Licenciatura em Engenharia Química

2022/2023

Laboratório 3 (Labo 3)

Relatório
Trabalho 2- Análise simultânea de cafeína e Ácido
Benzoico por Espetrofotometria de Absorção no
ultravioleta

Íris Mesquita 1211141

Beatriz Ferreira 1210968
Joana Moreira 1212144
2 DC
Sumário
Neste trabalho laboratorial, o objetivo foi analisar, em simultâneo, a cafeína e o ácido
benzoico numa amostra de um refrigerante, neste caso, o red bull através do método
de espetrofotometria de absorção molecular na zona do ultravioleta. As
concentrações médias obtidas do ácido benzoico e da cafeína foram de 506,6 mg/L
e 429,9 mg/L, respetivamente. A precisão dos resultados foi muito alta, tendo os
desvios padrão dado valores bastante baixos. Relativamente à exatidão, obtivemos
um erro percentual de 34,34%, um valor pouco exato, visto que a amostra
provavelmente tinha outras substâncias a absorver no nosso comprimento de onda
escolhido.

Introdução
Os métodos espetofotométricos baseiam-se em análises óticas e na medida
quantitativa da absorção da luz pelas soluções, onde a concentração da solução da
substância absorvente (analito) é proporcional à quantidade de luz absorvida. Os
equipamentos utilizados para este método denominam-se por espectrofotômetros.
Neste trabalho prático, o método utilizado foi a espetrofotometria de absorção
(molecular) na zona da radiação ultravioleta. Esta metodologia consiste em fazer-se
passar um feixe de radiação eletromagnética por uma solução contida numa cuvete
com um percurso ótico fixo. Se um ou mais compostos existentes na solução
absorverem a radiação eletromagnética, a intensidade do feixe incidido pelo
espetrofotómetro irá diminuir. Neste método, é medida a transmitância que pode ser
convertida em absorvância através da lei de Beer.
A = -log T = ε b c
Equação 1- Fórmula da Lei de Beer

Como referido, o objetivo foi analisar a cafeína e o ácido benzoico, em simultâneo,

portanto, tem-se duas espécies absorventes pelo que a absorvância medida vai ser a
soma das absorvâncias de cada espécie absorvente.
A=ε1 bc1 +ε2 bc2 +...εn bcn
Equação 2- Lei de Beer com n espécies absorventes
Assim, para analisar a amostra com estes dois compostos foi necessário medir a
absorvância em dois comprimentos de onda (λA e λB)
λA: AA =ε1A bc1 +ε2A bc2
Equação 3- Lei de Beer associado ao comprimento de onda A

λB: AB =ε1B bc1 +ε2B bc2

Equação 4- Lei de Beer associado ao comprimento de onda B

Parte Experimental

1. Reagentes
▪ Solução de ácido clorídrico 1,0 mol/L
▪ Solução mãe de Cafeína 200 mg/L
▪ Solução mãe de ácido benzoico 100 mg/L
▪ Água desionizada
▪ Refrigerante(amostra) 320 mg/L
Estas soluções desempenharam um papel fundamental no estudo dos dois compostos
na amostra de refrigerante. Por exemplo, o ácido clorídrico garantiu que as duas
espécies em estudo estivessem na mesma fase ionizada. Já a solução de cafeína foi
adicionada como estimulante e a de ácido benzoico como conservante.
Em consequência do método utilizado ser uma espetrofotometria de absorção
molecular na zona do ultravioleta foi necessário identificar os grupos cromóforos
dos compostos em estudo. Um grupo cromóforo designa-se como um grupo
funcional que absorve na região do ultravioleta e do visível.
O Ácido benzoico é um composto aromático que pertence ao grupo dos carboxílicos.
Este representa a forma mais simples de um ácido carboxílico, um carboxilo ligado
a um anel de benzeno. Tendo em conta que o único grupo principal do ácido
benzoico é o ácido carboxílico considera-se, então, que este é o grupo cromóforo.

Fig.1- Estrutura do ácido benzoico

A cafeína, tem como grupos principais, o nitrilo e a acetona. Contudo, como o nitrilo
aparece em primeiro na sequência da tabela, este é o grupo cromóforo.

