Contraco do msculo liso: - Estudo in vitro com rgos isolados.

Snia Alexandra Silva Santos Laboratrio de Farmacologia Faculdade de Farmcia Universidade de Coimbra

Objectivos
Registo da curva concentrao-resposta acetilcolina em leo de rato e da curva concentrao-resposta noradrenalina na aorta de rato:- isolamento e montagem do leo e da aorta de rato num banho de rgos, registo isomtrico da curva concentrao-resposta acetilcolina e/ou noradrenalina (curva de adies independentes e/ou cumulativa) com transdutores de fora num fisigrafo de quatro canais. Construo da curva concentrao-resposta acetilcolina e noradrenalina e clculo das respectivas CE50. Comparao do valor obtido por clculo manual com aquele obtido atravs de um programa de computador.

Msculo Liso multiunitrio

Formado por fibras musculares lisas separadas que funcionam independentementes das demais Cada fibra est inervada por uma nica terminao nervosa do nervo motor O seu controle exerce-se principalmente por estmulos nervosos. Respondem a substncias neurotransmissoras libertadas pelas terminaes nervosas (Ach e NA) Ex. Msculo ciliar do olho, iris, msculo erector dos plos

 Constitudo por clulas fusiformes (5-10 m dimetro por 30200 m de comprimento) dispostas paralelamente em feixes ou camadas Apresentam um nico ncleo localizado centralmente. No apresentam o sistema de tbulos T, mas sim cavolas. No tm os miofilamentos de actina e miosina dispostos em sarcmeros, no tendo por isso o aspecto estriado.

Msculo Liso visceral ou unitrio

Os miofilamentos de actina esto ligados a corpos densos Os corpos densos disseminados pelo sarcoplasma e ligados ao sarcolema so mantidos coesos atravs de filamentos intermdios constitudos por desmina Sistemas contrcteis de clulas adjacentes esto ligados por desmossomas permitindo a transmisso da fora de contraco desenvolvida por uma clula para a seguinte.

As fibras esto distribudas em feixes ou lminas e estabelecem entre si mltiplos pontos de contacto (fendas de juno) que asseguram a passagem de correntes inicas envolvidas na gerao de potenciais de aco conduo elctrica directa. Comporta-se como um sinccio funcional permite a contraco da massa muscular sem haver a secreo de substncias neurotransmissoras.

Msculo liso visceral

Localizao: intestino, canais biliares, ureteres, tero, brnquios, vasos sanguneos Funo: movimentos peristlticos intestinais e manuteno da tenso arterial Caracteriza-se por um processo de autoexcitao controlada por factores locais que provocam contraces rtmicas espontneas e contnuas. A gerao espontnea de p.a. sem estmulo extrnseco resulta de um ritmo de onda lenta do potencial de membrana associado a um aumento ou diminuio rtmica da condutncia dos canais de Na+. Atingido o limiar de excitao estas ondas lentas podem iniciar um p.a. e causar contraces rtmicas do msculo liso visceral.

 Substncias neurotransmissoras so secretadas pelas varicosidades das fibras nervosas do SNA, Ach e NA, que em contacto com receptores da camada mais externa do msculo liso visceral geram p.a. que se propagam a toda a massa muscular atravs das fendas de juno. Ambas as substncias podem ser excitatrias ou inibitrias consoante o subtipo de receptor. O msculo liso tem capacidade de manter um estado de contraco prolongado tnus. A origem desta contraco tnica pode ser a somao de contraces individuais resultantes de uma estimulao nervosa contnua de baixa intensidade ou por factores locais e hormonais.

Ensaios in vitro
Modelo experimental que utiliza sistemas biolgicos (clulas, tecidos, rgos ou embries) mantidos vivos de uma forma artificial. - substituio dos modelos meramente tericos - simplificao do meio complexo onde normalmente se incluem - controlo do meio artificial com conhecimento exacto da concentrao da substncia que provoca uma dada resposta, sem interferncia da biodisponibilidade da mesma - quantificao exacta da resposta com eliminao das respostas de feedback

Condies experimentais
Solutos fisiolgicos para manter a viabilidade dos rgo isolado - Glicose e sais minerais em concentraes adequadas, mimetizando a constituio do fluido extracelular da espcie animal utilizada importncia do Ca2+ nos estudos de contraco muscular - sistemas tampo e pH 7,4 - Arejamento ou oxigenao com carbognio (95% O2/5% CO2) - Temperatura mamferos 370,5C, anfbios temperatura ambiente

Banhos de rgos

Banhos de rgos

Sistemas de registo de contraco muscular

Registo de contraco isotnica o msculo quando estimulado desenvolve fora que ao vencer a resistncia, encurta e move uma carga constante. A fora desenvolvida est relacionada com o estabelecimento de pontes cruzadas entre os miofilamenteos de actina e miosina. Regista-se o encurtamento do msculo atravs do deslocamento de uma alavanca inscritora

Sistemas de registo de contraco muscular

Registo de contraco isomtrica o msculo inicialmente submetido a uma carga. O msculo desenvolve fora, mas no encurta. No se verificam alteraes do comprimento do msculo e a fora desenvolvida por este no vence a resistncia. A fora desenvolvida registada por transdutor de fora que simultaneamente amplifica a resposta a fim de obter um registo mensurvel do acontecimento mecnico.

Contruco da curva doseefeito

Mtodo das adies independentes Mtodo da curva cumulativa

Mtodo grfico do clculo da CE50

A representao semilogartmica

120
% do efeito mximo
% do efeito mximo

120 100 80 60 40 20 0
0 0,000001 0,000002 0,000003 0,000004
Concentrao (M)

100 80 60 40 20 0

-9

-8

-7

-6

-5

-4

Log Concentrao (M)