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Carcinognese
ONCOGNES, PRO-ONCOGNES E GENES SUPRESSORES DE TUMOR
Todos os tecidos vivem constantemente em equilbrio entre proliferao celular e morte celular. Esse equilbrio conseguido por meio de sinais moleculares intra e extracelulares. Quando esse equilbrio perdido forma-se uma massa de clulas com crescimento exagerado constituindo um tumor primrio. Ou seja, as clulas tumorais so capazes de se dividir na ausncia de sinais positivos para proliferao e readquirem caractersticas de clulas primordiais, alterando sua forma com intensa atividade nuclear. A progresso do crescimento tumoral produz clulas com funes novas para aquele tipo celular, como produo de fatores de crescimento vascular, enzimas proteolticas de matriz extracelular e esses eventos conduzem a perda de adeso entre as clulas do tecido inclusive com extravasamento de clulas na corrente sangnea, desse modo disseminando o tumor para outros locais formando as metstases. O cncer tem como origem clulas com alteraes genticas e ou epigenticas iniciais e ao longo do tempo novas alteraes vo ocorrendo, tendo deste modo uma populao celular com diferentes caractersticas e grande potencial de crescimento e invaso, ou seja, a formao de um tumor maligno. As alteraes genticas relacionadas ao cncer podem ser herdadas ou mais comumente adquiridas somaticamente durante a vida do indivduo. O cncer uma doena gentica e as primeiras evidncias disso surgiram nas dcadas de 1950 e 1960. Ao se observar clulas tumorais ao microscpio algumas alteraes cromossmicas podiam ser associadas a certos tipos de cncer. A primeira evidncia foi obviamente macroscpica e no a nvel gentico demonstrando relao do denominado cromossomo Filadlfia, resultante da troca recproca entre os cromossomos 9 e 22, e pacientes com leucemia mielide crnica. Nas ltimas duas dcadas do sculo XX se tornou possvel identificar os genes envolvidos no controle da proliferao celular divididos em classes funcionais: proto-oncogenes, genes supressores de tumor, genes de reparo de DNA Os proto-oncogenes esto relacionados com a proliferao celular e quando alterados so chamados de oncogenes. Os genes supressores de tumor so repressores da proliferao exagerada e sua inativao est associada com perda de funo.

Oncogenes
Proto-oncogenes so genes celulares normais que podem se transformar em oncogenes (v-oncs) por ativao que envolve uma mutao na estrutura do gene produzindo uma protena mutante ou mutaes sem alterar a estrutura do gene, mas sim produzindo vrias cpias do gene, ou mudando o gene de lugar de um cromossomo para outro ou ainda alterando a expresso do gene sendo que qualquer um desses modos de alterao produz aumento na quantidade da protena.

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Crescimento de clulas normais: (1) interao de um fator externo (primeiro mensageiro) com a membrana celular, resultando em transduo de sinais atravs da membrana celular, (2) transmisso do sinal transduzido a partir do folheto interno da membrana plasmtica atravs do ncleo por intermdio dos denominados segundos mensageiros, (3) iniciao da transcrio e replicaao de DNA que resultar da diviso celular. Duas formas de transduo de sinal: 1. Via prototpica (via PIP2): iniciada quando um fator de crescimento une-se ao receptor sobre a superfcie celular e transmite sinais de ativao atravs de uma protena fixadora de guanina para a enzima fosfolipase C. Quando ativada, cliva o fosfolipdio de membrana fosfatidinilnositol 4,5 bifosfato em dois segundos mensageiros: trifosfato de inositol (IP3) e diacilglicerol (DG). O IP3 difunde-se para dentro do citoplasma, onde causa a liberacao de Ca++ a partir das reservas intracelulares no reticulo endoplasmtico. O Ca++ estimula as cinases proticas calmodulina-dependentes. O diacilglicerol permanece na membrana, onde ativa a protena quinase C. 2. Resposta da clula ao fator de crescimento epidrmico (EGF) utiliza o receptor EGF. Esse receptor espalha-se sobre a membrana plasmtica e possui o domnio externo fixador de EGF e um domnio interno da cinase protica especifica para a tirosina. A fixao de uma molcula EGF ao receptor modifica a conformao do receptor e aciona a atividade da cinase tirosina do domnio intracelular. Alguns receptores do fator de crescimento, como o receptor PDGF podem acionar ambas as vias, pois possuem atividade intrnseca da cinase tirosina e podem desencadear tambm a renovao do fosfoinositol atravs das protenas G. A estimulao da proliferao das clulas normais depende de sinais externos proporcionados por fatores de crescimento. O sinal recebido por um receptor de membrana celular, que transfere a mensagem atravs da membrana para dentro do citoplasma, e finalmente para o ncleo. Os proto-oncogenes so classificados em quatro grupos de acordo com seu modo de atuao na proliferao celular: 1) fatores de crescimento, 2) receptores para fatores de crescimento, 3) transdutores de sinal e 4) fatores de transcrio. 1) FATORES DE CRESCIMENTO: fatores polipeptdicos de crescimento (PDGF, EGF e fator 1 estimulante de colnias) estimulam a proliferao das clulas normais. As mutaes nesses tipos de genes aumentam a quantidade de protenas produzida sem alterar sua estrutura molecular. Um exemplo o oncogene sis que codifica para uma das cadeias do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) e a clulas mutadas ficam sob controle autcrino independente da regulao externa. PDGF produzido por plaquetas, macrfagos, endotlio, clulas musculares lisas e por varias clulas tumorais, conhecido como fator de competncia, ou seja, no estimula a sntese de DNA diretamente, mas torna as clulas, que esto no fase G0 e/ou G1,

