo redox em cujo a glucose completamente oxidada em CO2, enquanto que o oxignio serve como ltimo receptor de eltron, sendo reduzido em gua. A mudana de energia livre padro para estas reaes libera 2880kJ (686kcal) por mole (180g) de glicose oxidada. A glicose mais comumente citada como substrato da respirao, porm em uma clula em funcionamento, o carbono reduzido pode ser derivado de fontes como polmeros de amido, disacardeos, e outros acares, como tambm lipdeos, cidos orgnicos, e ocasionalmente, protenas.

Com o objetivo de prevenir danos na estrutura celular, a clula libera uma grande quantidade de energia na oxidao da glicose por um processo que possui vrios passos, em cuja glicose oxidada atravs de uma srie de reaes. Estas reaes podem ser subdivididas em trs estgios: Gliclise, Ciclo do cido Tricarboxlico e a Cadeia de Transporte de Eltrons. O ciclo do cido tricarboxlico e a cadeia de transporte de eltron, ambos ocorrem na membrana do mitocondrio. No ciclo do cido tricarboxlico, o piruvato oxidado completamente a CO2 e uma considervel quantidade de poder redutor gerado neste processo. A cadeia de transporte de eltron consiste de uma coleo de protenas transportadoras ligadas as duas membranas do mitocondrio. Este sistema transfere eltrons do NADH, produzido durante a gliclise e o ciclo do cido tricarboxlico, para o oxignio. Esta transferncia de eltrons libera uma grande quantidade de energia livre, muito desta energia conservada na forma de ATP. Este estgio final completa a oxidao da glicose. C6H12O6 + 6 O2 + 6 H2O + 32 ADP + 32 Pi 6 CO2 + 12 H2O + 32 ATP Acima, a respirao pode ser representada por uma reao mais completa, onde nem todo o carbono que entra na rota respiratria sai na forma de CO2. Muitos metablitos intermedirios importantes aparecem nas rotas glicolticas e ciclo tricarboxlico, permitindo que estas rotas funcionem como ponto inicial de muitas outras reaes celulares. Como exemplo desses metablitos podemos citar vrios aminocidos, pentoses usadas na parede celular e biossntese, precursores de biossntese de porfirinas, e gliceris necessrios para sntese de fosfolipdeos. 2.GLICLISE 2.1 Reaes da via glicoltica Na gliclise, o primeiro estgio da respirao, a glicose, um acar de 6 carbonos, dividido em dois acares de 3 carbonos, que so oxidados e rearranjados para produzir duas molculas de piruvato Alm de preparar um substrato para oxidao do ciclo do cido tricarboxlico, a gliclise produz uma pequena quantidade de energia qumica na forma de ATP e NADH. Antes da evoluo da fotossntese e do aparecimento do oxignio na atmosfera, a gliclise foi provavelmente a principal fonte de energia para as clulas via fermentao. A gliclise ocorre em todos os organismos vivos (procariotos e eucariotos). Este processo no requer oxignio para converter glicose a piruvato, e o metabolismo glicoltico pode se tornar o principal modo de produo de energia em tecidos vegetais em baixos nveis de oxignio, por exemplo, em razes de solos alagados. A gliclise consiste de reaes catalizadas por uma srie de enzimas solveis localizadas no citossol. A principais reaes associadas com as rotas glicoltica clssica e fermentativa mostrada na figura 1. A sacarose o maior acar translocado na planta e deste modo a forma de carbono que muitos tecidos no fotossintticos importam para sua manuteno. Duas rotas para a degradao de sacarose conhecida em plantas (figura 1). Em muitos tecidos vegetais a sacarose sintase, que est localizada no citossol e combina a sacarose com UTP para produzir frutose, UDP-glicose, e fosfato inorgnico usado para degradar a sacarose. Mas em alguns tecidos, a invertase, que se localiza na parede celular, simplesmente hidrolisa a sacarose em glicose e frutose.

