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Informaes do Artigo
Resumo Esta matria apresenta, sucintamente, os princpios de funcionamento de espectrofotmetros para a obteno de espectros eletrnicos de absoro, na regio espectral do ultravioleta ao infravermelho prximo. Traz os esquemas e a descrio de instrumentos de mono e duplo feixes, bem como daqueles com detectores do tipo arranjo de diodos e fotomultiplicadoras. Esse texto ser complementado por um outro, que descrever o princpio de funcionamento de espectrofotmetros para a obteno de espectros eletrnicos de emisso e de excitao em condies fotoestacionrias, normalmente chamados de espectrofluormetros.
Histrico do Artigo
Criado em Fevereiro de 2002
Palavras-Chaves
Espectroscopia Espectrofotmetros Espectrofluormetros Radiao eletromagntica UV-Vis IV prximo Difrao Detectores Obturadores
O efeito da absoro Espectros eletrnicos de absoro e a razo pelas quais o efeito da absoro de radiao ultravioleta, visvel e no infravermelho prximo (UV-Vis-Nir) pode ocorrer so objetos dos estudos da Espectroscopia ptica e sero abordados em outros textos [1-3]. Entretanto, para ilustrar o processo da absoro por parte de algumas espcies, pode-se ver o que ocorre com o espectro da luz transmitida atravs de solues coloridas1. Alguns exemplos esto na Figura 1, que mostra o conjunto
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dos comprimentos de onda emitidos por uma lmpada, dando origem luz branca (Figura 1a) e a regio do espectro que est sendo absorvida pelas solues coloridas. Na parte b da Figura 1, uma soluo de azul de bromo timol (que tem cor laranja) absorve quase toda a parte do espectro nas cores azul, verde e amarelo permitindo a transmisso das cores vermelho, parte do amarelo e parte do verde. Para comparao pode-se ver, na parte inferior da figura, o espectro todo da luz emitida pela lmpada e na superior a parte transmitida pela soluo na qual todo o azul, violeta e parte da cor verde foram absorvidos.
A obteno do espectro de cores da lmpada e da luz transmitida pela amostra foi feita difratando-se a luz atravs de uma grade de difrao e fotografando-se o espectro projetado em uma parede branca. Os espectros das solues foram obtidos em um espectrofotmetro de absoro, utilizando-se uma soluo dos corantes contidas em uma cubeta de vidro de 1 cm de caminho ptico.
* Autor para contato
Os espectrofotmetros de absoro Espectrofotmetros em geral so instrumentos compostos por um conjunto de componentes do seguinte tipo: uma fonte de radiao eletromagntica, um conjunto de componentes pticos que levam esta radiao at a amostra, um compartimento de amostra e um ou mais detectores que medem a intensidade de radiao. Dependendo da finalidade e do fabricante os arranjos pticos destes instrumentos podem ser bastante diferentes. A concepo de um espectrofotmetro para absoro tambm bastante diferente de um espectrofotmetro para luminescncia, que por sua vez so denominados espectrofluormetros [1,2]. Este texto se refere apenas aos espectrofotmetros de absoro, operando na regio espectral do ultravioleta (UV) (200 < < 380-400 nm), visvel (Vis) (380-400 nm < < 700-800 nm) e infravermelho prximo (do ingls, near infrared - NIR) (800 nm < < 3300 nm) e descrever os seus principais componentes.
c - Espectro de uma soluo etanlica de fluorescena 10-5 molL-1 (amarela) Figura 1 - a. conjunto dos comprimentos de onda correspondentes ao espectro de emisso de uma lmpada de tungstnio-halognio (luz branca); b. regio espectral transmitida por uma soluo de azul de bromotimol e o respectivo espectro de absoro; c. regio espectral transmitida por uma soluo de soluo amarela de fluorescena e o respectivo espectro de absoro.
