UNIVERSIDADE PRESIDENTE ANTNIO CARLOS COORDENAO DE ESTGIO PROFESSOR ORIENTADOR: Tlio Lage ESTAGIRIO(A): Stfani Pelinson Campos

MICROBIOLOGIA CLNICA

RELATRIO DE ESTGIO CURRICULAR - I

EMPRESA: UNIPAC SETOR: de Microbiologia PERODO DE REALIZAO: 20/05/2011 a 03/06/2011 TOTAL DE DIAS: 5 dias TOTAL DE HORAS: 25 horas NOME DO(A) SUPERVISOR(A): Tlio Lage FUNO: Professor / Supervisor de estgio FORMAO PROFISSIONAL: Bacharel e licenciado em Biologia

Ipatinga - MG 2011

SUMRIO

1 INTRODUO.......................................................................................................................02 1.1 Objetivo.................................................................................................................................03 2 APRESENTAO DA EMPRESA...........................................................................................04 3 SNTESE DA CARGA HORRIA SEMANAL.......................................................................05 4 RELATRIO DESCRITIVO...................................................................................................06 4.1 Atividades desenvolvidas.........................................................................................................06 4.2 Mtodos e Procedimentos...........................................................................................................06 5 CONCLUSO..........................................................................................................................09 REFERNCIAS..............................................................................................................................11

1 INTRODUO

Nos ultimos 30 anos, a Microbiologia e Imunologia evoluiram admiravelmente como ciencia multidisciplinares, em relao estreita com a Biologia Molecular.

(MICROBIOLOGIA.UFRJ,2010) A Microbiologia classicamente definida como a rea da cincia que dedica-se ao estudo de organismos que somente podem ser visualizados ao microscpio. Com base neste conceito, a microbiologia aborda um vasto e diverso grupo de organismos unicelulares de dimenses reduzidas, que podem ser encontrados como clulas isoladas ou agrupados em diferentes arranjos (SHAECHTER et al, 2002). Assim, a microbiologia envolve o estudo de organismos procariticos (bactrias, archaeas), eucariticos (algas, protozorios, fungos) e tambm seres acelulares (vrus).No campo da Microbiologia Geral, enormes progressos foram realizados com referencia a anatomia quimica e morfologica da celula bacteriana, a biossintese da macromolecula e a genetica. Tudo isso contribui fundamentalmente a Genetica Moderna (PROCEDIMENTOS BSICOS EM MICROBIOLOGIA CLNICA PUBLICADO, 2004). O objetivo dos estudos no setor de Microbiologia para nos estagiarios ter uma visao ampla das principais tecnicas e metodos dentro de um laboratorio, com fins diagnosticos. Observa-se tambem uma padronizao e simplificao da metodologia utilizada na identificao dos microorganismos.

1.1 Objetivos Conhecer a rotina de um laboratrio de microbiologia. Aprender como preparar diferentes meios de culturas. Aprender como inocular micro-organismos em diferentes meios de cultura. Aprender como confeccionar e corar lminas. Aprender a identificar os micro-organismos.

2 APRESENTAO DA EMPRESA

A UNIPAC instalou-se em Ipatinga no ano de 1993. Em 12 de maro de 1997, os campi transformaram-se em universidade, sendo autorizada pelo Conselho Estadual de Educao, homologada pela Secretaria de Estado da Educao de Minas Gerais e Portaria do MEC n 366. As atividades da UNIPAC Ipatinga iniciaram-se em 2000, como Faculdade Regional do Vale do Ao (FARV), unidade do campus III. O funcionamento da FARV foi autorizado no dia 6 de julho de 2000, na reunio extraordinria do Conselho de Ensino, Pesquisa e Extenso, da Universidade Presidente Antnio Carlos. Os cursos de graduao ministrados so: Administrao, Biomedicina, Cincia da Computao, Cincias Contbeis, Educao Fsica, Enfermagem, Engenharia Ambiental, Engenharia Civil, Engenharia de Produo, Engenharia Qumica, Farmcia, Fonoaudiologia, Psicologia, Servio Social, Sistemas de Informao e Turismo. H tambm os cursos de extenso e de ps-graduao latu sensu. O campus de Ipatinga est localizado no bairro Bethnia, rua Salermo, n299. A sua estrutura fsica composta por dois prdios (A e B) tendo trs andares cada e h um terceiro prdio em construo. O estgio em Microbiologia Clnica foi realizado no laboratrio 417, de parasitologia e de microbiologia, localizado no terceiro andar do prdio B. O laboratrio conta com uma sala ampla, bem iluminada e com ar-condicionado. Ele possui pia com materiais para a assepsia das mos e de vidrarias; bancadas de mrmore equipadas para a realizao de exames microbiolgicos; trs longas bancadas de madeira, nas quais ficam os microscpios; duas geladeiras; uma televiso e DVD; armrios de madeira para armazenar as vidrarias, produtos qumicos e materiais de escritrio; e equipamentos de laboratrio como estufa, capela de fluxo laminar, micro-ondas, banho-maria e centrfuga.