Fig.1 Via Glicoltica e suas possveis rotas metablicas. Devido o amido ser sintetizado em plantas e catabolizado nos plastdeos, o carbono obtido da degradao do amido entra na gliclise no citossol, primeiramente a nvel de acares de 3 carbonos, gliceraldedo-3-fosfato e diidroxiacetona, no caso dos cloroplastos, ou a hexose glicose-1-fosfato, que translocado para fora dos amiloplastos. No caso dos aucares de 3 carbonos, a separao do stio de isoenzimas cataliza a mesma srie de reaes que convertem acares de 6 carbonos, como ocorre na gliclise, est localizado nos plastdeos. Nas reaes iniciais da gliclise, a hexose que entra (glicose ou frutose) fosforilada duas vezes e ento quebrada, produzindo duas molculas de acar com 3 carbonos (gliceraldedo-3-fosfato). Esta srie de reaes requer gasto de duas molculas de ATP por glicose e inclui duas das trs reaes irreversveis da rota glicoltica que so catalizadas por hexose quinase (incluindo glicose quinase e frutose quinase) e fosfofruto quinase. As reaes da fosfofrutoquinase um dos pontos de controle da gliclise tanto em plantas como em animais. Uma vez formado o gliceraldedo-3-fosfato, a rota glicoltica pode comear a extrair energia til. A enzima gliceraldedo-3-fosfato desidrogenase cataliza a oxidao do aldedo a cido carboxlico, liberando energia suficiente para permitir a reduo de NAD + em NADH e a fosforilao de gliceraldedo-3-fosfato para produzir1,3-bifosfoglicerato. O NAD+/NADH um cofator orgnico associado com muitas enzimas que catalizam reaes redox. O NAD+ a forma oxidada do cofator e ele passa por uma reao de 2 eltrons reversvel que produz NADH (NAD+ + 2 e- + H+). O potencial reduo padro para este duplo redox aproximadamente -320 mV. NADH desta maneira uma boa forma para armazenar energia livre liberada durante as reaes de oxidao da gliclise e do ciclo do cido tricarboxlico. A subsequente oxidao do NADH via cadeia transportadora de eltrons libera energia suficiente (220kJ mol-1, ou 52kcal mol-1) para mover a sntese de ATP. Um outro composto, o NADP, desempenha uma funo redox na fotossntese e na rota oxidativa das pentoses fosfato. Voltando para as reaes da gliclise, iniciando com o 1,3-bifosfoglicerato. O cido carboxlico fosfolrilado em carbono 1 do 1,3-bifosfoglicerato representa uma mistura de cido-anidro que tem uma grande energia de hidrlise (-18,9 kJmol-1 ou -4,5kcal). Desta forma o 1,3-bifosfoglicerato um forte doador de grupos fosfatos. No prximo passo da gliclise, que catalizado, pela fofoglicerato quinase, o fosfato do carbono 1 transferido para uma molcula de ADP, produzindo AATP e 3-fosfoglicerato. Para cada glicose que entra, 2 ATPs so gerados por esta reao- Um para cada molcula de 1,3bifosfoglicerato.

Este tipo de sntese de ATP se refere a Fosforilao a nvel de substrato, porque ela envolve transferncia direta de um fosfato de uma molcula de substrato para ADP para formar ATP. Esta fosforilao diferente do mecanismo de sntese de ATP durante a fosforilao oxidativa que usada pela cadeia de transporte de eltron, no estgio final da respirao. Nestas ltimas sries das reaes glicolticas, o fosfato do 3-fosfoglicerato transferido para o carbono 2 e uma molcula de gua removida, produzindo fosfoenolpiruvato (PEP). O grupo fosfato do PEP tambm tem alta energia livre de hidrlise (-30,5 kJ mol-1 ou -7,3 kcal mol-1), esta energia livre faz com que o PEP se torne um excelente doador de fosfato para formao de ATP. No passo final que a terceira reao irreversvel da gliclise, produz duas molculas adicionais de ATP para cada hexose que entra na rota (figura 2).

Fig.2 Via Glicoltica. As reaes em que o ATP ou o NADH esto em destaque. 2.2 Pontos de controle na Via Glicoltica Um dos pontos importantes nas vias metablicas so seus pontos de controle. As vias podero ser desligadas por qualquer organismo se l no tiver uma necessidade imediata de seus produtos, guardando, desse modo, a energia. Na gliclise, trs reaes formam os pontos de controle da via: a reao de glicose para glicose- 6 fosfato, catalisada pela hexoquinase; a produo de frutose- 1,6 bifosfato, catalisada pela fosfofrutoquinase; e a ltima reao da via, catalisada pela piruvato-quinase (Figura 3).

Freqentemente, observa-se que o controle de rotas metablicas exercido em pontos prximos ao incio e ao final da via, envolvendo intermedirios- chave; nesse caso temos a frutose 1,6-bifosfato.

