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USP - Universidade de So Paulo Instituto de Qumica

QBQ2451 Introduo Bioqumica

Enzimas como Catalistas Industriais

Amanda Tochinni n USP: Marina Franchi n USP: Patrcia Brajato n USP: 3455841 Sabrina Lira n USP: Thalita Guedes n USP: Wilson Garcia n USP: 7576392 Prof. Dra. Nadja Cristhina Larder

So Paulo, Novembro de 2011.

ndice
Objetivos Introduo Contexto histrico Panoramas do uso das enzimas da Indstria Desenvolvimento Enzimas na indstria Indstria Alimentcia Lpases no Processo de Catlise de leos e Gorduras Industria Txtil Catlise Enzimtica na Indstria Txtil Bioprocessos e Biorreatores Concluso Bibliografia consultada

Objetivos
O presente trabalho tem como objetivo de trazer o

1. Introduo
1.1 Contexto histrico
A histria das enzimas se inicia com a prpria histria da bioqumica, a partir das primeiras investigaes feitas com relao fermentao e a digesto. O interesse pela digesto de alimentos foi o grande indutor para os estudos de enzimas, que se iniciaram no sculo XVIII. Deste modo as primeiras observaes relacionadas s atividades enzimticas estudadas no sculo XVIII demostrou que secrees estomacais catalisavam a digesto da carne, o que indicou a existncias dos catalizadores biolgicos. O qumico suco Jns Jacob Berzelius (1779-1848) constatou , em 1831, que certas substncias continham uma fora cataltica que lhes permitia acelerar determinadas reaes, assim Berzilius nos deixa um legado cientfico, pois a primeira referencia cientifica nomeando de reae de catlise creditada a ele. Anos mais tarde, em 1935, Berzelius publica a primeira teoria sobre enzimas. A histria moderna das enzimas inicia a partir de 1833 em que, na publicao journal Annales de Chemie et de Physique , qumicos franceses Anselmo Payen e Jean-Franois Persoz descreveu a isolao de um complexo da amlase da germinao cevada e a nomeou distase. Como o malte prprio, este produto convertido gelatinizou o amido em acares, primeiramente maltose. Em 1835 o Swede J" o ns Jacob Berzelius demonstrou que o amido pode ser dividido mais eficientemente usando o extrato de malte do que o cido sulfrico e inventou o termo a catlise,e assim, uma nova cincia, a bioqumica, comea a dar os primeiros passos. As enzimas so importantes componentes do metabolismo de todos os seres vivos e tm a capacidade de promover e acelerar reaes qumicas e com exceo de um pequeno nmero de molculas de RNA que apresentam propriedades catalticas, todas as enzimas so protenas que promovem as reaes qumicas em uma escala de tempo til para sistemas biolgicos. Assim protenas so catalisadores que diminuem a energia de ativao necessria para a ocorrncia de uma reao e no se transformam ao final da reao. A denominao enzima provm de "in yeasts, em fermentao, no qual se suspeitava que as catlises biolgicas estivessem envolvidas com a fermentao do acar em lcool.

Em 1860, Pateur postulou que as enzimas esto associadas estrutura e a vida da clula. Em 1877 Buchener obteve sucesso na extrao de enzimas de clulas de leveduras que catalisavam a fermentao alcolica. Isto demonstrou que estas enzimas catalisavam a maioria das vias metablicas energticas e podem funcionar independentemente da sua estrutura. A partir de 1926 com os estudos de Summer, foi possvel compreender melhor os processos de cristalizao de protenas, no qual se destaca esse mtodo como muito eficiente e de baixo custo na purificao de protenas. Hoje 2000 diferentes enzimas so conhecidas, nas quais muitas so isoladas na forma pura homogeneizada e 200 na forma cristalizada.

1.2 Panoramas do uso das enzimas da Indstria


A importncia da catlise para a indstria deve-se ao fato do grande nmero de aplicaes na indstria qumica. H muito tempo que as enzimas existentes na natureza vm sendo utilizadas com fins industriais, particularmente na obteno de produtos alimentares como po, queijo e bebidas fermentadas como vinho e cerveja. Os avanos tecnolgicos dos ltimos tempos que permitiram um melhor conhecimento e caracterizao das enzimas tm expandido largamente a utilizao industrial das enzimas. Hoje bastante diversificado e amplo o campo de aplicao industrial das enzimas abrangendo reas to diversas como a indstria alimentar, txtil entre outras. A utilizao de enzimas em processos industriais tem sido apontada como um fator que reduz largamente a energia necessria para a obteno de alguns produtos manufaturados. O uso de enzimas em processos industriais de grande interesse, em especial devido facilidade de obteno (por biotecnologia) e s vantagens em relao aos catalisadores (aceleradores de reaes) qumicos, como maior especificidade, menor consumo energtico e maior velocidade de reao. Alm disso, a catlise enzimtica tem outros benefcios, como o aumento da qualidade dos produtos, em relao catlise qumica; a reduo dos custos de laboratrio e de maquinrio, graas melhoria do processo; ou a fabricao controlada de pequenas quantidades, segundos estudos publicados em jornais e revistas internacionais. A tabela 1 exemplifica algumas enzimas utilizadas na indstria, existe uma estimativa de que 95% dos produtos da indstria qumica sejam obtidos atravs de processos catalticos.

