26, pp.

149-158, ISSN 1405-2768; México, 2008

AVALIAÇÃO DE DOIS PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM TRÊS

MACRÓFITOS AQUÁTICOS EXPOSIDOS A COBRE

Nayeli Ismene Armendáriz Sáenz, Maria Teresa Aquino Terrazas,

Lauraceli Romero Ortiz, Mayra Luz Sánchez Villavicencio, Alma Socorro
Sobrino Figueroa 1 e Maria Guadalupe Miranda Arce 1

1 Departamento de Hidrobiologia, Divisão de Ciências Biológicas e da Saúde Universidade

Autónoma Metropolitana-Iztapalapa. San Rafael Atlixco No. 186,
Coronel Vicentina. CP 09340. Delegação de Iztapalapa, DF, México.

R RESUMO PARA BSTRACT

O lago Pátzcuaro em Michoacán recebe O lago Patzcuaro, em Michoacan, México, recebe

continuamente descargas urbanas de água,
fertilizantes e biocidas. Esta circunstância
contribuiu para o aumento do teor de cobre (Cu)
no corpo de água. Embora o Cu seja um
micronutriente essencial para as plantas, em altas
concentrações é tóxico, afetando sua fisiologia e
desenvolvimento. O objetivo deste trabalho foi
avaliar o teor de clorófilos e açúcares livres totais,
dois parâmetros de resposta ou biomarcadores,
determinados por métodos colorimétricos em três
macrófitas aquáticas comuns no lago Pátzcuaro: Eichhornia
crassipes, Ranunculoides de Hydrocotyle y Lemna
crassipes ( Martius) Solms Laubach., Hidrocotilo
ranúnculos L. e Lemna gibba L. Os resultados
obtidos mostraram que tanto as clorofilas quanto
os açúcares livres totais variaram em função do
aumento de Cu no meio nutriente; no entanto, os
açúcares livres totais se mostraram o parâmetro
de resposta mais adequado para detectar
alterações fisiológicas neste bioensaio.
continuamente fluxos de águas residuais, fertilizantes
e biocidas. Esta circunstância contribuiu para o
aumento do cobre (Cu) dentro do corpo d'água.
Embora o Cu seja um micronutriente essencial para
as plantas, em altas concentrações é tóxico, afetando
sua fisiologia e desenvolvimento. O objetivo deste
trabalho foi avaliar, por métodos colorimétricos, o
conteúdo de clorofilas e açúcares livres totais, dois
parâmetros de resposta ou biomarcadores, em três
macrófitas aquáticas comuns no lago Patz-cuaro: Eichhornia
gibba. Os resultados mostraram que ambos os tipos de
clorofilas, bem como o total de açúcares livres,
variaram em função do aumento do Cu na solução
nutritiva; No entanto, os açúcares livres totais foram o
parâmetro de resposta mais útil para detectar
alterações fisiológicas neste bioensaio.

Palavras-chave: clorofila, açúcares, cobre,

biomarcadores, macrófitas aquáticas.
Palavras chave: clorofila, açúcares, cobre,
biomarcadores, macrófitas aquáticas.

