1 s2.0 S0048357523001529 Main

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Investigação de mecanismos de resistência ao fomesafen em Ipomoea

nil da China
Shihan Cao, Yize Zou, Shuai Zhang, Hongtao Zhang, Yidi Guan,
Liru Liu, Mingshan Ji
PII: S0048-3575(23)00152-9
DOI: https://doi.org/10.1016/j.pestbp.2023.105487
Referência: YPEST 105487
Aparecer em: Bioquímica e Fisiologia de Pesticidas
Data de recebimento: 5 de abril de 2023
Data revisada: 30 de maio de 2023
Data aceita: 1 de junho de 2023
Cite este artigo como: S. Cao, Y. Zou, S. Zhang, et al., Investigação de mecanismos de
resistência a fomesafen em Ipomoea nil da China, Bioquímica e fisiologia de pesticidas (2023),
https://doi.org/ 10.1016/j.pestbp.2023.105487
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© 2023 Publicado pela Elsevier Inc.

Investigação de mecanismos de resistência ao fomesafen em Ipomoea nil
da China
Shihan Cao a1, Yize Zou a1, Shuai Zhang b

, Hongtao Zhang a , Yidi Guan a
, Liru Liu a,
Mingshan Ji a *
uma Faculdade de Proteção de Plantas, Shenyang Agricultural University, No. 120 Dongling
Estrada, distrito de Shenhe, cidade de Shenyang 110866, República Popular da China
b
Centro Nacional de Extensão e Serviços de Agrotecnologia, nº 20, Rua Maizidian,
Distrito de Chaoyang, cidade de Pequim, 100125, República Popular da China

prova
Pré-
Shihan Cao: caoshihanSY@163.com
Yize Zou: zouyize@163.com
Shuai Zhang: zhangsh2007@agri.gov.cn
Hongtao Zhang: syzhanghongtao@163.com

Diário
Yidi Guan: guanyidi0901@163.com
Liru Liu: liruliusyau@163.com
*Autor correspondente:
Mingshan Ji
Faculdade de Proteção de Plantas, Shenyang Agricultural University, No.120 Dongling Road,
Distrito de Shenhe, cidade de Shenyang 110866, República Popular da China
E-mail: jimingshan@163.com
1
Os autores Shihan Cao e Yize Zou contribuíram igualmente para este artigo
Abstrato
Recentemente, o herbicida fomesafen freqüentemente falhou em controlar os incômodos
erva daninha Ipomoea nula em campos de soja na província de Liaoning, China. Assim, coletamos
10 suspeitaram de populações resistentes e avaliaram sua sensibilidade ao fomesafen. O
resultados revelaram vários graus de resistência de Ipomoea nil ao fomesafen, com
índice de resistência de 2,88 a 22,43; o maior valor ocorreu na população LN3.
Portanto, os mecanismos de resistência em LN3 ao fomesafen foram explorados. Depois
tratamento com fomesafen, os níveis de expressão dos genes InPPX1 e InPPX2 foram 4,19-
e 9,29 vezes maior, respectivamente, no LN3 do que no suscetível (LN1)

prova
Pré-
população. No entanto, mutações e variações no número de cópias não foram detectadas entre
as duas populações. Além disso, o pré-tratamento com malathion reduziu a dose necessária
reduzir pela metade a taxa de crescimento do LN3 em 58%. Cromatografia líquida com massa em tandem
a espectrometria demonstrou que o metabolismo do fomesafen foi significativamente suprimido
por malatião. Além disso, LN3 exibiu aumento na eliminação de espécies reativas de oxigênio
capacidade, que foi representada por maior superóxido dismutase e peroxidase

Diário
atividades após a aplicação de fomesafen do que aquelas em LN1. Um mínimo parcial ortogonal
análise discriminante de quadrados revelou que a alta resistência em LN3 poderia ser
atribuído principalmente ao aumento do metabolismo. Felizmente, o I. nil resistente ao fomesafen
manteve-se sensível ao 2,4-D-etilhexilester e bentazon, fornecendo métodos para sua
ao controle.
Palavras-chave: Ipomoea nil; Fomesafen; Resistência metabólica; Superexpressão; Reativo
eliminação de espécies de oxigênio

1. Introdução
Os herbicidas servem como a principal ferramenta para combater a perda de rendimento e a má qualidade das culturas
causada por ervas daninhas. No entanto, a evolução da resistência a herbicidas devido à intensa
e o uso contínuo de herbicidas representa uma séria ameaça ao controle de ervas daninhas e
desenvolvimento agrícola. Ipomoea nil é uma planta daninha de folha larga problemática na cultura da soja
campos na província de Liaoning, China. Possui atributos biológicos competitivos, como
como alta capacidade reprodutiva e hábito trepador, que dificultam a
acessar os recursos necessários para o crescimento (Price e Wilcut, 2007). No entanto, isso
espécie foi negligenciada até que repetidos fracassos em controlá-la causaram sérias reduções na
colheitas em muitas áreas em Liaoning. Herbicidas inibidores da acetolactato sintase (ALS)
prova
Pré-
e glifosato foram as primeiras escolhas para o controle de ervas daninhas de folha larga; No entanto, o
o rápido desenvolvimento de resistência a esses herbicidas levou ao protoporfirinogênio IX
herbicidas inibidores da oxidase (PPO) como uma das poucas opções viáveis para controlar
ervas daninhas de folha larga em campos de soja (Sarangi e Jhala, 2019).
Os herbicidas inibidores de PPO atuam através da interrupção da integridade da membrana celular. PPO, que
é codificado pelos genes InPPX1 e InPPX2 , é o alvo dos herbicidas (Lermontova
Diário
e outros, 1997). Normalmente, catalisa a transformação do protoporfirinogênio IX em
protoporfirina IX na via do tetrapirrol, que está envolvida na biossíntese de
clorofila e heme (Dayan et al., 2018). Herbicidas inibidores de PPO bloqueiam o
conversão de protoporfirinogênio IX em protoporfirina IX, resultando em uma
acúmulo de protoporfirinogênio IX, que vaza para o citoplasma (Matringe e
Scalla, 1988). Isso resulta em aumento dos radicais de oxigênio que causam a perda de lipídios da membrana
peroxidação e danos à membrana celular, eventualmente resultando em fitotoxicidade nas plantas.
As classes comuns de herbicidas inibidores de PPO incluem éteres difenílicos, pirimidinadionas,
N-fenilftalimidas e aril-triazinonas, que são usadas principalmente para controlar
ervas daninhas de folha larga em campos de cultivo. No entanto, 13 espécies de ervas daninhas desenvolveram diferentes
graus de resistência devido ao uso frequente e persistente de herbicidas inibidores de PPO
(Pilha, 2023). O desenvolvimento de resistência de ervas daninhas representará uma grande ameaça para o
eficácia e uso sustentável de herbicidas inibidores de PPO.

