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ANAEROBIOS

Rivas
ORIGEN Y DEFINICION problema adicional se plantea por la tendencia a tornarse
La presencia de una atmósfera terrestre rica en O2 ha Gram negativos, sea por la poca estabilidad frente a la
permitido que los seres vivos hayan evolucionado decoloración (se prefiere el uso de alcohol a la mezcla
desarrollando un metabolismo aeróbico, el cual se alcohol-acetona) lo que los convierte en Gram inestables
caracteriza por ser una forma muy eficiente de obtención al examen directo de los materiales, sea porque existe
de energía. A nivel bacteriano las bacterias anaerobias una variación tintorial en los cultivos bacteriológicos.
precedieron largamente a las aeróbicas y sin duda Dos aspectos a tener en cuenta en la tinción de Gram
predominaron largamente en un mundo vivo que son:
comenzaba a desarrollarse. a. efectuar la decoloración solamente
Los anaerobios generalmente poseen un metabolismo con alcohol etílico prescindiendo de la acetona,
de tipo fermentativo en el cual sustancias orgánicas son y
los aceptores finales de electrones. Las formas b. prolongar el tiempo de contacto con
vegetativas mueren cuando son expuestos al O2 Lugol hasta 1 minuto.
molecular libre en la atmósfera, aunque el grado de La morfología celular, sobre las bases del Gram,
resistencia bajo estas condiciones es variable permite distinguir formas variadas que incluyen toda la
(AEROTOLERANCIA); Los esporos bacterianos no son gama: Cocos Gram positivos, cocos Gram negativos,
afectados por tratarse de formas biológicas diplococos, estreptococos; bacilos Gram negativos,
metabólicamente inertes y con muy escasa proporción de cocobacilos, fusiformes, bacilos rectos o curvos; bacilos
agua en su composición. Gram positivos, esporulados o no esporulados,
En consecuencia una definición simple de las espiroquetas, etc.
bacterias anaerobias sería: anaerobios son aquellos
gérmenes que sólo pueden desarrollarse en ausencia de EL METABOLISMO DE LOS ANAEROBIOS
cantidades significativas de Oxígeno (O2) y bajo OXIGENO SENSIBILIDAD
condiciones de potenciales REDOX (Eh) muy reducidos. Los anaerobios estrictos crecen y se multiplican en
En el mundo microbiano existen especies capaces de ausencia total de Oxígeno molecular (O2) logrando
alternar con sistemas metabólicos diferentes para crecer obtener energía libre y sintetizar todos sus componentes
y multiplicarse en muy diferentes condiciones de estructurales sin la ayuda del O2. Todos sabemos que la
aerobiosis, total, reducida o ausente. Son gérmenes vía anaerobia posee un menor rendimiento energético y
facultativos. Otros solamente subsisten en rangos está sujeta a potenciales REDOX bajos (algunas enzimas
estrictos de gases tales como el O2 y el CO2 solamente operan en estas condiciones) y sin la presencia
(microaerófilos). Los anaerobios son poseedores de de elementos que interfieran el flujo normal de
sistemas enzimáticos que solamente funcionan en electrones.
ausencia de O2 por tanto son estrictos en cuanto a sus Si bien el O2 es potencialmente tóxico para cualquier
exigencias de Medio Ambiente. forma de vida, los anaerobios son intolerantes al mismo
De ahora en más el término Anaerobios se aplicará aunque en diferentes grados. Existe un espectro que va
solamente para este tipo de gérmenes. desde los extremadamente intolerantes (aerointolerantes)
El conocimiento de estas bacterias es poco y hasta los aerotolerantes moderados los cuales pueden
relativamente reciente ya que para poder lograr sobrevivir a la presencia de O2 durante breves períodos.
condiciones de anaerobiosis en el Laboratorio se Varias son las causas de la Oxígeno toxicidad. En 1er
necesitaban, hasta los años 60, equipos costosos y lugar el Oxígeno es un poderoso oxidante, es decir, un
técnicas bacteriológicas muy dificultosas. A partir de la ávido receptor de electrones, por lo tanto su presencia en
introducción de sistemas simples para producir solución es incompatible con potenciales REDOX bajos.
anaerobiosis con equipos y reactivos de bajo costo el En esta situación el flujo de electrones se ve interferido
conocimiento de los anaerobios se desarrolla por un receptor extraño al usual de los gérmenes
intensamente. Aun así, no hay un gran número de provocando shunts letales. En segundo lugar el Oxígeno
Microbiólogos que se dediquen al Tema, la taxonomía puede interactuar directamente con enzimas o cofactores
está en permanente revisión e infinidad de aspectos se causando inactivaciones irreversibles. En tercer lugar y
mantienen oscuros. aparentemente, la causa más importante de la Ox.
toxicidad se atribuye a la producción de sustancias
MORFOLOGIA Y TINCION tóxicas derivadas de la reducción parcial de la molécula
Como en casi toda la bacteriología, la morfología de O2. Simplificando se pueden dar las siguientes
los anaerobios se basa en la tinción de Gram. Un reacciones químicas:
1
antibioticoterapia empírica racional y al microbiólogo
O2 + 4H + 4e- --> H2O (reducción completa) para seleccionar los Medios de Cultivo más apropiados
al aislamiento e identificación bacterianos.
O2 + 2H + 2e- --> H2O2 (reducción parcial) La TABLA 1 muestra el predominio de las especies
más comunes como flora normal humana según
O2 + e- --> O2.- diferentes localizaciones.

La formación de Peróxidos de Hidrógeno (H2O2)


puede ser catalizada por varias enzimas y su letalidad
para las bacterias está fehacientemente comprobada. Por
otra parte el anión Superóxido (O2.-) es altamente tóxico
por su participación en la producción de hidroxilos libres
(HO.-) agentes letales para los microorganismos.
Aquellos anaerobios aerotolerantes poseen enzimas
como Catalasas y peroxidasas que descomponen los
H2O2 en H2O + O; otros poseen Superóxido-dismutasas
(SOD) que actúan eliminando los O2.-; más aun las SOD
han sido postuladas como factores de virulencia en los
anaerobios ya que estas enzimas permitirían la sobrevida
de las bacterias en tejidos oxigenados hasta que el
consumo de Oxígeno creará el ambiente adecuado para
la multiplicación y desarrollo.