Tabela 1 Enzimas utilizadas em diferentes segmentos industriais

Seguimento Industrial Detergentes

Enzima Proteases, amilases, celulase Amilase, Amidoglucosidase, Glucose isomerase Proteases, amilases,lactases, trasnsglutaminase, lipoxigenase

Aplicao Remoo de manchas, lavagem e clarificao de cores. Liquefao do amido; sacarificao e converso da glicose a frutose. Coagulao do leite (frmulas infantis), queijo, remoo da lactose, branqueamento e amolecimento do po, etc. Tratamento de sucos, maturao de cervejas.

lcool combustvel

Alimentos

Bebidas

Amilase, -glucanase, Acetolactato descarboxilase, lacase Celulase, Amilase, Catalase

Txteis

Amolecimento do algodo, remoo de tintas em excesso. Atividade antimicrobiana

Higiene pessoal e beleza

Amiloglicosidase, Glicose oxidase, Peroxidase

Fonte: Industrial Enzyme Applications, Current Opinion in Biotechnology, 2002, 13:345-351

A implementao de enzimas em conjunto com suportes adequados tem permitido a elaborao de matrias primas seguras, e indstria qumica permite progressos biotecnolgicos tm tornado possvel o uso de enzimas.

2. Desenvolvimento
2.1 Enzimas: Catalisadores Biolgicos
O que so enzimas As enzimas so protenas especializadas na funcionalidade do metabolismo celular, conferindo celula a capacidade de ativar e promover diversas reaes essenciais ao bom funcionamento do organismo. Atuando em sequncias organizadas, elas regulam uma grande quantidade de processos biolgicos catalisando centenas de reaes nas quais molculas so degradadas, gerando energia e molculas so formadas de acordo com a necessidade.

Classificao das enzimas As enzimas so classificadas em 6 categorias de acordo com a Unio Internacional de Bioqumica (IUB): 1- Oxirredutases, que catalisam reaes de transferncia de eltrons (reaes de oxirreduo); 2- Transferases, que catalisam reaes de transferncia de grupos funcionais; 3- Hidrolases, que catalisam reaes de hidrlise de ligaes covalentes; 4- Liases, que catalisam a adio de grupos a duplas ligaes ou o inverso; 5- Isomerases, que catalisam a transferncia de grupos dentro de molculas, formando ismeros; 6- Ligases, que catalisam reaes de formao de ligaes C-C, C-S, C-O e C-N s custas de gasto de ATP

Cofatores enzimticos Cofatores so pequenas molculas, orgnicas ou inorgnicas, que no esto ligadas permanentemente enzima, porm so necessrias para o bom

funcionamento da mesma; caso estejam ausentes a enzima torna-se inativa. O conjunto Enzima + Cofator chamado de holoenzima

A especificidade enzimtica A maioria das enzimas possuem especificidade por um determinado substrato, remetendo a um modelo complementar muitas vezes designado como chavefechadura. Esse modelo preve um encaixe perfeito do substrato no sitio de ligao, que seria regido como uma fechadura. A enzima E combina-se de forma reversvel com o substrato S formando o complexo enzima-substrato ES: E + S ES O complexo ES , ento, quebrado, liberando os produtos P da reao e a enzima original: ES P+ E A figura abaixo mostra de maneira ilustrativa esse processo:

Outros modelos eventualmente utilizados para explicar a especificidade enzimtica so o modelo de ajuste induzido, que prev um stio de ligao moldvel molcula de substrato (figura 1) e o modelo combinado que une o modelo do ajuste induzido a uma toro da molcula do substrato, que seria responsvel por sua ativao, preperando-o para se transformar em produto.

Existe uma grande relao entre a estrutura proteica da enzima e a sua funo cataltica, sendo necessrio favorecer o conjunto de interaes que permitem a ligao

do substrato. Em contrapartida, a molcula do substrato tambm precisa apresentar caractersticas estruturais favorecidas, como ligao qumica especfica que ser

atacada pela enzima e o grupo de ligao, ao qual a enzima se liga, posicionando a molcula do substrato no sitio ativo, local onde ocorrer a reao catalisada. Essa regio contm os grupos catalticos, que so responsveis pela interao com o substrato, participando da ruptura e estabelecimento de ligaes qumicas. Entretanto, existem enzimas que no seguem essas limitaes, apresentando especificidade ampla e agindo em muitos compostos.

