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1.

INTRODUO Microrganismos nos alimentos so causadores de alteraes qumicas

prejudiciais, resultando no que chamamos deteriorao microbiana. A deteriorao microbiana resulta em alteraes de cor, odor, sabor textura e aspecto do alimento. Essas alteraes so conseqncia da atividade metablica natural dos microrganismos, que esto apenas tentando perpetuar a espcie, utilizando o alimento como fonte de energia. A deteriorao provocada somente uma conseqncia desse processo. Os microrganismos presentes nos alimentos podem representar um risco sade. Estes microrganismos so determinados patognicos, podendo afetar tanto o homem como animais. As caractersticas das doenas que esses microrganismos causam dependem de uma srie de fatores inerentes ao alimento, aos microrganismos patognicos em questo e ao individuo a ser afetado. (FRANCO, 2005). Os microrganismos patognicos podem chegar at o alimento por inmeras vias, sempre refletindo condies de higiene durante a produo, armazenamento, distribuio ou manuseio em nvel domstico. Muitos destes microrganismos j esto presentes naturalmente no sendo necessrio adicion-los, mas sim estimular seletivamente sua atividade biolgica. (FRANCO, 2005). O trabalho consiste em determinar os agentes causadores de deteriorao microbiolgica em pescado marinho conservado em gelo.

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2. OBJETIVOS 2.1 Objetivos Gerais Avaliar a qualidade microbiolgica do peixe marinho Tibiro (Oligoplites Palometa) conservado em gelo para determinao de sua vida til..

2.2 Objetivos Especficos Determinar:


Contagem padro em placas de bactrias mesfilas; Contagem padro em placas de bactrias psicrfilas; Contagem padro em placas de bolores e leveduras; Nmero Mais Provvel de coliformes total e termotolerante.

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FUNDAMENTAO TERICA

3.1 Microrganismos de importncia em pescado Os microrganismos coexistem dentro e fora do corpo do pescado, em equilbrio biolgico. A permanncia, tanto em termos de qualidade como a quantidade no pescado, pode ser passageira ou contnua. H variaes com a espcie, como o hbitat (principalmente a zona de captura), com a estao do ano, com o alimento disponvel e com a fase do ciclo reprodutivo. (FRANCO. 2005) No ocorrem microrganismos na carne do pescado no momento da captura. Os microrganismos chegam aos tecidos aps a morte, propagam-se e passam a constituir um grande nmero. Os microrganismos encontrados no pescado recm-capturado provm originalmente da pele, das brnquias e do trato intestinal. So principalmente Pseudmonas, Achromobacter, fosfobactrias, flavobactrias aerbicas e anaerbicas esporuladas, esporos de Eripsela e leveduras de diferentes tipos (JAY,2005). Uma combinao secundria seria a decorrente do contato do pescado com a embarcao, durante o transporte por terra e do manuseio para a venda. Aparecem ento, entre outros, enterobactrias, bacilos, micrococos, leveduras e fungos. Nas guas setentrionais do Atlntico, nas quais os peixes so capturados a uma temperatura mxima de 12C, a flora microbiana se compe principalmente de psicrotolerantes, havendo menos de 5% de mesfilos. Em guas mais temperadas, como o Mar Adritico e no Oceano ndico, predominam os mesfilos. Esses microrganismos encontram na carne do pescado condies apropriadas para a sua sobrevivncia e multiplicao. Assim, por efeito de sua atividade proteoltica, ocorrem alteraes que so detectveis por anlise organolptica (JAY, 2005). Os psicrotolerantes esto na pele do pescado fresco em nmero de 102 a 108/ml; e, nos tecidos das brnquias, de 103 a 106/g de tecido (FRANCO,2005).
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Nas guas das reas de captura h mais microrganismos que nas zonas pobres em pescado. Os rins, as brnquias e os vasos sanguneos so os principais focos de microrganismos; no msculo, na pele e nas paredes do estmago e do intestino eles se reproduzem mais lentamente. Os primeiros msculos contaminados so os correspondentes cavidade branquial, aos rins e parede abdominal. Esses microrganismos tm como caractersticas comuns uma velocidade elevada de multiplicao a temperaturas entre 5C e 20C, com intensa atividade proteoltica que persiste at -0,5C, uma ativa mobilidade que os faz penetrar eficazmente nos msculos, e produzem grandes quantidades substncias corantes e spidas. (OETERRER.M,2002). Entre os microrganismos psicrotolerantes mais representativos esto os Pseudomonas fluorescens liquefaciens, as Flavobacterium aquatile, as Achromobacter e as bactrias fosforescentes. Todo pescado capturado no Mar do Norte apresenta a predominncia de Moraxellas seguida de Pseudomonas dos grupos II e III, alm de Flavobacterium cytophaga e de Acinetobacter. Na costa brasileira, o pescado contm Achromobacter, Pseudomonas e bactrias corineformes entre outras. Entre os microrganismos com atividade patognica, esto as salmonelas, que originalmente no existem no pescado, porm podem estar em guas costeiras contaminadas. Nunca foram observados sintomas de salmonelose em peixes que vivem em mar aberto. (APHA, 2001). O Clostridium botulinum pode se instalar nas vsceras do pescado. O tipo E o causador da maior parte do botulismo devido ao consumo de pescado, mas os produtos pesqueiros tm de reunir condies de anaerobiose para que sua toxina chegue a se formar aps o crescimento e a multiplicao na carne. O consumo de pescado cru pode levar gastroenterite aguda devido presena de Vibrio parahaemolyticus. H elevada incidncia de vbrio nas guas, nos moluscos e nos crustceos da regio litornea paulista. O Staphilococcus aureus no aparece em ambientes marinhos, mas pode estar na pessoa que manipula o pescado, alojado nas mucosas nasais e nos olhos, podendo ser acrescentado microflora do pescado. Algumas espcies de Proteus podem formar histamina no pescado a partir da descarboxilao de