POTENCIALES REDOX
El potencial de Oxido Reducción (Eh) de una pareja
REDOX es la medida en VOLTIOS de la tendencia
espontánea a donar o recibir electrones por parte de uno
de los integrantes de la pareja (flujo de electrones). Una
pareja REDOX posee una forma reducida (dador de
electrones) y una forma oxidante (receptor de electrones)
Reductor <---> oxidante + electrones. En consecuencia
cuanto menor sea la cantidad de formas oxidantes menor
o más bajo será el potencial REDOX. La presencia de O2
en los cultivos o en el medio natural debe ser eliminada
imprescindiblemente del microclima de desarrollo (O2
atmosférico y en solución. Aún mas el descenso de los
Eh debe afirmarse con la presencia en el medio de
sustancias reductoras que superen en gran número a las
oxidantes.

FLORA NORMAL ANAEROBIA


El hombre conjuntamente con los animales
(mamíferos, aves, peces) es hospedero en sus epitelios,
mucosas y aparatos de un gran número de Especies y de
un gran número de individuos anaeróbicos. Estos son
miembros de una FLORA NORMAL beneficiosa y hasta
en algunos casos esencial para la vida. El conocimiento
de esta flora normal es importante desde varios ángulos.
Si pensamos que muchas infecciones anaeróbicas se
desarrollan en la vecindad de las superficies mucosas en
las cuales estos gérmenes predominan como flora
autóctona, el conocimiento de la misma se presenta de
gran utilidad para sospechar quienes estarían
involucrados en los procesos infecciosos. Esta
información ayuda al Clínico para establecer una
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TABLA 1

Piel V.R.S.(#) Boca Intestino Genitales Uretra Vagina


externos
Bacilos Gram
(+) esporulados
Clostridia 0 0 1 3-4 0 1 1

Bacilos Gram
(+) no esporulados
Actinomyces 0 2 2 1 0 0 0
Bifidobact. 0 0 2 1 0 0 2
Eubacterium 1 1 2 3-4 d d 1
Lactobac. (*) 0 0 2 2 0 1 3-4
Propionibact. 3-4 2 1 1 d 0 2
Bacilos Gram
(-) no esporulados
Bacteroides 0 2 3-4 2 2 2 2
Fusobact. 0 2 3-4 2 2 2 1

Cocos G (+) 2 2 3-4 3-4 2 1 2

Cocos G (-) 0 2 3-4 2 0 d 2


(#) Vías Respiratorias Superiores; incluye vías nasales, nasofaringe, orofaringe y amígdalas.
(*) Incluye anaerobios, facultativos y microaerófilos.
(d = desconocido) (0 = no encontrados o raros) (1 = hallazgo irregular) (2 = habitualmente presentes) (3-4 presentes
en gran número).

de superficie ricas en cisteína.


ESPOROS Esta propiedad de esporular le confiere a las especies
Algunas especies de anaerobios (bacilos Gram que la poseen una singular resistencia frente los agentes
positivos del Género Clostridium) poseen la capacidad físicos y químicos habitualmente usados para la
de esporular, esto es, producir esporos. Se trata de desinfección y una permanencia prolongada en el medio
estructuras biológicas genéticamente iguales a su ambiente. Sin duda la ubicuidad y la peligrosidad de
antecesor vegetativo, metabólicamente inactivos y estos gérmenes son resaltables y su permanencia en la
altamente resistentes a condiciones medioambientales ecología microbiana está por demás asegurada.
adversas (Temperatura, humedad, radiaciones UV, El proceso de esporulación comienza durante la fase
agentes químicos). de desarrollo estacionario luego de la falta de ciertos
La germinación de los esporos conduce a la forma nutrientes, una vez que se inicia el proceso este es
vegetativa de la bacteria y puede suceder, en algunos irreversible y una enorme cantidad de cambios
casos luego de varios años. La resistencia de los esporos metabólicos comienzan dentro de la célula con la
a altas temperaturas -120ºC hasta 15 minutos- producción y almacenamiento de enzimas y proteínas
desecación, falta de nutrientes, presencia de sustancias distintas a las de la forma vegetativa, que luego formarán
químicas antisépticas, radiaciones. La resistencia al calor parte del esporo.
se explica por los escasos porcentajes de H2O en su El factor desencadenante está constituido por la
constitución (proceso de desecación paulatino del esporo carencia de fuentes de Carbono y Nitrógeno,
en la maduración) y la presencia de Calcio y ácido concretamente la falta de concentraciones adecuadas de
dipicolínico como agentes quelantes, mientras que la trifosfato de guanosina (GPT) intracelulares inicia la
resistencia a los otros agentes físico/químicos estaría esporulación y se sabe que todas las deficiencias
dada por lo menos en parte por la presencia de proteínas nutricionales que conducen a una disminución del pool

