Sntese e degradao das porfirinas e do heme

I - Biossntese e mecanismos reguladores: As porfirinas so tetrapirris cclicos conjugados com metais, cujos quatro anis heterocclicos (I,II,III,IV) se encontram ligados entre si por grupos de meteno (-CH=), denominados , , , . A biossntese de porfirinas, para a qual a glicina precursora, de extrema importncia devido ao papel do ncleo de porfirina em protenas heme, como a hemoglobina e a mioglobina (nas quais o io Fe 2+ tem a funo de ligar uma molcula de O2, possibilitando o seu transporte na corrente sangunea), a catalase (onde o ferro catalisa a dismutao do perxido de hidrognio) e os citocromos (o grupo heme serve como meio de transporte electrnico entre protenas). Biossntese do heme:
IV I

III

II

primeira reaco da biossntese do heme ocorre nas mitocndrias e envolve a condensao de uma molcula de glicina e uma de succinil-CoA pela enzima aminolevulinato sintetase (ALA sintetase), gerando -amino--cetoadipato, que ento descarboxilado a -aminolevulinato (nas plantas, algas e na maior parte das bactrias, o -aminolevulinato formado a partir do glutamato e no da glicina). Esta reaco constitui o passo limitante da biossntese do heme, a reaco sujeita a uma maior regulao. O ALA mitocondrial ento transportado para o citosol onde a ALA desidratase (1) (tambm chamada porfibilinognio sintase ou hidroximetilbilano sintase) dimeriza duas molculas de ALA para produzir porfobilinognio. O prximo passo (2) envolve a condensao de 4 molculas de porfobilinognio para produzir o intermedirio hidroximetilbilano (ou preuroporfirinognio). A enzima para esta condensao a porfobilinognio desaminase (PBG desaminase), tambm chamada uroporfinognio I sintetase. O hidroximetilbilano formado vai ter dois principais destinos, os ismeros I e III do uroporfirinognio (UPG). No entanto, o ismero I no metabolizvel, sendo preterido a favor do ismero III. Este forma-se pela aco conjunta da uroporfirinognio sintase e da uroporfirinognio III cosintase (3). No citosol, o UPG descarboxilado pela enzima uroporfirinognio descarboxilase (4). Os produtos resultantes tm grupos metilo no lugar dos substituintes acetilo e so conhecidos como coproporfirinognios (CPG), sendo o coproporfirinognio III o intermedirio mais comum na sntese do heme. O coproporfirinognio III ento transportado para o interior da mitocndria, onde dois grupos propinicos so descarboxilados em grupos vinlicos, por aco da coproporfirinogneo oxidase (5). O produto incolor desta reaco o protoporfirinognio IX. Nas mitocndrias, este convertido em protoporfirina IX pela protoporfirinognio IX oxidase (6). A reaco final na sntese do heme (7) ocorre tambm nas mitocndrias e envolve a insero de um tomo de ferro no anel, gerando heme b. A enzima que catalisa esta reaco a ferroquelatase. Mecanismos reguladores: Em eucariotas superiores, o principal regulador da via a concentrao de heme na clula, actuando por um mecanismo de retroaco negativa. A concentrao de Fe2+, por outro lado, actua por retroaco positiva na transcrio da primeira enzima da via, a ALA sintetase. Apesar de o heme ser sintetizado em virtualmente todos os tecidos, os principais locais de sntese so clulas eritrides (~85%) e hepatcitos. As diferenas entre estes dois tecidos e as suas necessidades em grupos heme resultam em diferentes mecanismos de regulao da sua biossntese. Nos hepatcitos, o heme necessrio para a incorporao em citocromos, em particular na classe P450. Para alm disso, numerosos citocromos da via de fosforilao oxidativa contm heme. Aqui, a hemina, produto da oxidao do heme, actua como um inibidor da ALA sintetase, inibindo o seu transporte do citosol (onde sintetizada) para a mitocndria (o seu local de aco), assim como reprime tambm a sntese da enzima. Em clulas eritrides todo o heme sintetizado para ser incorporado na hemoglobina. Neste caso, o controlo da biossntese ocorre em numerosos locais que no ao nvel da ALA sintase. O controlo exercido ao nvel da ferroquelatase, a enzima responsvel pela insero do ferro na protoporfirina IX, e da porfobilinognio desaminase. Alteraes genticas na biossntese de porfirinas podem levar acumulao de intermedirios da via, causando uma srie de doenas conhecidas como porfrias. Defeitos genticos que causam um aumento da actividade da ALA sintetase ou uma diminuio na actividade da uroporfirinognio I sintase do origem mais comum das porfrias, a porfria aguda intermitente, que diagnosticada pela excreco em excesso de porfobilinognio (uma condio que no obvia a partir da cor da urina, j que este incolor). Outro exemplo a

