W ce POINTE Colestat enzimitico AA ‘Método enzimético para a determinagio de colesterol ‘om soro ou plasma SIGNIFICADO CLINICO ‘Adeterminaco de colesterol em forma isolada, tom utlidade lagndstica lmtada, Entrotanto, sua concantragao varia de rmaneira mais ou menos previsivel em um grande aimero de consigdes clnias. Fol observado que ocolesterol é um dos falores que contr buem a formaglo de ateromas vielo que as comlicagses arleioscleréicas prevalecem em individuos hipercoleste- ralémicos, Diversos estudos epidemiolégicos permitem, ainda, obser- vat, que o isco de cantar doenca cardiovascular (OCV) para (08 indviduos homens maiores de 40 anos com colestero- emia menor a0 igual a 2.10 gl é3 vezes menor que entre Indlviduos com mais de 2.30 g1'8 6 vazes manor quo entre inaividuos com mais de 260 gl. FUNDAMENTOS DO METODO ‘Asogléncia do raagdo 6 a soguinle: CHE stores do colosterol ——> colestrol + dcidos graxos choo colesterol +0, > colesten-3-ona + H,0, Pop H,0, + 4AF + aceltador > colorago vermotha REAGENTES FORNECIDOS SS, Padrao”: solugao de colesterol 2 af. [A Reagente A: fas00s contendo colesteal esterase (CHE), ealesterol oxidase (CHOD), peroxidase (POD), 4-amino- fenazona (@-AF) tampio Good, contenco fenol @colato de scl nas seguintes concentra: CHE. 100 Ul HOD. > 100 Un POD, vunnsnnnnnses® 1000 Ut 4a". 0.2 mmol Good 50 mmol Fenol 18 mmol Colato de sé, 0.2 mmolt REAGENTES NAO FORNECIDOS Calibrador A Plus de Wiener lab, INSTRUGOES DE USO Reagentes Fomecides: prontos para uso. PRECAUGOES (0s reagentes uso diagnéstico in vitro Utlizar 0s reagentes abservando as precaugses habituais, de trabalho no laboratério de andises cinicas, Todos 0s reagentes e as amostras devam ser descartadas conforme & regulagao local vigent, ESTABILIDADE E INSTRUGOES DE ARMAZENAMENTO. Reagentes Fomecidos: estdveis sob relrigeragio(2-10°C) alga data do vencimento ndieada na embalager. Nao mar tera tomperaturas elevadas durante perlodos prolongadas INDICIOS DE INSTABILIDADE OU DETERIORAGAO DOS REAGENTES. Descariar os reagentes quando as letras do Branco este- jam acima de 0,160 D.0. AMOSTRA Soro au plasma 8) Goleta: obter a amostra da forme usual 1) Aditivos: se a amostraauilizarforplasma,recomenda-se ‘uso de heparina como anicoagulante para sua obtengso. ©) Substancias interferentes conhecidas: += Sem contar a heparina, 08 antcoagulantes comuns inter- Terem na determinacto, = 0s soros com hemélse visvel produzem valores falsa- ments aumentados e, portanta, nao devem ser utlizados. Nao observan-seintTeréncis por blimubina até 80 mal ‘Acido abscérbio até 75 mall. ido trico até 200 mo! nem hemdlse igera Referénela biblogréfica de Young para efeltos de deogas reste metodo 4) Establlidade einstrugées de armazenamento: ocoles- terolem sore ¢ estavel durante um perfodo de até 1 semana sob refngeragao © 2 meses congelado, sem acrescantar conservantes MATERIAL NECESSARIO (nao fomecido) = EspectrofoiBmetr ou fotacolorimete, + Micropipetae pipetas para mecir os volumes incicados. Tubo ou cuba espectrofoiometricas de faces parallas. = Banho-maria 37°, = Relégi ou timer. CONDIGOES DE REAGAO = Comorimento de onda: 505 nm em espectrofolémetro ou fem fotocolerimetro com fra verde (490-530 nm). Temperatura de reagio: 37°C Tampa da reagdo: 5 minutos Vokime de amosta: 10 ul Volume do Reagente: 1 mi= Volume final de reago: 1,01 ml (0s volumes de Amosira © de reagente podem ser modi- cados proporcionalmente (Ex. 20 ul da Amostra + 2 mi de Reagente A) PROCEDIMENTO Em trés tubos ou cubas espectrofotométricas marcadas B (Branco), P(Padrdo) e D (Desconhecido), colocar 3 P Padrao : wa mostra : Toul Roagento