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competentes para responder aos fatores de progresso, como o EGF, que acionam a sntese de DNA. Cinases proticas da tirosina so enzimas que catalisam a transferncia de um grupo fosfato para inmeras clulas-alvo. Pode ser dividida em dois grupos, com base em suas localizaes subcelulares e possveis funes: 2) RECEPTORES PARA FATORES DE CRESCIMENTO PRESENTES NA SUPERFCIE DA CLULA: Esses receptores so protenas transmembranas com atividade tirosina cinase asssociada com seu dominio externo ao qual se liga o fator de crescimento (receptores para EGF, PDGF, IGF-1 e CSF-1). A interao essas duas protenas desencadeia uma cascata de reaes intracelulares. a. Proto-oncogene c-erb B e seu equivalente viral v-erb B codificam EGF b. Gene c-neu codifica EGF c. Proto-oncogene c-fms e seu equivalente viral v-fms codificam CSF-1 3) PROTENAS LOCALIZADAS NA FACE INTERNA DA MEMBRANA CITOPLASMTICA: as quais so envolvidas no processo de sinalizao intracelular. Essas protenas atuam como transdutoras ou amplificadoras do sinal desencadeado pela ligao do fator de crescimento ao seu receptor. Essas protenas comumente sofrem alteraes estruturais que fazem com que emitam sinais proliferativos, mesmo na ausncia de estmulo externo. Exemplo clssico de proto-oncogene dessa classe o ras. a. Proteinas fixadoras GTP (protenas ras): trs membros na famlia de genes ras: H-ras, K-ras e N-ras. Os dois primeiros detectados com v-oncs do sarcoma de Harvey e de Kirsten em ratos e o N-ras no possui homlogo viral. Localizaao e atividades das protenas ras so muito semelhantes as da protena G transduo de sinais externos (superfcie celular) desencadeados por fatores de crescimento, hormnios ou neurotransmissores. A transformao do proto-oncogenes ras em oncogenes envolve uma mutao puntiforme, que reduz a capacidade de hidrolizar GTP, por parte da protena ras, produzindo uma ativao permanente da protena ras e do sistema adenilato-ciclase. A clula comporta-se ento como se estivesse sob estimulao permanente de sinais externos. 4) PROTENAS NUCLEARES QUE AGEM COMO FATORES DE TRANSCRIO que regulam diretamente a expresso gnica. Essas protenas possuem domnios proticos capazes de interagir com a regio promotora dos genes assim como com outros membros do mecanismo de transcrio da clula. Os fatores de transcrio freqentemente relacionados formao de tumores so as protenas das famlias myc, fos e jun. Essas trs protenas tm em comum a propriedade de imortalizar clulas em cultura e tornlas capazes de crescer em baixas concentraes de soro, que so duas caractersticas marcantes nas clulas transformadas.

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Ativao dos proto-oncogenes


Alterao por mutaes puntiformes: Provenientes de uma mutao de ponto no gene ras preferencialmente nos cdons 12, 13 e 61. Uma dessas mutaes pontuais produz a protena Ras alterada. A protena Ras ao receber um estmulo externo sofre a troca de GDP por GTP e nessa forma fica ativada. Sua ativao desencadeia uma cascata de sinais que chegam ao ncleo ativando myc que ativa a transcrio e a proliferao celular. Na protena Ras normal ocorre rpida clivagem autocataltica de GTP em GDP, restaurando a protena inativa. A protena Ras mutada em determinados aminocidos especficos que se localizam no stio de clivagem autocataltica produzem uma protena Ras sempre ligada a GTP e, portanto sempre ativa independente de sinais hormonais externos. Alteraoes por translocaes e amplificaes: A translocao ocorre pela quebra de DNA com a realocao de um gene, por exemplo, myc para outro cromossomo em especial na regio que codifica para as cadeias pesadas de imunoglobulinas. Nesse local os genes so constitutivos, ou seja, no dependem de ativao externa. O gene myc nesse novo local torna-se, portanto, ativado sempre que os genes vizinhos so ativados, independente de sinais externos. Esse tipo de alterao visvel microscopicamente com alterao no tamanho e bandeamento dos cromossomos e ocorre comumente no linfoma de Burkit. Esse mesmo linfoma pode ocorrer por amplificao gnica, nesse caso ocorre multiplicao do nmero de cpias do gene myc no seu mesmo local de origem. J foram descritos linfomas com mais de 700 cpias do gene myc. Outro exemplo importante de amplificao gnica ocorre com os genes das ciclinas. Existem vrias ciclinas que atuam em diferentes pontos do ciclo celular fazendo a progresso de uma etapa para outra. As ciclinas atuam em conjunto com quinases dependente de ciclinas e a duas juntas fosforilam protenas importantes para progresso do ciclo celular. Normalmente as ciclinas so rapidamente degradadas, entretanto quando alteraes oncognicas ocorrem o ciclo celular permanece sempre ativo devido ao aumento na quantidade de ciclinas.

Genes supressores de tumor


Este grupo de genes tem importante papel no controle do ciclo celular. Ou seja, sua ao suprime ou estaciona o crescimento celular que s deve ocorrer de acordo com sinais moleculares especficos extremamente controlados. Alguns produtos desses genes so muito bem estudados e clssicos como a protena P53 e a protena RB. A protena P53 conhecida como guardi do genoma. Quando ocorrem leses no DNA devido, por exemplo, a radiao branda, radicais livres como radicais hidroxila ou perxido de hidrognio, ocorre a rpida expresso da protena P53. A P53 uma protena ativadora da transcrio de alguns genes bem especficos. Na situao de dano ao DNA ela ativa a transcrio e produo de uma protena inibidora de ciclinas, bloqueando assim o ciclo celular e tambm ativando o gene que codifica para uma protena de reparo do DNA. Assim os danos podem ser consertados enquanto a clula est estacionada em G1. Aps o conserto, por exemplo, de dmeros de timina que so comuns devido exposio aos raios ultravioleta, ocorre diminuio da protena P53 e a clula volta ao normal. Caso o dano no DNA seja extenso e impossvel o conserto, a protena P53 ativa a expresso e produo da protena Bax. Esta protena como j mencionado acima antagoniza a atividade da protena

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Bcl2 (protena anti-apoptose) levando a clula morte por ativao das caspase e levando a clula a apoptose. Desse modo uma clula com danos no DNA deve morrer para evitar danos futuros. Quando ocorre uma mutao que produza a protena P53 defeituosa ou faltando ocorrncia de cncer quase certa. Alteraes no gene da P53 esto presentes na maioria dos tipos de cncer. Outro gene supressor de tumor muito importante o que codifica para a protena RB. Essa protena foi estudada primeiro em crianas com um tumor raro de retina, o retinoblastoma. Essa protena quando a clula est em G1 est hipofosforilada. E nessa forma ela seqestra fatores de transcrio importantes para passagem da fase G1 para S no ciclo celular. Quando ocorre um estimulo externo e ativao das ciclinas ocorre a fosforilao da protena RB que com essa mudana de cargas libera os fatores de transcrio. Diversos tipos de cncer esto relacionados a alteraes no gene da protena RB.

