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Universidade Estadual de Campinas

Departamento de Bioqumica - IB Laboratrio de Aula Prtica

Objetivos: Rever conceitos de estrutura e desnaturao de protenas. As protenas so as macromolculas mais abundantes nos organismos vivos, ocorrendo em todas as clulas e em todas as partes das clulas. As protenas tambm ocorrem em grande variedade, uma nica clula pode conter milhares de protenas diferentes exercendo funes diferentes. Uma estrutura de subunidades monomricas relativamente simples o fundamento da estrutura das milhares de protenas. Todas as protenas existentes em qualquer forma de vida so constitudas dos mesmos 20 aminocidos, covalentemente ligados em uma seqncia linear caracterstica (estrutura primria). Alm da estrutura primria pode-se reconhecer nas protenas outros graus de organizao, chamados de estruturas secundria, terciria e quaternria. As protenas podem exercer funes diversas nos sistemas biolgicos atuando como: suporte estrutural, enzimas, transpotadores de membranas, nutrientes, anticorpos do sistema de defesa, hormnios, etc. Sabe-se que as funes biolgicas das protenas so altamente influencidas pela sua estrutura tridimensional. Normalmemte, modificaes na estrutura tridimensional de uma protena leva perda da sua funo, este processo chamado de desnaturao. Protenas podem ser desnaturadas por extremos de temperatura, de pH, por certos solventes orgnicos como o lcool e a acetona, pela uria e detergentes. interessante lembrar que cada um destes agentes desnaturantes atuam sobre as interaes qumicas que estabilizam a estrutura tridimensional de uma protena (estruturas secundria e terciria) mas no so capazes de romper as ligaes covalentes da cadeia polipeptdica (estrutura primria). Parte 1: Exerccio prtico 1-) Reao com cidos fortes Colocar em um tubo de ensaio cerca de 2 mL de cido ntrico diludo. Juntar cuidadosamente, pelas paredes, com um contagotas, a mesma quantidade de soluo proteica, sem misturar. No limite de separao das duas camadas, aparece um anel branco, a chamada reao de Heller. Explique e justifique o que aconteceu. 2-) Efeito da temperatura Colocar em dois tubos de ensaio cerca de 2 mL de soluo proteica. Submeter o primeiro banho de gua fervente (~100 oC) por 3 minutos. Submeter o segundo nitrognio lquido (~20 oC) por 3 minutos. Observe a alterao promovida pelas variaes de temperatura e o aspecto da protena aps retornar temperatura ambiente.
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3-) Reao com metais pesados Colocar em um tubo de ensaio, 2 mL de soluo de protena. Adicionar a mesma quantidade de gua e 5 gotas de soluo de cloreto de mercrio a 5 %. Explique e justifique o que aconteceu. 4-) Reao com etanol Colocar em um tubo de ensaio, 2 mL de soluo de protena. Adicionar a mesma quantidade etanol. Explique e justifique o que aconteceu. 5-) Determinao do ponto isoeltrico da casena (protena do leite) TUBOS H2O destic. actico c. actico c. actico Casena pH lada (mL) 0,01M (mL) 0, 1M (mL) 1M (mL) (mL) 1 8,4 0,6 1,0 5,9 2 7,7 1,3 1,0 5,5 3 8,7 0,3 1,0 5,3 4 8,5 0,5 1,0 5,0 5 8,0 1,0 1,0 4,7 6 7,0 2,0 1,0 4,4 7 5,0 4,0 1,0 4,1 8 1,0 8,0 1,0 3,8 9 7,4 1,6 1,0 3,5 Numere os tubos de acordo com a tabela acima e adicione os reagentes nesta ordem: gua destilada, cido actico e casena. Observe o que aconteceu e determine o pI da casena.

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Parte 2: Questes auxiliares 1-) Coneituar estruturas primria, secundria, terciria, quaternria e dizer que tipo de ligao ou interao qumica as estabilizam. 2-) Citar a diferena entre estrutura supersecundria e domnio de uma protena. 3-) Conceituar ponto isoeltrico (pI) de uma potena. 4-) Baseado nos exerccios prticos que voc realizou, conceitue desnaturao proteica e identifique quais os fatores que podem induz-la. 5) Mostrar graficamente o efeito do pH na solubilidade de uma proteina globular. Fazer um grfico colocando na ordenada solubilidade da proteina em na abcissa o pH. Identificar o ponto isoeltrico (pI) da proteina. Explicar o aspecto da curva. 6) Mostrar graficamente o efeito da fora inica na solubilidade de uma proteina globular. Fazer um grfico colocando na ordenada solubilidade da proteina em na abcissa a fora inica. Explicar o aspecto da curva. 7) Porque quando uma proteina desnaturada normalmente ela se torna insolvel? 8) Definir a desnaturao de uma proteina. A desnaturao reversvel?

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