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de GPT desencadenan la esporulación. Dos tipos de especies de Fusobacterium, Veillonella y Bacteroides.
carencias son conocidas como responsables de la Estas sustancias tienen una actividad "endotoxina"
disminución del GPT: similar a las de los bacilos Gram negativos facultativos.
1. Disminución del precursor purínico P- Su actividad es algo menos potente pero se ha
ribosil-PP, que ocurre cuando hay carencias de demostrado su capacidad (en Bacteroides) de participar
Carbono. en la producción de abscesos y de causar
2. La carencia de aminoácidos la cual se hipercoagulabilidad. El polisacárido capsular de los
relaciona con el aumento de nucleótidos fosforilados Bacteroides del grupo fragilis es otro factor de
de guanina, ppGpp y pppGpp. virulencia importante, ya que se comporta en forma
La germinación de los esporos comprende 3 etapas: similar a las Cápsulas de otras bacterias, es decir, le
a. ACTIVACIÓN: confiere al germen "la lanza y el escudo" en cuanto
La activación es esencial para el proceso de la favorece su poder invasivo y dificulta la acción defensiva
germinación y un esporo activado germina en forma de los leucocitos polinucleares. Aun más, está claramente
irreversible. Activan los esporos el calor y algunos demostrada su participación en la formación de abscesos
estímulos químicos. causados por Bacteroides.
b. GERMINACION: Diversas enzimas de los anaerobios deben
Esta etapa comienza cuando los esporos activados considerarse como factores de virulencia: colagenasa,
son estimulados por variados elementos nutritivos y no hialuronidasa, DNAsa, elastasa, heparinasa, son las
nutritivos (l-alanina, el más común,) glucosa, otros principales. También deben incluirse aquellas enzimas
aminoácidos. que protegen contra la acción letal del O2 tales como
Cambios morfológicos y fisiológicos muy Catalasa y Superóxidodismutasa en cuanto permiten la
interesantes se producen cuando finaliza el estado sobrevida del germen en ambiente no apropiado hasta
latente; el esporo se hincha, pierde su refringencia, que se presenten las condiciones favorables. Estos
pierde su resistencia a los agentes físico-químicos y factores de virulencia no deben considerarse como
comienza a observarse actividad metabólica. "toxinas".
c. CRECIMIENTO:
En esta etapa se produce la síntesis proteica y de los LAS TOXINAS
componentes estructurales de la futura forma vegetativa. Corresponde a las potentes exotoxinas producidas
La membrana del 'core' del esporo se irá convirtiendo en por los Clostridios las cuales serán analizadas con estos
pared celular y la actividad proteica se irá intensificando. microorganismos.
En este momento toda esta actividad puede anularse o
interferirse por Antibióticos, o carencias de nutrientes. GENETICA DE INTERES EN LOS
Por su especial constitución los esporos no se tiñen ANAEROBIOS
con el Gram aunque existen técnicas especiales que Elementos extra cromosómicos: Plásmidos.
permiten ponerlos en evidencia. Si se tiñe una bacteria Los Plásmidos están ampliamente difundidos entre
esporulando mostrará el esporo en su interior (debemos los anaerobios especialmente a nivel de especies de
recordar que cuando el esporo finaliza su maduración la Clostridium y Bacteroides. Un muy buen porcentaje de
forma vegetativa se desintegra) como una imagen en estos elementos no han demostrado funciones
negativo -ausencia de colorante-. específicas. Entre los Plásmidos funcionalmente
La ubicación de los esporos dentro de los bacilos así conocidos encontramos:
como su tamaño contribuyen a la identificación a. Plásmidos que codifican la produción
bacteriana. De esta manera podemos distinguir a los de Bacteriocinas.
esporulados según: Similares a las Colicinas estas
Ubicación: esporos medianos, subterminales, sustancias las poseen especies de Clostridium y
terminales. Bacteroides.
Tamaño : con deformación o no del cuerpo b. Plásmidos toxigénicos.
bacteriano. Ampliamente distribuidos entre las
especies de Clostridium productoras de
FACTORES DE VIRULENCIA exotoxinas (toxigénicas). La correlación
Se pueden separar en 2 categorías según su fehaciente entre plásmido y producción de
importancia. Por un lado existen las poderosas toxinas toxina no se ha podido establecer en muchos
producidas por los Clostridios; por otro, una serie de casos. El caso con más evidencias de la relación
estructuras y sustancias de mucho menor poder patógeno plásmido-toxina para Clostridium tetanii donde
que se observan en varias especies de no esporulados. Se puede afirmarse que la producción genética de
conocen los lipopolisacáridos de superficie en varias toxina tetánica está codificada por un Plásmido.
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c. Plásmidos que codifican la resistencia
a los ATB.
Existen evidencias de que entre
diferentes especies de Clostridium, Bacteroides
y Cocos anaerobios existen plásmidos de EL POR QUE DE LA INUTILIDAD DE
diferente tamaño que codifican la resistencia a ALGUNAS MUESTRAS
Macrólidos (Clindamicina, Eritromicina) La expectoración no sirve porque el esputo se
Tetraciclinas y Cloramfenicol. contamina con la flora anaerobia normal de la faringe y
la boca en su pasaje al exterior; igualmente pasa con el
RECOLECCION DE MUESTRAS esputo obtenido por fibroscopía o los aspirados
Teniendo en cuenta que los anaerobios pueden causar nasotraqueales ya que el tubo arrastra en su introducción
o contribuir a la infección de cualquier tipo y en flora normal en su extremo distal.
cualquier lugar del organismo, parece claro que se debe La orina emitida espontáneamente o con sonda se
procurar siempre una muestra libre de contaminación contamina por la colonización natural de la porción
con Flora Normal para tener resultados verdaderamente distal de la uretra y el meato o por la colonización de la
positivos. Las muestras siguientes habitualmente están sonda. Si existen catéteres suprapúbicos o renales
contaminadas con anaerobios de la Flora Normal y por pueden utilizarse para tomar la muestra con resultados
lo tanto no deben ser cultivadas en anaerobiosis. aceptables.
Exudados de garganta, nasofaríngeos, bucales. La endometritis presenta serias dificultades. En estos