A Ta Tai tm Colocar em banho-maria curante 6 minutos a SC ou 20 minutos a temperatura ambiente (25°C). Depass, lor ho especrofoldmetro a 505 nm ou em felocolorimeto com fit verde (480-530 nm), zerando 0 aparatho com 9 Branco. ESTABILIDADE DA MISTURA DA REAGAO FINAL ‘Acor da reagao nal éestavel 30 minutos, Ler a absorbancia durante este periodo CALCULO DOS RESULTADOS 2,00! alesterolgh=Dxt endef ‘CONVERSAO DE UNIDADES Colesterol (a) = colesterol (md) x 0,01 Colesterol (mmol) = colesteral (gi) x 2.59, Calesteral (gl) = colesterol (mal) x 0,39, METODO DE CONTROLE DE QUALIDADE Processar 2niveis de um material de controle de qualidade {Standatrol $£ 2 nlveles) com concentragbvs conhecidas dd colesteral, com cada determnagao. VALORES DE REFERENCIA © paine! de expertos do National Cholestol Education ro- {gram (NCEP) fomece os seguintes valores de colesterol Otimo: < 2,00 gi Moderadamente ato: 2,00 2,39 gl Flevaco: > 2.40 gl No entanto,¢recomendvel que cada laboratro estabelega ‘seus prépros intervals au valores de referéncia, LIMITAGOES DO PROCEDIMENTO Vide Substancias inerferentes conhecidas em Amosta, ‘Os redutores diminuem a resposta de cor, enquanto que os ‘oxidantes colorem 0 Reagente A aumentando os Brancos. ‘0s detergentes, metals pesados e cianetos sao inibidores, ‘onzimaicos, ‘Nao utilzar 0 Padréo em analisadores autométicas, posto que existem diferengas entre sua tensa superiial e a do Soro, resultante do dissolvente empregad na preparagao. recomendvel realizar uma nova calbragéo semanal ou cada vez que sejam obtidos valores fora da faixa accitivel dos controles (Siandatrol SE 2 nivels). DESEMPENHO a) Reprodutibilidade: processando duplicatas das mesmas lamostras em 10 das cferentes, obteve-se: Nivel bp. cw. 1.24 91 40,083 gi 3.49% 34g 0,115 gt 3.48% 'b) Recuperagéo: accescentando quantdades conhecidas de Calasterol aos diferantessoros, obleve-se uma recuperagio entre $8 6 101%, para todo o nivel de colestrol entre 1.80 24,79 9 6) Limite de detecgdo: depende do fotdmetro empregado. Para a leiura de 0,00" 0.0. a variago minima de concer {rardo detectavel Ser aproxmadamente de 0,0063 gf 4) Linearidade: a reacao 6 linear até 5 gi. Em valores su- periores, dur a metade da solugao com 0 Branco erepetir, Bletura maltipicando 0 resultado final por 2 PARAMETROS PARA ANALISADORES AUTOMATICOS. Pra.aprogramagio consulta o manual de uso do analisador 2 ser utizado, Para a callbragao deve ser utlizado Cal bbrador A plus de Wiener lab, conforme os requerimentos do analsador. APRESENTAGAQ. +1100 mi cacao (Cod. 1221221)" +4100 mi ePadrao (Cad. 1220114) *2% 500 ml oPadrao (Céa. 1220222). +6 x60 mi (Céd. 1009308) =8 x60 mi (Céd. 1008610). =6 x60 mi (Céd. 1008918)" = 12x 80 mi (G6a, 1008283), 4x40 ml (Céd. 1009802) Emoregando os reagentes Colestat enzimatico AA liquida junto com HDL Colesterol Reactive Precipltanto, HDL Colesterol FT © LDL Colesterol Reactivo Precipitente ((ornecidos por separado pala Wiener lab.) é possivel dete ‘minaro colesteraligado as lipoproteins de ata densidade {HDL colesteral) 8s ipoproteinas de babxa donsidade (LOL. calesteral. REFERENCIAS Abel, Leta. - J. Bil. Chem, 196:967 (1982) “Allain, CG etal, = Clin, Chem. 20:470 (1974), “American Health Foundation - Positon slatement on dis ‘and coronaty heart disease - pag, 255 (1972). -LEC.C. - Gin. Chim, Acta 87/8:459 F (1978), = Trinder,P.~ Ann. Clin, Biochem. 6/24 (1963). * Goniglio, RL. = Acta Blog. Clin. Latinoam. XXIlV2:201, (1989) - Expert Panel of National Cholesterol Education Program - JAMA 285/79:2486 (2001). Young, O.. -"Eftecs of Drugs on Clinical Laboratory Tests AACE Press, 4" ed, 200",