A resistência no local-alvo (TSR) é um dos principais contribuintes para a resistência a herbicidas em ervas daninhas.
TSR envolve uma alteração de sequência em uma região codificadora de proteína do alvo do herbicida
gene, que altera a respectiva estrutura da proteína, reduzindo assim a sua interação com
herbicidas (Gaines et al., 2020). As mutações dos genes PPX1 e PPX2 oferecem o principal
caminho para a evolução da resistência a herbicidas inibidores de PPO. Um aminoácido
mutação no gene PPX1 (Ala 212) e quatro mutações de aminoácidos (G210, Arg128,
e Gly399) em três locais no gene PPX2 demonstraram conferir resistência a
Herbicidas inibidores de PPO em várias espécies de ervas daninhas (Bi et al., 2020; Giacomini et al., 2017;
Patzoldt et al., 2006; Rangani et al., 2019). A superexpressão do gene alvo também pode resultar
em TSR, mas esses casos são muito menos do que os anteriores e ocorrem principalmente em glifosato
biótipos de resistência. Gaines e outros. (2010) demonstraram que o número de cópias do
prova
Pré-
O gene EPSPS foi positivamente correlacionado com os níveis de mRNA e proteínas que
conferiu resistência ao glifosato em Amaranthus palmeri. Outra regulação positiva do alvo
expressão gênica do local, como os genes ALS e acetil-CoA carboxilase (ACCase) ,
foram relatados em Alopecurus aequalis Sobol. e Digitaria sanguinalis (Zhao et
al., 2018; Laforest e outros, 2017).
Além disso, a resistência ao local não-alvo (NTSR) é imprevisível e difícil de
Diário
manejar, pois pode resultar em resistência a herbicidas com diferentes modos de ação e
mesmo aqueles ainda não comercializados (Petit et al., 2010). NTSR envolve minimizar a quantidade
herbicida atingindo o local de destino, reduzindo a absorção e o transporte, aumentando
metabolismo, neutralizando as moléculas citotóxicas produzidas pela ação do
herbicida (Délye et al., 2013). O metabolismo elevado de herbicidas é, sem dúvida, o mais
mecanismo comum para NTSR. Várias famílias de enzimas degradadoras de herbicidas têm
foram identificados e caracterizados, incluindo citocromo P450 monooxigenases
(P450s), glutationa S-transferases (GSTs), glicosiltransferases (GTs), ligação de ATP
transportadores de cassete (ABC), oxidases, esterases, hidrolases e peroxidases (Powles
e Yu, 2010). Notavelmente, P450s e GSTs foram estudados em profundidade devido à sua
impactos significativos nas fases de ativação e conjunção do metabolismo de herbicidas.
Além disso, os inibidores metabólicos surgiram como uma ferramenta poderosa para estudar a
diferenças na capacidade metabólica entre populações resistentes e suscetíveis que são

mediada por atividades de P450s e GSTs. Aplicação exógena de malathion (P450s
inibidor) e 4-cloro-7-nitrobenzoxadiazol (NBD-Cl) (inibidor de GSTs) foi
demonstrou reverter a resistência metabólica de Sagittaria trifolia L. a benssulfuron-metil
(Zhao et al., 2017; Zou et al., 2022); casos semelhantes também foram relatados para Lolium perenne
e Amaranthus tuberculatus (Fang et al., 2019; Yanniccari et al., 2020). Além disso,
como um estressor abiótico, os herbicidas podem aumentar muito as concentrações de oxigênio reativo
espécies (ROS) (Waszczak et al., 2018). Por exemplo, herbicidas inibidores de PPO
agravar a peroxidação lipídica da membrana e causar um acúmulo excessivo de ROS.
Os antioxidantes enzimáticos são um dos pilares da eliminação de ROS e incluem o antioxidante
enzimas superóxido dismutase (SOD), peroxidase (POD) e catalase (CAT), que
eliminar o excesso de ROS e manter a homeostase celular (Imahori et al., 2008). Anterior
prova
Pré-
estudos descobriram que a atividade aumentada de POD e CAT contribuiu para o mesossulfuron
resistência ao metilo em Beckmannia syzigachne (Wang et al., 2022). No entanto, nenhum estudo
de ervas daninhas resistentes a PPO investigaram sua capacidade antioxidante até o momento.
Fomesafen é um herbicida inibidor de PPO básico que controla efetivamente I. nil em
campos de soja. No entanto, nos últimos anos, ocorrências frequentes de falhas no controle
foram observados em campos de soja em Liaoning. Assim, amostramos 10 suspeitos
Diário
populações resistentes desta área e quantificou seus níveis de resistência. Baseado em
TSR e NTSR, os mecanismos de resistência de I. nil ao fomesafen foram explorados.
Além disso, buscaram-se alternativas viáveis. Esses resultados podem avançar a
compreensão do desenvolvimento de resistência em ervas daninhas e fornecer dados de apoio para
manejo de ervas daninhas.
2. Materiais e métodos
2.1 Materiais vegetais
Em setembro de 2018, 10 populações suspeitas de resistência de I. nil foram coletadas de
campos de soja em Liaoning, China, onde a dose recomendada de fomesafen
não conseguiu controlar as ervas daninhas. Uma população suscetível (LN1) foi coletada de
campos cultivados sem histórico de aplicação de herbicida (Tabela 1). todos maduros
sementes foram coletadas de plantas maduras, secas ao ar à sombra e armazenadas em
bolsas a 4 °C até o uso.