Esputo tosido o aspirado vía oral/nasal. casos los anaerobios casi constantemente están
Contenido gástrico e intestinal (salvo excepciones). involucrados en la etiología de estas infecciones y estos
Materias fecales (salvo excepciones). gérmenes como siempre sucede son los mismos de la
Orina obtenida por sonda o espontáneamente. flora normal (vaginal o cervical). Como la mayoría de las
Exudados vaginales y cervicales. endometritis suceden al nacimiento o a los abortos se
Una recolección de muestra adecuada debe evitar encuentran en el endometrio cantidades significativas de
siempre la más mínima contaminación con flora normal anaerobios.
(donde en algunos casos la proporción de individuos
anaerobios es de 1000 a 1 por aerobio). Los métodos de TRANSPORTE DE MUESTRAS
recolección más adecuados se pueden resumir de la Otro factor crucial para el éxito en el aislamiento de
siguiente manera: anaerobios es el transporte de muestras. Se debe proteger
a los microorganismos de los efectos del O2 durante el
LUGAR Procedimiento
tiempo que transcurre entre la extracción y la siembra
PULMON Punción Transtraqueal (PTT) anaeróbica. El primer y más efectivo sistema es "correr"
percutánea. ya que en ninguna otra ocasión como esta el envío
Punción Pulmonar Transparietal inmediato al Laboratorio es tan fundamental. Las
(PPTP). muestras deben ser colocadas en un sistema de transporte
Lavado Bronquial con Cepillo que asegure la anaerobiosis. Existen tubos,
Protegido. comercialmente disponibles en los que se ha sustituido
de aire por otro gas ("Tubos gaseados") y que contienen
PLEURA Toracocentesis. un indicador de anaerobiosis. En casos de extracción de
material con aguja y jeringa, si la demora no supera los
TRACTO Punción Suprapúbica (PSP) percutánea.
30 minutos puede enviarse el material en la misma
URINARIO
jeringa expulsando el aire residual y obturando la aguja
ABCESOS Aspiración con aguja y jeringa en abs. con un tapón de goma.
cerrados. Igual en abiertos; evitar Existen para períodos prolongados tubos con medios
hisopados de material al aire, puncionar de transporte adecuados o bolsas plásticas con sistemas
lateralmente. de anaerobiosis química. Los líquidos purulentos espesos
(Abscesos, Empiemas) se comportan como medios de
GENITAL Obtención por culdocentesis previa transporte 'per se' por su propia constitución y hemos
FEMENINO desifección vaginal con yodoforos. podido recuperar anaerobios hasta 24-48 después de
Cepillo protegido de uso bronquial. realizada la extracción.
TRACTO Aspiración con jeringas y catéter METODOS DE CULTIVO
SINUSAL plástico previa desinfección, curetajes, Los cultivos incluyen el uso de Jarras anaeróbicas,
biopsias. bolsas plásticas, el método PRAS de Hungate y la
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Cámara de anaerobiosis o "cámara de guantes". Los dos además de poder observar directamente si existe
últimos métodos son muy caros, requieren equipamiento crecimiento sin abrir el Sistema; también se puede
complejo, son lentos y se usan para estudios de Flora utilizar para los sistemas de identificación tipo API-20A.
Normal y en laboratorios altamente especializados.
Desde el punto de vista práctico las Jarras pequeñas y los SUSCEPTIBILIDAD A LOS ANTIBIÓTICOS
sobres o bolsas son equiparables en rendimiento a los La antibioticoterapia de las infecciones por
más sofisticados y son aceptables para los estudios de anaerobios es habitualmente empírica ya que los cultivos
anaerobios de interés médico. Con estos sistemas son y el aislamiento son lentos y dificultosos. Por otra parte,
posibles los cultivos en medios sólidos para la obtención las pruebas de sensibilidad realizadas en los laboratorios
de aislamientos que permitan la identificación bacteriana. Clínicos no dan resultados confiables. De manera pues,
El uso de medios líquidos en forma exclusiva no es que nos debemos guiar por las pruebas realizadas en los
recomendable (salvo para hemocultivos) ya que la laboratorios de Referencia Internacionales que aportan
mayoría de las infecciones por anaerobios son datos sobre sensibilidad que permiten predecir con un
polimicrobianas incluyendo facultativos o nivel razonable de seguridad cuales son los Antibióticos
microaerófilos. de elección para cada germen. Las pruebas de
Medios líquidos (sólo para hemocultivos) sensibilidad se realizan de forma similar a las de
Existen varios medios comercialmente disponibles. gérmenes aerobios. Existe una prueba de dilución en
Algunos contienen (SPS) sodium polyanetol sulfonate el Caldo que permite establecer CMI y CMB; el Test de
cual estimula el desarrollo de los anaerobios, aunque al Dilución en Agar (muy útil para realizar estudios de
parecer sería inhibidor para Peptococcus anaerobius. varias Cepas) en donde el Antibiótico se incorpora al
Se trata de frascos de 100 ml, al vacío, con el agregado Agar en diluciones sucesivas en placas de Petri.
de CO2, una base nutritiva (digerido tríptico de soja o
peptonas) y un agente reductor (thiol o thioglicolato). El IDENTIFICACION DE LOS ANAEROBIOS
por-centjae de sangre a inocular es del 5 al 10 % v/v. Los Los anaerobios se presentan corrientemente en
frascos se examinan diariamente buscando turbidez, cultivos mixtos con otras especies sea anaerobias,
hemólisis o gas; se consideran negativos definitivamente micoraerófilas o facultativas. El primer paso es pues, la
a los 10 días de incubación previos subcultivo final. observación de las colonias y su correspondiente Gram
Jarras de Anaerobiosis para establecer distintas especies las cuales serán
Existen varias marcas comerciales de jarras con subcultivadas para establecer aerotolerancia "aire, CO2 y
performance aceptable para generar atmósfera de anaerobiosis". Información complementaria puede
anaerobiosis. El fundamento del sistema más utilizado obtenerse observando las placas de Petri bajo luz UV
(Gas Pak)- se basa en: para determinar la fluorescencia de las colonias. En las
1. La generación de H2 y CO2 por medio placas de Subcultivos (con medios ricos, selectivos y/o
de una reacción química cuyos sustratos se diferenciales) según la sospecha de Género pueden