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histidina. As bactrias erisipelides so patgenas e esto na superfcie de algumas espcies (JAY,2005).

3.2 Importncia da anlise microbiolgica do pescado

A microbiologia de alimentos: estuda todos os microrganismos que contaminam alimentos e bebidas. De todos os alimentos o pescado o mais susceptvel a autlise, a oxidao de gorduras e a decomposio bacteriana, quando o peixe morre sofre uma srie de alteraes que culminam no Rigor Mortis. Aps a captura o pescado deteriora gradualmente, devido a fatores endgenos e exgenos, entre esses os microrganismos que penetram na musculatura atravs das brnquias, pele e cavidade abdominal ( DAOUST; MAURER ; BAILER; 2001). O pescado pode conter agentes microbianos e ser contaminado ou ter multiplicado a flora microbiana inicial, em qualquer um dos segmentos da cadeia produtiva. Por isso, a legislao sanitria impe limites presena de microrganismos, patognicos ou deterioradores, para garantir a segurana alimentar e a qualidade desse tipo de alimento (ANVISA, 2001). A avaliao microbiolgica de fundamental importncia para o controle da qualidade do pescado, atravs desta avaliao so identificados os principais contaminantes.

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3.3 Uso do gelo na conservao do pescado Ao sair da gua o peixe viaja vrias horas at a comercializao. O nico meio de atrasar a deteriorao usar um agente que freie as aes enzimticas e evite as aes bacterianas temporariamente. O frio esse agente. A estocagem a bordo com uso do gelo pode ser feita a granel, sendo de 3:1 a proporo peixe e gelo. Este sistema usado para peixes pequenos e a espessura mxima das camadas de peixes+gelo no deve ultrapassar 50 cm (OETTERER, 2002). Para peixes de valor comercial como a pescada, utilizados para elaborao de fil congelado, armazena-se em prateleiras. Os peixes so colocados sobre um leito de gelo, alternando caudas e cabeas, com a parte ventral para baixo, num total de duas ou trs camadas de peixes intercaladas com gelo. A ltima camada dever ser s gelo. O uso de gelo implica em se ter higiene no local de captura, como para o pescado artesanal ou piscicultura (OETTERER, 2002). A origem da gua, potvel de preferncia, o tamanho do gelo utilizado e a distribuio dele, so fatores importantes a serem considerados. O gelo vai atuar na reduo de temperatura do pescado pelo contato direto, onde o calor do pescado transferido para o gelo e pela gua de fuso do gelo, que ao derreter roubar calor do pescado e do ar ambiente, ficando gua a mesma temperatura do gelo que a originou. A indstria brasileira uso gelo em cubo ou em escamas, o que melhor. O cubo deve ter no mximo 1 cm 3 em camadas intercaladas com o pescado, na proporo 1:1 gelo:peixe (OGAWA,1990). O gelo fabricado em escamas proveniente de cilindros de parede dupla, onde evaporado o refrigerante presso atmosfrica. A gua distribuda por aspersores na regio superior do cilindro corre para baixo, na superfcie externa formando uma camada de gelo que raspada (OETTERER, 2002). Estocagem do pescado in natura para comercializao em peixarias e supermercados deve ser feita em cmaras refrigeradas com uso do gelo e em vitrines com gelo quando em exposio (OETTERER, 2002).