Enzimas como catalisadores As enzimas so catalisadores muito eficientes, aumentando a velocidade de reaes qumicas que ocorreriam de forma lenta sem o auxlio delas, a at 10 14 vezes, sem incluir qualquer condio extrema de temperatura, presso ou pH. O princpio de funcionamento desse catalisador fazer a reao percorrer um caminho alternativo no qual a barreira energtica seja menor; em outras palavras, o catalisador diminui a Energia de Ativao necessria para o processo ocorrer, sem alterar a termodinmica da reao. Para que essa energia de ativao seja superada, formado um estado intermedirio chamado estado de transio, formando um composto instvel Ts de alta energia que no liberado para o meio reacional, sua formao ocorre no stio cataltico da enzima. A afinidade desse composto Ts ao stio cataltico maior do que a do substrato, fazendo com que as molculas nesse estado de transio sejam rapidamente convertidas nos produtos, portanto qualquer aumento de molculas em Ts aumenta a velocidade da reao. Existem 4 principais mecanismos pelos quais h o aumento de molculas de substrato em Ts: - Catlise cido-Base, que ocorre com base nas cadeias laterais ionizveis de aminocidos, capazes de doar prtons durante a catlise. - Toro de Substrato, que depende da toro induzida do substrato quando este se liga ao stio de ligao da enzima, alcanando o estado de transio e estimulando sua converso em produto. -Catlise Covalente, resultante da ligao covalente do substrato ao stio cataltico pelo ataque nucleoflico ou eletroflico de um radical do stio cataltico, induzindo a transformao do substrato em produto. -Efeito de diminuio de Entropia. As enzimas auxiliam no posicionamento e na definio estequiomtrica correta da reao, facilitando os mecanismos descritos anteriormente.

Fatores que influenciam na velocidade de uma reao enzimtica Os principais fatores que influenciam a atividade enzimtica so a temperatura e o pH. Existe um pH timo, onde a distribuio de cargas eltricas da molcula da enzima e , em especial o stio cataltico, ideal para a catlise, tornando a atividade enzimtica mxima. Quanto maior a temperatura, maior a velocidade da reao at atingir uma temperatura tima. A partir dela, a atividade volta a diminuir por desnaturao da molcula e, consequentemente, a perda da funo. O grfico abaixo mostra a temperatura tima para a atividade enzimtica de uma determinada enzima:

Sabe-se que a concentrao dos reagentes tambm influencia na velocidade da reao, sendo que quanto maior a concentrao maior a velocidade. Porm se as diferentes velocidades resultantes de aumentos sucessivos na concentrao forem analisadas, notar-se- que a taxa de variao diminui cada vez mais, chegando a um ponto em que se torna insignificante. Esse ponto equivale velocidade mxima de reao, no qual a enzima est saturada com o substrato e no tem a possibilidade de funcionar mais rapidamente.

3. Catlise na indstria nos diversos setores 3.1 Indstria de Alimentos

3.2 Fermentao 3.3 Lipases no Processo de Catlise de leos e Gorduras

Modificao de leos e Gorduras leos e gorduras tm um papel fundamental na alimentao humana. Agindo como veculo para as vitaminas lipossolveis, como A, D, E e K1. Tambm so fontes de cidos graxos essenciais e contribuem para a palatabilidade dos alimentos. Recentemente, indstrias qumicas, farmacuticas e alimentcias tem

empregado esse tipo de material como matria prima de seus produtos, principalmente por serem obtidos de fontes naturais. O interesse na tecnologia de modificao desses leos e gorduras tem aumentado nos ltimos 15 anos, sendo que a produo anual est na faixa de 100 milhes de toneladas. leos e gorduras podem ser o principal ou o nico constituinte para um produto, so em geral, triglicerdeos e suas propriedades variam de acordo com a estrutura e a distribuio dos cidos graxos presentes na cadeia. Em alguns casos necessrio modificar as caractersticas de tais materiais, neste contexto que so inseridos os diversos processos industriais que existem na manipulao de tais propriedades de misturas de triglicerdeos. Um desses mtodos o biotecnolgico, que vem se tornando uma alternativa cada vez mais atrativa por se tratar de um processo mais rentvel, que gera produtos que so biodegradveis, cuja energia envolvida no processo menor e que gera um menor nmero de resduos. Tais dados podem ser vistos de acordo com a tabela abaixo. Tais metas da rea de biotecnologia esto sendo desenvolvidas com base no conceito de biotransformao e da aplicao de catalisadores enzimticos.

