Instruções de uso do Kit COLItest® 50 testes

I - USO
·Análise de água de qualquer procedência.
·Teste para detecção de coliformes totais e Escherichia coli. Obs.: Nestes casos há necessidade de realizar a prova de fluorescência e/ou
indol para identificação de presença de E.coli.
II - PRINCÍPIO DO TESTE
O COLItest® foi desenvolvido para determinar a presença ou a ausência de 3- PROVA DE FLUORESCÊNCIA (presença de E.coli)
coliformes totais e Escherichia coli através da técnica da cultura, sendo validado Transferir para um tubo de ensaio 5-10ml do caldo positivo, O teste será
frente a APHA/AWWA/WEF, descrito no Standard Methods for the Examination POSITIVO (presença de E.coli) quando:
of Water and Wastewater, pelo ITAL do Estado de São Paulo. * Houver fluorescência azul sob luz ultravioleta (lâmpada de luz negra de 3 a 6w,
O meio de cultura COLItest® possui em sua formulação substâncias, nutrientes ondas longas de 365nm)
e MUG que, devidamente balanceados, inibem o crescimento de bactérias Gram-
positivas, favorecem o crescimento de bactérias do grupo Coliformes e facilitam 4- PROVA DE INDOL (teste opcional para identificação e/ou confirmação
a identificação de E.coli através da fluorescência e indol. presença de E.coli)
- Crescimento (turbidez) e mudança de cor para amarelo: Após a leitura de fluorescência adicionar ao mesmo tubo com caldo positivo 3-5
Na presença de coliformes totais e de E. coli, o pH do meio se altera, devido à gotas de reativo de kovacs (indol) ou 0,2 ml de reativo de kovacs (indol) quando
fermentação da lactose, isso faz com que o meio de cultura COLItest® mude este não for adquirido em frasco conta-gotas. O teste será POSITIVO (presença
sua cor inicial de púrpura para amarelo. de E.coli) quando:
- Fluorescência * Houver formação de um anel vermelho na superfície do meio.
O produto contém em sua formulação MUG que quando hidrolisado libera um
fluoróforo, que apresenta fluorescência azul visível na luz ultravioleta, quando PAINEL DE INTERPRETAÇÃO DE RESULTADO
positivo para E. coli. Mudança de cor Reativo
- Teste do Indol Crescimento
COLItest® para tonalidade de Fluorescência de kovacs
A produção do indol é característica de E.coli e pode, portanto, ser usada na sua amarelo (Indol)
identificação presuntiva e/ou em sua confirmação.
Negativo - - - -
III - SENSIBILIDADE DO TESTE Coliformes
+ + - -
.A sensibilidade do teste é de 1(uma) U.F.C. por 100 ml. totais
E. coli + + + +
IV - APRESENTAÇÃO DO PRODUTO
50 Sachês individuais COLITEST® X - DESCARTE DO MATERIAL
50 Frascos estéreis contendo tiossulfato pulverizado Marca: LKP Após o uso descartar em um recipiente com Hipoclorito de Sódio a 2% em cloro
01 Frasco conta-gotas com 5ml de reativo de kovacs para prova de Indol (10 ativo, por pelo menos 30 minutos ou autoclavar por 15 minutos a 120º C.
testes);
10 Tubos cônicos para provas de fluorescência e Indol respectivamente. XI - CONTROLE DE QUALIDADE
Vide certificado
V - ARMAZENAGEM/CONSERVAÇÃO
O kit COLItest® deve ser armazenado em local seco, fora do alcance de crianças XII-TERMO DE GARANTIA
e animais em temperatura ambiente e mantido na sua embalagem original. Este produto tem total garantia desde que seja seguida corretamente as
instruções de uso e aplicada as boas práticas laboratoriais, observando
VI - ESTABILIDADE conservação, o número do lote e o prazo de validade.
.O Kit COLItest® deverá ser usado até a data de validade (vide embalagem).