149
 No. 26: 149-158
Eu NTRODUÇÃO
Em nosso país, a contaminação dos diferentes
corpos d'água aumentou de forma alarmante,
como o lago Pátzcuaro, que recebe
constantemente descargas de águas residuais,
retorno municipal e agrícola, nas quais se
encontra o cobre, pois é presente em fertilizantes
e biocidas (Rivas 2006). Tanto as atividades
agrícolas, industriais, de urbanização quanto a
taxa de infiltração da bacia estão deteriorando
seriamente os ecossistemas do lago Pátzcuaro
(García, 2000; Ochoa, et al., 2006).
Entre os metais pesados, prestamos atenção ao
cobre (Cu) porque o cobre é um micronutriente
exigido pelos sistemas biológicos como
componente estrutural e catalítico de proteínas e
enzimas, além de cofator essencial para o
crescimento e desenvolvimento normais de
organismos. Em particular, o cobre é um
constituinte da proteína plastocianina, que está
envolvida no transporte de elétrons no fotossistema Wang, 1990). Para conhecer o efeito do meio
I da fotossíntese (Taiz e Zeiger 1991; Goodwin e
Mercer 1983; Blakenship,
2002). No entanto, em excesso, pode se ligar a
ligantes não específicos de íons metálicos,
ocupando espaços celulares ou receptores cuja
função é bloqueada pela presença desse metal
(Viarego, 1989; Viarego e Nott, 1993; Visviki e
Racklin, 1994; Rai, 1996).
Observou-se que a toxicidade do cobre aumenta
quando a dureza da água e o oxigênio dissolvido
diminuem, pois produz uma diminuição na presença
de agentes quelantes, ácidos húmicos, aminoácidos e
sólidos em suspensão, essenciais para a captura de
metais (Alabaster e Lloyd, 1982 )
150
Outubro de 2008
O uso de plantas aquáticas foi desenvolvido como
um tratamento alternativo de águas residuais e
provou ser eficiente na remoção de uma ampla
gama de substâncias orgânicas e nutrientes
(Novotny e Olem, 1994; Moore, 1995; Pezzolesi,
1998 ; Eickson e Wesner, 1997; Machate, 1999;
Burke et al., 2000; Huddleston, 2000; Dellarosa et
al., 2001). Da mesma forma, na remoção de metais
pesados, as macrófitas aquáticas também
demonstraram ser eficientes (Maine et al. 2001;
Mays e Edwards 2000; Windham, 2001; Wu, 2002;
Global e Parcy, 2004).
Entre as macrófitas aquáticas utilizadas na
remoção de contaminantes destacam-se Lemna
gibba, Eichhornia crassipes e Ranunculoides de
Hydrocotyle Por serem fáceis de manusear em
laboratório, são amplamente distribuídos no
México, são altamente produtivos e às vezes são
considerados uma praga devido ao seu rápido
crescimento e, assim, invadem os corpos d'água
em pouco tempo (Arrivallaga e Arredondo, 1978;
ambiente em espécies vegetais e animais, é
necessário recorrer a estudos finos, de modo que
temos que os efeitos tóxicos de metais pesados
​e outros contaminantes possam ser medidos em
termos de respostas bioquímicas nos
organismos, essas respostas são conhecidas
como biomarcadores moleculares ou bioquímicos
(Livingstone, 1993). É fato que os efeitos de
poluentes em um ecossistema começam com
reações bioquímicas de organismos, et al., 1987).
Entre os possíveis biomarcadores bioquímicos
Armendariz Saenz, NI et al.: Avaliação de dois parâmetros bioquímicos em três macrófitas aquáticas expostas ao cobre

Por isso, é importante considerar aqueles com o Características das macrófitas aquáticas
menor custo e cujas técnicas de análise são fáceis
de executar rapidamente em laboratório (Melacon, Lemna gibba L. (lentilha) pertence à família
M., 1995). LEMNACEAE, que inclui os menores
fanerógamas do Reino Plantae, e é caracterizada
Dessa maneira, surge o interesse em avaliar por possuir pequenas flores cíclicas com
clorofilas totais e açúcares livres totais como perigônio único ou duplo. São pequenas plantas
parâmetros bioquímicos que podem ser aquáticas, reduzidas a um corpo membranoso e
facilmente avaliados em laboratório. taliforme que flutua livremente na água,
apresentam reprodução vegetativa muito ativa,
seu habitat é cosmopolita em água doce de
As clorofilas são indispensáveis ​no metabolismo das zonas temperadas e quentes (Sánchez, 1979).
plantas, porque sintetizam carboidratos por meio de
mecanismos enzimáticos especializados, pode haver
alterações no conteúdo das clorofilas que podem ser
usadas como biomarcadores quando a planta Ranunculoides de Hydrocotyle L. (guarda-chuva)
apresenta sintomas de estresse ( Blakenship, 2002; pertence à Família UMBELLIFERAE são plantas
Salisbury, 1996). Por outro lado, os açúcares glabras, um tanto suculentas, com caules rastejantes ou
representam fisiologicamente o metabolismo ativo flutuantes; folhas com pecíolo fino, 1 a 35 cm. lâminas
dos carboidratos e estão envolvidos em todas as longas e sem apetite, em forma de rim. Habitam corpos
atividades de biossíntese e conservação; servem de água doce em zonas quentes e temperadas.
como armazenamento quando as temperaturas são (Rzedowski et al., 1985).
baixas, pois o açúcar atua como anticongelante nas
células (Kramer e Kozlowski , 1979; Guy et al., 1992).
Eichhornia crassipes ( Martius) Solms Laubach.,
Pertence à família PONTE-DERIACEAE. O jacinto
ou nenúfar, como também é conhecido, é uma
planta flutuante que se espalha amplamente pelo
Clorofilas e açúcares são componentes amplamente mundo. É nativa da América do Sul e tem um
distribuídos nos tecidos das plantas e podem ser rápido crescimento e altas densidades, razão pela
utilizados como parâmetros bioquímicos em resposta qual cobre e obstrui completamente os corpos
(PBR) a danos causados ​pela presença de toxinas e d'água. Ele vive em águas frescas e salobras de
contaminantes, de modo que o objetivo deste zonas temperadas e quentes e úmidas (Miranda e
trabalho foi quantificar Os PBR ou biomarcadores Lot, 1999).
moleculares foram expostos à exposição ao cobre de
três diferentes macrófitas aquáticas comuns do Lago
Pátzcuaro, Michoacán, utilizando técnicas
colorimétricas viáveis ​para realizar a baixo custo em M ATERIAL E MÉTODO
laboratório.
I. Área de estudo