protoporfiria eritropoitica. Nesta situao, a uroporfirinognio III sintetase est presente na medula ssea a apenas 30% do seu nvel normal. O resultado que enormes quantidades de uroporfirinognio I e dos seus coloridos produtos de oxidao so encontrados na urina e depositados numa grande variedade de tecidos, incluindo dentes e ossos. II - Degradao, pigmentos (biliares, urinrios e fecais) e mecanismos reguladores: A maioria das porfirinas no organismo existem sob a forma de grupos heme, presentes em molculas como a hemoglobina, a mioglobina e os citocromos. Destes, a maior fonte de heme para degradao proveniente da morte de eritrcitos (por hora so destrudos entre 1 a 2*108 eritrcitos, fornecendo 6g de hemoglobina por dia para degradar). Na degradao da hemoglobina, a componente proteica (globina) degradada nos seus aminocidos constituintes para reutilizao, enquanto o heme (que vermelho-escuro) degradado em clulas fagocticas, com maior proporo no bao, fgado e medula ssea. Os passos de degradao do heme nestas clulas so os seguintes:

1.

Degradao do heme pelo complexo enzimtico heme oxigenase (HO). Aqui ocorre abertura do anel de tetrapirrol da porfirina, por quebra da ponte alfa-metenilo entre os pirris I e II. Ocorre com duas oxigenaes e usa NADPH como poder redutor para libertar Fe 2+, CO e biliverdina, um pigmento verde.

2.Reduo da bilirrubina pela enzima biliverdina redutase. Esta enzima catalisa a adio de um hidrognio fornecido pelo NADPH para reduzir a ligao dupla entre os pirris III e IV, formando-se a bilirrubina, um pigmento amarelo que ser encaminhado para o fgado para a sua posterior transformao. Os produtos da degradao do heme so variados. O Fe2+ transportado atravs da circulao sangunea pela ferritina para ser reutilizado na formao de novos grupos heme; o CO, apesar de ser muito txico em altas concentraes, nesta via produzido em pequenas quantidades, tendo bastante importncia na proteco antioxidante, vasodilatao e sntese de neurotransmissores. A bilirrubina tambm utilizada em pequenas quantidades nos tecidos como um antioxidante muito poderoso. A bilirrubina uma molcula apolar e insolvel no plasma sanguneo. Para que seja encaminhada para o fgado, liga-se albumina srica, aumentando muito a sua solubilidade no sangue. Esta protena tem dois locais de ligao para a bilirrubina, de alta e baixa afinidade. Assim, excessos de bilirrubina difundem-se nos tecidos. A bilirrubina entra pela face sinusoidal dos hepatcitos por difuso facilitada, ligando-se em seguinda ligandina, que aumenta a sua solubilidade no citosol. Em seguida, a bilirrubina conjuga-se com cido glicurnico no retculo endoplasmtico liso dos hepatcitos, formando-se bilirrubina diglicurnido, uma molcula polar e solvel no plasma. As enzimas que catalisam esta conjugao so as glicuronosil transferases. Por ltimo, esta bilirrubina conjugada sai dos hepatcitos para os canalculos biliares por transporte activo primrio. Estes canalculos terminam no ducto biliar, sendo a bilirrubina diglicurnido o principal componente da blis que excretada para o duodeno. Como sabemos, os sais biliares tm um papel importante na digesto das gorduras. Quando a bilirrubina diglicurnido atinge a poro terminal do leon e o intestino grosso, a flora fecal produz beta-glicuronosidases, que removem os grupos glicurnido e reduzem a bilirrubina a vrios compostos, sendo o principal produto o urobilinognio. Este urobilinognio pode seguir trs vias: Pode entrar na circulao sangunea e ser reconvertido no fgado a bilirrubina conjugada para ser excretada de novo na blis. A isto se chama ciclo enteroheptico do urobilinognio; Pode entrar na circulao sangunea e ser encaminhado para o rim, onde convertido a urobilina, um pigmento amarelo que d cor urina; Pode continuar a ser degradado pela flora fecal no intestino, sendo oxidado a estercobilina, um pigmento castanhoavermelhado que d cor s fezes. Quanto regulao desta via, os principais eventos so os seguintes: Transcrio do gene da heme oxigenase: existem pelos menos 3 tipos de HO no organismo. A mais importante, a HO-1, possui transcrio do seu gene regulada, sendo activada por stress, hiperoxia e hipoxia, choque trmico e exposio aos UV. A HO-2 existe no crebro e continuamente transcrita. Regulao da enzima heme oxigenase: a HO induzvel por altas concentraes de heme; Transporte da bilirrubina: alguns antibiticos realizam inibio competitiva no local de alta afinidade da albumina srica; Conjugao e secreo da bilirrubina: O passo limitante de toda a degradao da bilirrubina ao nvel do fgado a passagem da bilirrubina conjugada dos hepatcitos para os canalculos biliares, porque o transporte activo saturvel por concetrao a este nvel. A conjugao e a secreo so um sistema conjugado, porque so induzidos pelas mesmas substncias. O excesso de bilirrubina no plasma sanguneo designa-se por hiperbilirrubinmia. Quando ultrapassa a concentrao de 2.5 mg/dl de plasma, a bilirrubina difunde-se nos tecidos, causando ictercia. Esta doena caracteriza-se por amarelecimento da pele e dos olhos. Pode ter origem pr-heptica (excesso de produo de bilirrubina para o fgado excretar, como pode ocorrer na anemia hemoltica), heptica (hepatite, cancro do fgado), ou ps heptica (obstruo do ducto biliar, cancro do pncreas, pedras na vescula biliar). No caso da ictercia ps-heptica, h excesso de bilirrubina conjugada, e pode ser detectada tambm pela sua presena na urina. Nos recm-nascidos esta situao comum porque o sistema de conjugao da bilirrubina ao nvel do fgado ainda est imaturo e acumula-se bilirrubina no

