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Isolamento e Caraterizao do Amido Resumo:

O trabalho realizado teve como objetivo demonstrar experimentalmente o isolamento e caracterizao do amido testando a presena na soluo com a reao de iodo, verificar a extenso da hidrlise enzimtica, utilizando o espectrofotmetro, com o valor da absorbncia no tempo de cinco minutos, calcula-se a v=117,22mol/L*min.

Introduo:
O amido que encontrado na formula de grnulos, o principal carboidrato de reserva vegetal, alm de ser o mais importante da alimentao humana. E a quantidade do amido em sementes e tubrculos como a batata muito alta. Estes grnulos de amido so insolveis, e quando se aquece uma suspenso de amido, estes grnulos se desintegram e formam uma soluo coloidal. O amido pode ser precipitao das solues em condies quem ocorrem a desidratao. O amido consiste em uma mistura de amilase e amilopectina. A amilase um polissacardeo linear formado por unidades de D-glicose unidas por ligaes glicosdicas do tipo -(1-4).A amilopectina altamente ramificada, sendo formada por unidades de d-glicose -(1-4) e -(1-6).sendo a estrutura da amilose:

Existem diversas reaes que permitem caracterizar a presena de carboidratos em uma soluo, entre as quais a reao com o iodo, que as molculas de iodo podem ser ocludas pela hlice da amilose, formando um complexo azul escuro e quando aquecido a soluo pode perder a colorao. Verifica-se a extenso de hidrolise de polissacardeos, por meio de reaes especificas, como hidrolise enzimtica que consiste em amilases que catalisam a hidrolise do amido.Um exemplo so as -amilases so endo-enzimas e as amilases so exo-enzimas.A -amilase, salivar e pancretica, catalisa a hidrolise das ligaes glicosdicas -(1 -4) da amilose, amilopectina e glicognio, produzindo na clivagem inicial, produzindo oligassacarideos de glicose e maltose.

Materiais e Mtodos:
Parte 1:Isolamento do amido e preparo da soluo de amido Materiais:

50g de batata inglesa; Liquidificador; Agua destilada; Bquer ; Gaze; Chapa de aquecimento; Basto de vidro

Colocou-se a batata no liquidificador com 100 ml de gua destilada e homogeneizouse.Entao filtrou-se em gaze,deixou-se o filtrado em repouso para sedimentao do amido.Eliminou-se o maximo do sobrenadante e conservou-se o sedimento que juntouse com 100 ml de gua.retirou-se uma alquota de 20 ml do sedimento diludo e ferveuse com agitao constante com o basto de vidro ate obter uma solucao coloidal,gelatinizar e deixou-se esfriar. Parte 2: reacao de iodo Materiais: Pipeta; Pera; Tubo de ensaio; Solucao de iodo; Solucao coloidal de amido; Conta gota; Banho Maria; Retirou-se uma alquota de 2 ml da solucao coloidal obtida, colocou-se em um tubo de ensaio com uma gota de iodo.Em seguida aqueceu-se o tubo em banho-maria fervente por 10 minutos. Parte 3:Hidrlise enzimtica Materiais: Solucao cloidal de amido; Saliva; Solucao de iodo; Solucao de DNS; Pipeta; Erlenmeyer; Espectrofotmetro; Tubos de ensaio; Banho de gua a 37C; Agua destilada;

Colocou-se 2 ml de saliva num tubo de ensaio e diluiu-se com 2 ml de gua destilada. Diluiu-se a soluo coloidal de amido com 20 ml de solucao e 20 ml de gua destilada em um erlenmeyer.Colocou-se o erlenmeyer em banho de gua a 37 C, deixando-o por 2 minutos. Neste tempo, preparou-se uma bateria de 10 tubos de ensaio, 5 contendo 2 gotas de soluo de iodo em cada um e os outros 5 com 1ml de DNS em cada. Aps 2 minutos adicionou-se ao erlenmeyer 1ml da saliva diluda, agitou-se e retirou-se imediatamente 2ml da mistura com o auxlio de uma pipeta, sendo 1ml adicionado soluo de iodo e 1ml ao DNS, sendo essas amostras as do tempo zero. Assim, retirou-se 2ml da mistura a cada 5 minutos, at o tempo de 20 minutos , obtendo as amostras para cada tempo, tanto para a reao de iodo como para com o DNS. Os tubos nos quais fez-se a reao com o DNS foram levados em banho Maria fervente por cerca de 2 minutos. E ento, adicionou-se cerca de 10ml de gua destilada em cada tubo e, aps os tubos resfriarem, fez-se a leitura das absorbncias em comprimento de onda de 540nm em um espectrofotmetro, utilizou-se o tubo correspondente ao tempo zero para calibrao do aparelho.