2.2 Bioensaio dose-resposta de planta inteira
Para quebrar a dormência das sementes, as sementes foram tratadas com ácido sulfúrico concentrado a 98%
ácido por 20 minutos e, posteriormente, enxaguados abundantemente com água destilada esterilizada.
Em seguida, as sementes foram esterilizadas em hipoclorito de sódio 1,5% por 3 min e
lavados novamente com água destilada esterilizada.
Seis sementes de cada população foram semeadas em vasos plásticos (9 cm de diâmetro x 8 cm
altura) contendo uma mistura 1:1 de turfa e areia (v/v) e colocados em casa de vegetação.
As condições da casa de vegetação foram de 27 ± 5 °C e umidade relativa média de 65%. Antes de
aplicação de herbicida, as mudas foram regadas diariamente para garantir o crescimento normal. no 3-
estágio de 4 folhas, as mudas foram tratadas com fomesafen {5-(2-cloro-ÿ,ÿ,ÿ-trifluoro-p
toliloxi)-N-metilsulfonil-2-nitrobenzamida} usando um pulverizador de gabinete de barra móvel
prova
Pré-
(NOVO STA F-470, volume de aplicação: 118.139 L ha-1 , pressão:0,29 MPa). As concentrações de
fomesafen foram 4,1, 12,3, 37, 111, 333 e 1000 g ia ha-1 para S e
12,3, 37, 111, 333, 1.000 e 3.000 g ia ha-1 para populações suspeitas de resistentes,
respectivamente. Os brotos foram colhidos e pesados 21 dias após fomesafen
aplicativo.
2.3 Sequenciamento dos genes InPPX1 e InPPX2
Diário
Folhas foram amostradas de LN1 e LN3 no estágio de 3-4 folhas e foram moídas
em pó via nitrogênio líquido. Posteriormente, o RNA total foi extraído usando o
Kit de planta pura de RNA (Dnase I) (CWBIO, Pequim, China). Qualidade e pureza total do RNA
foram avaliados usando eletroforese em gel a 1% e um espectrofotômetro Nanodrop 1000
(Thermo Fisher Scientific, EUA), respectivamente. DNA complementar de primeira fita
(cDNA) foi realizada usando um HiFiScript cDNA Synthesis Kit (CWBIO,
Pequim, China); o cDNA foi armazenado a -20 °C até o uso.
Os primers foram projetados com base no InPPX1 (XM_019297961.1) e no InPPX2
(XM_019307643.1) sequências de genes de I. nil disponíveis no National Center for
Informações sobre Biotecnologia (NCBI); usamos o Primer Premier 5.0 para cobrir todos os
pontos que conferem resistência. Com base nas sequências obtidas, as sequências de primers
foram os seguintes: InPPX1, para a frente (5'-CTCATTGGCGACAAGACGGAA-3') e
reverso (5'-AATCTCGTAGGGCATTCTCACT-3'); InPPX2, para a frente (5'-

TCCGCAGCTACTCACCACGATA-3') e reverter (5'-
AACCTAACCATTACGGGAAGACG-3'). A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi
realizada seguindo o protocolo de Sun et al. (2020). Os produtos amplificados foram
detectado usando eletroforese em gel de agarose 1,2%, purificado usando um TaKaRa Mini BESTA
kit de extração de DNA em gel de agarose e subsequentemente sequenciado bidirecionalmente por Sangon
Biotech (Xangai, China). Os alinhamentos de sequências foram realizados usando o DNAMAN
software 6.0.
2.4 Expressão gênica relativa de InPPX1 e InPPX2 e número de cópias genômicas
Mudas das populações LN1 e LN3 foram tratadas com o recomendado
dose de fomesafen (333 g ia ha-1 ) no estádio de 3-4 folhas. As folhas foram coletadas antes
aplicação e 12, 24, 48 e 72 horas após a aplicação. Extração total de RNA

prova
Pré-
e a síntese de cDNA foi realizada como descrito acima. PCR quantitativo em tempo real
(qRT-PCR), e a mistura de reação (20 µL) consistia em 1 µL de cDNA, 0,4 µL
de cada primer direto/reverso, 10 µL de Mistura UltraSYBR (Low ROX) (CWBIO,
Pequim, China) e 8,2 µL de água bidestilada livre de ribonuclease. O qRT-PCR
foi realizada com o programa CFX Manager 3.0 (Bio-Rad, Hercules, CA, EUA)
ajustado para 95 °C por 10 min, seguido por 40 ciclos de 95 °C por 15 s e 60 °C por 1 min,
Diário
com uma etapa final de 15 s a 95 °C, 1 min a 60 °C, 15 s a 95 °C e 15 s a 60 °C para
obter a curva de fusão do produto. Os primers foram os seguintes: GAPDH, forward (5'-
GTTGTGGGAGTGAACGAGAAGG - 3') e reverter (5'-
TCTTCTGAGTAGCGGTGATGGAG - 3'); InPPX1, para a frente (5' -
TAATATGGGACGAAGGAGC - 3') e reverso (5' -ATCTCCGCTTTCACAGAAC - 3');
e InPPX2, direto (5' - CCATACTACGTCCTCTTTCG - 3') e reverso (5' -
AGTGCCTGATTGATGGTGA - 3'). Três pares de primers amplificados 166, 108 e 111
pb respectivamente. A expressão gênica foi determinada de acordo com o 2 Método -ÿÿCT .
Os experimentos de qRT-PCR usaram três réplicas biológicas e foram repetidos duas vezes.
qRT-PCR também foi utilizado para determinar o número de cópias genômicas de InPPX1 e
InPPX2 relativo ao gene da gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH). Dez
as plantas de cada população foram congeladas rapidamente em nitrogênio líquido e armazenadas a -80 °C.
Um kit de genômica vegetal (Tiangen Biotech, China) foi usado para extrair o DNA genômico.
Os seguintes pares de primers foram usados para amplificar os genes InPPX1, InPPX2 e GAPDH ,
respectivamente: InPPX1, direto (5'-TAATATGGGACGAAGGAGC – 3') e reverso (5'
– ATCTCCGCTTTCACAGAAC – 3'); EmPPX2, para a frente (5' –
CCATACTACGTCCTCTTTCG – 3') e reverso (5' – AGTGCCTGATTGATGGTGA –
3'); e GAPDH, para frente (5' – GTTGTGGGAGTGAACGAGA -3') e reverso (5'-
GGCTCTGATGACTACTGTCC - 3'). Três pares de primers amplificados 110, 125 e
134 pb, respectivamente. Os aumentos nos números de cópias PPX1 e PPX2 foram expressos como
ÿCT
2 .
2.5 Efeitos dos inibidores metabólicos no fomesafen
Um inibidor de P450s malation (1,2-di(etoxicarbonil) etilo, o
dimetilfosforoditioato) e um inibidor de GSTs NBD-Cl (4-Cloro-7-nitro-1,2,3-

prova
Pré-
benzoxadiazol) foram utilizados para investigar seus efeitos na resistência ao fomesafen.
Mudas no estádio de 3-4 folhas das populações LN1 e LN3 foram tratadas com
malathion (2000 g ia ha-1 ) e NBD-Cl (270 g ia ha-1 ) 2 h e 48 h antes da aplicação do herbicida
aplicação, respectivamente. Estas doses demonstraram não ter efeito adverso
impactos no crescimento normal das mudas. As taxas de aplicação de Fomesafen foram idênticas
aos do ensaio dose-resposta da planta inteira. A biomassa acima do solo foi