b - Espectro de uma soluo aquosa de azul de bromotimol 10-5 mol L-1 (laranja)
Fontes de radiao
Ser denominada radiao eletromagntica o feixe proveniente de uma fonte emissora (lmpada). Nos espectrofotmetros de absoro estas fontes so lmpadas que emitem feixes na regio do espectro denominada
ptica. Por isto do lugar chamada espectroscopia ptica. Se a fonte emitir na regio do visvel, a radiao conhecida como luz. A fonte de radiao (comumente chamada de lmpada) ideal para um espectrofotmetro aquela que apresenta uma intensidade aproximadamente constante em toda faixa de comprimento de onda de operao, com pouco rudo e longo perodo de estabilidade. Em funo do fato que um nico tipo de lmpada no satisfaz todas estas condies, os espectrofotmetros para absoro tm, normalmente, dois tipos de fontes. As fontes que so comumente usadas nos espectrofotmetros que operam na regio espectral do UV-Vis so: as lmpadas de deutrio (tempo de vida: 1.000 h), para excitao na regio do ultravioleta ( < 350 nm) e de tungstnio ou tungstniohalognio ( > 350 nm; tempo de vida 10.000 h) para excitao na regio do visvel e infravermelho prximo. Normalmente a regio espectral em que se pode medir os espectros a regio chamada UV-Vis (200 nm < < 800 nm), mas alguns instrumentos operam na regio que atinge o infravermelho prximo, e neste caso utilizada a denominao UV-Vis-Nir (175 nm < < 3300 nm). As emisses espectrais caractersticas das lmpadas de deutrio e de tungstnio-halognio so mostradas na Figura 2 e na Figura 3, respectivamente.
Existem, portanto, instrumentos que operam na regio do UV-Vis (180-800 nm) e outros que operam na regio do UV-Vis-Nir (180-3000 nm) e, dependendo do tipo de espectro que se deseja obter, deve-se selecionar o instrumento mais adequado. lgico supor-se que instrumentos que operem em uma faixa mais ampla de comprimentos de onda devem apresentar um custo de aquisio e de manuteno tambm maior.
Grades de difrao
A segunda estrutura fsica que define o tipo de espectrofotmetro so os seus componentes pticos. Dependendo dos tipos de componentes pticos, os espectrofotmetros so classificados em: dispersivos2, sendo que nesta categoria se enquadram os instrumentos com elementos pticos do tipo de difrao (prismas ou grades) e os interferomtricos3. No caso dos espectrofotmetros de absoro na regio
Elementos dispersivos so aqueles que difratam a luz, como por exemplo prismas e grades de difrao.
Elementos interferomtricos so aqueles que produzem processos de interferncia da radiao eletromagntica como, por exemplo, o interfermetro de Michelson, que utilizado nos espectrofotmetros operando na regio do infravermelho que se utilizam a transformada de Fourier do sinal.
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do UV-Vis-Nir, diferentemente dos instrumentos que operam na regio do infravermelho, os instrumentos so sempre dispersivos, sendo que normalmente o elemento de disperso uma grade de difrao. A forma com que a radiao eletromagntica sofre difrao atravs de uma grade est baseada na lei de difrao de Bragg [4]. A finalidade deste componente a de difratar a luz de modo que diferentes comprimentos de onda iro incidir sobre a amostra permitindo que se determine sua absorbncia em cada um destes comprimentos. Este conjunto de dados resulta no que se chama espectro de absoro. Uma grade de difrao um componente ptico que contm uma srie de ranhuras, que so justamente os elementos responsveis pela difrao. Dependendo do nmero de ranhuras por milmetro, haver uma maior ou menor resoluo dos espectros. Instrumentos com melhor resoluo espectral tero grades de difrao com maior nmero de ranhuras por milmetro, e, conseqentemente, este um (mas no o nico) parmetro a ser avaliado na seleo de um instrumento. Em pocas passadas as ranhuras eram feitas mecanicamente, porm atualmente estas so feitas atravs de processos denominados hologrficos. Neste caso feito um depsito de uma camada muito fina de um material sobre um substrato de vidro ou de quartzo, que , posteriormente, corrodo em certas regies definidas por uma figura de interferncia gerando sobre este material um conjunto de vales e topos denominados ranhuras [5]. A qualidade de uma grade de difrao controlada pelo nmero de ranhuras por unidade de rea e pela preciso com que estas foram feitas. Nos catlogos dos espectrofotmetros dever estar indicado o tipo (hologrfica ou no) e o nmero de ranhuras da grade de difrao do instrumento. Mostra-se na Figura 5 o espectro de difrao da radiao eletromagntica produzido por um prisma; na Figura 6, o mesmo espectro de difrao produzido por uma grade, e na Figura 7 o espectro de difrao na regio do visvel, ao qual pode-se denominar espectro da luz visvel. A natureza, caprichosamente, tambm pode produzir difrao de luz. Um dos exemplos disto a existncia do arco-iris (Figura 8).