sangue. Isto pode ser resolvido com recurso exposio a luz polarizada, que converte fotoquimicamente a bilirrubina em compostos mais solveis e fceis de degradar.

III - Citocromo P450: composio e mecanismo de aco na destoxificao heptica: O nosso organismo est exposto diariamente, atravs do ar, gua, alimentos, a diversas substncias txicas, que necessrio metabolizar, para no se acumularem e provocarem sobrecargas e disfunes orgnicas importantes que propiciem o desenvolvimento de certas doenas. Estas substncias txicas so compostas por metais pesados, como o chumbo ou o mercrio, qumicos txicos, como medicamentos, lcool, pesticidas, herbicidas, aditivos alimentares, solventes orgnicos (eg. benzeno); compostos microbianos e produtos finais do metabolismo proteico: ureia e amonaco. Doravante, iremos design-las, genericamente, por xenobiticos (apesar desta expresso ser mais adequada para as substncias txicas provenientes do exterior, o facto que o mecanismo de destoxificao heptica idntico tanto para as endgenas como para as exgenas). O fgado o principal rgo responsvel por filtrar todas as toxinas produzidas pelo prprio organismo, alm das provenientes do meio ambiente, que so acumuladas ao longo do tempo. O mecanismo responsvel pela destoxificao d-se atravs da filtragem sangunea e pode ser dividido em duas fases: Fase I: As substncias txicas sofrem transformaes metablicas para posteriormente, na fase II tornar possvel a sua eliminao ( nesta fase que entra o citocromo P450, do qual falaremos mais adiante). Fase II: Nessa fase as toxinas formadas ou recebidas na fase I conjugam-se com alguns grupos qumicos hidrossolveis, tornando-se compostos excretveis, o que facilita a eliminao atravs da funo renal e fecal. De facto, a polaridade destes compostos (xenobiticos) aumentada e a ligao a grupos polares de compostos (eg. sulfato, glicuronato) promovida, logo a sua eliminao facilitada. Citocromo P450 (ou CYP), o nome dado a cada um dos elementos de uma famlia muito vasta de hemeprotenas, formando, em geral, parte de componentes das cadeias de transporte de electres. O nome citocromo P450 deriva do facto de ser um conjunto de protenas celulares (cytos) coloridas (cromo), absorvendo luz na gama dos 450nm (quando o Ferro do grupo heme reduzido). A reaco mais comum catalisada pelo CYP uma mono-oxigenao (insero de um tomo de oxignio num substrato orgnico AH, enquanto o outro tomo de oxignio reduzido a gua). Ser uma reaco do tipo , sendo, no caso do CYP, o BH2 um co-substrato representado pelo NADPH+H+ (ou pelo NADH+H+). Este tipo de monoxigenases mistas (ou hidroxilases) est presente nas mitocndrias e no retculo endoplasmtico das clulas de diversos rgos, incluindo o fgado, o rim, o crebro e linfcitos, as quais desempenham um papel fundamental na destoxificao heptica. No entanto, nem sempre a hidroxilao dos xenobiticos pelo CYP conduz a um processo de desintoxicao, pois algumas molculas podem converter-se em formas muito reactivas capazes de se ligarem (covalentemente) a determinadas protenas e cidos nucleicos e dar origem a processos de cancerizao (eg. o CYP2E1 metaboliza o Acetaminofn(1), dando origem a NAPQI(2) que hepatotxico). Existem muitos tipos de Citocromos P450, podendo destacar-se os que se representam na tabela da pgina anterior, pela sua importncia no mecanismo de destoxificao heptica. Por exemplo, o CYP2E1 responsvel pela degradao do Paracetamol, sendo o Etanol um indutor (por isso, excessos de Acetaminofn e/ou de etanol podem levar a hepatoxicidade). No representados na tabela, os CYP da subfamlia 4A so extremamente importantes no metabolismo de cidos gordos (eg. araquidnico). A maioria dos CYP formada por 400-500 aminocidos, dos quais cerca de 55% so de natureza apolar. Nas reaces de hidroxilao a forma oxidada do citocromo P450 (Fe3+) combina-se com o substrato em presena de NADPH-cytP450 redutase, formando-se um complexo frrico citocromo P450(Fe2+)-substrato, portador de um electro (proveniente do NADPH). Este complexo combina-se com o O 2, dando lugar a uma espcie muito reactiva e instvel contendo (FeO)3+, que oxida directamente o substrato, com libertao de gua. Em seguida o substrato oxidado dissocia-se e regenera-se a forma oxidada do CytP450 (dando o substrato lugar a um produto hidroxilado). Nos esquemas abaixo possvel ver como os electres necessrios para activar o oxignio passam no NADPH ao CYP atravs da aco da enzima NADPH-cytP450 redutase, que juntamente com o CYP se encontra na membrana celular.