Fig.3 Pontos de Controle da Gliclise

2.3 Fermentao A fermentao regenera o NAD+ necessrio para a gliclise na ausncia de oxignio. Na ausncia de oxignio, o ciclo do cido tricarboxlico e a cadeia transportadora de eltrons no conseguem funcionar. A gliclise deste modo no pode continuar operando, devido ao suprimento da clula em NAD+ ser limitado, e o NAD+ se torna disponvel no estado reduzido (NADH), a reao catalizada pelo gliceraldedo-3fosfato desidrogenase no pode ocorrer. Para superar este problema, plantas e outros organismos podem metabolizar todo piruvato atravs do Metabolismo Fermentativo. Na fermentao alcolica, as duas enzimas piruvato descarboxilase e lcool desidrogenase agem sobre o piruvato, produzindo etanol e CO2 e oxidando NADH no processo. Na fermentao do cido ltico, mais comum em mamferos, a enzima lactato desidrogenase usa NADH para reduzir piruvato a lactato, regenerando NAD+. Um dos melhores exemplos envolvendo o metabolismo fermentativo, so as razes situadas em solo alagado, onde as concentraes de oxignio so muito baixas. A fermentao no libera toda a energia vivel em cada molcula de acar. A energia livre padro ( G0) para a completa oxidao da glicose -2880kJ mol-1 (-686 kcal mol-1). O valor de G0, para a sntese de ATP -31,8 kJ mol-1 (-7,6 kcal mol-1). Entretanto sobre condies no padro que normalmente ocorrem nas clulas, a sntese de ATP requer uma entrada de energia livre de aproximadamente 50,2 kJ mol -1 (12 kcal mol-1). Dando a sntese de duas molculas de ATP para cada glicose que convertidas em etanol (ou lactato), a eficincia da fermentao anaerbica, que , a energia estocada como ATP relativa a energia potencialmente vivel na molcula de glicose de aproximadamente 4%. Muito desta energia em glicose restante pelo produto da fermentao: lactato ou etanol. Durante a respirao aerbica, o piruvato produzido pela gliclise transportado para dentro do mitocondrio, onde totalmente oxidado, resultando em uma converso de energia livre em glicose com uma eficincia bem maior.

2.4 Reaes Glicolticas Alternativas Os organismos podem utilizar esta rota, operando no sentido contrrio para sntese de glicose a partir de outras molculas orgnicas. A sntese de glicose atravs do reverso da rota glicoltica conhecida como gliconeognese. Gliconeognese no comum em plantas, mas pode ocorrer em algumas sementes de espcies que armazenam uma grande quantidade de carbono sob a forma de leo. Aps a germinao, muito do leo convertido em sacarose via gliconeognese, que ento usada para suportar o crescimento. 3. A ESTRUTURA DO MITOCNDRIO Em 1937, o bioqumico alemo Hans A. Krebs relatou a descoberta do ciclo do cido tricarbixlico (ATC), tambm conhecido como ciclo do cido ctrico ou ciclo de Krebs. A elucidao do ciclo ATC no explica apenas como o piruvato quebrado em CO2 e H2O; Ele tambm mostra o conceito chave dos ciclos nas rotas metablicas. O ciclo ATC ocorre na matriz do mitocondrio, que uma organela semi-autnoma. A quebra de glicose para formar piruvato libera menos energia do que 25% da energia total em glicose; a energia restante armazenada sob a forma de 2 molculas de piruvato. Os prximos dois estgios da respirao o ciclo do cido tricarboxlico e a cadeia transportadora de eltrons, juntamente com a sntese de ATP, ocorrem dentro do mitocondrio.

Fig.5 Estrutura do Mitocndrio Os mitocondrios vegetais foram originalmente identificadas pelo microscpio luminoso, porm com o advento da microscopia eletrnica, os cientistas puderam definir claramente a morfologia mitocondrial. Mitocondrios vegetais isoladas alcanam 0,5 a 1,0 m de dimetro e at 3,0 m de comprimento (Douce,1985). Em clulas intactas pode-se observar o complexo mitocondrial representado por uma membrana interna altamente retificada, em clulas animais. Em plantas, o nmero de mitocondrios por clula e est diretamente relacionado com a atividade metablica do tecido, refletindo o papel da mitocondrio no metabolismo de energia. As caractersticas ultra estuturais de mitocondrios vegetais so semelhantes quelas que so encontradas em tecidos no vegetais. A mitocondrio vegetal ( figura 5)