Diário
analisados 21 dias após o tratamento. Este experimento foi inteiramente randomizado e foi
conduzido duas vezes com três repetições.
2.6 Análise de cromatografia líquida com espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS) de
fomesafen absorção e metabolismo
Mudas das populações LN1 e LN3 foram cultivadas até o estádio de 3-4 folhas para
experimentos subsequentes. Dois grupos de tratamento foram projetados para determinar a
absorção e variações metabólicas entre eles: fomesafen sozinho e malathion
seguido de fomesafen. O malathion foi aplicado nas mudas 2 h antes do fomesafen
aplicação (333 g ia ha-1 ). Folhas de cada população foram amostradas em 0, 12, 24, 48
e 72 h após o tratamento.
2.6.1 Procedimento de extração
Amostras moídas (1 g) foram misturadas com acetonitrila (10 mL) e extraídas usando
ultrassonografia por 30 min. Após centrifugação a 5.000 × g por 15 min, o

o sobrenadante foi coletado e evaporado rotativamente até a secura a 45°C. Cada amostra foi
ressuspenso em 1 mL de acetonitrila e adicionado a um tubo de centrífuga contendo um sorvente
mistura (200 mg MgSO4 + 50 mg GCB + 30 mg PSA). As amostras foram agitadas para
1 min e posteriormente centrifugado a 5000× g por 5 min; o sobrenadante resultante foi
filtrada através de um filtro de 0,22 ÿm.
2.6.2. Separação HPLC e identificação MS
Um sistema de cromatografia líquida de alta performance (HPLC) Agilent 1290
(Milford, MA, EUA) equipado com uma coluna Eclipse Plus C18 (2,1 × 50 mm, 1,8 ÿm
tamanho de partícula) foi usado para separação cromatográfica. A eluição por HPLC foi conduzida
usando acetonitrila de grau cromatográfico (solvente A) e 0,2% (v/v) de ácido fórmico em
água (solvente B). O método de eluição foi o seguinte: 0–0,5 min, 20% A; 1,5 min, 80%
prova
Pré-
A; 2,5–3,5 min, 95% A; 4,0 min, 80% A; e 5,0–6,0 min, 20% A. A taxa de fluxo foi
0,3 mL min-1 e os volumes de injeção foram de 2 µL. O íon precursor do fomesafen
foi selecionado como 388 (m/z), e a produção quantitativa foi de 167 (m/z) quando o
a voltagem do fragmento era de 120 V com uma energia de colisão de 20 eV.
2.7 Diferenças nos sequestradores de ROS
Mudas cultivadas (estágio de 3-4 folhas) das populações LN1 e LN3 foram
preparados para os experimentos a seguir. Todas as mudas foram tratadas com fomesafen
Diário
a 333 g ia ha-1 ; amostras foram colhidas em 0, 12, 24, 48 e 72 h após a aplicação.
O conteúdo de malondialdeído (MDA) foi determinado por meio de um kit MDA (Meimian, Beijing,
China). O conteúdo de ROS foi medido por meio de um kit ROS (Meimian, Pequim, China). SOD,
As atividades de POD e CAT foram determinadas por meio de um kit de ensaio de atividade SOD (Meimian,
Pequim, China), Kit de Ensaio de Atividade POD (Meimian, Pequim, China) e Atividade CAT
Kit de Ensaio (Meimian, Pequim, China), respectivamente.
2.8 Suscetibilidade a outros herbicidas
Pelo menos 100 mudas das populações LN1 e LN3 foram cultivadas para 3-4
estágio de folha. Vários herbicidas comumente usados foram selecionados, e as mudas foram
tratados nas taxas de campo recomendadas (Tabela S1). Após 21 dias, a porcentagem de
os indivíduos sobreviventes foram registrados; suscetibilidade foi classificada da seguinte forma: <20% foi
definido como suscetível, 20-80% como baixa resistência e > 80% como altamente resistente.
2.9 Análise de dados
A análise de diferença significativa do experimento dose-resposta de planta inteira
foi realizada via ANOVA usando o software SPSS (versão 21.0; SPSS, Chicago,
EUA). Curvas dose-resposta (logística sigmoidal, quatro parâmetros) foram criadas usando
SigmaPlot 14.0 (versão 14.0; Sigma Plot Software, Erkrath, Alemanha), usando o
seguinte equação:
b]
y = C + (D – C) / [1 + (x/GR50)
onde y é o peso fresco em relação ao controle não tratado; D e C
representam os limites de resposta superior e inferior, respectivamente; x é a concentração de
fomesafen; GR50 é a dose efetiva do herbicida que causa 50% de inibição do crescimento; e
b é a inclinação da curva.
prova
Pré-
Análise discriminante de mínimos quadrados parciais ortogonais (OPLS-DA) foi usada para
rastrear os principais fatores que conferiram resistência ao fomesafen em I. nil.
3. Resultados
3.1 Bioensaio dose-resposta de planta inteira
A sensibilidade das populações LN1 e 10 I. nil suspeitas de serem resistentes a
fomesafen foram determinados com diferentes doses de herbicida. no campo

Diário
dose recomendada (333 g ia ha-1 ) para fomesafen, várias respostas foram observadas
entre as populações. Inicialmente, todas as plantas apresentaram sintomas de fitotoxicidade semelhantes,
clorose, atrofiamento e murcha. Porém, posteriormente, o ponto de crescimento da resistente
população produziu novas folhas e retomou o crescimento normal 7 dias após o tratamento,
enquanto a população LN1 morreu completamente. Os valores de GR50 foram 19,73 g ia ha-1 para a
população LN1 e 56,84-442,52 g ia ha-1 para as populações resistentes. O
o índice de resistência (R/S) variou entre 2,88 e 22,43 (Tabela 1). Assim, toda a planta
O bioensaio dose-resposta indicou que as 10 populações desenvolveram níveis variados
de resistência ao fomesafen em comparação com a população LN1. LN1 e LN3
(população com maior índice de resistência) foram selecionadas para posterior
experimentos.
3.2 Sequenciamento dos genes InPPX1 e InPPX2