encuentran separados en un sobre al cual se le agregarse Discos de Vancomicina 5 µg, Kanamicina
agrega agua, desencadenando la reacción. 1000 µg, Coilistin 10 µg , SPS y NO3, los cuales aportan
2. La combinación del H2 y el O del aire datos para la identificación preliminar. En el diagrama
para formar agua generan la anaerobiosis, esta siguiente se esquematizan los pasos a seguir:
reacción se cataliza utilizando granallas de Zinc
recubiertas de Paladio las cuales se encuentran Cultivo en placa
depositadas en una canastilla dentro de la jarra. Registrar: Realizar:
Una tirilla de papel impregnada en Azul de
metileno (azul en presencia de O2, incoloro en ! Morfología de colonias ! Gram
ausencia) introducida en la Jarra es el indicador ! Pigmento ! Indol
de Anaerobiosis. ! Hemólisis ! Catalasa
Sobres de Anaerobiosis ! Fluorescencia !
Test de NO3
El sistema BioBag consiste en una bolsa plástica ! Susceptibilidad a:
transparente, gas impermeable, una ampolla de indicador Vancomicina
de anaerobiosis (resarzurina) y una ampolla generadora Kanamicina
de anaerobiosis. Una o 2 placas de Petri pueden Colistin
introducirse antes de sellar la bolsa mediante un sellador SPS
plástico por calor. Luego se rompen las ampollas de ! Actividad lipasa
indicador y generador. Los gérmenes crecen y se ! Actividad lecitinasa
mantienen viables por lo menos una semana. Este
sistema tiene las ventajas de su economía y practicidad,
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La mayoría de los Laboratorios deben conformarse Bacteroides se ha reclasificado, ya que anteriormente se
con la realización de los Tests de Identificación agrupaban como Bacteroides y subespecies de los
preliminares. La identificación final queda reservada mismos. Las cepas con producción de pigmento negro a
para los laboratorios de Referencia y comprende: marrón en los medios de cultivo son fácilmente
Estudios de fermentación de azúcares y estudio de los identificables y son miembros de flora normal de boca y
productos finales del metabolismo los cuales pueden vías respiratorias superiores y partes blandas
agruparse en: subyacentes. Algunas cepas (menos del 20 %) son
Ácidos grasos volátiles y alcoholes. productoras de penicilinasas, pero en general son
Metabolitos no volátiles. sensibles a este antibiótico.
Ácido fórmico. La Prevotella bivia prevalece en flora vaginal y
Producción de Hidrógeno. produce vaginosis e infecciones de origen obstétrico.
Estos estudios se realizan utilizando la Cromatografía
Gas-líquida. Porphiromonas
asacarolítica
ANAEROBIOS NO ESPORULADOS DE gingivalis
INTERES MEDICO endodontalis
Bacilos Gram negativos Flora normal de boca y encías (gingivalis y
Bacteroides endodontalis) y flora intestinal (asacarolítica) producen
fragilis infecciones relacionadas con su habitat. Su morfología
vulgatus varía desde los cocobacilos hasta formas alargadas. Las
ovatus colonias son convexas, lisas y pigmentan con el tiempo,
thetaiotamicron algunas veces se observa beta hemólisis. La vitamina K
distasonis estimula el desarrollo de estos gérmenes.
ureolyticus
gracilis Fusobacterium
Estas especies del género Bacteroides mortiferum
(fundamentalmente fragilis, de alta proporción en flora nucleatum
intestinal) se asocian con infecciones anaerobias necrophorum
subdiafragmáticas y genitales (por su vecindad con la
porción final del aparato digestivo y región perineal), y Miembros de flora normal de bucofaringe
con las sepsis al punto de partida de estas infecciones. (nucleatum) y flora intestinal su morfología es
Todos los miembros del género son resistentes a característica; bacilos largos con extremos acintados o
Penicilinas (por Betalactamasas) y Cefalosporinas -con filamentos delgados. Algunos (necrophorum) pueden ser
alguna excepción-. La morfología es de coco-bacilos más abultados en su sector medio. Producen alfa y beta
pleomórficos, pequeños, Gram negativos. En los cultivos hemólisis en los cultivos y las colonias son translúcidas
se presentan como colonias pequeñas, bajas, brillantes. de forma varias a veces irregulares. Fusobacterium
El desarrollo se estimula por la adición de Bilis a los nucleatum es el más común en infecciones del aparato
medios, lo cual permite el aislamiento selectivo para respiratorio, mientras que necrophorum se lo aísla de
estos gérmenes. Poseen antígenos proteicos y infecciones subdiafragmáticas. Son habitualmente
lipopolisacarídicos pero lo característico es la Cápsula. sensibles a las Penicilinas y su poder patógeno se
Su poder patógeno radica en la actividad endotoxina establece por la presencia de lipasa y leucotoxinas.
símil de sus Ag. de membrana y del polisacárido
capsular. Existen descripciones de cepas productoras de Bacilos Gram positivos
enterotoxinas capaces de dar enfermedades diarreicas en Actinomyces
el hombre y animales. israelii
naeslundii
Prevotella bovis
melaninogénica odontolyticus
buccae viscosus
oris Se trata de bacilos Gram positivos largos y
bivia ramificados, delgados y delicados, bajo ciertas
corporis circunstancias, frotis o cultivos pueden fragmentarse
dentícola simulando bacilos del tipo difteroides.
intermedia De variada aerotolerancia, israelii (el patógeno de
Estos bacilos de similares características a los interés médico más importante) y bovis son los menos
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tolerantes al Oxígeno; aunque las cinco especies crecen y vías respiratorias superiores, E. lentum forma parte de
mejor en presencia de CO2, las otras especies deben la flora intestinal. Las infecciones están relacionadas con
considerarse facultativos. la vecindad de su hábitat produciendo infecciones
Miembro de flora normal bucal (Actimomyces odontológicas, de cabeza y cuello, y aparato genital
israelii) se relaciona con una entidad Clínica conocida femenino.
como Actinomicosis la cual tiene varias manifestaciones
clínicas que veremos más adelante. Propionobacterium
El poder patógeno no está determinado con claridad; acnes
las infecciones se ven favorecidas por un traumatismo o granulosum
por alguna otra disminución de las barreras defensivas Integrantes de flora normal de piel,
locales. fundamentalmente, de escaso poder patógeno se los aísla
como contaminantes de hemocultivos y procesos de piel.