BIOLOGIA DO CRESCIMENTO TUMORAL


Alterao maligna na clula alvo (transformao) Crescimento da clula transformada Invaso da clula transformada Metstases

O crescimento dos tumores no esta associado comumente com uma reduo no tempo do ciclo celular. Frao de crescimento (FC) proporo de clulas dentro da populao tumoral ndice de rotulagem (IR) estimativa aproximada da frao de clulas em proliferao Clulas filhas podem deixar a reserva de proliferao em um tumor de crescimento atravs dos seguintes mecanismos: 1. Clulas neoplsicas so menos coesas que as clulas normais, sendo perdidas continuamente por semeadura 2. Algumas clulas se diferenciam, processo associado a perde de auto renovao 3. As clulas podem ingressar na fase G0 e podero ser recrutadas novamente. Os tumores crescem rpido e desordenadamente devido ao desequilbrio entre a produo e perda de clulas. A velocidade do crescimento tumoral depende da frao de crescimento e do grau de desequilbrio entre a produo e perda celular. A frao de crescimento das clulas tumorais exerce profundo efeito sobre a susceptibilidade a quimioterapia, j que os agentes anti-cancerosos agem sobre as clulas que esto sintetizando ativamente DNA. A freqncia de mitoses em uma neoplasia um indicativo do ritmo de crescimento tumoral. Se o ciclo celular prolongado, muito mais mitoses sero visveis em determinado momento.

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Progresso e heterogeneidade tumoral


Aquisio de alteraes qualitativas permanentes e irreversveis em uma ou mais das caractersticas de uma neoplasia, associada aquisio de instabilidade gentica. Maioria das clulas de origem clonal derivam da proliferao de uma nica clula transformada. A instabilidade gentica torna as clulas susceptveis a um alto ritmo de mutao aleatria durante a expanso clonal. Crescimento de clulas tumorais in vitro Clulas transformadas no so inibidas por contato e esto menos sujeitas a inibio densidade-dependente do crescimento Clulas transformadas sintetizam e secretam fatores de crescimento polipeptdico que estimulam seu prprio crescimento Clulas transformadas no necessitam de ancoragem para seu crescimento Por no sofrerem diferenciao terminal e morte celular, clulas transformadas conservam por perodos mais longos sua viabilidade e capacidade de replicao e acumulo Clulas transformadas so imortais Clulas transformadas so menos aderente, devido a alteraes na glicosilao das protenas de superfcies celulares e modificao na quantidade de glicoproteinas (fibronectina), o que facilita a invasidade tecidual.

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Mecanismos de invaso e metstase


1. Interaes das clulas tumorais com a matriz celular Clula transformada expanso clonal/crescimento diversificao subclone metasttico aderncia e invaso da membrana basal passagem atravs da matriz extracelular (MEC) intravasamento interao com clulas linfides hospedeiras embolo de clulas tumorais aderncia a membrana basal extravasamento deposito metasttico. Membrana extracelular (MEC) dividida em duas categorias: - Membrana basal (MB): colgeno IV, laminina e proteoglicanos (sulfato de heparan) - Tecido conjuntivo intersticial (TCI): colgeno I, fibronectina e proteoglicanos 2. Invaso metasttica ocorre em trs etapas: 1. Fixao das clulas tumorais aos componentes da matriz (laminina e fibronectina): clulas tumorais fixam-se a laminina da membrana basal atravs de recpetores desocupados na superfcie celular. Muitas clulas tumorais secretam grandes quantidades de laminina que ocupam os seus receptores de laminina (essas clulas exibem maior potencial metasttico). Os receptores de laminina nas clulas tumorais unem-se a laminina secretada na interseco com formato de cruz nos ramos da laminina, deixando expostos os domnios globulares fixadores de colgeno nas extremidades que podero fixar o colgeno IV nas membranas basais. Assim a laminina forma uma ponte entre a clula e a membrana basal 2. Secreo de enzimas proteolticas que degradam localmente os componentes da matriz: clulas tumorais que penetram na circulao representam uma subpopulao selecionada com a capacidade de secretar enzimas capazes de degradar membranas basais vasculares. O colgeno IV clivado especificamente por uma metaloproteinase denominada de colagenase IV. A proteinase plasmina consegue demolir varias molculas no colagenosas da matriz tipo laminina e ncleos proticos de proteoglicanos. A plasmina ativa a colagenase IV. 3. Migrao do tumor para as zonas degradadas da matriz extracelular: clulas tumorais so muito menos coesas que as clulas normais. 3. Disseminao vascular e fixao das clulas tumorais Estando na circulao as clulas tumorais so vulnerveis a destruio pelas defesas imunes naturais e adaptativas. Clulas NK (Natural Killer) so importantes no controle da disseminao hematgena. Estando na circulao tendem a formar agregados celulares, facilitado pela aderncia homotpica (entre as prprias clulas tumorais) e pela aderncia heterotpica (entre as clulas tumorais e clulas sangneas, particularmente plaquetas). Essa associao clulas tumorais/plaquetas parece facilitar a sobrevida e implantao das clulas tumorais, sendo que tambm favores a proteo contra os ataques realizados pelas clulas linfides.

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AGENTES CARCINOGNICOS E SUAS INTERAES CELULARES Carcinognese Qumica


Percival Pott neoplasia cutnea escrotal em limpadores de chamin devido a exposio crnica a fuligem

Dois estgios: 1. Iniciao: resulta da exposio de clulas a uma dose apropriada de um agente carcinognico (iniciador). A clula iniciada de alguma forma alterada, o que torna capaz de dar origem a um tumor. Entretanto, apenas a iniciao no suficiente para a formao do tumor. Processo irreversvel, devido s alteraes permanentes ocasionadas no DNA das clulas alvo. 2. Promoo: os agentes promotores induzem tumores em clulas iniciadas, porm por si s no so tumorignicos. Ao contrrio dos efeitos dos iniciadores, as alteraes celulares que resultam da aplicao de promotores reversvel.