Resultados e discusso:
Na reao com o iodo, temos que no primeiro instante a soluo ficou azul, isso ocorre porque as molculas de iodo podem ser ocludas pela hlice da amilose e neste complexo as molculas de iodo esto paralelas ao eixo da hlice.O componente do amido responsvel pela colorao amilose,que em sua reao com amilopectina apresenta uma cor marrom avermelhada.A figura abaixo, representa a conformao espacial da amilose:

Quando se colocou o tubo em banho-maria, a soluo perde a colorao tornando-se incolor. Isto pode ser explicado pelo fato deste complexo se dissociar no aquecimento por causa da perda da estrutura helicoidal, devido o enfraquecimento das ligaes da estrutura do amido.

Para o parte 3, temos que os tubos que continham iodo, aps adicionara solucao de amido e saliva, apresneta coloracao azul.E quanto mais tempo no banho de gua a 37C,a solucao foi enfraquecendo a cor, ate tornar-se incolor.Isso ocorre porque as saliva contem enzima capaz de hidolisar amido e a reacao amido-iodo vai sendo enfraquecida aos poucos,j que a estrutura do amido quebrada em glicose e maltose. Os tubos contendo mistura e DNS aps banho-maria e diluio, so levados para a leitura de absorbncia, no espectrofotmetro com comprimento de onda de 540 nm. Tabela 1: absorbncias das solues tubo absorbancia 1 0 2 0,815 3 0,991 4 1,032 5 1,051

Garfico: tempo x absorbancia 1.4

1.2

1 absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

10 tempo

12

14

16

18

20

Pela equao dada em sala de aula, abteve-se a concentracao de glicose para cada tubo. Y= 7,382*X + 0,0359 Y= absorbncia X= concentracao de glicose(mg/ml) Tabela 2: concentracao de glicose Tubos Absorbancia 2 3 4 5 0,815 0,991 1,032 1,051

Concentracao de Glicose
0,1055

0,1294 0,1349 0,1375

Grfico 2: concentrao de glicose x Tempo


0 .14

0 .12

0.1

concentracao

0 .08

0 .06

0 .04

0 .02

10 12 Te m p o

14

16

18

20

Do grfico observa-se que apresenta caracterstica linear ate o tempo de 5 minutos,assim utilizou-se a concentrao neste tempo, para calculo da velocidade: V=concentrao de glicose/ tempo V= 0,1055/5 V= 0,0211 mg/ml*min Sendo a massa molar da glicose M = 180g/mol: V = 0,02011E-3/180 = 1,1722E-7 mol/ml*min Sendo 1 mol = 1E-6mol e 1L = 1000ml: V = 117,22mol/L*min

Concluso:
Aps obter uma soluo de amido, podemos evidencia-la com reao de iodo, onde ocorre alterao da coloroo, de incolor para azul, caracterizando o amido.E aps o aquecimento temos o proceso inverso(azul- incolor), j que as ligaes so enfraquecidas,tendo a dissociao do complexo formado anteriormente.E vemos que isso tambem ocorre se estiver presente a enzimas, como a saliva. Para a reao do DNS, com a solucao de amido e saliva, verifica-se que quanto mais tempo o amido fica junto com a saliva,que contem enzimas, maior ser a concentrao de glicose presente na soluo, isso ocorre por causa do processo de hidrolise.Podendo observar a extenso da hidrolise enzimtica.

Bibliografia:

*Lehninger,A.L.Bioquimica volume 1;traduo da segunda edio americana,1917 *Voet,Donald.fundamentos de bioquimica:a vida em nivel molecular/Donald Voet,Judith Voet,Charlotte W.Pratt;traduo Jaqueline Josi Sama Rodrigues [et al.].-2 ed.,2008