possui duas membranas Uma membrana lisa externa que circunda completamente uma membrana interna altamente invaginada. A fase aquosa contida dentro da membrana interna chamada de matriz mitocondrial, e a regio entre as duas membranas conhecida como espao intermembrana. As invaginaes da membrana interna chamada de crista. Assim como os cloroplastos, as mitocondrios so organelas semiautnomas, elas contm ribossomos, RNA e DNA, que codifica um limitado nmero de protenas mitocondriais. A mitocondrio se multiplica atravs de fisso de mitocondrios prexistentes e no atravs de uma nova biognese. Algumas caractersticas do sistema gentico mitocondrial no so encontrados nas mitocondrios de animais, protozorios, e alguns fungos. 4. CICLO DO CIDO TRICARBOXLICO 4.1 Reaes do ciclo do cido tricarboxlico Embora o mitocondrio possua seu prprio DNA, suas funes so muito mais dependentes das protenas codificadas pelo ncleo do citossol, que inclui todas a protenas mais importantes do ciclo do cido tricarboxlico (ATC). Este ciclo representa o segundo estgio da respirao e ocorre na matriz mitocondrial. Para iniciar as reaes deste ciclo necessria a entrada do piruvato que foi formado no citossol atravs das reaes de gliclise, porm a membrana interna da mitocondrio impermevel ao piruvato e precisa ser transportada para o seu interior. Sendo assim, existe um transportador de piruvato (monocarboxilado) que cataliza uma mudana eltrica atravs da membrana interna resultando em piruvato e OH-. Uma vez dentro da matriz mitocondrial, o piruvato descarboxilado oxidativamente pela enzima piruvato descarboxilase para produzir NADH, CO2 e cido actico. O cido actico ligado via uma ligao tioster a um cofator contendo enxofre, coenzima A (CoA), para formar acetil CoA. A enzima piruvato desidrogenase existe como um complexo de vrias enzimas que catalizam a reao global em um processo que consiste de 3 passos: descarboxilao, oxidao e conjugao do CoA. Anterior a reao a enzima citrato-sintase o acetil CoA com um cido carboxlico de 4 carbonos, oxalacetato (OAA), para formar um cido tricarboxlico de 6 carbonos, o citrato. O citrato ento isomerizado. isocitrato pela enzima aconitase, e as prximas duas reaes so sucessivas descarboxilao oxidativas, cada uma delas produzindo um NADH e liberando uma molcula de CO2 , produzindo por ltimo uma molcula de 4 carbonos, succinil CoA. At este ponto, 3 molculas de CO2 j foram produzidas para cada piruvato que entrou na mitocondrio, assim a glicose foi completamente oxidada. A figura 6 ilustra bem as as reaes do ciclo do cido tricarboxlico com as enzimas especficas e os produtos resultantes. A molcula de succinil CoA convertida em OAA, permitindo a continuao do ciclo. No incio uma grande quantidade de energia livre disponvel em ligao tioster do succinil CoA conservado atravs da sntese de ATP a partir de ADP e Pi via fosforilao a nvel de substrato catalizada pela succinil-CoA sintetase. O succinato resultante oxidado a fumarato pela succinato desidrogenase, que a nica enzima associada a membrana do ciclo ATC e considerada como um componente do complexo II da cadeia transportadora de eltrons. Os eltrons removidos do succinato foram transferidos para outro cofator, o FAD. O FAD ligado covalentemente ao stio da succinato desidrogenase e passa por uma reduo reversvel de 2 eltrons para produzir FADH2 (FAD + 2 e- + 2 H+). Ao final das duas reaes do ciclo do cido tricarboxlico, fumarato hidratado para produzir malato, que subsequente oxidado pela malato

desidrogenase para gerar OAA e produzir outra molcula de NADH. O OAA produzido agora capaz de reagir com outro acetil CoA e continuar o ciclo. A oxidao do piruvato no mitocondrio d origem a 3 molculas de CO2, e muita da energia livre liberada por estas oxidaes armazenada na forma reduzida de NAD+ (4 NADH) e FAD (1 FADH2). Em adio uma molcula de ATP produzida pela fosforilao a nvel de substrato durante o ciclo ATC. As reaes do ciclo do cido tricarboxlico que ocorrem nas plantas diferem em alguns pontos das que ocorrem em clulas animais, por exemplo, o passo catalizado pela enzima succinil CoA sintetase produz ATP em plantas e GTP em animais. No mitocondrio animal, o ATP formado por uma outra enzima que retira e transfere fosfato do GTP para o ADP.

Fig.6 Ciclo do cido ctrico 4.2 Pontos de controle do ciclo do cido tricarboxlico Trs so as enzimas que desempenham papel regulatrio no ciclo do cido ctrico. Existe tambm um ponto de controle fora do ciclo, onde o piruvato descarboxilado oxidativamente em acetil CoA, sendo inibido por ATP e NADH. Dentro do ciclo as enzimas citarto-sintetase, isocitrato desidrogenase e pelo complexo -cetoglurato-desidrogenase como pode ser observado na figura 7.