ACTINOMICOSIS CERVICOFACIAL P. acnes deben su nombre al relacionarlo con el Acné.
Constituye aproximadamente el 50% de los casos de Bacilos, a veces ramificados, pueden confundirse con
actinomicosis. Secundario a caries o enfermedades Actinomyces, a veces pleomórficos y cortos se los
odonto-periodontales el germen atraviesa (por confunde con Difteroides.
traumatismo) la mucosa bucal intacta conduciendo en su
forma típica a un proceso inflamatorio de región maxilar Lactobacillus
inferior con compromiso óseo (osteomielitis maxilar). Si Múltiples especies asociadas con la flora normal de
la enfermedad progresa se abre una fístula al exterior boca y en gran cantidad en flora vaginal, poseen un
evacuándose el pus al exterior. El diagnóstico etiológico poder patógeno mínimo; se trata de bacilos largos, Gram
se realiza evidenciando la presencia de "gránulos de positivos netos, de bordes paralelos y extremos
azufre", material granulomatoso con colonias de rectangulares.
microorganismos y filamentos ramificados al Gram.
Mobiluncus
ACTINOMICOSIS TORACICA mulieris
Por aspiración del agente o por extensión de lesiones curtisii
cérvicofaciales puede producirse enfermedad pulmonar Estas especies de bacilos Gram positivos inestables,
de tipo subagudo, febril, con tos y expectoración eran conocidos como Bacilos Anaerobios curvos que se
purulenta. La progresión de la enfermedad conduce a aíslan de vaginitis inespecífica; de lento crecimiento son
cavitación pulmonar, con fistulización al exterior a través difíciles de cultivar y su participación en infecciones se
de la pared torácica pudiendo interesar costillas y puede sospechar por una buena microscopía.
vértebras.
Bifidobacterium
ACTINOMICOSIS ABDOMINAL Miembros de flora normal de boca y
Como consecuencia de una perforación intestinal, la tractogastrointestinal, hay varias especies; de escaso
enfermedad se desarrolla lentamente generando signos y poder patógeno deben su nombre a la morfología del
síntomas según el órgano abdominal afectado. Es posible Gram que les de su nombre.
la extensión vertebral y la fistulización al exterior.
Cocos Gram positivos
ACTIMOMICOSIS GENITAL Peptoestreptococos
Se ha descrito infección en mujeres que utilizan anaerobius
dispositivos intrauterinos con sintomatología escasa y sin magnus
presencia de gránulos. asaccharoliticus
Principales características bioquímicas de tetradius
Actinomyces israelii. prevotti
Req. de Oxígeno: Anaerobio A pesar del nombre del Género la morfología de
estos gérmenes incluye formas en pares, tétradas,
Eubacterium racimos, y cadenas. Un estudio microscópico cuidadoso
lentun muestra a estos cocos con tamaño irregular y alguna
nodatum decoloración parcial, lo que permite diferenciarlos de sus
timidum similares aerobios. Forman parte de la flora de la boca,
brachy intestino y genitales. Se encuentran involucrados en
De lento desarrollo en cultivos y aerotolerancia muy infecciones pleuropulmonares, abscesos, infecciones
amplia, estos pequeños bacilos tienen su hábitat en boca ginecológicas, sinusitis. Casi constantemente son
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sensibles a los betalactámicos. formas esporulando, los esporos medianos o
subterminales no deforman el soma vegetativo.
Cocos Gram Negativos Fisiología y cultivo
Veillonella parvula Anaerobio aerotolerante, de fácil recuperación, de
Pequeños cocos Gram negativos en diplos o cadenas crecimiento rápido en Agar sangre, es el único inmóvil
cortas y racimos, miembros de flora bucal intestinal y de los clostridios patógenos, no esporula en medios
genital, se aísla de materiales Clínicos, pero es dudoso y comunes, desarrolla en pH variable y temperaturas de 20
desconocido su poder patógeno. a 50 grados. En 24 horas de incubación produce colonias
de 2 a 4 mm con formas lisas a rugosas. Se puede ver
BACILOS GRAM POSTIVOS ESPORULADOS una hemólisis doble, una estrecha betahemólisis
Los Clostridium son bacilos Gram positivos, producida por la alfa toxina y una zona más amplia de
esporulados, anaerobios estrictos, salvo alguna especie hemólisis incompleta producida por la toxina omega.
con mayor aerotolerancia. Los patógenos son Desarrolla abundantemente en medios con glucosa y
productores de poderosas exotoxinas las cuales por sí carne picada o medios con leche, produciendo abundante
mismas provocan todos los síntomas y signos de las gas e intensa fermentación (ferment. lactosa -
infecciones. Dentro del Género podemos separar 4 >acidificación ->coagulación de la caseína ->rotura del
grandes grupos. coágulo por la producción de gas). La producción de
alfa-toxina se puede realizar colocando suero humano en
1. Clostridios histotóxicos presencia de un sobrenadante de cultivo el cual produce
(especies más comunes) Clostridium una opalescencia clara del mismo (Reacción de Nagler),
perfringens o alternativamente sembrando Agar con yema de huevo
septicum el cual se torna opalescente. La adición de la antitoxina
histoliticum específica se usa como contraprueba, sea en placas o en
novyi la prueba del suero. La siembra directa de materiales en
sordelli Agar yema de huevo (media placa con antoxina) permite
fallax determinar en pocas horas la presencia de C. perfringens
bifermentans en muestras clínicas. La opalescencia del suero y la yema
Dentro de este grupo la especie más importante es de huevo se deben a que la alfa-toxina es químicamente
perfringens, (80 a 90%) por lo que nos referiremos una lecitinasa.
fundamentalmente a esta especie. Estructura antigénica - Toxinas
Este grupo de gérmenes causa infecciones muy C. perfringens del tipo A produce por lo menos 12
severas caracterizada por una mionecrosis, infección sustancias de naturaleza proteica de poder antigénico, 4
clásicamente conocida como gangrena gaseosa; de ellas toxinas, de las cuales la alfa es la más poderosa.
(debemos tener en cuenta que la presencia de gas en Esta toxina se define como dermonecrótica-letal y
infecciones de partes blandas no siempre significa hemolítica. Químicamente es una lecitinasa C - o
mionecrosis. Todos estos clostridios producen fosfolipasa C- que degrada la lecitina. La activación de la
