Tema: METODOLOGIA PARA EXTRACCIN DE CAROTINOIDES E IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Objetivo: Extraer carotinoides e identificar por cromatografa de capa fina

Objetivos Especficos:
Conocer la tcnica y procedimientos bsicos para la extraccin de carotenoides a travs del mtodo de Sxleth.

Utilizar el mtodo de cromatografa de capa fina para la identificacin de los carotenos y calcular Rf.

Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, (C.C.F), sus caractersticas y los factores que en ella intervienen.

METODOLOGA EXPERIMENTAL
a.- Materiales

b.- Equipos Equipo Sxleth Rotavapor Cocineta c.- Reactivos y Sustancias. Metanol Agua destilada ter de petrleo Silica gel Benceno

Bistur Probeta 10, 50ml 3 matraces erlenmeyer de 250ml 1 agitador de vidrio 1 esptula Pinzas de 3 dedos Soporte universal Vidrio reloj Placa Papel filtro Frasco cmara 3 vasos de precipitados de 150ml Embudo de separacin Pipeta pasteur Vial mbar

Material biolgico 20 g de zanahoria

d.- Procedimiento. EXTRACCIN Y SEPARACIN DE CAROTENOS 1. Picar 20 gramos de zanahoria debe estar perfectamente seca (Fig.1), extraer los carotenoides mediante extraccin Sxleth, y reflujar con 25 ml de metanol.(Fig.2)

Fig.1

Fig.2

2. Seguidamente realizamos una Extraccin liquido-liquido, con la solucin obtenida en el paso anterior, a la cual se le aade 25ml de ter de petrleo (Fig.3), agitar la solucin (Fig.4) y permitir reposo para lograr separar los carotenoides (capa superior) y xantofilas (capa inferior). (Fig.5)

Fig.3

Fig.4

Fig.5

3. Guardar la capa superior.(Fig.6)

Fig.6

4. Volver la capa inferior al embudo y lavar con 2 porciones sucesivas de 10 ml c\u de ter de petrleo. (Fig.7)

Fig.7

5. Combinar los extractos de ter de petrleo.(Fig.8)

6. Evaporar el ter de petrleo calentando a menos Fig.8 de 40 C usando al vaco (manipule con cuidado). (Fig.9)

Fig.9

7. Disolver el residuo en 2 ml de ter de petrleo antes de pasar a la prueba de cromatografa de capa fina. IDENTIFICACIN DE CAROTENOS. Cromatografa Capa Fina: 1. Haga una marca con lpiz a 1 cm del borde inferior de la placa de silicagel, 2. Realice otra marca a 1 cm arriba de la marca inferior. Estas servirn de gua para colocar sus muestras y hasta dnde dejar correr la cromatografa. 3. Agregue la muestra sobre la placa de silicagel. Quedarn unas manchitas de humedad sobre la silicagel. 4. Previamente debe estar preparada la cmara CCF, con una mezcla de 9ml de ter de petrleo, 0,5 de benceno y 0,5 de metanol, y dejar por 5 min para tener una mejor concentracin de los reactivos 5. Coloque la muestra preparada en la cmara de CCF, Deje que el solvente suba por la placa.

6. Mida la distancia recorrida por cada mancha desde el lugar donde coloc la muestra, para calcular el Rf.

DIAGRAMA DE FLUJO.

10 g de muestra (seca)

PESAR

ter de petrleo 25 ml EXTRACCIN SOXHLET Residuo Alcohol 25 ml

FILTRAR Filtrado

9 ml de H2O DECANTAR FILTRADO

Fase acuosa

Eliminar

Hacer lavados

FASE ORGNICA

EVAPORAR EL TER DE PETRLEO

PRUEBAS CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Fin