Figura 5 - Espectro visvel da luz de uma lmpada difratada por um prisma: (a) esquema e (b) fotografia.
Figura 6 - Espectro visvel da luz de uma lmpada difratada por uma grade de difrao : (a) esquema e (b) fotografia.
Figura 7 - Espectro visvel de uma fonte de luz branca difratada por uma grade de difrao.
Detectores O outro conjunto importante de elementos que compe um espectrofotmetro o tipo de detector que emprega. Assumindo-se que se est tratando de sistemas que empregam como elemento de difrao da radiao uma grade, o tipo de detector ir definir todo o conjunto de elementos pticos adicionais. Duas grandes classes de espectrofotmetros esto
disponveis: os que utilizam como sistema de deteco um tubo fotomultiplicador e os que utilizam arranjo de diodos. Um tubo fotomultiplicador formado por um tubo de vidro ou de quartzo sob vcuo, no qual existe um conjunto de placas metlicas interligadas. Na Figura 9 mostra-se um esquema (a) e uma fotografia (b) do tubo fotomultiplicador HAMAMATSU - R928, que utilizado no espectrofotmetro Cary 2300 - Varian.
Existem diversos outros tipos e o mais adequado est normalmente especificado no catlogo do fabricante do instrumento. Como normalmente os fabricantes dos espectrofotmetros adquirem estes detectores de terceiros, muitas vezes mais econmico comprar diretamente do fabricante. Neste caso, consulte o fabricante para a aquisio do modelo adequado. Quando a radiao incide sobre estas placas metlicas elas induzem uma corrente eltrica, de acordo com o que descrito pelo efeito fotoeltrico4 proposto por Einstein [4,6]. Em funo do fato destas placas estarem interligadas e de uma diferena de potencial eltrico estar sendo aplicada entre elas, esta fotocorrente amplificada por um circuito eletrnico adequado, de modo que um sinal muito baixo de corrente eltrica pode ser detectado e
Figura 10 - Fotografias de arranjos de diodo com 1024 elementos (detectores de diodo): a. vista de topo; b. vista de perfil.
De modo simplificado, um arranjo de diodos consiste em uma srie de detectores fotodiodo posicionado lado a lado em um cristal de silcio, de modo que cada comprimento de onda difratado pela grade atinge um ponto deste arranjo, e conseqentemente um detector. Cada diodo tem um capacitor dedicado e est conectado por um interruptor tipo transistor para uma linha de sada comum a todos. Deste modo, a radiao que atravessa a amostra integral e instantaneamente analisada determinandose, portanto, a absorbncia em todos os comprimentos de onda determinada de modo simultneo. Um esquema de um arranjo de diodo ilustrado na Figura 11.
O efeito fotoeltrico foi descoberto por Einstein, quando estudava a radiao do corpo negro. Segundo suas observaes, uma superfcie metlica quando irradiada pela radiao eletromagntica com uma energia acima de um certo valor crtico, passava a conduzir eletricidade. Este valor crtico, ou limite, de energia foi denominado funo trabalho e correspondia ao valor mnimo de energia necessrio para ejetar um eltron da superfcie metlica. Detalhes sobre a descrio do efeito fotoeltrico podem ser obtidos em vrios livros textos de Qumica e de Fsica, entre eles os citados nas referncias 4,6 e 7 deste texto.