Fig.2- Estrutura da cafeína

2. Equipamentos
▪ Espetrofotómetro de UV/Bis (feixe duplo)

3. Material
▪ Balões volumétricos de 50,00 ml
▪ Banho de ultrassons
▪ Cuvetes de Quartzo (b=1 cm)
▪ Material corrente de laboratório
Nota: Nesta atividade laboratorial utilizou-se as cuvetes de quartzo ao contrário das
de plástico porque na zona do ultravioleta o plástico não é transparente.
4. Procedimento Experimental
1. Preparação das soluções padrão de ácido benzoico e cafeína
1.1. Preparou-se 5 soluções padrão de ácido benzoico de 2, 4, 6, 8, e 10
mg/L, em balões volumétricos de 50,00 mL, tendo-se adicionando em cada um dos
balões 500 μL da solução de ácido clorídrico 1,0 mol/L antes de completar o
volume com água desionizada.
1.2. Preparou-se 5 soluções padrão de cafeína de 4, 8, 12, 16 e 20 mg/L, em
balões volumétricos de 50,00 mL, tendo-se adicionando em cada um dos balões 500
μL da solução de ácido clorídrico 1,0 mol/L antes de completar o volume com água
desionizada.
1.3. Preparou-se o branco(onde se incluiu tudo, menos o que se pretendia
analisar: ácido clorídrico e água desionizada).
2. Preparação da amostra
2.1. Desgaseificou-se amostra.
2.2. Preparou-se 3 soluções problema: medir a quantidade adequada da amostra
para balões volumétricos de 50,00 mL e adicionou-se 500 μL da solução de ácido
clorídrico 1,0 mol/L antes de se perfazer o volume com água desionizada.
3. Análise espetrofotométrica
3.1. Traçou-se os espetros de absorção do ácido benzoico e da cafeína entre 190
e 360 nm (nota: utilizou-se os padrões de concentração intermédia e o branco como
referência).
3.2. Selecionou-se os comprimentos de onda mais adequados para a análise.
3.3. Mediu-se, em triplicado, as absorvâncias das soluções padrão e problema
aos comprimentos de onda selecionados, tendo-se utilizando o branco como
referência.
Recolheu-se os restos/resíduos e colocou-se nos respetivos recipientes.
Lavou-se e arrumou-se todo o material utilizado no decurso do trabalho.
Resultados e Discussão
Antes de ser executado o trabalho foi necessário efetuar cálculos para descobrir o
volume inicial para assim se preparar 5 soluções padrão de ácido benzoico de
2,4,6,8,10 mg/L e 5 soluções padrão de cafeína de 4,8,12,16,20 mg/L em balões
volumétricos de 50,00 ml.
Soluções padrão de ácido benzoico
Solução 1- 2 mg/L
Calcular volume inicial

Solução 2- 4 mg/L
Vinicial = 2,00 mL
Solução 3- 6 mg/L
Vinicial = 3,00 mL
Solução 4- 8 mg/L
Vinicial = 4,00 mL
Solução 5- 10 mg/L
Vinicial = 5,00 mL

Soluções padrão de cafeína

Solução 1- 4 mg/L
Calcular volume inicial

Solução 2- 8 mg/L
Vinicial = 2,00 mL
Solução 3- 12 mg/L
Vinicial = 3,00 mL
Solução 4- 16 mg/L
Vinicial = 4,00 mL
Solução 5- 20 mg/L
Vinicial = 5,00 mL
Foi também realizado um ensaio em branco, que continha 500μL de ácido clorídrico
e no restante volume água desionizada.
Tal como referido no procedimento experimental foi necessário também preparar
três soluções problema através da amostra de refrigerante cuja concentração da
cafeína era de 320 mg/l( visto no rótulo do refrigenrante) . Para tal, supôs-se as
seguintes concentrações finais: 8,10,12 mg/L.
Amostra 1- 8 mg/L
Calcular volume inicial Colocar fator de diluição

Vinicial = 1,250 mL

Amostra 2- 10 mg/L fator diluição

Vinicial = 1,562 mL

Amostra 3- 12 mg/L fator diluição

Vinicial = 1,875 mL

Resultados Experimentais
Para o estudo da cafeína e do ácido benzoico na amostra foi importante escolher o
comprimento de onda adequado para se colocar no espetrofotómetro. Sendo assim,
traçou-se o espetro de absorção de cada composto para determinar o comprimento
de onda.
Colocar espetro

Fig.5- Espetro de Absorção do ácido benzoico

Para o ácido benzoico, definiu-se que o comprimento apropriado era de 230 nm pois
este valor apresentava a absorvância máxima.
Colocar espetro

Fig.6- Espetro de Absorção da cafeína

No caso da cafeína, através do espetro de absorção, conclui-se que existem dois picos
onde existe absorvância máxima. Nesta situação, quando se usa dois compostos, em
simultâneo, além de se usar os comprimentos de onda cujas amplitudes são máximas,
caso haja mais do que um máximo(pico) é necessário escolher o que a razão entre as
absorvâncias dos compostos nesse máximo seja maior. Deste modo, o comprimento
de onda escolhido foi de 273 nm.