Transcrição quase completa dos genes InPPX1 e InPPX2 do LN1 e LN3
populações foram amplificadas para determinar a presença de mutações associadas com
fomesafen resistência. O quadro de leitura aberta dos genes InPPX1 e InPPX2 foi
1664 pb e 1557 pb, que codificam aproximadamente 554 e 519 aminoácidos,
respectivamente. Não foram observadas substituições e deleções de aminoácidos no altamente
regiões conservadas desses genes em qualquer população (Fig. S1). Assim, o local-alvo do PPO
mutações não foram um mecanismo de resistência ao fomesafen em LN3.
3.3 Expressão gênica relativa de InPPX1 e InPPX2 e número de cópias genômicas
Neste estudo, os níveis de expressão gênica InPPX1 e InPPX2 no LN1 e LN3
as populações foram determinadas via qRT-PCR, com GAPDH como referência interna. Em
na ausência de tratamento com fomesafen, níveis de expressão semelhantes foram exibidos em LN1
prova
Pré-
e populações LN3. Após o tratamento com fomesafen, conforme mostrado na Fig. 1A e 1B, InPPX1
e expressões de InPPX2 em LN1 diminuíram, enquanto em LN3, elas continuamente
aumentaram e foram significativamente maiores do que aqueles em LN1. Às 72 h, o InPPX1 e
Os níveis de expressão de InPPX2 em LN3 foram 4,19 e 9,29 vezes maiores, respectivamente, do que
aqueles em LN1. Em contraste, a amplificação do DNA genômico por qRT-PCR não revelou
diferenças nos números relativos de cópias dos dois genes entre todas as populações (Fig.
Diário
1C). Portanto, a superexpressão dos genes InPPX1 e InPPX2 pode contribuir para a resistência,
mas esse efeito não foi devido a variações no número de cópias (CNV) em LN3.
3.4 Efeito dos inibidores metabólicos no fomesafen
Malathion e NBD-Cl foram selecionados como inibidores metabólicos para investigar sua
efeitos sobre o fomesafen. Nenhum dos inibidores teve um impacto significativo no valor GR50 de
a população LN1. Em contraste, em LN3, uma redução acentuada de GR50 de 58% foi observada
com tratamento com malation; no entanto, isso não foi observado com o tratamento com NBD-Cl
(Mesa 2). Esses resultados sugeriram que as atividades aprimoradas do P450s podem ter
conferiu resistência ao fomesafen em LN3. Além disso, os valores de GR50 de LN3 ainda eram
muito maior do que LN1, apesar de ser significativamente reduzido por malathion. Isso sugere
que outros mecanismos de resistência também podem estar envolvidos na resistência ao fomesafen
3.5 Análise LC-MS/MS da absorção e metabolismo do fomesafen

Para investigar melhor se LN3 tinha resistência metabólica ao fomesafen, LC
MS/MS foi usado para monitorar as diferenças na absorção e metabolismo entre
LN1 e LN3. Conforme mostrado na Fig. 2A e na Tabela S2, não há diferenças significativas em
absorção foram observadas por 72 h em todos os grupos de tratamento de todas as populações após
aplicação de fomesafen. Após aplicação de fomesafen, metabolismo de fomesafen por LN3
foi significativamente mais extensa do que por LN1 (Fig. 2B, Tabela S3). Com o
o metabolismo combinado de fomesafen e tratamento com malathion de fomesafen em LN3 foi
diminuir apenas com fomesafen. No entanto, o metabolismo do fomesafen de LN3 no
presença de malathion ainda foi mais rápida que a de LN1. Com base nesses resultados, os P450s
O aumento do metabolismo mediado pode de fato contribuir para a resistência ao fomesafen em LN3.
3.6 Diferenças nas substâncias relacionadas à eliminação de ROS
prova
Pré-
ROS e MDA são marcadores bem conhecidos de dano oxidativo. sob a indução
de fomesafen, as concentrações de MDA aumentaram progressivamente e continuaram a se acumular em
todas as amostras. Às 72 h, as concentrações de MDA em LN1 foram significativamente maiores do que
aqueles em LN3 (Fig. 3A). O acúmulo de ROS mostrou uma tendência semelhante. Por todo
Após o experimento, as concentrações de MDA e ROS em LN3 foram menores do que as de LN1
(Fig. 3B). Portanto, o grau de peroxidação lipídica da membrana em LN3 foi
Diário
significativamente menor do que em LN1.
SOD, POD e CAT são os principais sequestradores enzimáticos de ROS. Neste estudo,
eles geralmente diminuíram inicialmente antes de aumentar. Entre eles, a atividade CAT foi
semelhante entre LN1 e LN3 com e sem tratamento com fomesafen (Fig. 3E). Em
Por outro lado, as atividades de SOD e POD foram significativamente maiores em LN3 após fomesafen
aplicação do que aqueles em LN1 (Fig. 3C e 3D). Esses resultados indicaram que o
aumento da atividade antioxidante em LN3 também foi associado com resistência a
fomesafen.
3.7 Análise OPLS-DA
Com base nas investigações dos mecanismos TSR e NTSR, o OPLS-DA foi
utilizado para análise estatística para determinar o elemento crítico que foi responsável por
resistência ao fomesafen em I. nil. Conforme mostrado na Fig. 4A, amostras do LN1 e LN3
populações foram distribuídas em elipses, o que implica que fortes valores de variância foram
2
ausente nas amostras. Simultaneamente, ajuste alto (R fechar 1) e preditividade (Q 2>0,5)
foram confirmados através dos valores cumulativos de R2 Xcum (0,974), R 2 Ycum (0,861) e Q 2
esperma (0,882). A precisão e a confiabilidade do modelo foram ainda confirmadas pelo
ausência de overfitting no teste de permutação (Q2<0; Fig. 4B). Componente do modelo OPLS
1 foi MR (taxa metabólica de fomesafen; autovetor, +0,548223), seguido por ROS
(vetor próprio, -0,482784) e InPPX2 (vetor próprio, +0,254178). O mais alto
contribuição para o segundo componente principal foi MR (vetor próprio, -0,692007),
seguido por ROS (vetor próprio, -0,539559), MDA (vetor próprio, -0,342777) e SOD
(autovetor, -0,322822). (Fig. 4C). Além disso, os valores de VIP para MR e ROS foram
superior a 1 (1,82183 e 1,58355, respetivamente), o que implica que a melhoria
da capacidade metabólica e capacidade antioxidante foi o fator chave no desenvolvimento
prova
Pré-
de resistência. O valor de VIP de CAT foi inferior a 0,5, indicando que era independente
do desenvolvimento da resistência. Os valores VIP para SOD, InPPX2, POD e InPPX1
foram todos maiores que 0,5 (0,80672, 0,633036, 0,63273 e 0,596757, respectivamente);
portanto, podem ter sido associados ao desenvolvimento de fomesafen
resistência em LN3 (Fig. 4D).
3.8 Suscetibilidade a outros herbicidas
Diário
Resistência a fluoroglicofen-etil (O-[5-(2-cloro-ÿ,ÿ,ÿ-trifluoro-p-toliloxi)-2-
ácido nitrobenzoil]glicólico) (PPO), tifensulfuron-metil (3-(4-metoxi-6-metil
ácido 1,3,5-triazin-2-ilcarbamoilsulfamoil) tiofen-2-carboxílico) (ALS), 2,4-D
etilhexil (2-etil-4-metilpentil 2,4-diclorofenoxiacetato) (Auxina sintética),
e bentazon (3-isopropil-1H-2,1,3-benzotiadiazin-4 (3H)-ona 2,2-dióxido) (PS ÿ)
foram investigados em LN3 e LN1. Os resultados indicaram que LN1 foi sensível a todos
herbicidas testados. Em contraste, LN3 foi sensível a bentazon e 2,4-D-etilhexil, mas
mostrou altos níveis de resistência a tifensulfuron-metil e fluoroglicofen-etil
(Tabela 3). Portanto, bentazon e 2,4-D-etilhexil podem servir como alternativas para o
controle de I. nil resistente ao fomesafen .
4. Discussão
Os herbicidas químicos são os meios mais eficazes para reduzir as perdas econômicas
causada por ervas daninhas em todo o mundo. No entanto, o uso excessivo e persistente de um único herbicida
durante uma estação de crescimento pode resultar na evolução adaptativa da resistência a herbicidas em
populações de plantas daninhas. Susceptíveis Raphanus raphanistrum foram relatados para evoluir rapidamente
resistência ao 2,4-D após apenas quatro gerações de seleção (Ashworth et al., 2016).
Analogamente, o Amaranthus retroflexus em Heilongjiang, na China, desenvolveu altos níveis
de resistência sob a pressão sucessiva exercida pelo fomesafen (Huang et al., 2020).
Neste estudo, os ensaios dose-resposta de toda a planta demonstraram que 10 populações de
I. nil de Liaoning desenvolveram vários graus de resistência ao fomesafen. Devido
à eficácia reduzida de herbicidas inibidores de ALS e glifosato, inibidor de PPO
herbicidas foram usados por mais de cinco anos. No LN3, foram mais de 12 anos de
aplicação de fomesafen. Além disso, a soja costuma ser cultivada em sistema contínuo
sistema de plantio. Essas condições podem ser as causas subjacentes da resistência a
fomesafen em I. nil. prova