A bacia do Pátzcuaro está localizada no centro-norte

do estado de Michoacán (Fig.

151
 No. 26: 149-158 Outubro de 2008

Fig. 1. Localização do lago Pátzcuaro, Michoacán.

1) e está localizado na província fisiográfica do Eixo II Coleta de material vegetal e tratamentos

Neovolcanico. Pátzcuaro está localizado nas experimentais
coordenadas geográficas de 101º 26 'e 101º 54' de
longitude oeste e 19º 25 'de latitude norte, tem uma As cópias de Lemna gibba, Eichhornia crassipes e Ranunculoides
superfície de 919 km 2 com uma altura média de 2.369 de Hydrocotyle eles foram coletados durante a estação
msnm (García, 2000). Estende-se pelos municípios chuvosa na área conhecida como Los Urandenes,
de Pátzcuaro, Erongaricuaro, Quiroga e Tzintzuntzán, localizada ao sul do lago Pátzcuaro, Michoacán (Fig.
incluindo também as cidades de Pichátaro 2). A coleta das plantas foi realizada manualmente,
(Tingambato) e San Isidro (Nahuatzen) (INEGI, utilizando sacolas plásticas para mantê-las com uma
2003). certa quantidade de água, estas foram colocadas em
um refrigerador de plástico para transportá-las para o
laboratório. Eles foram cultivados em triplicado em
Recebe as águas de pequenos rios, como o meio nutritivo Hoagland diluído 1/40 em bacias
Guaní e o Chapultepec. A área total do lago, plásticas, com 2.000 ml de volume total e 100 g de
incluindo as ilhas, é de 130 m 2 com profundidade plantas em peso fresco (Miranda e Ilangovan, 1996).
média entre 5 e 8 metros e máxima entre 12 e 15 Eles foram mantidos com um fotoperíodo 12/12
metros. Atualmente, possui oito ilhas, sendo a
maior de Jarácuaro (INEGI, 2003).

152
Armendariz Saenz, NI et al.: Avaliação de dois parâmetros bioquímicos em três macrófitas aquáticas expostas ao cobre

Figura 2. Localização do local de coleta para macrófitas aquáticas.

claro-escuro e temperatura entre 19 ° e 21 ° C, o
pH foi mantido em um valor de
7. Após uma semana de aclimatação, os bioensaios
foram realizados. Segundo Taiz e Zeiger, 1991, a
concentração ideal de Cu determinada na biomassa
seca das plantas é de apenas 6 mg / L. No entanto,
Jain
et al., 1989 e Baixa et al., Relatório de 1994 que a
lentilha-d'água e o nenúfar acumulam altos níveis
de Cu. Devido ao exposto, as concentrações
testadas neste estudo foram de 50 e 100 mg / L
de Cu na forma de (Cu 2 SO 4 5H 2 O). Foram
utilizadas as mesmas condições de luz e
temperatura de aclimatação. Os bioensaios
foram realizados em triplicata e mantidos por
cinco dias, após o que
foi determinado o teor de clorofila, que foi avaliado
pelo método colorimétrico de Arnon (1949) e o
teor de açúcar foi determinado pelo método
colorimétrico de Dubois, et al. ( 1956).
Os testes estatísticos de Lilliefors e a
homocedasticidade de Barlett foram aplicados aos
dados obtidos. Posteriormente, para determinar
qualquer padrão de variação, as diferenças
significativas entre as três espécies de plantas
estudadas e as concentrações de Cu foram
avaliadas com base em uma análise de variância
unidirecional (ANDEVA). Em todos os casos, o
programa NCSS (2001) foi utilizado.