Fig.7 Pontos de controle do ciclo do cido ctrico. 4.3 Ciclo do glioxilato O acetil CoA produzido pela oxidao beta completamente metabolizado no glioxissomo atravs de uma srie de reaes que que fazem parte do ciclo do Glioxilato. Inicialmente o acetil CoA reage com o oxalacetato para produzir citrato. As enzimas que catalizam esta reao (citrato sintase e aconitase), so as mesmas do ciclo do cido tricarboxlico. Desde que haja aconitase altamente ativa no citossol, o citrato pode ser convertido a iso-citrato no citossol. As prximas reaes ocorrem dentro do glioxissoma. O isocitrato (6C) convertido em succinato (4C) e glioxilato (2C). Depois a enzima malato sintase combina uma segunda molcula de acetil CoA com glioxilato para produzir malato (figura 8). A funo do ciclo do glioxilato converter duas molculas de acetil CoA em succinato, este ento se move para o mitocondrio, onde convertido a malato atravs do ciclo do cido tricarboxlico. O malato resultante pode ser oxidado a oxalacetato pela malato desidrogenase no citossol, e o oxalacetato convertido em carboidrato.

Fig. 8 Ciclo do Glioxalato 5. CADEIA TRANSPORTADORA DE ELTRONS Para cada molcula de glicose atravs da gliclise e do ciclo ATC, 2 molculas de NADH so geradas no citossol, e 8 molculas de NADH mais 2 molculas de FADH2 (associada com succinato desidrogenase) aparecem na matriz mitocondrial. A cadeia transportadora de eltrons catalisa o fluxo de eltrons do NADH ( e FADH2 ) para o O2, o aceptor final de eltrons no processo respiratrio (figura 9). A transferencia de 2 eltrons do NADH representado a seguir: NADH + H+ + 1/2 O2 NAD+ + H2O A partir do ponto mdio do potencial de reduo para ligao NADH-NAD+ (-320mV) e a ligao H2O-1/2 O2 (+810mV), a energia livre padro liberada durante esta reao (-n F E0) aproximadamente 220 kJ mol-1 (52 kcal mol-1) por 2 eltrons. O potencial de reduo do FADH2-FAD (-45 mV) alguma coisa maior do que o do NADH-NAD+, apenas 167,5kJ mol-1 (40 kcal mol-1) liberada para cada 2 eltrons gerados durante a oxidao do succinato. O papel da cadeia transportadora de eltron realizar a oxidao do NADH (e FADH2). A cadeia transportadora de eltrons contm aproximadamente os mesmos sitio de carreadores de eltrons encontrado em mitocondrios no vegetais. As protenas individuais que transportam eltrons so organizadas em um srie de quatro complexo de multiprotena (complexo I a IV), cada um localizado no interior da membrana mitocondrial. Eltrons do NADH gerados na matriz mitocondrial durante o ciclo ATC so oxidados pelo complexo I (NADH desidrogenase), que transfere estes eltrons para a ubiquinona.

Fig.9 Gradiente de prtons formado na membrana mitocondrial interna como resultado do transporte de eltrons. A enzima succinato desidrogenase do ciclo ATC um componente do complexo II, ento os eltrons derivados da oxidao do succinato so transferidas via FADH2 e um grupo de trs protenas ferro-enxofre para o pool da ubiquinona. O complexo III age como um ubiquinol: citocromo c oxidoredutase, oxidando a ubiquinona reduzida (ubiquinol) e transferindo eltrons via centro ferro-enxofre. A sntese de ATP no mitocondrio est unida ao transporte de eltrons para o oxignio via complexo I at o complexo IV, e o nmero de ATP sintetizado depende da natureza do doador de eltrons. Com mitocondrio isolado, os eltrons derivados do NADH da matriz mitocondrial apresentaram uma relao ADP:O de 2,4 a 2,7. A energia liberada para sntese de ATP produzida por uma reao de xidoreduo, a converso de ADP e Pi para produzir ATP chamada de Fosforilao Oxidativa. A completa oxidao da hexose leva a formao de 4 molculas de ATP atravs da fosforilao ao nvel se substrato (duas durante a gliclise e duas no ciclo do cido tricarboxlico), 2 molculas de NADH no citossol, e 8 de NADH mais 2 molculas de FADH2 (via succinato desidrogenase) na matriz mitocondrial. Sobre a base de valores da relao ADP:O medida, um total de aproximadamente 28 molculas de ATP sero geradas por hexose pela fosforilao oxidativa. O resultado um total de 32 molculas de ATP sintetizadas por hexose. Entretanto, o nmero exato de ATP sintetizado por 2 eltrons controvertido. A relao ADP:O uma funo do nmero de prtons translocados por 2 eltrons, multiplicados pelo nmero de ATP sintetizados por prton translocado, podendo no ser um valor integral. Se cianeto (1mM) adicionada em tecidos animais em respirao ativa, o citocromo c oxidase inibida e a taxa de respirao cai drasticamente. Entretanto, muitos tecidos vegetais mostram um nvel de respirao resistente a cianeto que atinge 10 a 25% e em alguns tecidos at 100% da inibio controlada. A enzima responsvel por esta inibio a oxidase resistente a cianeto componente da cadeia de eltrons da mitocondria chamada de oxidase alternativa (Siedow & Umbach, 1995). A oxidase alternativa catalisa uma reduo de quatro eltrons do oxignio para a gua e especificamente inibida por vrios compostos. Quando os eltrons passam para a rota alternativa a partir da ubiquinona, dois stios de conservao de energia (complexo III e IV) so desviados, e no h formao de ATP. No h stio de conservao de