Os resultados das absorvâncias obtidas estão organizados em três tabelas.

Na tabela 1 é apresentado os resultados de três leituras da absorvância relativa ao
ácido benzoico sujeitos aos comprimentos de onda de 230 e 273 nm.
 Tabela 1- absorvâncias do ácido benzoico sujeitos aos comprimentos de onda de 230 e 273 nm

Leituras da Solução 1- 2 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,049 0,000
2 0,049 0,000
3 0,056 0,000
Média 0,051 0,000
Leituras da solução 2- 4 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,132 0,007
2 0,132 0,007
3 0,134 0,007
Média 0,133 0,007
Leituras da solução 3- 6 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,193 0,009
2 0,193 0,010
3 0,193 0,009
Média 0,193 0,009
Leituras da solução 4- 8 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,261 0,016
2 0,262 0,016
3 0,265 0,017
Média 0,263 0,016
Leituras da solução 5- 10 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,335 0,022
2 0,331 0,021
3 0,332 0,021
Média 0,333 0,021

Na tabela 2 é apresentado os resultados de três leituras da absorvância relativa à

cafeína sujeitos aos comprimentos de onda de 230 e 273 nm.
Tabela 2- absorvâncias da cafeína sujeitos aos comprimentos de onda de 230 e 273 nm

Leituras da solução 1- 4 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,098 0,197
2 0,094 0,195
3 0,094 0,195
Média 0,095 0,196
Leituras da solução 2- 8 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,213 0,397
2 0,212 0,397

3 0,211 0,396
Média 0,212 0,397
Leituras da solução 3- 12 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,315 0,591
2 0,315 0,591
3 0,316 0,592
Média 0,315 0,591
Leituras da solução 4- 16 mg/L λ= 230 nm λ= 273nm

1 0,411 0,783
2 0,411 0,784
3 0,411 0,784
Média 0,411 0,784
Leitura da solução 5- 20 mg/L λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,512 0,978
2 0,512 0,978
3 0,516 0,981
Média 0,513 0,979

Na tabela 3 estão apresentados os resultados de três leituras da absorvância relativas

às amostras sujeitas aos comprimentos de onda de 230 e 273 nm.
Tabela 3- absorvâncias das amostras sujeitas aos comprimentos de onda de 230 e 273 nm

Leituras da amostra 1 λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,715 0,557
2 0,716 0,558
3 0,716 0,559
Média 0,716 0,558
Leituras da amostra 2 λ= 230 nm λ= 273 nm

1 0,901 0,694
2 0,902 0,695
3 0,902 0,695
Média 0,902 0,695
Leituras da amostra 3 λ= 230 nm λ= 273 nm

1 1,077 0,838
2 1,072 0,835
3 1,071 0,834
Média 1,073 0,836

Com este conjunto de dados foi possível traçar a curva de calibração dos dois
compostos a diferentes comprimentos de onda, a 230 e 273 nm. Primeiramente, irá
ser apresentado as curvas de calibração do ácido benzoico, assim como o respetivo
coeficiente de correlação e o 𝑆𝑦/𝑥 .

𝑟 2 = 0,998
𝑟 = 0,999
𝑆𝑦/𝑥 = 0,00540

Gráfico 1- Curva de calibração do ácido benzoico com o comprimento de onda de 230 nm

 𝑟 2 = 0,993
𝑟 = 0,996
𝑆𝑦/𝑥 = 0,000975

Gráfico 2- Curva de calibração do ácido benzoico com o comprimento de onda de 273 nm

Nota: O ponto referente à concentração de 6 mg/L foi retirado da curva de

calibração uma vez que estava deslocado da linha, diminuindo deste modo o valor
do coeficiente de correlação .

