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06.Manter a 200C at que termine o desprendimento de vapor marrom e a soluo esteja translcida OBS1: Algumas amostras no se apresentam plenamente translcidas ao final da digesto. Isto parece ser normal. Retir-las seguindo a observao 2 abaixo. OBS2: No deixar o material secar durante a digesto, pois h risco de exploso. O volume final deve ficar entre 1 e 2 mL. 07.Deixar esfriar em capela 08.Transferir quantitativamente para balo de 50 mL OBS1: O uso de papel de filtro (quantitativo, faixa preta, filtrao rpida) opcional. Sugere-se a obrigatoriedade de uso somente para as amostras que no ficaram plenamente translcidas. OBS2: O volume de 50 mL do balo no fixo e depender da concentrao de cromo da amostra. Em mdia, em experimentos com bovinos com doses de cromo de 10 a 20 g/dia de Cr2O3, este balo adequado para produzir soluo dentro da faixa dos padres da absoro atmica (de 0 a 12 ppm, como faixa mdia). OBS3: Para leitura de cromo advindo de uso de mordentes, pode ser necessrio utilizar bales de 25 mL e/ou ampliar o peso da amostra analisada. 09.Completar o desmineralizada volume do tampa balo ou com gua e
para-filme
11.Transferir uma alquota para o frasco de armazenamento que dever ser obrigatoriamente de polietileno (frascos do tipo acetona) OBS1: Realizar a lavagem do frasco na transferncia com um pouco da soluo mineral. Adicionar cerca de 5 a 10 mL da soluo no frasco, tampar e agitar. Descarte este material e ento acondicione a soluo a ser armazenada. OBS2: Embora no haja nada que indique que h deteriorao da soluo, recomenda-se o armazenamento da mesma sob refrigerao (geladeira convencional). 12.Proceder leitura absoro atmica em espectrofotmetro de
Importante Em todos os experimentos deve-se reservar amostra do xido crmico utilizado para que a mesma seja aferida quanto ao teor de cromo. A suposio do teor de 68,4% de cromo no xido cromo no deve ser utilizada em nenhuma hiptese, pois os xidos adquiridos comercialmente variam muito quanto ao teor real de cromo. comum verificar-se teores de 55 a 56%. Assim, a dose real de cromo deve ser aferida por experimento e/ou por partida de xido crmico adquirida. A abertura feita de forma similar realizada acima, com as seguintes sugestes: 01.Pesar alquotas de 100 a 150 mg 02.Utilizar bales de 100 ou 200 mL
03. relativamente comum a necessidade de diluir a soluo mineral antes da leitura na absoro atmica. Exemplo de Clculo 01.Padres da absoro atmica Padro (ppm) 0 2 4 8 12 Absorbncia 0,0000 0,0367 0,0758 0,1644 0,2322
02.Clculo da Lambert-Beer)
Curva
Padro
(segundo
Lei
de
02.1.Relao concentrao x absorbncia determinada por uma reta passando pela origem, dada por: em que: Y = absorbncia; X = concentrao no padro; b = coeficiente de inclinao da reta; e e = erro aleatrio. OBS: alguns equipamentos utilizam uma funo quadrtica passando pela origem para estimar a curva padro. Assim, os resultados de concentrao das solues podem apresentar valores ligeiramente divergentes do mtodo aqui apresentado. 02.2.Estimador de mnimos b pelo mtodo dos quadrados
da
concentrao
de
cromo
na
03.Exemplo de clculo da concentrao de cromo em uma amostra fecal (utilizando os padres demonstrados anteriormente): Dados: Peso da Amostra (ASA): 250,1 mg ASE: 90,15% Balo de diluio aps digesto: 50 mL Absorbncia da soluo: 0,1391 03.1.Concentrao de cromo na soluo:
04.Exemplo de clculo da concentrao de cromo no xido crmico (utilizando os padres demonstrados anteriormente): Dados:
Peso da amostra de xido crmico: 105,5 mg Balo de diluio aps digesto: 200 mL Diluio da soluo pr-leitura: 25x (1 parte de soluo e 24 partes de gua desmineralizada) Absorbncia da soluo: 0,2301 04.1.Concentrao de cromo na soluo diluda:
OBS: Caso a dose diria de xido crmico seja de 10 g, ento a dose real de cromo seria de 5,564g e no 6,84 g (considerando-se 68,4% de cromo no xido). Viosa, 06 de maio de 2009. Prof. Edenio Detmann
Professor Adjunto DZO/UFV Chefe do Laboratrio de Nutrio Animal
completa ventilao
05.Levar os sacos estufa no-ventilada (105C) por 60 minutos 06.Acondicionar os sacos em dessecador por cerca de 30 minutos OBS: Recomenda-se no mximo 20 sacos no dessecador. Nos procedimentos de pesagem de sacos, principalmente quando estes j contm os resduos fibrosos, h alta absoro de umidade, o que eleva o peso
os
sacos
(4
casas
08.Pesar as amostras e acondicion-las nos sacos OBS1: Observar a relao de 20 a matria seca por cm de superfcie. para sacos F57, 1,1 grama de amostra corresponde quantidade de amostra para se obter esta relao 25 mg de Em geral, seca ao ar necessria
OBS2: As amostras devem ser processadas em moinho de facas (tipo Wiley) com peneira de porosidade 2 mm. 09.Acondicionar os sacos em sacola(s) de fil ou tecido similar e incub-los no rmen de um ou mais animais. OBS1: o nmero de sacos por animal depender do tamanho do animal. Para um bovino jovem (cerca de 250 a 350 kg) recomenda-se no mais de 100 a 120 sacos. OBS2: no se exige dieta especfica para o animal. Entende-se que a condio essencial de que o animal deve estar sendo bem alimentado, incluindo-se forragem de mdia a alta qualidade. Relao volumoso:concentrado de 80:20 sugerida. 10.O tempo de incubao dever ser de 240 horas quando se objetiva obter apenas MSi ou FDNi e de 264 horas para quando se objetiva a obteno de FDAi. OBS1: quando indicadores procedimento elevado (264 se objetiva a obteno de todos os ou da FDNi e FDAi em conjunto o deve ser conduzido com o tempo mais horas).