3 SNTESE DA CARGA HORRIA SEMANAL

Semana 18/06/11 20/06/11 a 22/06/11 30/06/2011

Nmero de dias 01 03 01

Nmero de horas 05 15 05

4 RELATRIO DESCRITIVO

4.1 Atividades desenvolvidas Orientao sobre normas de biossegurana e controle de qualidade em laboratrio de microbiologia. Orientao sobre coleta, transporte e conservao de amostras. Meios de cultura: orientao e elaborao de meios slidos e lquidos. Semeadura em meios slidos e lquidos. Semeadura qualitativa e quantitativa. Incubao: atmosfera, temperatura e tempo. Antibiograma: orientao e execuo. Anlise do crescimento de colnias de microrganismos: tamanho, cor, forma, tipo de hemlise. Mtodos de colorao em microscopia: colorao de gram e colorao Ziehl-Neelsen Identificao de cocos: Streptococcus, Staphylococcus e Enterococcus. Identificao preliminar: semeadura em meio gar sangue Provas para identificao de Staphylococcus: Prova da catalase, prova da coagulase, crescimento em gar manitol, antibiograma com novabiocina. Provas para identificao de Streptococcus e Enterococcus: Teste de CAMP, Teste da Bile Esculina, Tolerncia em BHI NaCl 6,5%, antibiograma com Bacitracina e Optoquina. Idnetificao de enterobactrias: Semeadura em meio preliminar e em meios seletivos, Orientao sobre as provas bioqumicas para identificao de enterobactrias. Utilizao Mtodo de Rugai e do Bactray 4.2 Mtodos e procedimentos

Normas de biossegurana e controle de qualidade em laboratrio de microbiologia

As atividades bsicas de um Laboratrio de Microbiologia consistem em Elaborar e viabilizar normas para colheita, conservao e transporte de material de interesse clnico; Estabelecer e executar rotinas microbiolgicas, dentro dos padres tcnico-cientficos vigentes, que permitam o isolamento e identificao dos principais agentes infecciosos de importncia clnica, por gnero e, se possvel, por espcie; Determinar a sensibilidade s drogas antimicrobianas; Efetuar o controle de qualidade de suas atividades e dos processos de

esterilizao; Divulgar e pr em prtica normas de biossegurana; Participar junto com a Comisso de Controle de Infeco Hospitalar do rastreamento epidemiolgico dos surtos de infeco hospitalar; Fornecer periodicamente dados relacionados com a etiologia das infeces hospitalares e da resistncia s drogas; Executar outras atividades afins de natureza no rotineira e de relevncia em determinadas situaes como, por exemplo, estudos microbiolgicos de materiais inanimados, portadores, desinfetantes, etc. Sobre a Segurana em Laboratrio de Microbiologia foram apresentados situaes em que nos tempos modernos incorporaram considerveis avanos nos trabalhos do Laboratrio de Anlises Clnicas. O aumento do nmero de amostras analisadas e o incremento da demanda, a par da introduo de diversos aparelhos analticos nas rotinas do laboratrio, determinaram cuidados mais criteriosos e expressiva preocupao com os nveis de segurana nessas rotinas de trabalho.

Coleta, transporte e conservao de amostras Todo resultado liberado pelo laboratrio de microbiologia conseqncia da qualidade da amostra recebida. O material coletado deve ser representativo do processo infeccioso investigado, devendo ser eleito o melhor stio da leso, evitando contaminao com as reas adjacentes. A coleta e o transporte inadequados podem ocasionar falhas no isolamento do agente etiolgico e favorecer o desenvolvimento da flora contaminante, induzindo a um tratamento no apropriado.Portanto, procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um falso agente etiolgico, resultando numa orientao teraputica inadequada.O profissional responsvel pela coleta ser tambm responsvel por identificar de forma legvel e correta o material a ser encaminhado ao laboratrio de microbiologia. Na amostra devem estar identificado; Nome e registro do paciente; Leito ou ambulatrio e especialidade; Material colhido; Data, hora e quem realizou a coleta Quem coleta o material deve ser devidamente treinado e periodicamente reciclado nesta atividade. Deve saber que o material dever ser destinado, o mais brevemente possvel, ao laboratrio. Deve conhecer ou obter instrues sobre conservao e/ou transporte do material caso este no possa ser realizado imediatamente. As consideraes gerais da coleta microbiolgica so colher antes da antibioticoterapia, sempre que possvel, instruir claramente o paciente sobre o procedimento, Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais clnicos, Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha maior probabilidade de ser isolado, considerar o estgio da

doena na escolha do material. Patgenos entricos causadores de diarria, esto presentes em maior quantidade e so mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarrica do processo infeccioso intestinal. Na suspeita de febre tifide, a fase da doena ir determinar o melhor local da coleta (sangue/fezes). Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anlise microbiolgica. Caso a quantidade seja pequena, priorizar os exames. O pedido do exame deve conter as informaes necessrias.