energia na rota alternativa entre a ubiquinona e o oxignio, a energia que seria armazenada na forma de ATP perdida por calor quando os eltrons so desviados a partir da rota alternativa. 6. A VIA DA PENTOSE FOSFATO A rota glicoltica no a nica rota disponvel para a oxidao da glicose nos citossol de clulas vegetais. A via oxidativa da pentose fosfato pode tambm executar essa funo, usando enzimas que so solveis no citossol. As primeiras duas reaes dessa serie representam as reaes oxidativas, convertendo glicose-6-fosfato em um acar de cinco carbono, ribulose-5-fosfato, com a perda de um CO2 e produo de duas molculas de NADPH. As reaes restantes convertem a ribulose-5-fosfato em gliceraldeido-3-fosfato e frutose-6-fosfato. A figura 10 mostra esta via. As trioses e hexoses produzidas na via pentose podem ser utilizadas com facilidade na via glicoltica. A via oxidativa das pentose fosfato desempenham vrios papeis no metabolismo vegetal: 1. 1. Produzir o nucleotdeo NADPH, e esse NADPH levado a reaes de reduo associado, para suprir a sua demanda, j que o fotossntese no produz NADPH suficiente para as reaes biossnteticas que ocorrem no citossol. 2. 2. Entretanto, a NADPH desidrogenase contida no citossol da membrana interna do mitocondrio tambm capaz de oxidar NADPH. Os eltrons do NADPH podem reduzir O2 e gerar ATP. 3. 3. A via oxidativa das pentoses fosfato esta envolvida na gerao de intermedirios no ciclo de Calvin 4. 4. A via tambm produz ribose-5-fosfato, um precurssor da ribose e desoxirribose necessria na sntese de RNA e DNA respectivamente. A via oxidativa das pentose fosfato controlado pela reao inicial catalisada pelo glicose-6-fosfato desidrogenase. Entretanto medidas da atividade da enzima desta via em tecidos verdes so complicadas pelo fato que muito da atividade cataltica esta tambm associado com enzima e cloroplasto que catalisa as reaes da rota redutiva da pentose fosfato, ou do ciclo de Calvin.

Fig. 10 Via Pentose Fosfato.

7. BALANO ENERGTICO DA RESPIRAO


Via de ATP Gliclise 8 Piruvato-Acetil CoA 6 Ciclo de Krebs 24 Total de ATP 38 NADH 2 2 6 10 x 3 = 30 0 2 2 x 2 =4 Ubiquinol 0 ATP Total 2 0 2 4

8. 8.

RESPIRAO PS-COLHEITA

8.1 Padres de atividade respiratria De acordo com o tipo de respirao que os frutos apresentam, estes podem ser classificados em dois grupos distintos, ou seja, os no climatricos e os climatricos.

So considerados frutos no climatricos os que apresentam um contnuo declnio na taxa de respirao em funo do tempo. Dentre eles, tem-se: limo, laranja, abacaxi, morango (Biale, 1960). Frutos no climatricos somente amadurecem enquanto estiverem ligados planta. Aps a colheita, eles no melhoram suas qualidades de excelncia e nutricional, embora um leve amolecimento e perda de colorao verde possam ocorrer (Medlicotti, 1986). Neste caso no existe nenhuma relao entre a respirao e as mudanas que se manifestam com a maturao dos frutos (Aragn et al., 1984). Segundo Awad(1990), frutos climatricos tem um aumento rpido e significativo da taxa respiratria durante a maturao. As etapas desse aumento so: pr-climatrico, mnimo pr-climatrico, aumento climatrico, pico climatrico e ps-climatrico. Dentre os frutos climatricos podemos citar: pra, abacate, banana, tomate. 7.2 8.2 Fatores que influenciam a respirao