Pré-
A superexpressão de um gene alvo é um mecanismo prevalente que confere
resistência a herbicidas. É o principal mecanismo em ervas daninhas resistentes ao glifosato e é
sempre associado a CNV (Chen et al., 2020). No entanto, nenhuma CNV foi descoberta em
nosso estudo; no entanto, os níveis de expressão dos genes InPPX1 e InPPX2 em LN3
foram significativamente maiores do que aqueles em LN1. Este resultado é semelhante ao piroxsulam
Diário
resistência em Bromus sterilis, onde a superexpressão do gene ALS contribui para a resistência
(Sen et al., 2021). Além disso, a alteração de um gene alvo é um importante mecanismo de
resistência a herbicidas inibidores de PPO. Por exemplo, substituições R128G e R128M
de InPPX2 que confere resistência a herbicidas inibidores de PPO tem sido amplamente
documentado em espécies de Amaranthus (Giacomini et al., 2017; Nie et al., 2019). Em
em contraste, em nosso estudo, nenhuma alteração de aminoácidos foi encontrada. Portanto, o
a superexpressão de genes que codificam para PPO é potencialmente responsável pela resistência
para fomesafen em LN3, em vez de mutação do gene alvo ou CNV.
Comparado com estudos sobre TSR, NTSR recebe menos atenção entre os
mecanismos atuais de resistência a PPO em plantas daninhas. Frequentemente, desintoxicar e metabolizar
as enzimas desempenham papéis importantes nos mecanismos NTSR, especialmente P450s e GSTs.
Varanasi et ai. (2018) demonstraram, através do uso combinado de enzimas metabólicas
inibidores, que aumentos na atividade de P450s e GSTs resultaram em resistência ao fomesafen em

A. palmeri. A. tuberculatus resistente à carfentrazona-etil mostrou sensibilidade aumentada
após pré-tratamento com malathion, indicando que sua resistência também pode ser mediada
por atividades aprimoradas de P450s (Obenland et al., 2019). Da mesma forma, em nosso estudo, o fomesafen
seguido pelo tratamento com malathion reverteu a resistência de LN3 e reduziu o GR50
em 57,98%. Portanto, atividades aumentadas de P450s podem induzir resistência ao fomesafen em
LN3. Além disso, os P450s exibem diversas especificidades de substrato, permitindo-lhes
metabolizam vários tipos de herbicidas (Dimaano et al., 2020).
O aumento do metabolismo de herbicidas mediado por P450s foi documentado em alguns
ervas daninhas (Gaines et al., 2020). Para obter mais evidências, combinamos o uso de testes metabólicos
inibidores enzimáticos com a determinação de fomesafen remanescente. Em nosso estudo, o
metabolismo de fomesafen em LN3 foi significativamente maior do que em LN1 no
prova
Pré-
ausência de pré-tratamento com malation. Da mesma forma, a análise OPLS-DA mostrou que o
O valor VIP da taxa metabólica de fomesafen foi superior a 1. Portanto, aumentou
o metabolismo é o fator chave que leva à resistência ao fomesafen em LN3. No entanto,
metabolismo de fomesafen foi reduzido com o uso de herbicida em combinação com
malathion. Esses resultados estão de acordo com a conjectura de que o aumento das atividades do P450
mediou o aumento do metabolismo do fomesafen. Embora a porcentagem de metabolismo
Diário
de fomesafen de LN3 foi bastante suprimido pelo malathion, permaneceu mais rápido do que
de LN1. Além de diferenças na capacidade metabólica entre os indivíduos daninhas
devido a variações genéticas naturais, o número de genes que forneceram metabolismo
resistência pode ser responsável por este resultado. Portanto, especulamos que além de
P450s, outros genes estão envolvidos na resistência metabólica de I. nil ao fomesafen. Baseado
sobre esses resultados, o RNA-seq deve ser conduzido para identificar os genes-chave que conferem
resistência metabólica, o que poderia fornecer um meio para resolver problemas de resistência e
revivendo herbicidas proeminentes.
Melhorias na capacidade de eliminação de ROS também conferem resistência a herbicidas.
Como um estressor abiótico, os herbicidas inibidores de PPO causam a produção de grandes quantidades
de ROS em ervas daninhas. Além disso, devido ao mecanismo único desses herbicidas, a
A capacidade antioxidante de ervas daninhas resistentes deve ser mais estudada. Em nosso estudo, o
acúmulo de MDA e ROS foi significativamente maior em LN1 do que em LN3,