Meios de cultura: orientao e elaborao de meios slidos e lquidos Os meios de cultura (preparaes slidas, lquidas ou semi-slidas que contm todos os nutrientes necessrios para o crescimento de microrganismos) so utilizados com a finalidade de cultivar e manter microrganismos viveis no laboratrio, sob a forma de culturas puras. Os meios de cultura devem ter na sua composio, os nutrientes indispensveis ao crescimento do organismo em questo, sob forma assimilvel e em concentrao no inibitria do crescimento. Alm disso, aps a sua preparao, cada meio de cultura deve ser submetido a esterilizao, por forma a eliminar qualquer organismo vivo contaminante. Por outro lado, para manter uma cultura pura, necessrio que o meio de cultura que se pretende utilizar seja mantido desprovido de qualquer organismo vivo contaminante. Para a preveno de contaminaes durante a manipulao de culturas puras recorre-se a tcnicas de assepsia. De um ponto de vista geral, os meios de cultura podem ser classificados tendo em conta o seu estado fsico, a sua composio qumica e os objectivos funcionais a que se destinam. A especificidade dos meios de cultura muito importante, nomeadamente no isolamento e identificao de certos microrganismos (por exemplo, no isolamento de microrganismos do solo) ou em testes de sensibilidade a antibiticos ou na anlise microbiolgica de guas, de alimentos, etc. Semeadura em meios slidos e lquidos

A escolha da tcnica para o cultivo de microrganismos varia de acordo com o tipo de meio de cultura e a finalidade do cultivo, porm algumas regras devem ser seguidas nas inoculaes. A agulha e ala de nquel-cromo (tambm chamada de agulha e ala de platina) devem ser esterilizadas por flambagem antes e aps qualquer cultivo, deve se ter cuidado ao esfri-las antes da coleta, Os recipientes devem sempre ser abertos prximos chama do bico

de Bunsen, Deve-se evitar ao mximo que as tampas dos tubos e placas fiquem sob a bancada durante o cultivo. Para garantir uma semeadura correta, deve-se evitar ao mximo perfurar ou rasgar o gar, pois poder ocorrer acmulo de bactrias neste setor do meio alm de alterar as condies de crescimento bacteriano. Em meio lquido seque o procedimento de mergulhar a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada, aps mergulhe a ala carregada de bactrias no tubo com o meio de cultivo e agite a ala. Meio semi-slido mergulha-se a Agulha de nquel-cromo esterilizada na cultura bacteriana que lhe fornecida. Faz-se uma injeo com a agulha carregada com bactrias no meio de cultivo semi-slido. Meio slido (gar inclinado) Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada. Encoste levemente a ala na parte mais baixa do plano inclinado e suba fazendo estrias na superfcie do gar.

Semeadura qualitativa e quantitativa As placas so organizadas sobre as bancadas conforme o material a ser semeado. Quando a amostra for lquida deve-se homogeneiz-la. No caso de secrees se escolhe a parte mais purulenta, e das feridas a parte com sangue, muco ou pus. A semeadura feita com um Swab ou ala bacteriolgica flambada e estril, o material descarregado no canto da placa e os movimentos realizados em sua superfcie visam obter o isolamento de todas as diferentes colnias. Incubao: atmosfera, temperatura e tempo

O crescimento dos microrganismos grandemente afetado pelas condies fsicas e qumicas do ambiente onde se encontram, sendo que estas podem influir positivamente ou negativamente de acordo com o microrganismo em questo. A Temperatura corresponde a um dos principais fatores ambientais que influenciam o desenvolvimento bacteriano. A medida que h um aumento da temperatura, as reaes qumicas e enzimticas na clula tendem a tornar-se mais rpidas, acelerando a taxa de crescimento. Entretanto, em determinadas temperaturas inicia-se o processo de desnaturao de protenas e cidos nuclicos, inviabilizando a sobrevivncia celular. Assim, todos os microrganismos apresentam uma faixa de temperatura onde desenvolvem-se plenamente.