Biotransformao Biotransformao o termo aplicado as modificaes de estrutura qumica realizadas por catalisadores bioqumicos. Em leos e gorduras, so inmeros os processos que podem ser aplicados na transformao, so utilizados desde enzimas a microrganismos vivos. Porm, o uso de enzimas isoladas prefervel, quando existem limites com relao permeabilidade do substrato na membrana da clula ou quando no esperada a existncia de reaes secundrias. Enzimas possuem propriedades catalticas atrativas, como tais como ao em condies brandas de temperatura e presso e alta eficincia cataltica, aumentando a velocidade de reaes em 108 a 1012 vezes. As reas de engenharia de protenas e enzimologia vm abrindo portas para uma considervel ampliao do uso de catalisadores enzimticos em processos industriais, no s de modificao de leos e gorduras. Entre os processos de maior interesse, esto as reaes de hidrlise, sntese e interesterificao de lipdeos por meio de lipases. Lipases normalmente so usadas devido ao fato de serem altamente estveis em solvente orgnicos, no requererem a presena de co-fatores e possurem uma larga especificidade pelo substrato. O reconhecimento dessas vantagens tem proporcionado um aumento considervel na produo e comercializao de lipases, o que resulta no desenvolvimento de tecnologias alternativas para o setor industrial. Atualmente, o maior consumidor da enzima lipase a indstria de formulao de detergentes, onde usada, geralmente, em combinao com outras enzimas (proteases e celulases), sendo responsveis pela remoo de manchas de gordura tais como batom, fritura, manteiga, azeite, molhos e as difceis manchas em colarinhos

e punhos. Entretanto, novas aplicaes vem se estabelecendo, como na indstria farmacutica, qumica fina, oleoquimica, couros, celulose e cosmticos.

Lipases como Catalisadores As lipases so enzimas classificadas como hidrolases e atuam sobre a ligao ster de vrios compostos, sendo os acilgliceris seus melhores substratos. So comumente encontradas na natureza, podendo ser obtidas a partir de fontes animais, vegetais e microbianas. Atualmente, lipases microbianas so produzidas por diversas indstrias, como Novozymes, Amano e Gist Brocades. Uma estudo recente sobre a disponibilidade comercial de lipases listou enzimas de 34 diferentes fontes, incluindo 18 a partir de fungos e 7 de bactrias. Dependendo da fonte, as lipases podem ter massa molecular variando entre 20 a 75 kDa, atividade em pH na faixa entre 4 a 9 e em temperaturas variando desde a ambiente at 70 C. Essas enzimas so usualmente estveis em solues aquosas neutras temperatura ambiente apresentando, em sua maioria, uma atividade tima na faixa de temperatura entre 30 e 40 C. O stio ativo da lipase formado por uma trade cataltica constituda pelos aminocidos: serina, cido asprtico (ou glutmico) e histidina. A hidrlise do substrato inicia-se com o ataque nucleoflico pelo oxignio da serina no tomo de carbono carbonlico na ligao ster, levando formao de um intermedirio tetradrico estabilizado pelas ligaes do hidrognio a tomos de nitrognio de resduos da cadeia principal pertencente cavidade de oxinion. Um lcool liberado aps a formao do complexo acil-lipase, o qual finalmente hidrolisado com a liberao dos cidos graxos e regenerao da enzima. O fenmeno mais conhecido originado de estudos cinticos recentes de reaes lipolticas a "ativao interfacial", que relaciona o aumento da atividade da lipase em funo de substratos insolveis, que formam emulso. O stio ativo das lipases coberto por uma superfcie entrelaada, denominada de tampa (ou borda). Quando h ligao do substrato na superfcie da enzima, esta tampa move-se, alterando a forma fechada da enzima para a forma aberta, com o centro ativo agora acessvel ao substrato e, ao mesmo tempo, expondo uma larga superfcie hidrofbica que facilita a ligao da lipase interface. As lipases catalisam uma srie de diferentes reaes. Alm de quebrar as ligaes de steres com o consumo de molculas de gua (hidrlise), as lipases so tambm capazes de catalisar a reao reversa sob condies microaquosas, como a formao de ligaes ster, a partir de um lcool e cido carboxlico. Estes dois

processos bsicos podem ser combinados numa sequncia lgica para resultar em reaes de interesterificao como mostrado no esquema abaixo:

Outros compostos, alm de gua e lcool, podem ser utilizados como nuclefilos em reaes catalisadas por estas enzimas. O uso deste biocatalisador em aminlise de steres, em meios anidros, tem sido bem sucedido na sntese de peptdeos e amidas de cidos graxos, por exemplo. Lipases de diferentes fontes so capazes de catalisar a mesma reao, embora possam diferir no desempenho sob as mesmas condies reacionais27. Para a aplicao industrial, a especificidade da lipase um fator de extrema importncia. A enzima pode ser especfica com relao molcula cida ou alcolica do substrato. As lipases so divididas em trs grupos baseados em sua especificidade. Lipases no especficas, onde temos a formao de produtos que so similares queles produzidos por catlise qumica convencional. Lipases 1,3 especficas, liberam cidos graxos das posies 1 e 3 e formam, por esta razo, produtos com composies diferentes daquelas obtidas por lipases no especficas ou mesmo de catalisadores qumicos convencionais. E por fim as Lipases cido graxo especfico, que so lipases com ao especfica na hidrlise de steres, cujos cidos graxos so de cadeia longa insaturada com duplas ligaes. A especificidade estrutural decorrente da orientao imposta pelas dimenses e pela estrutura do centro ativo ligao do substrato. Estas restries levam distino e transformao seletiva de funes quimicamente similares na mesma molcula. A seletividade e a estereoqumica advm da prpria quiralidade da enzima, ou seja, de sua simetria estrutural, que limita a ao em substratos que no satisfaam determinadas relaes espaciais. Desse modo, a catlise enzimtica