exotoxinas de diferente potencia que veremos más toxina es dependiente de los iones Ca++ y Mg++. De
adelante. alto poder antigénico, los Ac. antitoxina son los únicos
El clostridio más frecuente (C. perfringens) posee que pueden neutralizar el efecto de la misma. La alfa-
cinco tipos diferentes, del A al E, los cuales producen 4 toxina actúa sobre lipoproteínas que contienen lecitina en
tipos de toxinas letales clasificadas como: alfa, beta, la membrana celular y en las mitocondrias. La acción
epsilón y theta. El tipo más común de interés médico es necrótica tisular es evidente, no así las acciones a nivel
el tipo A que produce la alfatoxina y algunas otras toxina sistémico. Otras sustancias antigénicas de menor poder
de menor poder (omega, kappa, micrón). C. perfringens tóxico son importantes auxiliares en la diseminación de
tipo A se halla como flora normal del hombre y los la enfermedad.
animales aunque en estos no es frecuente causa de Clostridium septicum
enfermedad. Lo contrario sucede con los otros tipos de Flora normal intestinal de hombre y animales, móvil
clostridios. perítrico, es productor de alfa-toxina y se encuentra
Morfología y tinción asociado en el 10% de los casos de mionecrosis o sepsis
Bacilo netamente Gram positivo corto y grueso de de origen endógeno.
bordes redondeados, con formas hasta cocoides. De los Clostridium histoliticum
frotis directos de muestras clínicas destacamos que no se Flora normal del hombre y los animales,
observan esporos y que la células que componen un aerotolerante productor de alfa-toxina y beta-toxina.
frotis de material clínico se encuentran ausentes (debido Esta última es una proteína con actividad enzimática
a la intensa citólisis tóxica). Cuando en cultivos vemos (colagenasa) que destruye las fibras del colágeno.
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a la producción de una poderosa toxina:
Clostridium novyi tétanoespasmina. La toxina, intracelular y liberada por
Existen tres tipos A B y C. Se trata de bacilos autólisis, es una proteína TERMOLABIL que se
grandes, móviles perítricos con esporas subterminales. inactiva por calentamiento -60ºC durante 20 minutos- o
por formaldehído, esta propiedad es de extraordinaria
2. Clostridios enterotoxigénicos importancia ya que si bien la toxina pierde su poder
C.perfringens tipo A. --> Intoxicación alimentaria patógeno, no pierde su poder antigénico transformándose
Este germen productor de una enterotoxina (detallada en toxoide, el cual confiere una excelente inmunidad a
en otro Capítulo) produce una intoxicación alimentaria los sujetos inoculados. Químicamente es una cadena
de tipo leve. Los síntomas de la enfermedad dependen de polipeptídica de pm 150 kdalton, que posee tres
la acción de la enterotoxina sobre la mucosa intestinal, la subunidades A, B y C. Al momento de su liberación
misma es producida cuando alimentos contaminados con existe un clivaje, al parecer por las proteasas bacterianas,
esporos son calentados para su cocción y la germinación quedando dos subunidades A y BC unidas por un puente
y posterior multiplicación acumula toxinas. disulfuro.
C. prefringens tipo C. --> Enteritis necrotizante La toxina tetánica es una de las toxinas más
Se trata de una enfermedad mucho más severa que la poderosas que existen, en especial para el hombre y los
anterior, pudiendo ser letal. Los síntomas de la animales.
enfermedad son ocasionados por la beta-toxina Mecanismo de acción de la toxina tetánica
producida por estos gérmenes. Con exclusivo sitio de acción a nivel de Sistema
C. difficile --> Enterocolitis seudomembranosa Nervioso (regiones A y BC con afinidad para receptores
Se trata de una especie anaerobia estricta, miembro gangliósidos) es capaz de actuar a distancia por el
de flora normal intestinal humana, y se han descrito seis siguiente mecanismo. Una vez fijada al receptor celular
serogrupos en relación con su toxicidad. C. difficile la toxina ingresa a la célula por endocitosis y se mueve
produce 2 toxinas: una toxina B citotóxica y una toxina por vía retrógrada a través de los axones.
A, enterotoxina potente; ambas son las determinantes de Entonces la toxina interfiere la transmisión sináptica
la enfermedad. En ciertas circunstancias el origen de la inhibiendo la liberación de neurotrasmisores
enfermedad es endógeno y su causa es, por una intensa inhibitorios tales como la Glicina, de las neuronas
antibióticoterapia, en especial con Clindamicina. Al inhibitorias. Los efectos estímulo-inhibición de las
parecer los ATB al eliminar la flora normal permitirían neuronas motoras son desbalanceados causando una
un hiperdesarrollo de C. difficile. rigidez muscular. Esta se manifiesta en los músculos más
fuertes: maseteros (trismus) flexores de extremidades
3. Clostridium tetani superiores y extensores de extremidades inferiores y
TETANOS tronco (opsitótonos).
C. tetani es el agente productor del Tétanos, La contaminación
descubierto en 1889 por Kitasato. Los esporos de C. tetani se hallan ampliamente
Morfología distribuidos en el suelo y medio ambiente, las formas
Bacilo Gram positivo, delgado, de 3 a 8 µm de vegetativas son flora normal de hombre y animales,
longitud, móvil perítrico, posee tendencia al Gram especialmente equinos. Una herida contaminada con
negativo en cultivos viejos y materiales clínicos, con esporos de C. tetani es la puerta de entrada del germen.
esporos terminales que deforman el soma bacteriano Estas heridas deben poseer un contexto especial de
dándole una forma característica de raqueta o palillo de necrosis o de sustancias necrotizantes (bajos Eh.); en
tambor. general se trata de heridas punzantes, cuerpos extraños
Cultivos como astillas, espinas, etc. Existe una forma muy temida
Anaerobio obligado, algo exigente, temperatura de tétanos que es el tétanos neonatal, provocado por el
óptima de crecimiento a 37ºC, pH óptimo 7.4. Las corte del cordón umbilical con instrumentos contamin-
exigencias nutritivas son cubiertas por el agregado de dos.
sangre o carne cocida, produce una betahemólisis débil, La Clínica
no fermenta hidratos de carbono. Los esporos resisten 20 Luego de un período de incubación variable 4 a 10
minutos a la ebullición y una esterilización segura días se desarrolla la enfermedad que puede ser