A faixa de temperatura pode determinar as temperaturas mnima, tima e mxima (temperaturas cardeais), para cada microrganismo. A temperatura mxima provavelmente reflete os processos de desnaturao mencionados acima, enquanto os fatores que determinam a temperatura mnima ainda no so bem conhecidos, embora certamente a fluidez da membrana seja um dos fatores determinantes destes nveis trmicos baixos.

Provas para identificao de Staphylococcus

Provas para identificao de Streptococcus e Enterococcus Teste de CAMP

Neste teste inoculada uma estria central de uma amostra de Staphylococcus aureus produtor de beta lisina no centro de uma placa de gar sangue. Em um ngulo reto que no toque a estria central inoculam-se amostras que sero testadas. A placa incubada para depois ser analisada. Caso haja a presena de Streptococcus agalactiae a amostra ser positiva com o aparecimento de uma zona de lise.

Teste da Bile Esculina

A colnia semeada em gar Bile Esculina, e incubada por at 24 horas a 35C, caso esteja presente na amostra o S. bovis ou o Enterococcus sp., ela ser positiva e ir apresentar cor marrom escuro.

Mtodos de colorao em microscopia

Colorao de Gram

Esta colorao realizada sempre que se utiliza um meio de cultura no seletivo, ou quando se deseja a confirmao entre a classificao morfotintorial e o meio utilizado. Tambm usado para classificar bactrias com base no tamanho, morfologia celular e comportamento diante dos corantes.

Neste teste as lminas recebem em sequncia, pelo intervalo de 30 segundos a 1 minuto os reagentes Cristal Violeta, Lugol, Descolorante e Contracorante. Depois de lavadas e
secas, podem ser analisadas no microscpio.

Prova da Catalase

Com a ala bacteriolgica coleta-se o centro de uma colnia suspeita e esfrega-se em uma lamina de vidro. Sobre este esfregao coloca-se uma gota de gua oxigenada a 3% e observa-se a formao de bolhas. Se houver formao de bolhas, a prova considerada positiva para cocos Gram positivos.

Prova da Coagulase

Em uma lmina so colocadas 2 gotas de soluo salina na qual adicionada uma colnia a ser analisada, e em seguida adiciona-se 1 gota de plasma. Caso seja observada uma aglutinao em at 10 segundos com formao de precipitado granuloso ou de grumos brancos, a amostra considerada positiva para S. aureus.

Antibiograma

Em uma placa de gar Muller Hinton semeada um micro-organismo. Depois so colocados em pontos afastados entre si, discos de antibiticos diferentes e a placa incubada na estufa. Depois do perodo de incubao so medidos o tamanho dos halos provocados pelos antibiticos, caso o halo seja grande significa que a bactria sensvel a aquele antibitico, caso o halo seja pequeno ou inesistente significa que a bactria possui resistncia ao antibitico. Por meio do antibiograma possvel realizar o teste do disco de Novobiocina para identificar estafilococos coagulase negativa, de acordo com a sensibilidade ou resistncia a este antibitico; o teste da Bacitracina e da Optoquina.

Anlise do crescimento de colnias de microrganismos Identificao de cocos: Streptococcus, Staphylococcus e Enterococcus Identificao preliminar: semeadura em meio gar sangue

Identificao de enterobactrias

5 CONCLUSO

O Estgio Supervisionado em microbiologia, foi muito importante em nvel de conhecimentos e experincia profissional. foi um perodo em que buscamos vincular aspecto terico com aspectos prticos. Os Exames de microbiologia se mostram importantes, principalmente para o tratamento eficaz de infeces bacterianas para que no ocorra o uso errneo dos antibiticos. A partir do estgio que uma ferramenta de aperfeioamento das tcnicas e procedimentos tericos aprendidos em sala de aula foi-nos concebido um conhecimento impar, pois ficou comprovada a compatibilidade da formao acadmica oferecida com a prtica executada em campo. Toda a programao foi realizada a contento, onde foi estabelecido um

clima de realizao e verificado em que farmacutico uma ferramenta indispensvel para o bom andamento dos procedimentos. Sendo assim o estgio foi satisfatrio para uma melhor aprendizagem. Nos mostrando sobre a responsabilidade que cabe ao Farmacutico na liberao de laudos.

REFERNCIAS Edio nova com modificaes no contedo e no ttulo, tendo como base o Manual de Procedimentos Bsicos em Microbiologia Clnica publicado em 2000. ed. 2004. Tiragem: 200 exemplares em CD SCHAECHTER, Moselio et al. Microbiologia: mecanismos das doenas infecciosas. 3. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO . Microbiologia / Ancestralidade comum na produo de cristais em bactrias magnetotticas. Disponivel em : <http://www.microbiologia.ufrj.br/index.asp>. acesso em: 28 julho 2011.