permite transferir ou criar centros quirais nas molculas, assim como distinguir formas enantimeras. 4. Indstria Txtil

4.1 Catlise enzimtica na indstria Txtil Os processos enzimticos podem ser utilizados para alterar as propriedades das fibras txteis e tm como principal vantagem, sobre a utilizao de reagentes qumicos, o fato de no implicarem qualquer efeito nocivo ao meio ambiente. A atividade cataltica de enzimas no processamento txtil tem sido utilizada pelo homem h milhares de anos, a primeira aplicao foi a macerao do linho. H mais de 2.000 anos, o crescimento de microrganismos no linho era usado para a separao das fibras dos caules da planta. As amilases, ainda hoje usadas para a remoo de gomas de amido dos tecidos aps a tecelagem, eram as nicas enzimas aplicadas no processamento de txteis at a dcada de 1980. No final da dcada de 1970, descobriu-se que as celulases acrescentavam detergncia lavao de tecidos e removiam a fibrilao em mltiplas lavaes. Desse modo, atualmente esto sendo empregada na remoo enzimtica de fibrilas e de pilosidade nos tecidos ou malhas de algodo, etapa esta conhecida como biopolimento. Foram descobertas tambm outras aplicaes para essas enzimas, que do um aspecto envelhecido aos artigos de denim e outras peas de vesturio. A utilizao de enzimas no processo txtil, visando remoo das impurezas no celulsicas denomina-se biopreparao, biopurga, purga enzimtica ou

bioscouring e apresenta inmeras vantagens, contribuindo para o melhoramento ecolgico do processo, pois substitui produtos qumicos normalmente utilizados, em alguns processos txteis, reduzindo consideravelmente o impacto ambiental assim como os danos s fibras. A enzima utilizada no processo melhora a qualidade das fibras, pois altamente especfica, permitindo a produo de produtos acabados de melhor qualidade com relao ao aspecto visual, toque e propriedades de resistncia. Reduz o desgaste do equipamento e confere maior flexibilidade na sua utilizao.

Etapas do Beneficiamento Txtil um conjunto de processos aplicados aos materiais txteis, objetivando transform-los a partir do estado cru em artigos acabados com boas propriedades de solidez e resistncia. No beneficiamento primrio entram as operaes mecnicas, fsicas, qumicas, bioqumicas e fsico-qumicas destinadas a eliminar as impurezas das fibras txteis e prepar-las o acabamento final.

J no secundrio so conferidas caractersticas especficas ao material como cor, estampa e melhora da maciez. O fluxograma abaixo apresenta os processos da indstria txtil que utilizam enzimas: Mercerizao e Purga

Matria - Prima

Desengomagem

Tratamento de Efluentes

Tingimento

Avejamento

Acabamento

Produto Acabado

a) Desengomagem

Durante a produo dos tecidos, os fios so submetidos a foras considerveis de toro e dobradura. Para evitar a quebra dessas fibras, comum o uso de gomas nos fios e tecidos. A grande maioria das gomas usadas atualmente feita base de amido (eficiente e de baixo custo). A desengomagem usada para remover a goma aplicada anteriormente para tecelagem. As fibras sintticas so geralmente engomadas com gomas solveis em gua, que so facilmente removidas por lavao com gua quente, ou no processo de cozimento. As fibras naturais, tais como algodo, so muitas vezes engomadas com gomas ou misturas de gomas e outros materiais. A remoo das gomas antes do cozimento necessria porque elas podem reagir e causar a mudana de cor quando exposto ao hidrxido de sdio no cozimento. A remoo das gomas base de amido envolve basicamente o tratamento do tecido em solues que contm amilases, alm de alguns tensoativos. As amilases podem ser divididas em dois tipos principais: -amilase e -amilase. Ambos os tipos so similares no sentido de que hidrolisam ligaes glicosdicas nas molculas de amido, mas as reaes ocorrem de maneiras diferentes: as -amilases atacam as cadeias aleatoriamente e so designadas como dextrinognicas ou liqueficantes; as -