Iniciao da carcinognese:
Duas categorias: 1. Compostos de ao direta: no necessitam de transformao qumica para sua carcinogenicidade, possuem a propriedade de serem eletroflicos altamente reativos que podem reagir com locais nucleofilicos na clula. Essas reaes no so enzimticas e resultam na formao de acrscimos covalentes (produtos de adio). Os agentes eletrofilicos podem atacar vrios locais eltrons-ricos nas clulas alvos, incluindo DNA, RNA e protenas, produzindo ocasionalmente um dano letal.

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2. Compostos de ao indireta ou pro-carcinognicos: necessitam de transformao metablica in vivo para produzir carcingenos definitivos capazes de transformar as clulas. a. Ativaao metablica da carcinognese: a maioria dos carcingenos necessita de ativao metablica para converso em carcingenos definitivos. Essa transformao pode ser de uma nica etapa ou pode envolver muitas etapas nas quais podem ser formados um ou mais intermedirios menos reativos (carcingenos imediatos). Outras veias metablicas podem resultar na inativao (detoxificao) do pro-cancergeno ou seus derivados. A potncia carcinognica determinada no apenas pela reatividade inerente ao seu derivado eletrofilico, mas tambm pelo equilbrio entre a ativao metablica e reaes de inativao. A maioria dos carcingenos conhecidos metabolizada pelas monoxigenases que dependem do citocromo p450, sistema localizado principalmente na frao microssmica do reticulo endoplasmtico e tambm nos ncleos. TESTE AMES investiga o potencial mutagnico dos carcingenos qumicos utilizando a capacidade de uma substancia qumica em induzir mutaes na bactria Salmonela typhimurium. Organismos selecionados por sua incapacidade de sintetizar histidina. Esses organismos so incubados com o possvel carcingeno, juntamente com homogenados de fgado para fornecer as enzimas necessrias para a ativao metablica. Quando mutagnicos adquirem um gene histidina funcional, que permite aos mutantes crescerem em meio de cultura sem histidina. O numero de colnias que crescem nessas condies, permite um calculo aproximado da sua mutagenicidade.

Promoo da carcinognese:
Os agentes promotores no so compostos eletroflicos e no leso o DNA. Substncias qumicas carcinognicas: 1. Agentes alquilantes de ao direta (carcinogenos fracos) 2. Hidrocarbonetos aromticos policclicos: os mais conhecidos necessitam de ativao metablica e podem induzir tumores em uma ampla variedade de tecidos. Seus carcinogenos definitivos so os epxidos diidrodiol, poderosos agentes eletrofilicos que se combinam aos centros nucleofilicos nas clulas alvo, incluindo DNA, RNA e protenas. Produzidos na combusto do tabaco e tambm a partir de gorduras animais no processo de assar das carnes. 3. Aminas aromticas e azocorantes: necessitam de ativao metablica, que ocorre no fgado onde o carcingeno definitivo formado pela intermediao dos sistemas oxigenase-citocromo P450. 4. Carcingenos de ocorrncia natural: micotoxinas como a aflatoxina B1. Necessita de ativao metablica pelas oxigenases microssomais hepticas para produzir o epoxido diidrodiol como carcinogeno definitivo. 5. Nitrosamidas e amidas: podem ser formados no trato gastrointestinal, necessitam de ativao metablica pelo sistema microssmico P450, formando carcinogenos definitivos ons alquildizonio fortemente eletrofilicos.

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Carcinognese da Radiao
A energia radiante causa ruptura cromossmica, translocaes e mutaes puntiformes alterando enzimas e protenas. Duas teorias sobre o mecanismo de ao: 1. A radiao ioniza diretamente as macromolculas celulares criticas 2. Ocorre primeiro a interao com a gua ou oxignio molecular para a produo de radicais livres que medeiam a leso. Atravs de qualquer uma dessas vias, o DNA sofre uma leso induzindo assim a uma mutao somtica.

Carcinogse Viral
Vrus Oncognicos DNA
Mecanismo de ao dos vrus DNA: As clulas nas quais a replicao viral pode ser completada so denominadas de permissivas, elas no podem ser transformadas, pois morrem com a liberao do vrus recm formado. Enquanto que as clulas no permissivas podem ser transformadas em clulas neoplsicas. Para ser transformada por um vrus, a clula tem que sobreviver aps a infeco. Apenas pores do genoma que so transcritas antes da replicao de DNA viral e da sntese das protenas da cpsula viral so essenciais para a transformao. Fragmentos clonados do DNA viral, que incluem a regio mais primitiva do genoma, podem induzir a transformao quando transferidos para dentro de clulas apropriadas in vitro. Nas clulas no permissivas, os vrus DNA oncognicos formam associaes estveis com o genoma da clula hospedeira por integrao do DNA viram nos cromossomos.

Vrus Oncognico RNA


Contm a enzima transcriptase reversa que permite a transcrio reversa de RNA viral para DNA vrus especifico. Ciclo dos retrovrus: o retrovrus penetra na clula por um receptor especifico, perdendo o seu revestimento em um endossoma e o RNA viral transcrito para o DNA viral de cadeia dupla e ento transportado para o ncleo, integrando-se no genoma celular. O DNA viral transcrito como RNA genmico e RNA mensageiro viral, que transladado em nova protena viral, agrega-se a membrana celular para completar o ciclo vital viral por brotamento. Trs conjuntos de genes: (1) GAG carreiam seqncias das protenas centrais da partcula viral, (2) POL codifica a transcriptase reversa e os produtos dos genes e (3) ENV glicoprotenas de cobertura (membrana).