a)Tipo de produto Cada espcie possui sua taxa respiratria prpria. E, mesmo dentro da mesma espcie a atividade respiratria pode variar entre as cultivares de determinado produto. De acordo com Biles et al (1993) a taxa respiratria de pimenta cultivar Chiltepin e cultivar Tabasco foram maiores do que as cultivares Chooraehong e New Mexican b) b) Relao superfcie/volume Quanto maior for a relao superfcie/volume, maior ser a respirao do vegetal. Assim, se se comparar a taxa respiratria de uma alface comum com a de uma alface de cabea, constata-se que a primeira apresentar uma maior evoluo de CO 2. Isto porque tem uma maior superfcie de exposio s trocas gasosas. c) Temperatura A intensidade respiratria de frutos e hortalias aps a colheita est intimamente relacionada temperatura. Ela pode interferir diretamente na velocidade da reao dos processos metablicos, no tempo de armazenamento, bem como causar distrbios fisiolgicos (chilling). A atividade respiratria reduzida pelo uso de baixa temperatura. Em frutos climatricos, o abaixamento da tempertaura retarda o pico climatrico e reduz sua intensidade podendo o mesmo ser totalmente suprimido na faixa de temperatura prxima ao limite fisiolgico de tolerncia do fruto (Chitarra, 1990). De acordo com Amorim (1985), entre temperaturas de 5 a 25C o quociente de temperatura (Q10) se situa entre 2,0 e 2,5. A temperatura influencia a velocidade de uma reao biolgica. De acordo com a Lei de VantHoff, a cada 10C na variao da temperatura a velocidade das reaes metablicas aumenta em 2 a 3 vezes, dentro da faixa fisiolgica de temperatura. Hardenburg (1971), constatou que a taxa respiratria de pessgos embalados com polietileno, foi reduzida com a diminuio da temperatura. Verificou-se que a taxa respiratria foi reduzida de 72mg para 5mg CO2.Kg-1.h-1 ao abaixar-se a temperatura de 21 para 0C, respectivamente. d) Concentrao de oxignio

Uma vez que o oxignio do ar o componente mais importante para que se realize a respirao aerbica, deve estar disponvel em quantidade adequada. Se restringido o acesso do oxignio aos frutos, ocorrer a fermentao, que acompanhada da produo de odores e sabores desagradveis (Mitchell et al., 1972)

Substncias de reserva (amido e acares) Fermentao (CO2, lcool, e sabor odor desagradveis)

Ausncia de oxignio cido pirvico

Oxignio

Ciclo dos cidos orgnicos

CO2, H2O, calor, textura, sabor e odor normais

A fermentao pode ser evitada, armazenando-se os frutos em contentores bem ventilados. A ventilao adequada (disponibilidade de oxignio) est diretamente relacionada ao: tipo de embalagem e contentores utilizados para transportar ou armazenar o produto; e, quantidades de ceras artificiais aplicadas s frutas. Entretanto, a reduo na concentrao de oxignio uma tcnica muito til para controlar a taxa de respirao das frutas. Este o princpio utilizado no armazenamento em atmosfera controlada ou modificada (Pantastico, 1975) e no armazenamento hipobrico (ou baixa presso) dos produtos perecveis (Crucefix, 1986). O consumo de oxignio pela fruta pode ser utilizado para se determinar sua taxa de respirao. O resultado expresso em ml O2.Kg-1.h-1 ou l O2.g-1.h-1. Geralmente a concentrao de oxignio deve ser reduzida a menos de 10% para obteno de efeito positivo na reduo da respirao. No entanto, so necessrios