requiere auto-clave (121ºC, 15 min.) localizada, con espasmos musculares de músculos
Antígenos adyacentes a la herida o, con mayor frecuencia,
Posee antígenos H flagelares (10 tipos), O somáticos generalizada. Los síntomas son todos aquellos
y en los esporos. provocados por la contracción espástica muscular con
Poder patógeno afectación de los músculos respiratorios, alteraciones
Todos los síntomas de la enfermedad son atribuibles cardiovasculares y muerte.
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El Diagnóstico La patogencidad está dada exclusivamente por la
El diagnóstico es Clínico ya que es muy difícil el exotoxina que habitualmente es producida fuera del
aislamiento bacteriológico; apenas unos pocos gérmenes organismo, al punto que más que una infección se
que produzcan ínfimas cantidades de toxina son debería considerar como intoxicación o envenenamiento.
suficientes para desencadenar el proceso. La toxina botulínica y su mecanismo de acción
La inmunidad y la prevención La toxina se genera incubando los gérmenes entre 25
La enfermedad no confiere inmunidad ya que la a 38ºC a un pH de aproximadamente 7. Si bien es
cantidad de toxina que desencadena los síntomas no es lo considerada una exotoxina, se libera cuando se produce
suficientemente grande como para activar el Sistema la lisis de la bacteria. Su dosis letal es tan poderosa que
Inmunitario. un µg (milésima de mg) contiene 200.000 dosis letales
La prevención se logra con la inmunización activa de para un ratón de 20 gr y se acepta que apenas unos
toda la población a partir de los 3 meses de edad gramos serían capaces de eliminar toda la humanidad.
utilizando el Toxoide tetánico. Confiere una protección De naturaleza proteica, al igual que la tetánica, se trata
del 100% en inmunocompetentes y es inadmisible no de una cadena polipeptídca de 150kda con tres regiones
estar correctamente inmunizado. La inmunización pasiva A, B, y C de baja toxicidad, que cuando son clivadas se
con gamma globulinas hiperinmunes de donantes se forman dos cadenas, una pesada y una liviana unidas por
utiliza como coadyuvante en la enfermedad y como puentes disulfuro y con marcada actividad tóxica.
protección pasiva en sujetos no vacunados con heridas Existen 8 tipos de toxina antigénicamente distintos,
tetanígenas. genéticamente dirigidos por bacteriófagos. La toxina
botulínica es ingerida y sortea la barrera digestiva
4. Clostridium Botulinum aparentemente protegida por otras proteínas con las
BOTULISMO cuales forma complejos, más aun, de hecho las proteasas
La enfermedad del botulismo data desde 1870 para digestivas activan la toxina. A diferencia de la toxina
describir una intoxicación alimentaria mortal por tetánica, la toxina botulínica afecta las terminaciones
ingestión de salchichas (latín, botulus = salchicha). En nerviosas periféricas. Una vez que atravesó la barrera
realidad múltiples alimentos conservados pueden intestinal, llega vía hematógena a las uniones
provocar la intoxicación. En la época actual el empleo de neuromusculares, provocando un bloqueo presináptico
autoclaves y métodos modernos de esterilización hacen de la liberación de acetilcolina. La interrupción de la
que los productos comerciales enlatados hayan perdido estimulación nerviosa provoca una parálisis fláccida
el protagonismo quedando el riesgo reducido a la irreversible conduciendo a la muerte por parálisis de los
manufactura casera de enlatado de carnes, pescados y músculos respiratorios.
vegetales. Aun así la cocción de los enlatados destruye la Tipos de intoxicación botulínica
toxina botulínica por lo cual sólo existe riesgo en Existen 4 formas de botulismo.
aquellos alimentos a consumirse directo de la lata sin a. Botulismo alimentario. Forma clásica
previa cocción. letal por ingestión de la toxina producida en
Morfología alimentos conservados mal esterilizados.
El C. botulinum es un bacilo Gram postivo recto, b. Botulismo infantil. Se trata de la
con extremos redondeados, móvil perítrico, produce ingestión de esporos por los lactantes (clásico
esporos resitentes al calor, subterminales que deforman chupete con miel) con multiplicación de los
algo el soma bacteriano. Clostridios en el intestino con producción de
Cultivos toxina en la luz intestinal y posterior absorción.
Anaerobio estricto, desarrolla en medios con sangre, c. Botulismo de las heridas. Forma muy
produciendo colonias betahemolíticas, bastante exigente rara a partir de heridas infectadas.
en cuanto a requerimientos nutritivos, fermentan la d. Botulismo no determinado. En
glucosa. Los esporos son muy resistentes al calor, a las mayores de un año que padecen la enfermedad
radiaciones y a los agentes químicos. sin hallarse ningún vehículo aparente.
Estructura antigénica La Clínica
De composición compleja y bastante indefinida no Con un período de incubación corto (12 a 24 hs),
existen antígenos en las células vegetativas que resulten dependiendo de la cantidad de toxina ingerida, se
de importancia. producen los signos toxo-dependientes: debilidad,
Según el tipo de exotoxina producida se han descrito lasitud, visión borrosa y doble, disfagia y disfonía. Con
8 tipos serológicos A al G. Tienen importancia el progreso de la enfermedad otros grupos musculares
epidemiológica ya que, excepto los tipos C y D, el resto son afectados entre ellos los respiratorios.
produce un solo tipo de toxina. El diagnóstico
El poder patógeno Es fundamentalmente Clínico, pudiendo confirmarse
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la intoxicación con el estudio de los alimentos o restos de
alimentos ingeridos para buscar toxina botulínica.
La prevención
La prevención de esta enfermedad pasa por evitar la
fabricación y consumo de alimentos "en forma Casera" si
no existe seguridad de la perfecta esterilización. En
cuanto a alimentos de origen comercial las severas
normas bromatológicas hacen casi imposible la
contaminación; si no existe esa certeza deberá siempre
calentar los alimentos a la ebullición durante unos
minutos. Respecto al botulismo del lactante se evitarán
los alimentos posiblemente contaminados.

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