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MECANISMOS GERAIS DE INTERAAO VRUS E CNCER RNA vrus


So vrus de fita simples que ao penetrar nas clulas, sob ao da transcriptase reversa, so convertidos em DNA de fita dupla (pro-vrus) e se integra ao genoma celular. Alguns possuem o protooncogenes V-ONC (protooncogenes que sofre mutaes durante sua incorporao ao vrus ou que se integram prximo de promotores virais potentes). Estrutura bsica do genoma dos retrovrus: 1. Trs genes: GAG (codifica protenas do cerne do vrion), POL (transcriptase reversa) e ENV (glicoprotena do capsdeo viral). 2. Uma regio LTR (regio de repeties terminais longas): seqncia regulatria da expresso gnica contendo pelo menos trs componentes: a. Promotores: regies de DNA que contem stios de ligao para RNA polimerase e para protenas de regulao b. Aumentadores: seqencias de DNA que aumentam a transcrio de um gene c. Stios de poliadenilaao: marcam o final da cadeia polipeptdica. Capacidade do vrus RNA em transformar as clulas est relacionada a: 1. O vrus carrega um V-ONC, ao inserir o cDNA no DNA da clula hospedeira, o RNA ativa os protooncogeneses que eram pouco estimulados ou mesmo reprimidos, por meio da insero de seqencias promotoras ou aumentadoras. 2. O vrus induz transativao de oncogenes por insero de seqncias que codificam protenas capazes de ativar oncogenes distantes do sitio de integrao do genoma viral 3. O vrus de RNA defectivo se associa a um vrus auxiliar para induzir a carcinognese com dois componentes: um vrus induz uma alterao (imortalizao) e outro induz as alteraes que completam a malignizao. Divididos em duas categorias: 1. Vrus de ao rpida: capazes de induzir a doena em duas a trs semanas. Todos possuem oncogenes. A caracterstica principal a presena de V-ONC, que responsvel pela transformao celular. A maioria so vrus deficientes, pois no se replicam autonomamente. Isso ocorre pela perda do gene POL durante o processo de transduo a partir do genoma celular. A estratgia adaptativa consiste na co-infeco com outros retrovrus completos, chamados auxiliares. No caso, a transcriptase reversa do auxiliar usada para a replicao de ambos os vrus. 2. Vrus de ao lenta: so vrus desprovidos de oncogenes, no transformar clulas em cultura, mas so capazes de replicarem, sem ajuda dos auxiliares. O mecanismo consiste na sua integrao ao genoma celular e ativao dos protooncogenes (mutao por insero).

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Alteram a estrutura e expresso dos protooncogenes tornando-os ativos, atravs de: a. Ativao insercional: inserem um promotor ou uma seqncia aumentadora da transcrio integrao imediatamente antes ou na regio 5 de um gene leva a estimulao de sua transcrio. b. Codificao de protenas truncadas: a insero de cDNA viral separando parte de um protoncogenes leva a transcrio de protenas truncadas (faltando pedaos). c. Transativao: o cDNA insere um gene que codifica a protena capaz de ativar o protooncogenes mesmo distante do sitio de interao ou at mesmo em outro cromossomo. d. Transformao com auxilio de outro vrus

DNA vrus
Basicamente comportam-se de duas maneiras: 1. Vrus infecta a clula e esta permite a transcrio dos seus genes precoces e tardios, alm da duplicao de seu DNA, formando novas partculas virais e a destruio da clula (efeito ltico) quando ocorre essa seqncia a clula chamada de permissiva. 2. Transcrio de genes virais que levam a sntese de protenas que na membrana da clula hospedeira comportam-se como receptores ativos transduzindo sinais que ativam a fatores de transcrio para genes ativadores de proliferao e sobrevivncia nas clulas. Neste mecanismo, a clula no permite a replicao viral e considerada no permissiva.

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Imunologia Bsica
Conceitos Gerais
Imunidade: proteo ou resistncia a doenas infecciosas. Capacidade do organismo de reconhecer substncias consideradas estranhas reconhecimento, metabolizao, neutralizao e eliminao. Antgeno: partcula reconhecida como estranha ao hospedeiro. So substancias capazes de provocar uma resposta imunolgica. Podem ser classificados como: antgeno, imungeno ou antgeno completo; hapteno ou antgeno incompleto; carreadores e adjuvantes (aumentam o poder antignico). Anticorpo: molcula protica responsvel pela defesa do hospedeiro Resposta imune ou imunolgica: reao do organismo coordenada pelo sistema imunolgico, contra os agentes infecciosos ou partculas inertes. Imunopatologia: estudo das alteraes da imunidade como alergias, doenas autoimunes e imunodeficincias.

Sistema Imunolgico
Conjunto de clulas, tecidos e molculas que em um sistema cooperativo, interativo e coordenado responde ao agente infeccioso. Sistema que d imunidade ao indivduo o sistema de defesa do organismo. Sistema linfoctico-macrofgico que tem por funes: a. Vigilncia b. Fagocitose (microorganismos intracelulares e clulas neoplsicas) c. Produo de citocinas d. Apresentao de antigenos Origem das clulas da resposta imunolgica Clula primordial diferencia-se em duas linhagens: (1) linhagem linfide (linfcitos) e (2) linhagem mielide (neutrfilos, moncitos, macrfagos, mastcitos, basfilos, eosinfilos, plaquetas). A resposta imunolgica pode ser classificada em diferentes tipos: 1. Resposta primria / Resposta secundria a. Resposta primria: a resposta que ocorre quando o organismo entre em contato pela primeira vez com o antgeno. Ag ativa o sistema macrofgico, formao de clulas de memria pelo sistema linfide (T e B IgM)