amilases removem sucessivamente as unidades de maltose a partir das extremidades redutoras e so designadas como sacarognicas. Existem alguns fatores que podem influenciar no rendimento da desengomagem enzimtica, tais como: Insumos auxiliares: atuam sobre a atividade enzimtica auxiliando na interao com o substrato; Tempo de desengomagem: O tempo tem que ser dosado o suficiente para que a enzima possa solubilizar por completo todo o amido, porm no deve ser demasiadamente prolongado, pois pode haver prejuzo para o substrato; Temperatura empregada: a temperatura deve ser controlada de acordo com o tipo de enzima, visando a mxima atividade enzimtica; pH do banho: Quando o pH se localiza na faixa ideal proporciona alta atividade enzima e um mximo de estabilidade ao calor. O pH ideal para a desengomagem deve estar entre 6 a 7; Dureza da gua: A presena de clcio e/ou magnsio no banho de desengomagem aumenta a atividade da enzima; Presena de contaminantes: So agentes que inibem ou at chegam a destruir a enzima. Normalmente so corpos estranhos ao banho de desengomagem.

b) Purga As fibras de algodo, no estado cru, so formadas em mdia por 94% de celulose e os restantes 6% de material no celulsico, que confere s fibras um carter hidrofbico e uma colorao amarelada. A purga tem o objetivo de retirar essas impurezas. Estudos foram realizados para ver os efeitos da aplicao de pectinases e celulases para melhorar a absorvncia de tecido de algodo. A concluso foi que o uso simultneo das duas enzimas produz um efeito sinrgico que resulta numa limpeza mais eficiente tanto no tempo quanto na uniformidade do tratamento. A pectinase uma enzima que degrada a pectina (polissacardeo de cadeia longa), e essa pectina atua como uma cola entre as impurezas e as fibras de algodo. Com a degradao dela, as impurezas so mais facilmente retiradas. As vantagens potenciais que torna a purga enzimtica comercialmente atrativa incluem gua residual mais facilmente tratvel, economia de energia e melhor compatibilidade com outros processos, maquinaria e materiais. Comparando a purga obtida com o emprego de pectinase com a obtida empregando soda custica (utilizada anteriormente), ambos seguidos de um alvejamento com perxido de hidrognio, chegou-se a concluso que para o processo

alcalino a perda de peso 1% superior ao do processo enzimtico, obtendo-se neste um melhor grau de branco para a mesma degradao da celulose.

c) Alvejamento O processo de alvejamento visa remover a cor amarelada do algodo e deix-lo branco, sendo o agente ativo principalmente o perxido de hidrognio ou hipoclorito de sdio, em meio alcalino. Os resduos de perxido de hidrognio utilizados na etapa de alvejamento em contato com pigmentos sensveis oxidao podem sofrer pequenas alteraes na tonalidade. No processo convencional, os resduos de perxido de hidrognio so removidos atravs de vrios enxges ou da adio de um redutor inorgnico. Entretanto, aps varias pesquisas observou se a possibilidade de se utilizar as peroxidases para reduzir o perxido de hidrognio. Alm disso, os produtos (efluentes) desta reao no causam problemas ecolgicos, como a elevada carga de sais, e a quantidade de enzimas usada so muito menores que a quantidade de agente redutor inorgnico. interessante ressaltar que a utilizao de enzimas no processo de alvejamento no visa o branqueamento do tecido, mas sim a reduo do perxido de hidrognio d) Tingimento O tingimento uma operao destinada a colorir uniformemente os materiais txteis, a qual depende da interao entre as fibras txteis, gua, corante e compostos aditivos. Dentre as enzimas relacionadas a essa etapa de beneficiamento est a catalase e a peroxidase que permitem a preparao do material a ser tingido. O fato de as peroxidases no terem sequncias de aminocidos que podem reagir com pigmentos e modific-los, o tingimento pode ser realizado imediatamente ao final da reao enzimtica sem necessidade de escoamento do banho. Essa medida favorece a queda do consumo de produtos qumicos, de energia e de gua. As peroxidases tambm podem ser utilizadas para a oxidao dos corantes residuais na gua de lavagem, removendo-os e impedindo-os de provocarem manchas no tecido. A aptido da l para a tintura pode ser melhorada por um tratamento enzimtico. Isto resulta da decomposio da barreira hidrfoba pelas lipases lipoproteicas deixando a fibra mais acessvel para o banho aquoso de pigmentos. Alm disso, a decomposio das protenas no interior da fibra causa um melhor

acesso e mobilidade das molculas aos pigmentos. Ao mesmo tempo, a melhora da absoro do corante com o uso da enzima no promove nenhuma danificao visvel.