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3.4 Tibiro (Oligoplites palometa) O tibiro (Figura 1) um peixe de hbito costeiro de ocorrncia comum em reas de mangues, esturios, baas, ao longo de praias e ao redor de ilhas, preferindo reas trbidas s mais claras, aonde forma grandes cardume. Possui hbito alimentar carnvoro, e tamanho e peso mdio de 57,8 cm e 478,6g, respectivamente (SANTOS 2009).

Figura 1 Peixe tibiro comercializado no municpio de Raposa MA, 2011.

O Maranho o segundo maior produtor de pescado da regio nordeste do Brasil, produzindo cerca de 40.000 toneladas de peixes, crustceos, e moluscos por ano (VANSCONCELOS, 2005). No municpio de Raposa encontra-se a maior e mais importante comunidade pesqueira do estado, com nmero de aproximado de 359 embarcaes ativas e produo anual de 5.057 toneladas de pescado, o que corresponde a 12,75% da produo total do litoral maranhense (IBAMA, SEAP, PROZEE, 2008). O Tibiro descarregado, principalmente, no municpio da Raposa, devido a recentes estudos sobre sua qualidade nutricional e resultados satisfatrios em comparao a peixes de outras espcies e que possuem valor de mercado elevado, o Tibiro teve projeo no mercado, sendo distribudo tambm para as feiras de So Lus.
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4. MATERIAL E MTODOS

4.1 Coleta das amostras 4.6.1 Coleta e tratamento das Amostras: As anlises realizadas nesse estudo deram-se com o Tibiro (Oligoplites Palometa). O pescado foi coletado no municpio da Raposa, litoral Norte do Maranho. Seu armazenamento foi feito em caixa isotrmica com gelo. As amostras foram coletadas entre os meses de maro e junho. As anlises foram realizadas semanalmente no pescado at que o mesmo se tornasse imprprio para o consumo humano. 4.2 Anlise microbiolgica: 1. Ala de Nquel Cromo 2. Basto de vidro 3. Erlenmeyer 4. Pipeta 5. Placas de Petri 6. Tubos de Durhan 7. Tubos de Ensaio 4.3 Soluo e meio de Cultura 4.3.1 Soluo: Salina (NaCl+gua) a 0,85% 1.1.2 Meio de Cultura 1. Agar Batata - (Bolores e Leveduras). 2. Caldo E.C - (Coliforme Termo tolerante). 3. Caldo Lauril- (Teste Presuntivo-Coliforme total) 4. Caldo Verde Brilhante - (Teste confirmativo-Coliforme Total). 5. Plate Count Agar (PCA) - (Bactrias). 4.4 Preparo da soluo diluente:

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4.4.1 Diluies sucessivas: Dissolver o cloreto de sdio (0,85 g) em gua destilada (100 ml). Distribuir em tubos de ensaio. Esterilizar em autoclave a 121C/15 min. (ICMSF). 4.4.2. Diluio inicial: Dissolver o cloreto de sdio (1.91g) em gua destilada (225 ml). Medir na proveta. Esterilizar em autoclave a 121C/15min. (ICMSF).

4.5 Preparo do meio de cultura: Pesar o meio de cultura de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a proporo indicada pelo fabricante. Transferir para recipiente adequado. Adicionar o volume de gua destilada correspondente. Deixar em repouso por 15 minutos. Aquecer at a completa dissoluo ajustar o pH se necessrio. Distribuir volume de acordo com a necessidade. Esterilizar 121C por 15 min.(ICMSF). 4.6 Metodologia das Anlises Os exemplares de tibiro foram coletados semanalmente de forma aleatria na caixa isotrmica de armazenamento dos mesmos no Laboratrio de Tecnologia de Alimentos da Universidade Federal do Maranho. Os peixes foram eviscerados e feitos fils, o material foi homogeneizado e colocado em um bquer esterilizado previamente, sendo transferido para outra caixa de isopor contendo gelo, e transportado para o laboratrio de microbiologia. (Anexo A).