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b. Resposta secundria: j houve contato prvio. Ag aciona o sistema macrofgico, sistema linfide libera IgG, T e B memria resposta mais rpida e intensa (vacinas) 2. Resposta ativa / Resposta passiva a. Resposta ativa: recebe Ag atravs de vacinas ou imunizaes haver resposta imunolgica (Toxide tetnico/diftrico, vrus vivo atenuado poliomielite/sarampo/rubola ou vrus mortos) b. Resposta passiva: recebe produtos da resposta imune produtos de linfcitos B (anticorpos) que iro melhorar a defesa (recm nascido recm IgG materna e IgA pelo colostro, antitoxinas diftrica/tetnica, soros) 3. Resposta inata ou especifica / Resposta adaptativa ou inespecfica a. Resposta inata ou especifica: primeira linha de defesa tem como funo impedir a disseminao de patgenos, reconhece estrutura compartilhada pelos diferentes patgenos. Componentes da resposta inata: barreira mecnica, fagcitos (quimiotaxia e fagocitose), sistema complemento e clulas NK. b. Resposta adaptativa ou inespecfica: o organismo reage de diferentes formas, dependendo do antgeno. Adaptam-se a cada tipo de agente invasor, estimulada quando o microorganismo vence as barreiras inatas. Tem como funo bloquear o agente agressor. Reconhece a estrutura especifica da partcula infecciosa, proteo duradoura. Caracteristicas: memria, especificidade e heterogenicidade. 4. Resposta humoral / Resposta celular A origem se d na medula ssea primordial. No timo originam-se os linfcitos T e na medula os linfcitos B, esses seguem para os linfonodos, bao e MALT. Imunidade humoral compreende os linfcitos B e a imunidade celular os linfcitos T. Barreira mecnica: a primeira linha de defesa, integrando a resposta imunolgica inata ou inespecfica. difcil que microorganismos consigam penetrar nos tecidos e rgos enquanto a barreira mecnica estiver intacta e em perfeita funcionalidade. 1. Pele: glndulas sudorparas (acido ltico/rico), glndulas sebceas (triglicerdeocidos graxos) 2. Mucosas: sistema muco ciliar (integridade, funcionalidade), secrees (lactoferina, alfa 1 antitripsina, lisozima responsveis pela inibio da elastase dos fagcitos e rompimento da membrana citoplasmtica). 3. Estmago: pH acido 4. Intestino: peristaltismo intestinal, flora bacteriana normal, muco, peptidios microbicidas das criptas. 5. Espirro/tosse: eliminam patgenos das vias areas. 6. Febre: IL-1, TNF e IL-6 aumento dos pirgenos endgenos que emitem mensagens para o hipotlamo. A IL-1 e o TNF so sintetizados por moncitos e macrfagos e a IL-6 secretada por linfcitos T auxiliares.

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Fagocitose compreende a ingesto e digesto de partculas slidas pelas clulas. Para substancias liquidas denominamos de pinocitose. Como fagcitos, temos: a. Neutrfilos: originados na medula ssea, atingem a circulao perifrica em resposta a inflamao aguda. b. Eosinfilos: originados na medula ssea, atingem mucosas, tecidos e circulao perifrica em resposta a infestaes parasitrias e respostas alrgicas. c. Moncitos/macrfagos: os moncitos so originados na medula ssea (clulas primordiais), tornam-se pr-moncitos ainda na medula ssea e por ao da IL-3, GM-FSC tornam-se moncitos no sangue perifrico e ao atingirem tecidos e cavidades passam a serem macrfagos. Quimiotaxia: para que ocorra a atividade fagocitria, os fagcitos deixam a circulao sangnea, aps a unio com molculas de adeso expressas na superfcie de clulas fagocticas e endoteliais, por migrao transendotelial. No meio extravascular, elas se dirigem por quimiotaxia ao local onde deve ocorrer a resposta imunolgica. Receptores de fagcitos: receptores de sinalizao promovem a seqncia de respostas adaptativas aps a resposta inata, outros permitem que as fases iniciais dos fagcitos se completem: adeso ingesto digesto eliminao de restos bacterianos. A fagocitose por eosinfilos libera: Protena bsica principal: toxina para helmintos promove liberao de histamina e citocina. Protena catinica eosinoflica: toxina para helmintos promove a liberao de histamina, microbicida e lise das clulas tumorais. Peroxidase eosinofilica: microbicida que promove a liberao de histamina e dano epitelial. Sistema Complemento: Conjunto de no mnimo 30 protenas plasmticas que podem fazer parte da resposta imunolgica, resultando na formao de fatores quimiotticos, anafilatoxinas, opsonizao e lise das clulas ou microorganismos. So compostos termolbeis e funcionam em cascata de amplificao. rgos linfides: agrupamento de muitos linfcitos os quais so clulas responsveis pela imunidade adaptativa. Neles ocorre a maturao de linfcitos (timo e medula ssea). a. Timo: tem como funo a maturao ou diferenciao de linfcitos, produo de hormnios (timopoetina, tomosina e fatores tmicos humorais). A maturao se d pelo ganho de grupamento moleculares na superfcie celular, denominados como CD (cluster of differentiation), geralmente so glicoproteinas. i. CD1, CD2, CD3, CD5 e CD7: fases iniciais da maturao. ii. CD1, CD5 e CD7: indicam imaturidade desses linfcitos. iii. CD3, CD4, CD8 e TCR: so linfcitos maturos.

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TCR: formado por duas cadeias glicopeptdicas contendo uma parte constante e outra varivel na qual ocorre a maior recombinao de peptdeos, dando hipervariabilidade do linfcito. b. Medula ssea: rgo hematopoitico d origem aos linfcitos a partir da clula primordial. A maioria migra para o timo, onde sofre diferenciao. rgos linfides perifricos: a. Linfonodos: contm linfcitos B na regio cortical e linfcitos T na rea paracortical. b. Bao: contm a maior quantidade de linfcitos no organismo. Na polpa vermelha ocorre destruio das clulas danificadas ou envelhecidas e na polpa branca ocorre coleta de antgenos e reteno de linfcitos. Ao redor da arterola central encontram-se os linfcitos T e no centro germinativo os linfcitos B. c. Tecido linfide associada a mucosas (MALT): onde ocorre a resposta adaptativa humoral e/ou celular das mucosas. i. GALT tecido linfide associado ao digestivo ii. BALT tecido linfide associado aos brnquios iii. Tecido linfide associado ao genitourinrio Sub-populaes de linfcitos: de origem hematopoitica de linhagem linfide a qual estimulada por IL-3 e IL-7 a. Sub-populaes de linfcitos bursa equivalentes: ao atingirem linfonodos, bao e tecidos linfides associados s mucosas, sofrem proliferao e diferenciao final. Fenmeno da captao antignica que consiste na polarizao, endocitose, proliferao de B maturo e diferenciao. b. Sub-populaes de linfcitos timo dependentes: os linfcitos T alcanam os rgo linfides secundrios, proliferam-se e se diferenciam em linfcitos citotxicos, T auxiliares, T com funo imunossupressora, T produtor de citocina e T memria mediante encontro antignico. i. T citotxico CD8+ ii. T auxiliar CD4+ iii. T supressor principalmente CD8+ iv. T citocina principalmente CD4+ Mecanismo de lise por linfcitos T citotxicos ou clulas CD8+ ocorre pela liberao de perfurinas (substancias monomricas) sobre as clulas a ser destruda. Ocorre a polimerizao dessas perfurinas na membrana citoplasmtica, levando ao desequilbrio da bomba de sdio-potssio e conseqente lise.