153
 No. 26: 149-158 Outubro de 2008

R Resultados e Discussão 0,05). Eichhornia crassipes F ( 2, 6) = 3,2 (P <

0,05). Lemna gibba F ( 2, 6) = 4,0 (P <0,05).
As figuras 1 e 2 mostram a produção de açúcares Observando a morfologia das plantas a olho nu, as
livres e o teor total de cloro, respectivamente. No plantas Hydrocotyle apresentaram clorose a partir
caso de açúcares livres entre as três espécies de das 24 horas. de exposição ao Cu enquanto, Lemna
macrófitas, não houve diferenças significativas, F gibba y Eichhornia crassipes eles não mostraram
( 2, 9) = 5,71 (P> 0,05), mas houve diferenças danos aparentes. Essa observação indica que o
estatisticamente significantes em relação aos último poderia ser mais tolerante à presença de
tratamentos de 50 e 100 mg / L em relação ao cobre neste momento de exposição.
controle sem Cu.

Ranunculoides de Hydrocotyle F ( 2, 6) = 3,8 (P <

Gráfico. 1. Açúcares livres totais em μg / g de peso fresco vs Concentração de Cu

no meio nutriente.

Gráfico 2. Clorofilas totais em μg / g de peso fresco vs Concentração de Cu

no meio nutriente.

154
Armendariz Saenz, NI et al.: Avaliação de dois parâmetros bioquímicos em três macrófitas aquáticas expostas ao cobre
A variação na produção de clorofilas não foi
totalmente proporcional ao tempo de exposição e à
concentração de cobre; a análise estatística
indicou que não houve diferenças significativas no
teor de clorofila entre as três espécies de
macrófitas F ( 2, 9) = 8,4 (P> 0,05); nem em relação à
concentração de 50 e 100 mg / L de Cu, em
relação ao lote controle sem Cu, Ranunculoides de
Hydrocotyle F ( 2, 6) = 6,2 (P> 0,05). Eichhornia
crassipes F ( 2, 6) = 5,7 (P> 0,05). Lemna gibba F ( 2, 6) = 5.3
(P>
0,05). Esses resultados concordam com os de Kara
(2005) que relata que Chagas of fi cinale tolera altos
níveis de Cu sem alterações significativas na
concentração de pigmentos fotossintéticos.
Conforme observado neste estudo, houve
alterações nos açúcares livres totais e nas
clorofilas totais, o que mostra que as alterações
ocorrem no nível bioquímico em resposta a
contaminantes como o Cu, que, indiretamente,
inativa vários Enzimas do ciclo de Calvin, ou seja,
Cu inativam proteínas-enzimas que contêm
grupos sulfidrila, como tioredoxinas, que
transferem elétrons para enzimas estromais, como Blankenship, R., 2002. Mecanismo Molecular
gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase, entre
outras (Larcher, 1995). A detecção da primeira
resposta que as plantas têm é útil nos trabalhos
de monitoramento ambiental, pois ocorre
imediatamente após o contato com o
contaminante e pode ser reversível, enquanto as
respostas a níveis mais complexos de
organização biológica, Eles geralmente são
detectados após longos períodos de tempo e
tendem a resultar em efeitos irreversíveis. A
aplicação de respostas bioquímicas ou
biomarcadores de contaminação, como os
estudados aqui, é muito conveniente devido ao
seu baixo custo e detecção rápida em laboratório.
C ONCLUSÃO
De acordo com os biomarcadores avaliados, o total
de açúcares livres mostrou-se o PBRs mais
adequado para detectar alterações fisiológicas nas
macrófitas aquáticas estudadas com exposição ao
Cu nas condições de bioensaio aqui descritas.
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