12.Lavar os sacos com gua corrente abundncia at que a gua se torne clara
em
OBS1: esporadicamente durante a lavagem os sacos devem ser comprimidos manualmente para auxiliar na retirada do material solvel em gua que se acumula do interior dos sacos. A omisso deste procedimento tende a superestimar o teor de MSi e pode reduzir a preciso dos resultados de FDNi 13.Para obteno da MSi, os sacos, aps a lavagem, devem ser avaliados segundo os procedimentos 04 a 07. Calcular por:
em que:MSi = teor de MSi, como % da MS; SR = saco mais resduo aps incubao (g); S = peso do saco (g); MS = massa de MS incubada (g). 14.Para obteno da FDNi, acondicionar os sacos em aparelho analisador de fibra que utiliza ambiente sob presso (Ankom200 ou similar) OBS: no se devem utilizar aparelhos de anlise de fibra cujo ambiente de extrao no esteja sob presso (como alguns aparelhos nacionais). Anlise de fibra em sacos incompatvel com ambientes no-pressurizados. Os resultados perdem preciso e podem ser superestimados 15.Adicionar detergente neutro extrao a 100C por uma hora. e executar a
16.Retirar o detergente e executar a lavagem dos sacos com gua destilada quente (>90C) at que o detergente seja removido. 17.Lavar os sacos com acetona
18. Para obteno da FDNi, os sacos, aps a lavagem com acetona, devem ser avaliados segundo os procedimentos 04 a 07. Calcular por:
em que:FDNi = teor de FDNi, como % da MS; SR = saco mais resduo aps incubao e tratamento com detergente neutro (g); S = peso do saco (g); MS = massa de MS incubada (g). OBS: para obteno direta da FDNi, no h necessidade de se realizar o passo 13. Os sacos, aps a lavagem (passo 12) podem ser submetidos extrao com detergente neutro diretamente. 19.Para obteno da FDAi, deve-se proceder aos passos 14 a 18, substituindo-se detergente neutro por detergente cido Sugestes Gerais 1.Para obteno da MS potencialmente digestvel (MSpd), utilizar a frmula:
em que: MSpd = teor de matria seca potencialmente digestvel (% da MS); FDN = teor de FDN (%da MS); e FDNi = teor de FDNi (% da MS). A obteno da disponibilidade de MSpd no pasto dada pelo produto entre a disponibilidade total de MS (t/ha ou kg/ha) e o teor de MSpd (% da MS) na amostra de pasto tomada durante a avaliao da disponibilidade (massa total do pasto). 2.Formulao sugerida para o detergente neutro (g/L):
30 g de sulfato lurico de sdio (lauril sulfato de sdio) 18,61 g de EDTA sal dissdico 6,81 g de borato de sdio decahidratado 4,56 g de fosfato de cido de sdio anidro 10 mL de trietileno glicol OBS1: no se recomenda o uso de sulfito de sdio OBS2: entende-se no haver necessidade da utilizao de amilase para avaliao de FDNi, pois se espera que o amido tenha sido degradado durante a incubao ruminal 3.Formulao sugerida para o detergente cido: 1 L de cido sulfrico 1 N 20 g de Cetremide (brometo amnio) Viosa, 06 de maio de 2009. Prof. Edenio Detmann
Professor Adjunto DZO/UFV Chefe do Laboratrio de Nutrio Animal
de
cetil-trimetil