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Clulas Natural Killer (Clulas NK): promovem tanto a lise das clulas tumorais quanto das infectadas por microorganismos intracelulares. No possuem memria imunolgica, no necessitam de apresentao antignica e utilizam como mecanismo de ao as perfurinas, apoptose e a citotoxicidade dependente de anticorpo.

Imunoglobulinas
So protenas plasmticas efetoras da resposta imunolgica, com funo anticpica, alm de combaterem outras substncias. Combinam-se exclusivamente com a substncia que induziu a sua formao. Sua estrutura um monmero constitudo por duas cadeias polipeptdicas leves (L) e duas pesadas (H) unidas entre si por pontes dissulfdicas. Imunoglobulina IgG IgM IgD IgE IgA Cadeia Leve (L) K ou K ou K ou K ou K ou Cadeia Pesada (H)

Caractersticas: especificidade e diversidade Domnio das imunoglobulinas: so regies globulares formadas por pontes dissulfdicas entre os resduos de cistenas. Funo de cada domnio: Domnio VL-VH CL-CH1 CH2-CH2 CH3-CH3 CH4-CH4 Funo Reconhecimento do antgeno Ligao covalente entre L e H Fixa o primeiro componente do sistema do complemento Ligao no covalente entre as cadeias H, citotropismo para linfcitos, moncitos e macrfagos Citotropismo para basfilos e mastcitos

Classificao das imunoglobulinas: a. Istopos: existe a mesma classe de imunoglobulina em indivduos de mesma espcie. b. Altipos: existem genes alelos que determinam pequenas diferenas na seqncia de aminocidos das imunoglobulinas. c. Iditipos: so imunoglobulinas individuais, a diferena est na regio varivel. Atividades primrias: resultado das ligaes aos antgenos a. Lise: ao direta nas membranas celulares b. Neutralizao: recobrimento da poro deletria da substancia c. Aglutinao: agregao de anticorpo a certas bactrias d. Precipitao: unio da substancia solvel formando complexos insolveis

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e. Opsonizao: facilitam a fagocitose f. Ativao do complemento Atividades secundrias Imunoglobulina Atividade secundria Primeira a ser sintetizada (principalmente em organismos Gram negativos), Fixa o complemento, Neutraliza toxinas, Ao aglutinadora e citotxina Atravessa as barreiras placentrias e mucosas, Fixa complementos IgG1/IgG3, Neutraliza toxinas, Participa da opsonizao, Ao bloqueadora e aglutinadora. Neutraliza toxinas, Possui ao antiviral, Ao aglutinadora, Age contra os pilis bacterianos Quase toda IgD encontra-se unida a superfcie dos linfcitos B, Participa da regulao da resposta humoral, Atua como anticorpo para certos antgenos (nucleares, tireoideanos, insulina, penicilia e protenas do leite) Une-se a mastcitos e basfilos nas reaes de hipersensibilidade, Participa da eliminao de parasitas ( facilitando a fagocitose e contrao da musculatura lisa).

IgM

IgG

IgA

IgD

IgE

Dimerizao da imunoglobulina IgA: esta sintetizada por plasmcitos quando estimulados e se encontra no plasma. Quando necessrio, sofre transformao para IgA dimrica atravs de dimerizao. A mudana de classe das imunoglobulinas ocorre somente aps o contato de clulas B com o antgeno na tentativa de encontrar a classe ou subclasse de imunoglobulina que tenha atividade biolgica efetiva na defesa contra o antgeno. Eptopo, eptope ou determinante antignico: a parte ativa da molcula, geralmente um grupo de aminocidos. Tolerncia dependente da dose (TDD): altas ou baixas doses repetitivas de antgenos levam a ausncia de resposta imunolgica. A TDD um mecanismo adaptativo, torna-se comprometedora quando h necessidade de defesa imune.

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Interao antignica e resposta adaptativa


Locais de interao antignica: 1. Ags do sangue - bao 2. Ags do TGI, respiratrio e genitourinrio tecidos linfides associados as mucosas correspondentes 3. Ags de diferentes tecidos/rgos linfonodos regionais. Na resposta humoral ocorre unio entre o eptopo e determinante de complementaridade. Na resposta celular a unio entre o eptopo e o TCR. Essa interao antignica vai depender do componente gentico do indivduo. As imunoglobulinas monomricas (IgG, IgD, IgM superficial e IgA srica) apresentam dois fragmentos de unio antignica. Unio antignica Anticorpo: a unio reversvel, no covalente, sem caractersticas chavefechadura, ou seja, no existe fuso Ag-Ac. A unio ocorre por foras atrativas (hidrofbicas, eletrosttica, hidrogeninicas e/ou de van der Waals). Afinidade a fora total resultante da unio entre os eptopos e determinantes de complementaridade. Avidez a soma das diversas afinidades (vrios eptopos). Rede idioptica anti-idiotpica: o idiotipo formado uma substncia nova para o organismo, o sistema imunolgico reconhece o novo idiotipo como substncia estranha. Alteraes na rede idiotpica levam a reaes de hipersensibilidade e doenas auto-imunes.

Molculas de adeso
Molculas de adeso so molculas de superfcie que promovem a unio entre diferentes clulas, facilitando ou permitindo a resposta imunolgica. Receptores quase sempre so especficos para cada tipo de molcula de adeso, e so chamados de co-receptores ou ligantes. As clulas em repouso so clulas de baixa expresso de molculas de adeso e de cargas negativas em sua membrana celular, que so responsveis pela diminuio da aproximao entre as clulas, mantendo-as afastadas. Na presena de antgenos, ocorre um aumento na expresso das molculas de adeso na membrana celular, tornando as membranas com carga eltrica positiva. Isso leva a aproximao de diferentes clulas permitindo a interao intracelular.