Por fim, segue-se as curvas de calibração da cafeína tal como referido em cima com
os dois comprimentos de onda, e os respetivos valores de coeficiente de correlação
e 𝑆𝑦/𝑥 .
 𝑟 2 = 0,999
𝑟 = 0,999
𝑆𝑦/𝑥 = 0,00679

Gráfico 3- Curva de Calibração da Cafeína com o comprimento de onda a 230 nm

𝑟 2 = 0,9999
𝑟 = 0,99997
𝑆𝑦/𝑥 = 0,00260

Gráfico 4- Curva de calibração da Cafeína com o comprimento de onda a 273 nm

Cálculo dos Resultados
Neste tópico, serão apresentados os resultados tais como: as absortividades do ácido
benzoico e da cafeína e as concentrações destes dois compostos em cada solução
problema.
No que toca às absortividades dos dois compostos em estudo, estas foram facilmente
retiradas através do declive da curva de calibração.
▪ Absortividade do ácido benzoico submetido ao comprimento de onda de 230
nm

colocar
▪ Absortividade do ácido benzoico submetido ao comprimento de onda de 273
nm

colocar

▪ Absortividade da cafeína submetido ao comprimento de onda de 230 nm

colocar

▪ Absortividade da cafeína submetido ao comprimento de onda de 273 nm

colocar

Daqui resultou um sistema com a Lei de Beer associada a dois compostos:

colocar
Para o cálculo das concentrações dos compostos nas amostras utilizou-se a média
das absorvâncias nos diferentes comprimentos de onda e substitui-se no sistema
referido em cima.
Amostra 1

calculos

Amostra 2

calculos
Amostra 3

calculos

Como resultado final das concentrações do ácido benzoico e da cafeína apresentou-

se as médias aritméticas e os respetivos desvios padrões.

Ácido Benzoico
Colocar a media das concentrações de acido benzoico
Desvio padrao
Cafeína

Calcular mesma coisa de cima

Análise crítica e discussão de resultados

Para comentar criticamente os resultados obtidos foi necessário abordar dois aspetos:
a exatidão e a precisão dos resultados.
Em relação à exatidão da concentração do ácido benzoico, não se pode afirmar nada,
uma vez que não existia um valor de referência no rótulo do refrigerante para assim
comentar e comparar com o resultado obtido. Já para a exatidão dos resultados da
cafeína, foi possível comparar a concentração obtida com o valor de referência
descrito no rótulo, que era de 320 mg/L.
Cálculo da percentagem do errro

Comparados os resultados, através do erro percentual, é possível afirmar-se que o

resultado da concentração da cafeína não é muito exata, uma vez que o erro é
bastante superior a 5%.
Por fim, para comentar a precisão efetuou-se os desvios padrão de cada amostra
sujeita aos comprimentos de onda de 230 e 273 nm.
Calculo dos desvios padrao
Analisando as precisões obtidas para as absorvâncias do comprimento de onda de
230 e 273 nm do ácido benzoico e da cafeína foi possível deduzir que estas são
bastantes precisas pois os valores dos desvios padrão são muito baixos.
Conclusão

Foi possível concluir que a concentração de cafeína e de ácido benzoico no RedBull

foram, respetivamente, (506,6 ± 4,7) mg/L e (429,9 ± 1,0) mg/L. Todos os valores
obtidos foram bastante precisos, com desvios padrões muito baixos. O valor da
concentração de cafeína obtive um erro percentual de 34,34% relativamente ao valor
rotulado (320 mg/L), e para o valor da concentração do ácido benzoico não foi
possível retirar conclusões sobre a exatidão, visto não haver um valor rotulado na
embalagem.
As curvas de calibração obtidas tiveram todas valores de coeficiente de correlação
bastante elevados (à exceção da curva retirada para o ácido benzoico ao
comprimento de onda de 273nm, contudo, depois de retirado um dos pontos, o
coeficiente de correlação foi superior a 0,995), o que representa uma linearidade
muito boa.
Relativamente aos devios padrão das regressões lineares (𝑆𝑦/𝑥 ), obtivemos valores
relativamente baixos, o que é favorável para se conseguir chegar a valores de
concentrações também mais baixos.
Tendo em conta que o erro percentual obtido para a concentração de cafeína no
RedBull foi bastante elevado, uma possível causa para o erro sistemático obtido terá
sido a presença de outras substâncias na amostra que estiveram a absorver radiação
aos comprimentos de onda usados e que não estavam a ser contabilizadas para os
cálculos efetuados.
Referências bibliográficas

- Manual de Laboratório, Laboratório III (Labo3), 2022-2023, 1ºSemestre,

Departamento de engenharia química, Licenciatura em engenharia química, (5
outubro 2022)
- [Cafeína. 07h54min de 7 de janeiro de 2022],
https://pt.wikipedia.org/wiki/Cafe%C3%ADna (5 outubro 2022)
- [Espectrofotometria. 20h57min de 22 de setembro de 2022],
https://pt.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometria (5 outubro 2022)
- [Ácido benzoico. 22h27min de 22 de setembro de 2022],
https://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_benzoico (5 outubro 2022)

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