·Não utilizar o kit COLItest® caso o mesmo apresente qualquer sinal de XIII-EQUIPAMENTOS NÃO FORNECIDOS
deterioração e/ou violação. - Estufa bacteriológica;
- Leitor de Fluorescência;
VII - CUIDADOS E PRECAUÇÕES
·Aplicar boas práticas laboratoriais e seguir um rigoroso controle de qualidade. XIII - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
·A análise da água deverá ser iniciada até 6 (seis) horas após a coleta, caso não N.Silva,R.C.Neto,V.C.A.Junqueira,N.F.A.Silveira, Manual de Métodos de Análise
seja possível, guardar a amostra em temperatura entre 2 a 8ºC por no máximo Microbiológica da Água. Campinas:
24 horas. ITAL/Núcleo de Microbiologia,2000.
American Public Health Association (1978) Standard Methods for the
VIII - COLETA E PROCEDIMENTO examination of Dairy Products.14th Ed. APHA Inc. American Public Health
1- Coletar assepticamente a água a ser analisada até 100 ml; Association (1976) Compendium of Methods for the Microbiological Examination
2- Adicionar o meio de cultura COLItest® e homogeneizar; of Foods. APHA Inc. Washington DC.
(ATENÇÃO: Quando analisar água clorada adicionar inativador de cloro Mac Conkey A.T. (1938) J.Hyg. 8.322-334.
conforme orientação técnica do fornecedor) Albus W.R. and Holm G.E. (1926) J.Bact.12.13-18
3- Incubar o frasco em estufa bacteriológica a 35 + 2°C entre 18-48h. A partir de Mallmann W.L. and Darby C.W. (1941) Am. J.Publ.Hlth.31.127-134
18h pode-se interpretar os resultados dos frascos POSITIVOS e aguardar até Dyett E.J. (1957) Lab. Prac. (6)6.327-328
48h de incubação para os casos negativos e duvidosos. Evitando assim falsos ISO Standard 11866-2 Milk and Milk Products- Enumeration of presumptive
resultados. Escherichia coli- part2 :Most Probable number technique using
4-methylumbeliferil -D glucoronide.
IX - INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO (após período de incubação 18-48h) F.D.A. (1980) Bacteriological Analytical Manual A.O.A.C. Washington
O teste é considerado: VANDERZANT & SPLITTOESSER (1992) Compendium of Methods for the
1- NEGATIVO (ausência de coliformes totais e E.coli) quando: Microbiological Examination of Food. 3rd. Ed. APHA Washington.
* Não houver alteração da cor inicial púrpura DIN, Standard 10183. Mikrobiologishe Fleischuntersuchung.Bestimnung der
Obs.: Nestes casos não há necessidade de realizar a prova de fluorescência. E.coli Fluoreszeenzoptisches Vefahren mit paralleler Bestimung coliformer
Keime.
2- POSITIVO (Presença de Coliformes totais) com leituras parciais a partir de 18 MANAFI, M., B. KNEIFEL and S.BASCON(1991) Fluorogenic and Chromogenic
horas e leituras finais com 48 horas, quando: substrates used in bacterial diagnosis.Microbiol.
* Houver alteração da cor púrpura para uma faixa de tonalidade* de amarelo Ver. 55:335-348.
influenciado pela fermentação da lactose, ph, especificidade e concentração de American Public Health Association (1980) Standard Methods for the examination
bactérias do grupo Coliformes presentes na amostra. of Water and Wastewater. 15th Ed. APHA Inc.
* Faixa de tonalidade de cor na presença de bactérias do grupo Coliformes

Ilustração de forma de uso do COLItest®

1 - Presença / Ausência

Coletar a amostra de água de Adicione o meio de cultura COLItest® e leve Interpretação resultado:
qualquer procedência até 100ml ao incubador por 18 a 48 horas a uma Púrpura = Negativo
temperatura de 35 + 2°C Amarelo = Positivo para Coliformes totais
Fluorescência = Positivo para Escherichia coli

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