indicando que LN3 pode ter uma maior capacidade de eliminar ROS. Mais adiante, exploramos
as enzimas de eliminação de ROS predominantes e descobriram que aumentos em SOD e POD
atividades estiveram presentes. Da mesma forma, um estudo confirmou que a capacidade de limpeza elevada
para resistência dotada de ROS a benssulfuron-metil em S. trifolia (Zou et al., 2022).
Assim, a capacidade antioxidante é outro fator na resistência ao fomesafen em I. nil.
A imprevisibilidade do NTSR pode dotar as ervas daninhas de resistência múltipla, o que
pode dificultar o controle. Em nosso estudo, LN3 foi altamente resistente a
tifensulfurão-metilo e fluoroglicofeno-etilo. Felizmente, permaneceu sensível a
2,4-D-etilhexilo e bentazona. I. nil é uma erva daninha de polinização cruzada e seus genes de resistência
podem ser rapidamente recombinados e enriquecidos através da polinização, aumentando assim a
probabilidade de resistências múltiplas (Sarangi et al., 2017). Atualmente, a melhor estratégia para
prova
Pré-
retardar o desenvolvimento de resistência ainda é inconclusivo. A mistura de herbicidas pode ser uma boa
escolha para evitar o desenvolvimento de resistência. No entanto, herbicidas mistos só podem
atingem esse objetivo quando seus efeitos são semelhantes (Yu e Powles, 2014). Por exemplo,
imazaquin misturado com pendimetalina falhou em retardar a resistência ao imazaquin em
Amaranthus hybridus porque pendimetalina não foi capaz de controlar a espécie
adequadamente (Beckie, 2006). Além disso, a ordem de mistura também deve ser mais
Diário
estudado. Han et ai. (2013) provou que o pré-tratamento com 2,4-D pode induzir um aumento de 10 vezes
aumento de GR50 para diclofope na população suscetível de Lolium rigidum .
5. Conclusão
Neste estudo, confirmamos a resistência ao fomesafen em I. nil em Liaoning, China, para
a primeira vez. Além disso, demonstramos que o aumento mediado por P450s
metabolismo foi o principal mecanismo que conferiu resistência ao fomesafen em I. nil.
Além disso, a superexpressão dos genes InPPX1 e InPPX2 e alta concentração de antioxidantes
capacidade também contribuiu para essa resistência. Além disso, buscamos uma alternativa
herbicida e descobriu que 2,4-D-etilhexil e bentazon foram eficazes para controlar
I. resistente a fomesafen. nil. No futuro, um sistema integrado e eficiente de controle de ervas daninhas
devem ser desenvolvidos e promovidos para garantir que o desenvolvimento da resistência seja
atrasado enquanto protege o ecossistema agrícola.

Contribuições do autor
SHC e MSJ projetaram a pesquisa. SHC e YZZ realizaram o
trabalho experimental e análise de dados. SZ, HTZ, YDG e LRL, fornecidos
sugestões úteis para a análise de dados e durante a preparação do manuscrito. CHS,
e MSJ, escreveram o artigo. Todos os autores editaram e revisaram o manuscrito.
Financiamento
Este trabalho foi financiado pelo Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento da China [concessão
número 2016YFD0200503-3].
Declaração de interesse concorrente

prova
Pré-
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes conhecidos ou
relações pessoais que possam ter parecido influenciar o trabalho relatado neste
papel.
Disponibilidade de dados
Diário
Os dados serão disponibilizados mediante solicitação.
Reconhecimentos
Agradecemos ao editor e revisores por seus comentários úteis e perspicazes sobre
rascunhos do manuscrito. Agradecemos também ao Grupo Editage por seu inglês profissional
serviços de edição de idiomas.
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Pré-
Diário
(A) (B)
(C)
prova
Pré-
Diário
Fig. 1. Detecção por RT-qPCR da expressão dos genes InPPX1 e InPPX2 e número de cópias. (A)
Expressão gênica de InPPX1 e (B) InPPX2 em relação a GAPDH para LN3 e LN1 em momentos
diferentes após o tratamento com fomesafen. As barras verticais indicam a média ± erro padrão. Os
asteriscos indicam diferenças significativas entre LN1 e LN3. (*P<0,05; **P<0,01) (C) Número de cópias
genômicas dos genes InPPX1 e InPPX2 em relação a GAPDH para LN1 e LN3. As barras verticais indicam a média ± padrão
erro.
(A) (B)
Fig. 2. Absorção relativa de fomesafen (A) e metabolismo (B) nas populações LN1 e LN3.
prova
Pré-
Diário
prova
Pré-
Diário
Fig. 3. Mudanças nos sequestradores de ROS nas populações LN1 e LN3 de Ipomoea nil tratadas com fomesafen.
(A) conteúdo MDA; (B) conteúdo de ROS; (C) atividade SOD; (D) atividade de POD; (E) atividade CAT. Cada
o ponto representa a média ± padrão de três réplicas.

prova
Pré-
2
Fig. 4. Resultados OPLS-DA. (A) O gráfico de pontuação2(R
X cum =0,974, R 2 Y cum = 0,861 e Q ecum = 0,882).
(B) Gráfico de previsão por teste de permutação de 200 vezes (C) O gráfico de carregamento. (D) Valores de VIP
(variável importante na projeção). MR representa a taxa metabólica de fomesafen.
Diário
Tabela 1. Valores de GR50 e equação de regressão para bioensaios dose-resposta de plantas inteiras de populações
suscetíveis (LN1) e resistentes (LN2-LN11) de Ipomoea nil a fomesafen
y=Cÿ(DÿC)D[1+(x/GR50)b]
Populações Latitude Longitude GR50a R/Sb

CD b
(g ai ha-1)
LN1 N41°51ÿ29ÿ E123°25ÿ59ÿ 1,03 97,92 19.73 1.14 -
LN2 N39°38ÿ3ÿ E122°40ÿ24ÿ 5,08 99,96 414,99 0,93 21,03
LN3 N39°47ÿ17ÿ E121°53ÿ16ÿ 0,66 98,74 442,52 0,91 22,43
LN4 N39°39ÿ5ÿ E121°52ÿ5ÿ 5,46 97,62 178,42 0,72 9,04
LN5 N40°21ÿ51ÿ E122°18ÿ57ÿ 0,05 96,24 427.04 1,48 21,64
LN6 N40°28ÿ13ÿ E122°24ÿ37ÿ 9,36 98,52 77,40 0,91 3,92
LN7 N40°59ÿ50ÿ E121°32ÿ57ÿ 2,16 99,91

prova
Pré- 202.96 0,91 10,29
LN8 N40°55ÿ39ÿ E121°2ÿ8ÿ 4,62 99,40 56,84 0,65 2,88
LN9 N40°42ÿ52ÿ E120°49ÿ35ÿ 0,76 91,99 98,93 1,22 5,01
LN10 N40°37ÿ12ÿ E119°58ÿ21ÿ 2,23 86,06 80,78 1,03 4,09
LN11 N40°38ÿ17ÿ E120°42ÿ34ÿ 2,97 93,98 285,27 1,02 14,46
a
Diário
GR50: dose de herbicida causando redução de 50% no crescimento da população.
b R/S: R-GR50/S-GR50.
Tabela 2. Sensibilidades de populações resistentes ao fomesafeno (LN3) e suscetíveis (LN1) com ou sem inibidores
metabólicos
a GR50 refere-se a
GR50a±SE das populações testadasÿg ia ha-1ÿ
o eficaz
Tratamento
dose de LN1 LN3 R/Sb herbicida
causando 50%
inibição Fomesafen 18,84 ± 2,99 455,02 ± 94,62 24.15 de fresco
peso, e é
indicado Fomesafena +malationa 17,6 ± 3,1 223,66 ± 43,40 12.71
em gramas
ativo de
Fomesafena +NBD-Cl 17,4 ± 1,34 450,22 ± 100,11 23,90
por hectare ingrediente
Os dados foram (g ia ha-1 ). o significado
de dois experimentos. Cada valor representa a média ± erro padrão. b R/S: R-