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Classificaao das molculas de adeso 1. Superfamlia das imunoglobulinas a. TCR ou receptor de clulas T: localiza-se na superfcie de linfcitos timodependentes conferindo a especificidade ao linfcito. Seus receptores so molculas codificadas por genes MHC (complexo principal de histocompatibilidade). O resultado da unio o inicio da ativao da clula T. b. CD3: faz parte do TCR e sua funo consiste na maturao e ativao das clulas T. c. CD4/CD8: responsveis pela ativao dos linfcitos T auxiliares e T citotxicos. d. MHC classes I e II: ativam linfcitos T e. CD19: presente na superfcie celular de linfcitos B. Em conjunto com a IgM da superfcie constitui o receptor para clulas B, responsveis pela maturao e ativao de clulas B. f. ICAM-1 e ICAM-2: molculas de adeso intercelulares presentes em leuccitos e clulas endoteliais respectivamente. g. VCAM: promove a migrao transendotelial final de leuccitos, completando a sada desses da circulao sangnea. 2. Superfamlia das integrinas: a. LFA-1: conhecida como antgeno 1 associado a funo linfocitica ou leucocitica, presente em linfcitos e neutrfilos. Tem como funo unir leuccitos ao endotlio. b. VLA-1 / VLA-2 / VLA-3 / VLA-4 / VLA-5 e VLA-6: associadas ativao tardia, associam-se ao CD29, encontrados na superfcie de leuccitos. Sua funo idntica a de LFA-1. c. CR1 / CR2 / CR3 e CR4: glicoprotenas receptoras do sistema complemento, encontradas em leuccitos e eritrcitos. Promovem a opsonizao de bactrias, regulao de complemento e eliminao de imunocomplexos. 3. Famlia das selectinas: a. Estruturas monomricas que contem aminocidos terminais, cuja funo permitir a sada de leuccitos e plaquetas do vaso sangneo para o interstcio, regulando o nmero de clulas na circulao. So trs as selectinas: P (plaquetas), E (endotlio) e L (leuccitos). Migrao endotelial: fenmeno onde os leuccitos deixam a circulao sangunea atravessando a parede dos vasos entre as clulas endoteliais. Ela induzida pela presena de antgenos, pela expresso de molculas de adeso e citocinas

Citocinas
So peptdeos estimulados antigenicamente que atuam na prpria clula produtora (ao autcrina), em clulas prximas (ao parcrina) ou em clulas distantes (ao endcrina). Atuam como mediadores da comunicao intercelular, regulando a resposta imune maturao, proliferao e diferenciaao celular ativando ou inibindo a resposta imune.

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Caractersticas: so polipeptideos que atuam em concentraes muito baixas, de ao rpida e autolimitante, necessitam de receptores, apresentam tropismo por vrias clulas. Uma citocina pode apresentar diferentes efeitos e diferentes efeitos podem ser produzidos por varias citocinas. Mecanismo de ao: 1. Por meio de enzimas quinases (JAK ou RAS): propiciam eventos moleculares que transmitem sinais para o interior das clulas, resultando em respostas especficas. 2. Por dmeros ativados: unio de enzimas quinases que levam a fosforilao de protenas, que se tornam ativas e translocam o ncleo celular. 3. Por genes reguladores: genes reguladores levam a transcrio de novas seqncias de nucleotdeos, ocasionando a sntese de novo RNA mensageiro, que leva a sntese de novas protenas com atividades especificas respostas determinadas por clulas que modulam a resposta imunolgicas Quimiocinas (Citocinas quimioatraentes): sintetizadas por moncitos e macrfagos, promovem de forma parcrina ou endcrina a atividade quimiottica de diferentes clulas, direcionando o deslocamento destas para o local do processo inflamatrio.

Reaes de Hipersensibilidade
Alergia: resposta exagerada do sistema imunolgico a um antgeno especifico (alrgeno), na forma de reao de hipersensibilidade. Atopia: distrbio de hipersensibilidade a diversos fatores ambientais, com carter gentico. Anafilaxia: certos alrgenos podem induzir a respostas mediadas por IgE, causando uma liberao generalizada de mediadores pelos mastcitos, resultando em uma reao sistmica. caracterizada pela hipotenso, choque, vasodilatao, broncoespasmo, urticria e andioedema. Hipersensibilidade: geralmente o organismo consegue remover e eliminar o antgeno sem causar danos teciduais. Para produo de manifestaes de hipersensibilidade necessrio contato anterior com a substncia sensibilizadora (Ag alrgeno).

Tipos de hipersensibilidade:
1. Hipersensibilidade tipo I mediada pelo IgE, ativando mastcitos, caracterizada por uma reao alrgica imediata (anafiltica) aps o contato com o alrgeno. Provoca degranulaao dos mastcitos, liberando histamina, prostaglandinas e citocinas. As citocinas atuam como mediadores qumicos sobre os basfilos. Ex.: rinite, asma, dermatite atpica. 2. Hipersensibilidade tipo II ou citotxica mediada por anticorpos (IgG/IgM), resulta na ativao da cascata do complemento e destruio da clula a qual o antgeno est aderido. Ex.: anemia hemoltica

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3. Hipersensibilidade tipo III mediada por imunocomplexos, reao de IgM/IgG sobre antgenos solveis formando imunocomplexos que se depositam entre os tecidos. Os imunocomplexos permanecem circulantes at depositarem-se nos tecidos, principalmente glomrulos e endotlio vascular. Ex.: artrite, glomerulonefrite, febre reumtica 4. Hipersensibilidade tipo IV conhecida como hipersensibilidade retardada ou tardia. Reao mediada por clulas T (CD4/CD8) hipersensibilidade celular. Ocorre geralmente em dois dias, com a formao de granulomas tpicos em 20 dias. Ex.: artrite reumatide, micobacterioses, dermatite de contato.

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