e) Acabamento Nas etapas de acabamento do tecido so conferidas caractersticas especiais ao material, como aumento da maciez e aspecto desbotado. O termo biofinishing ou biopolimento indica o processo de acabamento de produtos celulsicos com a ajuda de celulases. Os seguintes objetivos de acabamento podem ser almejados: Obteno de brilho, maciez ao tato e polimento; Produo de boa tica de superfcie; Produo de uma tica com efeito de usado. O biopolimento foi introduzido inicialmente com o objetivo de fornecer ao tecido de algodo uma aparncia mais limpa, suave e um toque mais agradvel. Isso porque as celulases degradam as fibras soltas e microfibrilas remanescentes na superfcie do material. No entanto, atualmente, utilizado em todas as reas de tecidos celulsicos. Por ser um processo de ao degradativa, resulta num tecido com menor peso e resistncia. Para que essas perdas sejam apenas moderadas necessrio o controle das operaes do processo, como temperatura, pH e tempo. Um novo ramo na moda do jeans, o used look, roupas com aparncia envelhecida so obtidas com um tratamento conhecido por stone-wash. Neste caso as calas jeans, j prontas para serem vendidas, so lavadas em mquinas com tambor, nas quais so adicionadas pedras-pomes e at mesmo um agente de branqueamento. As celulases podem substituir as pedras-pomes no desbotamento do jeans, possuindo a vantagem de propiciar um melhor toque j que no causa grande degradao da fibra, aspecto de desbotado mais uniforme e menor resistncia flexo. O controle do pH ao se alcanar a temperatura tima, bem como a desativao da enzima ao trmino da reao so medidas para evitar a danificao do material. A produo enzimtica de l sem aparncia de feltros envolve a aplicao de proteases. Essa alterao no toque resulta da ao intensiva das proteases para decompor a camada escamosa responsvel pela formao desses feltros. Durante este processo ocorre tambm uma perda da densidade de l porque as enzimas tambm agem no interior da fibra durante a reao.

Mudanas na superfcie da l com o uso dessas enzimas podem propiciar um toque similar ao da casimira fazendo com que tecidos mais simples tenham o aspecto dos mais nobres.

f)

Tratamento de Efluentes Os efluentes lquidos so txicos e geralmente no biodegradveis, sendo

muitas vezes resistentes destruio por mtodos de tratamento fsico-qumico. Estes so eficientes na remoo de material particulado, porm so deficientes quando se tratam de corantes, surfactantes e aditivos orgnicos dissolvidos. O problema de cor intensa nos efluentes txteis consequncia de grande quantidade de corantes no fixados, ionizados, principalmente os corantes reativos que possuem pequena degradabilidade, tornando sua eliminao difcil tanto pelos processos fsico-qumicos quanto pelos biolgicos. Dessa forma, buscam-se novas alternativas que utilizam microorganismos capazes de degradarem de maneira eficiente um grande nmero de poluentes a um baixo custo operacional, como a utilizao de fungos formadores de biofilme que produzem enzimas fortemente oxidativas. Estas conseguem oxidar grande variedade de compostos considerados txicos e recalcitrantes. O potencial destes fungos tem sido atribudo sua habilidade em degradar uma variedade de compostos xenobiticos via um mecanismo de radical livre mediado pelas peroxidases e lacases, enzimas que tm um potencial de oxidao-reduo muito elevado em relao a compostos fenlicos e aminas aromticas presentes nos efluentes industriais. Outros fungos produzem enzimas que agem sobre compostos recalcitrantes especficos aumentando sua biodegradabilidade ou removendo-os por precipitao, um exemplo a enzima tirosinase, obtida atravs de cogumelos Agaricus bispora. A tirosinase atua sobre grupamentos fenlicos presentes na estrutura dos corantes e catalisa duas reaes distintas: a o-hidroxilao de monofenis a catecis e a desidrogenao dos catecis a o-quinonas. 4.2 4.3 5. Bioprocessos e Bioreatores Bio

Com uma crescente preocupao com os impactos ambientais a partir dos processos industriais, os quais representam todo o desenvolvimento e necessidades cada vez

mais especficas da sociedade, mtodos menos agressivos, porm to ou mais eficientes, ganham cada vez mais espao, podendo-se citar o ramo da Biotecnologia como de grande importncia neste assunto. Baseada em trabalhar em harmonia com o mundo natural, apresenta solues para atender humanidade e substituir tecnologias que poluem a biosfera e contribuem para a degradao de fontes finitas os Bioprocessos.