No laboratrio de microbiologia, foram retirados 25g da amostra e colocados em um erlenmeyer esterilizado contendo 225 ml de soluo salina 0,85% estril. O material foi homogeneizado. A partir da primeira diluio
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foram realizadas duas diluies decimais (10-2; 10-3)( Anexo B), em seguida 1mL do inculo de cada diluio foi transferido para os tubos (srie de trs tubos) contendo Caldo Lauril Sulfato para determinao de coliformes, com incubao de 35C durante dois dias(Anexo C).Os tubos positivos aps o perodo de incubao tiveram o sobrenadante transferido com auxilio de ala de nquel cromo para os tubos de verde Brilhante(teste Confirmativo) 35C durante dois dias(Anexo D), e para os tubos de Caldo E.C(coliformes termo tolerante) em Banho Maria durante um dia.(Anexo E). Para as bactrias e bolores e leveduras um mL do Inoculo foi transferido para as placas de Petri correspondente a cada diluio, as anlises foram realizadas em duplicata. O meio de cultura PCA (Plate Count Agar) foi distribudo nas placas referentes s bactrias (15-20 mL) e o BDA (Agar Batata) Foi distribudo nas placas referentes a bolores e leveduras (1520 mL). Para as bactrias psicrfilas as diluies utilizadas foram 10 -4; 10-5; 10-6, incubadas a 7C durante dez dias (Anexo F) e as bactrias Mesfilas foram incubadas a 35C durante dois dias (Anexo G). Para os bolores e leveduras, as placas foram incubadas a temperatura ambiente 25C, durante trs a cinco dias. (Anexo H). 4.7 Equipamentos e acessrios 4.7.1 Autoclave (FIGURA 2): um aparelho utilizado para esterilizar artigos atravs do calor hmido sob presso.

FIGURA 2-Autoclave
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4.7.2 Balana Analtica (FIGURA 3): So as de uso mais restrito, especialmente na determinao de massas em anlises qumicas de determinao da quantidade absoluta ou relativa de um ou mais constituintes de uma amostra.

FIGURA 3-Balana Analtica. 4.7.3 Banho Maria 45C(FIGURA 4): um mtodo utilizado tanto na cozinha como em laboratrios qumicos e na indstria (farmacutica, cosmtica, conservas, etc.) para aquecer lenta e uniformemente qualquer substncia lquida ou slida num recipiente, submergindo-o noutro, onde existe gua a ferver ou quase

FIGURA 4-Banho Maria

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4.7.4 Bico de Bunsen (FIGURA 5):

um dispositivo usado para efetuar aquecimento de solues em laboratrio.

FIGURA 5-Bico Bunsen

4.7.5 Capela (FIGURA 6): Uma capela de exausto um gabinete ventilado, que est dentro de um ambiente laboratorial cuja ventilao tambm deve estar corretamente projetada, para que o sistema leve para fora do edifcio os efluentes indesejveis provocados por um procedimento efetuado no interior da capela.

FIGURA 6-Capela

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4.7.6 Estufa (FIGURA 7): O processo de esterilizao em estufas de ar quente o mtodo mais utilizado dentre os de esterilizao por calor seco, iremos descrever o equipamento utilizado neste mtodo, que a estufa ou forno de Pasteur.

FIGURA 7- Estufa 4.7.7 Estufa de Crescimento microbiolgico (FIGURA 8): Incubar Bactrias mesfilas e Coliformes totais.

FIGURA 8-Estufa de Crescimento microbiolgico

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4.7.8 Refrigerador (FIGURA 9): Os objetivos principais da refrigerao so armazenamento de alimentos a baixas temperaturas para evitar ao de bactrias e o surgimento bolor ou fermentao e manter uma temperatura estvel em ambientes ou em equipamentos eletrnicos. Para a nossa pesquisa foi utilizado para o crescimento de bactrias psicrfilas, pois o ambiente favorvel.