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Figura 11 - Esquema de funcionamento do arranjo de diodos [5]. Este esquema ser descrito em texto complementar.
Este tipo de instrumento bastante simplificado na sua ptica, se comparado aos instrumentos com fotomultiplicadoras como detectores, e os espectros so obtidos mais rapidamente, mas um instrumento com menor sensibilidade. Um outro fator importante que os detectores de arranjo de diodos tambm tm sensibilidades diferentes aos diversos comprimentos de onda, de modo que necessrio que se especifique em que regio do espectro se vai trabalhar ao se propor a aquisio de um instrumento. Alm disto, a qualidade do instrumento, em termos de sua resoluo espectral, depende do tipo e do nmero de diodos que compe o arranjo.
Figura 13. Esquema do sinal pulsado de luz que atravessa ou refletido pelo obturador eletromecnico, onde o ponto amarelo corresponde fonte de radiao, a regio branca do obturador a vazada (transmite) e a regio cinza do obturador espelhada (reflete). Os pulsos de luz refletida e transmitida so defasados em funo da freqncia de rotao do obturador.
Quando o feixe atinge a parte vazada atravessa e segue um certo caminho ptico; quando ele atinge a parte espelhada refletido e segue um outro caminho; e finalmente, quando atinge a regio negra, o feixe absorvido pelo disco. Portanto, a finalidade do obturador a de alternar o caminho ptico do feixe. Como ele gira a uma velocidade maior que a velocidade de varredura da grade, cada comprimento de onda selecionado pela grade que incide sobre o disco ir, alternadamente, fazer um ou outro caminho ptico. Um destes caminhos far com que o feixe atravesse a amostra; o outro caminho far com que o feixe atravesse uma referncia. Ambos os feixes sero posteriormente dirigidos, por espelhos at o detector (tubo fotomultiplicador), de modo que este estar medindo a intensidade do feixe que, alternadamente, passa pela amostra e pela referncia, a cada comprimento de onda. Um circuito eletrnico compara estes dois sinais e os converte em uma escala apropriada de absorbncia a cada comprimento de onda, corrigida eletronicamente.
Note, portanto, que um instrumento de duplo feixe no tem dois feixes emissores, no seu sentido estrito, mas tem uma nica fonte (um nico feixe) que segue caminhos pticos alternados. O sincronismo entre a velocidade do obturador eletromecnico e a capacidade de resposta da fotomultiplicadora um fator importante para o bom registro de um espectro. No esquema ptico de um espectrofotmetro de duplo feixe (Figura 14), descrito no prximo tem, (Esquemas pticos), um segundo obturador eletromecnico ligado ao primeiro com movimentos sincronizados para direcionar a luz alternadamente atravs do compartimento da amostra e da referncia. Assim, a radiao monocromtica ao atingir o primeiro obturador eletromecnico, na parte vazada, atravessa, refletida por um espelho e direcionada ao compartimento da amostra. A radiao transmitida pela amostra passa para o segundo obturador eletromecnico incidindo na parte espelhada, onde refletida para o detector. Quando no primeiro obturador eletromecnico a luz incide na parte espelhada, esta refletida e passa pelo compartimento da referncia, e encontra o segundo obturador eletromecnico na parte cortada e refletida ao detector.