cuidados para que no se atinjam nveis de oxignio que promovam a respirao anaerbica, associada ao desenvolvimento de aroma e sabores desagradveis e quebra de componentes estruturais dos tecidos, o que provoca perda de firmeza do produto. Alm disso, o nvel mnimo de oxignio em que certo produto pode ser armazenado sem problemas no constante, mas dependente da temperatura e da resistncia da epiderme difuso do oxignio (Dadzie et al., 1993). e) Concentrao de gs carbnico De acordo com Chitarra (1990), a adio de CO2 ao ar ou ao O2 em concentraes superiores do ar, prolonga o processo de maturao tanto em frutos climatricos como em no climatricos, sendo o efeito uma funo da concentrao de CO 2. Nveis de 5 a 10% de CO2 diminuem a atividade respiratria e retardam o incio do climatrio. Nveis muito elevados de CO2 causam injrias aos tecidos. Bender et al (1994) observaram que concentraes de 50% e 70% de CO2 aumentaram a taxa de produo de etanol em mangas armazenadas a 12C. f) Acmulo de etileno O etileno considerado um hormnio de amadurecimento de frutos e fisiologicamente ativo em quantidades iguais a 0,1 ppm (Abeles, 1973). Reduzindo o O2 a nveis menores que 8% a produo de etileno reduzida em frutas e hortalias. O O2 necessrio para a sntese e ao do etileno, uma vez que sob condies anaerbicas a converso do ACC (cido 1aminociclopropanocarboxlico) etileno inibida, promovendo um acmulo de ACC no tecido, uma vez que a passagem de metionina a ACC ocorre mesmo na Ausncia de O2. Altas concentraes de CO2, por sua vez, pode reduzir, promover ou no ter nenhum efeito na taxa de produo de etileno pelo fruto, dependendo do produto e da concentrao a que este exposto. Em alguns frutos, ocorre um acmulo de CO2 nos espaos intercelulares e este funciona como um antagonista natural do etileno (Kader, 1992) g) Injrias mecnicas Todo e qualquer tipo de leso mecnica s frutas e hortalias pode causar um estmulo na atividade respiratria. De modo geral, frutos climatricos so mais susceptveis influncia deste fator, pois a estimulao da respirao devido s leses fsicas provavelmente est relacionada ao efeito indireto do etileno. Isto porque os tecidos vegetais em deteriorao produzem mais etileno que os sadios. A ocorrncia de danos mecnicos nos tecidos minimamente processados inevitvel, uma vez que o produto descascado e/ou picado. De acordo com Moretti (1999), frutos de pimento minimamente processados armazenados 2C apresentaram elevao significativa da atividade respiratria logo aps o processamento, sendo trs vezes maior do que os frutos intactos armazenados sob a mesma condio. 7.3 8.3 Tcnicas ps-colheita para reduzir a respirao

a) Reduo da temperatura Pr-resfriamento

Tem por finalidade a remoo rpida do calor de campo dos produtos recmcolhidos, antes do transporte, armazenado ou processamento. Quando realizado de modo adequado restringe as atividades enzimticas e respiratria, entre outros benefcios (Chitarra, 1990). Refrigerao A refrigerao o mtodo mais econmico para o armazenamento prolongado de frutos e hortalias frescos (Chitarra, 1990). O abaixamento da temperatura diminui a velocidade do metabolismo respiratrio. Os frutos que apresentam uma taxa respiratria baixa apresentam de maneira geral, melhor conservao nas baixas temperaturas. Os frutos de origem tropical possuem taxas respiratrias altas, toleram menos temperaturas muito baixas e podem ser conservados apenas durante pouco tempo (Awad, 1990). b) Alterao na composio atmosfrica Atmosfera modificada A atmosfera modificada, juntamente com o uso da refrigerao, pode atrasar o amadurecimento dos frutos, estendendo, assim, sua vida ps-colheita (Coelho, 1994). De acordo com este autor, o processo de respirao do produto armazenado em embalagens de polietileno consome oxignio e causa acmulo de gs carbnico e gua, o que reduz o metabolismo, a sntese e a ao do etileno, e consequentemente, evita a perda de gua pela transpirao (perda de peso) e o enrugamento. Oliveira et al (1996) observaram que frutos de goiaba tratados com pelcula de fcula de mandioca 1 e 2% apresentaram menores valores de taxa respiratria em relao ao tratamento testemunha. Atmosfera controlada O processo de atmosfera controlada implica na adio ou remoo de gases, resultando em uma composio atmosfrica diferente da atmosfera normal do ar (Kader, 1980). Kim (1976), observou que tomates inicialmente armazenados em atmosferas contendo 2,5% ou 15% de O2 produziam taxas baixas de CO2 e etileno e, consequentemente, a maturao foi retardada. A seguir, expondo os frutos a uma atmosfera normal (ar), o desenvolvimento da maturao foi normalizada. c) Reguladores vegetais As auxinas, giberelinas e citocininas, tm sido estudadas com interesse particular por funcionarem total ou parcialmente como retardadores da senescncia de frutos. A aplicao de giberelina em banana, retarda o amadurecimento, com manuteno do teor de clorofila na casca, firmeza do fruto e baixa taxa respiratria (Chitarra, 1990). Golding (1999) verificaram que a aplicao de 1-MCP ( Metilciclopropeno) em bananas retardou o incio do pico do etileno e reduziu a taxa respiratria, atrasnado o amadurecimento. d) Colheita no estdio ideal Frutos climatricos devem ser colhidos durante o estgio mnimo climatrico, onde sua taxa respiratria baixa. Caso sejam colhidos na fase climatrica (alta taxa respiratria) poder apresentar uma rpida taxa de deteriorao antes da comercializao (Chitarra, 1990) e) Mnimo manuseio do produto

O manuseio excessivo e inadequado de produtos hortcolas pode ocasionar injrias no tecido vegetal, aumentando a taxa respiratria.

8. 9.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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