FIGURA 9- Refrigerador

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5. RESULTADOS E DISCUSSO
Os resultados das anlises microbiolgicas de amostras do Tibiro (Oligoplites Palometa). Comercializados no municpio de Raposa-Ma esto demonstrados na TABELA 1.
TABELA. 1

Anlises microbiolgica em Tibiro (Oligoplites Palometa)

conservado em gelo.
Amostras/dias 1/(3 dias) 2/(10 dias) 3/(17 dias) 4/(24 dias) 5/(3 dias) 6/(10 dias) 7/(17 dias) 8/(24 dias) Coli.Tot (NMP/g) 210 2400 2400 2400 2400 2400 2400 2400 Coli.Tem (NMP/g) 210 2400 2400 2400 2400 2400 2400 2400 Bact.Mes (UFC/g) 3,3x102 4,0x102 3,1x105 3,1x105 3,05x102 4,45 x102 3,1 x105 3,1 x105 Bact.Psic (UFC/g) 4,15x105 5,75x102 4,1x105 4,2x105 4,15 x105 5,75 x102 4,1 x105 4,2 x105 Bolores e leveduras (UFC/g) 3,15x102 3,0x102 3,0x102 3,2x102 2,95 x102 3,0 x102 2,95 x102 3,35x103

GRFICO 1: Avaliao de bactrias mesfilas, psicrfilas, bolores e

leveduras em Tibiro (Oligoplites Palometa) armazenado em gelo.


60 0 50 0

B c r sMs fila a tia e s B c r sPic s a tia s r fila B loe eL v d r s o r s e e ua

UFC/g 10

40 0 30 0 20 0 10 0 0 0 5 1 0 1 5 2 0 2 5

Ds i a

No que diz respeito contagem de coliformes a 35-37C a legislao brasileira no possuem padro o que impossibilita a comparao dos resultados com padres adotados por rgos nacionais de inspeo e controle dos alimentos; tais anlises foram realizadas para que se tivesse uma noo de presena destes microrganismos no alimento, assim como na qualidade higinico-sanitria do produto oferecido ao consumo; os resultados obtidos, para esse grupo de microrganismo, apresentaram uma variao de 210 a 2400 NMP/g.

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Para coliformes a 45C, a variao tambm foi de 210 a 2400 NMP/g segundo Muratori et al.( 2004) a presena deste microrganismo em pescado indica que a captura foi realizada em ambientes com elevados ndices de contaminao bacteriana e poluio fecal. Falha ocorrida durante a manipulao captura armazenamento, transporte e beneficiamento, tambm so responsabilizadas pela ocorrncia desse microrganismo em pescado. Os dados de mesfilos aerbios tambm evidenciam um aumento em mdia de 3,175x102 UFC/g com 3 dias de estocagem para 3,1 x105 UFC/g com 24 dias de estocagem o que indica a proliferao de bactrias, provavelmente deteriorante segundo (DELBEM & GARBELINI & DE LARA 2010). Agnese et al. ( 2001) relatam que valores de mesfilos aerbios superiores a 106 UFC/g-1 de carne de peixe so considerados Crticos com relao ao seu frescor. Entretanto, Lira et al. ( 2001) observaram que alguns pescados que apresentarem mesfilos aerbios superiores a 106 UFC/g-1 no estavam com seus caracteres sensoriais alterados, enquanto que os outros com nmero inferior, na anlise sensorial eram desclassificados.O alto ndice de bactrias mesfilas na amostra deve-se ao fato de que o pescado utilizado na pesquisa proveniente do litoral maranhense que possui clima quente. Para as bactrias psicrfilas houve variao em mdia de 4,15x105 a 4,2x105 UFC/g segundo (DE AQUINO & DE VASCONCELOS & INHAMUNS & DA SILVA, 1996) bactrias psicrfilas com variao entre 102 a 12x106 UFC/g indica variao bem acentuado no nvel de contaminao. Nos pescados refrigerados as bactrias psicrfilas e psicrotrficas participam diretamente do processo de deteriorao do pescado, pelo fato de se multiplicarem bem nessas condies (FRANCO, 1996). Os pescados de regies tropicais provenientes tanto da gua doce quanto da gua salgada apresentam tempo de vida til superior aos pescados de regies frias temperadas de gua doce e salgada. Provavelmente pelo fato de nmero dos microrganismos mesfilos serem maior do que o nmero das psicrfilas nas regies tropicais registrando-se o inverno nas regies temperadas e frias. (HUSS, 1998).
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A presena de bolores e leveduras nas amostras analisadas teve variao em mdia de 3,05x102 com 3 dias de estocagem a 3,27x103 com 24 dias de estocagem.Na legislao federal no h padro para bolores e leveduras, porm tal determinao foi realizada, uma vez que a presena destes microrganismos pode indicar condies higinico sanitrias insatisfatrias.