GR50/S-GR50.
Tabela 3. A taxa de sobrevivência da população suscetível (LN1) e resistente (LN3) de Ipomoea nil após
tratamento herbicida
Número Sobrevivência Sobrevivência
Suscetibilidade Suscetibilidade
Targeta Herbicida de plantas taxa de taxa de
b b
testado LN3 (%) LN1 (%)
fluoroglicofeno
PPO 100 81 RH 0 S
etil
tifensulfurão
ELA 100 88 RH 3 S
metilo
auxina 2,4-D
100 7 S 0 S
sintética etil-hexilo
PSÿ Bentazon 100 2 S 0 S
um PPO, protoporfirinogênio oxidase; ALS, acetolactato sintase; Auxina sintética, mimetizador de auxina;
PSÿ, fotossistema II.
b
HR, altamente resistente; S, suscetível
prova
Pré-
Diário
Resumo gráfico
prova
Pré-
Diário
Destaques
1. Ipomoea nil desenvolveu resistência ao fomesafen em Liaoning, China.
2. A superexpressão dos genes InPPX1 e InPPX2 é um potencial envolvido na resistência
mecanismos.
3. O aumento do metabolismo do herbicida foi responsável pela resistência ao fomesafen em
Ipomoea nil, e servem como o principal mecanismo.
4. Forte capacidade de eliminação de ROS causada por maior atividade de SOD e POD contribui para o
resistência a fomesafen em Ipomoea nula.
prova
Pré-
5. Ipomoea nil resistente a fomesafen desenvolveu resistência múltipla a tifensulfurão-metil e
fluoroglicofena-etil.
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Investigação de mecanismos de resistência ao fomesafen em Ipomoea

Aparecer em: Bioquímica e Fisiologia de Pesticidas

Data de recebimento: 5 de abril de 2023

Data revisada: 30 de maio de 2023

Data aceita: 1 de junho de 2023

© 2023 Publicado pela Elsevier Inc.

Investigação de mecanismos de resistência ao fomesafen em Ipomoea nil

Shihan Cao a1, Yize Zou a1, Shuai Zhang b

Estrada, distrito de Shenhe, cidade de Shenyang 110866, República Popular da China

Distrito de Chaoyang, cidade de Pequim, 100125, República Popular da China

Yize Zou: zouyize@163.com

Shuai Zhang: zhangsh2007@agri.gov.cn

Hongtao Zhang: syzhanghongtao@163.com

Liru Liu: liruliusyau@163.com

Faculdade de Proteção de Plantas, Shenyang Agricultural University, No.120 Dongling Road,

Distrito de Shenhe, cidade de Shenyang 110866, República Popular da China

Recentemente, o herbicida fomesafen freqüentemente falhou em controlar os incômodos

10 suspeitaram de populações resistentes e avaliaram sua sensibilidade ao fomesafen. O

resultados revelaram vários graus de resistência de Ipomoea nil ao fomesafen, com

índice de resistência de 2,88 a 22,43; o maior valor ocorreu na população LN3.

Portanto, os mecanismos de resistência em LN3 ao fomesafen foram explorados. Depois

e 9,29 vezes maior, respectivamente, no LN3 do que no suscetível (LN1)

a espectrometria demonstrou que o metabolismo do fomesafen foi significativamente suprimido

capacidade, que foi representada por maior superóxido dismutase e peroxidase

atribuído principalmente ao aumento do metabolismo. Felizmente, o I. nil resistente ao fomesafen

manteve-se sensível ao 2,4-D-etilhexilester e bentazon, fornecendo métodos para sua

Palavras-chave: Ipomoea nil; Fomesafen; Resistência metabólica; Superexpressão; Reativo

eliminação de espécies de oxigênio

campos na província de Liaoning, China. Possui atributos biológicos competitivos, como

como alta capacidade reprodutiva e hábito trepador, que dificultam a

colheitas em muitas áreas em Liaoning. Herbicidas inibidores da acetolactato sintase (ALS)

o rápido desenvolvimento de resistência a esses herbicidas levou ao protoporfirinogênio IX

ervas daninhas de folha larga em campos de soja (Sarangi e Jhala, 2019).

é codificado pelos genes InPPX1 e InPPX2 , é o alvo dos herbicidas (Lermontova

protoporfirina IX na via do tetrapirrol, que está envolvida na biossíntese de

clorofila e heme (Dayan et al., 2018). Herbicidas inibidores de PPO bloqueiam o

conversão de protoporfirinogênio IX em protoporfirina IX, resultando em uma

acúmulo de protoporfirinogênio IX, que vaza para o citoplasma (Matringe e

peroxidação e danos à membrana celular, eventualmente resultando em fitotoxicidade nas plantas.

As classes comuns de herbicidas inibidores de PPO incluem éteres difenílicos, pirimidinadionas,

N-fenilftalimidas e aril-triazinonas, que são usadas principalmente para controlar

graus de resistência devido ao uso frequente e persistente de herbicidas inibidores de PPO

eficácia e uso sustentável de herbicidas inibidores de PPO.

caminho para a evolução da resistência a herbicidas inibidores de PPO. Um aminoácido

e Gly399) em três locais no gene PPX2 demonstraram conferir resistência a

biótipos de resistência. Gaines e outros. (2010) demonstraram que o número de cópias do

conferiu resistência ao glifosato em Amaranthus palmeri. Outra regulação positiva do alvo

expressão gênica do local, como os genes ALS e acetil-CoA carboxilase (ACCase) ,

foram relatados em Alopecurus aequalis Sobol. e Digitaria sanguinalis (Zhao et

al., 2018; Laforest e outros, 2017).

Além disso, a resistência ao local não-alvo (NTSR) é imprevisível e difícil de

herbicida atingindo o local de destino, reduzindo a absorção e o transporte, aumentando

metabolismo, neutralizando as moléculas citotóxicas produzidas pela ação do

foram identificados e caracterizados, incluindo citocromo P450 monooxigenases

(P450s), glutationa S-transferases (GSTs), glicosiltransferases (GTs), ligação de ATP

transportadores de cassete (ABC), oxidases, esterases, hidrolases e peroxidases (Powles

impactos significativos nas fases de ativação e conjunção do metabolismo de herbicidas.

diferenças na capacidade metabólica entre populações resistentes e suscetíveis que são

mediada por atividades de P450s e GSTs. Aplicação exógena de malathion (P450s

inibidor) e 4-cloro-7-nitrobenzoxadiazol (NBD-Cl) (inibidor de GSTs) foi

demonstrou reverter a resistência metabólica de Sagittaria trifolia L. a benssulfuron-metil

agravar a peroxidação lipídica da membrana e causar um acúmulo excessivo de ROS.