(1) Acetaminofn derivado analgsico e antipirtico da acetanilida; Paracetamol dos nomes comerciais;

O mecanismo de aco complexo e no est bem esclarecido devido ao baixo tempo mdio de vida dos seus intermedirios. Existem evidncias de que no processo se geram espcies reactivas de oxignio (superxido: O 2-; perxido de hidrognio: H2O2) e outros radicais livres (R) que se podem unir a um radical hidroxilo e gerar o produto hidroxilado. A decomposio do CYP oxigenado descrita como uma das maiores fontes de radicais superxido dos sistemas biolgicos. Vejamos o caso do metabolismo do Etanol. No fgado, mais propriamente no citosol dos hepatcitos, o etanol convertido em acetaldedo e NADH e, na matriz mitocondrial, o acetaldedo converte-se em acetato e NADH. Portanto, o etanol pode ser convertido em triacilgliceris. Alm disso, o excesso da produo de NADH (derivada do consumo excessivo, mas no habitual, de lcool) pode levar inibio de processos que necessitem de NAD+ (eg. gliconeognese e oxidao dos cidos gordos), o que leva, por exemplo, acumulao de triacilgliceris no fgado. Tambm ocorre libertao de acetaldedo que, quando ligado a grupos funcionais de alguns compostos importantes, leva ressaca. No entanto, quando o consumo de lcool se torna frequente, o organismo cria um sistema de eliminao alternativo: o sistema microssomal de oxidao do etanol, MEOS (Microssomal Ethanol Oxidation System), que gasta poder redutor em vez de produzir sistema do citocromo P450. Portanto, pessoas que bebem habitualmente eliminam o lcool mais depressa e perdem peso, em vez de ganhar, sob a agravante de haver destruio progressiva do fgado (cirrose, cancro). O metabolismo microssomal do etanol um caso tpico de metabolismo de xenobiticos pelo fgado, sendo, no entanto comum ao sistema de destoxificao de alguns frmacos (por isso, que h interferncia do lcool no metabolismo de alguns medicamentos).

TRABALHO EFECTUADO POR: Ctia Bandeiras, n 58390; Andreia Borges, n 58505; Diogo Ferreira, n 58548 (grupo 10) MEBM BIBLIOGRAFIA:

Murray, R. K. et al, Harper's Illustrated Biochemistry, 26 Edio (2003), McGraw-Hill Medical; Nelson, D. L. & Cox, M. C., Lehninger's Principles of Biochemistry, 4 Edio (2004), W. H. Freeman; Koolman, J. & Roehm, K.-H., Color Atlas of Biochemistry, 2 Edio (2005), Thieme; Halpern, M. J et al, Bioqumica, Edio Revista (1997), Lidel; http://library.med.utah.edu/NetBiochem/hi7b.htm http://www.med.unibs.it/~marchesi/heme.html