6. CONCLUSO
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A contagem de coliformes total e temotolerante revelou na primeira semana de anlise ou seja com trs dias de armazenamento altos valores, o que indica condies higinicas sanitrias insatisfatrias e torna a partir do o pescado em estudo imprprio para o consumo. Para as bactrias mesfilas o pescado apresentou a uma elevao no ndice da primeira semana at a ltima indicando o crescimento de bactrias provavelmente de origem patognica. Para as bactrias psicrfilas no houve variao acentuada no resultado o que demonstra que o mtodo de conservao em gelo til para a preservao do pescado. Bolores e Leveduras apresentaram resultados em pequena quantidade no pescado, o que j era esperado uma vez que as bactrias so predominantes nesse tipo de alimento. De acordo com os resultados obtidos no presente estudo medidas higinicos sanitrias devem ser tomadas, os manipuladores devem ser capacitados e implementar boas prticas de manipulao,um maior controle da temperatura de acondicionamento e exposio, afim de preservar a qualidade do produto por mais tempo, estendendo seu tempo de vida til.

7. REFERNCIAS

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AGNESE.

A.P.;

DE

OLIVEIRA,

V.M.

SILVA,

P.P.O.;OLIVEIRA.G.A.;Contagem de bactrias heterotrficas aerbias mesfilas e enumerao de coliformes totais e fecais em peixes frescos comercializados no municpio de Seropdica-RJ.Revista de Higiene Alimentar v.15, p 67-70, 2011. ADAMS, M. R.; MOSS, M. O. Food microbiology. 2. ed. Cambridge: Royal Society o f Chemistry, 2002. ANVISA, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Ministrio da Sade.Resoluo n. 12 de 2 de janeiro de 2001. Dirio Oficial da Unio, janeiro de 2001. APHA, American Public Health Associat ion. Compendium of methods for the microbiological examination of foods. Washington: APHA, 2001. MOUCHREK FILHO. Victor Elias; NASCIMENTO. Adenilde Ribeiro, Noes de anlise fsico-qumicas e microbiolgicas de alimentos DELBEM, A.C. B; GARBELINI J.S; DE LARA J.A. F Avaliao

Microbiolgica do Pintado (Pseudoplatystoma corruscan) obtido no Rio Araguaia (Pantanal) e conservado em gelo. 2010 FORSYTHE, S. J. Microbiologia da segurana alimentar. Porto Alegre:Artmed, 2002. FRANCO,BERNADETTE; LANDGRAFF,M. Microbiologia de alimentos. 2005 FRAZIER, W.C.; WESTHOFF, D.C. Microbiologia de los alimentos. 4.ed.Zaragoza: Acribia, 2003. HACCP. Instrumento Essencial para a inocuidade de alimentos. So Paulo:OPAS, 2001. IBAMA/SEAP/PROZEE. Monitoramento da atividade pesqueira no litoral nordestino- Projeto Estatpesca. Tamandar, 2008, 385p. JAMES M.JAY. Microbiologia de alimentos. 2005

KAI, M.; MORAIS, C. Vias de Deteriorao do Pescado In: Seminriosobre controle de qualidade na indstria de pescado. Santos 1988. Anais.Leopoldina/Loyola, 303 p.

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OGAWA,M.;MAIA,E. L.M. Manual de Pesca Cincia e Tecnologia do Pescado. So Paulo: Varela. v.1, 1999. OETTERER, M.Industrializado do pescado cultivado.Guaba: Editora Agropecuria.200p.2002 SANTOS, Carlos Alberto Muylaert Lima dos. A qualidade do pescado e a segurana dos alimentos. In: Simpsio de Controle do Pescado, 2., 2006. Disponvel em: <ftp://ftp.sp.gov.br/ftppesca/qualidade_pescado.pdf> Acesso em: 14 de Maro de 2011

8. ANEXOS

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