na qual T o valor da transmitncia da amostra em um certo comprimento de onda; Ia, Ir e Ib, so as intensidades de corrente medidas pela fotomultiplicadora referentes radiao transmitida pela amostra, pela referncia e do rudo de fundo, respectivamente. O valor da transmitncia da amostra e o comprimento de onda medido so enviados a um microcomputador e o conjunto deles registrado na forma de um espectro T versus (nm). Um espectro , portanto um grfico da intensidade de radiao transmitida nos vrios comprimentos de onda. Pode aparecer na forma de transmitncia ou de absorbncia (1 - T) e isto justamente o que est registrado como espectros na parte inferior da Figura 1. Da mesma forma que no espectrofotmetro com arranjo de diodo, neste tipo de espectrofotmetro tambm necessrio, antes de se obter o espectro da amostra, obter-se um espectro do rudo de fundo (isto , todo o rudo da parte eletrnica do instrumento, da oscilao de intensidade da emisso da lmpada, das intensidades em comprimentos de onda diferentes [que tambm so diferentes], da sensibilidade da fotomultiplicadora em comprimentos de ondas diferentes, etc) ou do solvente (branco), no caso de espectrofotmetro de duplo feixe. Aps a medida do branco, a cubeta com o solvente permanecer no compartimento da referncia durante a obteno do espectro da amostra, ocorrendo a subtrao dos dois simultaneamente. O resultado final ser apenas o espectro da amostra.
Esquemas pticos
Figura 14 - Esquema ptico de um espectrofotmetro de duplo feixe, com detector do tipo tubo fotomultiplicador [8].
No final tanto a radiao transmitida pela amostra quanto a transmitida pela referncia atingem o detector alternadamente. A terceira parte do obturador eletromecnico (slida pintada de preto) serve para subtrair ou corrigir qualquer sinal residual que possa surgir, o detector considera esta parte escura (sem luz) do obturador eletromecnico como zero. Finalmente o resultado do ciclo do obturador eletromecnico no detector ento calculado por:
De maneira geral, os esquemas pticos dos espectrofotmetros diferem entre si por usarem detectores do tipo de arranjos de diodo ou do tipo tubo fotomultiplicador.
atravs de uma lente (lens) sobre a amostra. Portanto, todo o espectro de emisso da lmpada incide sobre a mesma, sendo que a radiao incidente ser, em parte, absorvida. Esta radiao que atravessou a amostra (sample) (transmitida ou emergente) ir incidir sobre uma lente que focaliza o feixe sobre uma fenda (slit), e desta sobre uma grade de difrao. Esta grade (grating) ir difratar a radiao, separando os seus diferentes comprimentos de onda, sendo que cada um deles ir incidir sobre um diodo do arranjo. Este diodo, ao ser irradiado, produz uma corrente eltrica cuja magnitude depende da intensidade da emisso (novamente aqui se aplica o efeito fotoeltrico). Atravs de um circuito de calibrao adequado, esta corrente ser transformada em absorbncia nos diferentes comprimentos de onda, resultando no que se convenciona chamar de espectro de absoro.
O procedimento experimental convencional de obteno de espectros de absoro em um instrumento deste tipo envolve inicialmente o registro de um espectro do rudo de fundo (background) ou do solvente ou do ar (a serem utilizados como branco). Arquiva-se o mesmo e, em seqncia, se obtm o espectro da amostra e se efetua a subtrao dos dois. O resultado deve ser o espectro da amostra tendo-se o solvente (ou ar) como branco.
Referncias 1. Atvars, T. D. Z.; Martelli C., Espectroscopia eletrnica de emisso, http://www.chemkeys.com 2. Atvars, T. D. Z.; Martelli C., Espectroscopia de luminescncia, http://www.chemkeys.com 3. Bassi, A. B. M. S. Conceitos fundamentais em espectroscopia, http://www.chemkeys.com
4. Karplus, M.; Porter, R. N., Atoms and Molecules An Introduction for Students of Physical Chemistry, The Benjamin, London, 1970. 5. Oriel Corporation, Light sources, monochromators and detection systems, Catalogue 1986. 6. Hanna, M. W., Quantum Mechanics in Chemistry, W. A. Benjamin, 2nd Edition, 1969. 7. Owen, T., Fundamentals of Modern UV-Visible Spectroscopy, 1996, pp. 39-43. 8. Manual de operao do espectrofotmetro Cary 5G Varian - 1995, A-1, B-3.