Bioprocessos Reaes qumicas oxidaes, redues, hidrlises, condensaes,

isomerizaes e formao de ligaes duplas (C=C) ou de ligaes de heterotomos mediadas por microrganismo ou por preparaes enzimticas, envolvendo o tratamento da matria prima/resduo, preparo dos meios, esterilizao (quando necessrio) e a transformao do substrato em produto por rota bioqumica, seguida por processos de separao e purificao do obtido. Bioprocessos conduzidos por microrganismos, tradicionalmente conhecidos como processos fermentativos, so importantes fontes de produtos biolgicos usados nas indstrias farmacutica, alimentcia, qumica e agroqumica. Os produtos de processo fermentativo podem ser divididos em: produtos associados ao crescimento, produtos parcialmente associados ao crescimento e produtos no associados ao crescimento. Os produtos associados ao crescimento so tambm chamados de metablitos primrios e incluem cidos orgnicos, nucleotdeos, aminocidos, lipdios, vitaminas e polissacardeos. So produzidos em paralelo com o crescimento e podem, a princpio, serem produzidos em cultura contnua. Usualmente, devido ao baixo preo dos produtos, seria economicamente vivel se o crescimento e a produo tiverem taxas relativamente altas. Os produtos no associados ao crescimento, metablitos secundrios, incluem antibiticos, alcalides, toxinas microbianas e micotoxinas. Na ltima dcada observou-se um aumento expressivo na quantidade de bioprodutos comerciais, especialmente metablitos secundrios e protenas

teraputicas produzidas com tecnologia de DNA recombinante. No passado, o interesse era por produzir substncias com demanda de mercado da ordem de toneladas por dia. Hoje, o desafio implementar processos para a obteno de

produtos com consumo de quilogramas por ano, os quais tm que apresentar um grau de pureza elevado e atender s estritas exigncias dos rgo regulatrios. Necessitam de maiores cuidados do que a maioria dos processos qumicos comuns, principalmente devido sensibilidade a variaes nos estados dos sistemas como, por exemplo, temperatura e concentrao.

Considerando-se suas complexidades e particularidades, podem ser divididos em trs estgios: Montante (upstream) tratamento da matria-prima, preparo do meio e esterilizao; Transformaes realizadas no Bioreator, envolvem fenmenos qumicos, fsicos e biolgicos sobre os agentes biolgicos no meio de cultivo e em condies ambientais timas; Jusante (downstream) separao de clulas, separao/purificao de produtos. Bioprocessos e Processos Qumicos distinguem-se essencialmente segundo os catalisadores utilizados em suas reaes. Os Bioprocessos so conduzidos mediante ao de agentes biolgicos, sendo, portanto, as transformaes catalisadas enzimaticamente e assim com alta especificidade. Alm disso, suas estruturas e meios reacionais tambm exigem diferentes condies, utilizandose Bioreatores. Biorreatores A seleo e projeto de bioreatores baseia-se na obteno de um comportamento timo do sistema biolgico operando a um custo mnimo e maximizando a produtividade e rendimento do Bioprocesso.:

Exigncias do produto: especificaes do produto a ser gerado (tipo, grau de pureza, etc) segundo a necessidade do mercado ou at exigncias governamentais.

Identificao do sistema biolgico: comeando pela seleo do sistema biolgico (microrganismos, clulas animais ou plantas), analisa fatores como condies de crescimento, necessidade de O2, pH timo (para produo de produto ou crescimento celular), condies de agitao, necessidade de luz, produo ou no de espuma, verificao se o produto excretado para o meio, dentre outros.

Estequiometria e Projeto do meio: realizada a fim de se maximizar o desempenho do sistema, pois o meio deve, se possvel, facilitar a etapa de separao e purificao. nessa etapa que se define as quantidades de O2 e luz, se necessrias. A relao quantitativa entre o consumo de substrato e formao de produto e gerao/liberao do calor (estequimetria) so os primeiros elementos analisados no projeto de reatores de modo geral. O metabolismo dos organismos do sistema resulta na converso de substrato em produto com a liberao de uma certa quantidade de calor. Os clculos estequiomtricos fornecem relacionamentos quantitativos entre produo de biomassa e sntese de produto (ou produo de energia) e so extremamente importantes no projeto de Bioprocessos.

Cintica:

os

dados

sobre

estequimetria

complementam

as

informaes cinticas e, juntos, so o ncleo do projeto de um biorreator. Alm da cintica microbiana existe a cintica enzimtica velocidade das reaes enzimticas e fatores que a influenciam, sendo que a cintica de um sistema biolgico difere se as clulas estiverem imobilizadas ou em suspenso. Seleo do tipo de Biorreator: escolha do biorreator adequado de acordo com os dados obtidos anteriormente. Todas as restries possveis do sistema biolgico devem ser analisadas para a melhor seleo. A anlise da possibilidade, ou necessidade, de reciclo de clulas deve ser realizada. Projeto do Sistema: definir o modo de operao, as equaes bsicas de operao, a anlise do aumento de escala, a necessidade, tipo e controle da esterilizao, o controle de contaminantes, o tratamento da gua, ar e outros gases que possam ser utilizados no sistema, outros acessrios necessrios, como o consumo de vapor, et

Algumas transformaes microbianas, analogamente s reaes qumicas, atingem rendimentos prximos ao mximo estequiomtrico (produtos do metabolismo primrio), embora apresentando taxas globais de produo baixas. Outras, como as do metabolismo secundrio, resultam em baixos valores de rendimento e produtividade. O aprimoramento ser alcanado atravs de uma maior compreenso sobre a fisiologia celular e da interao da clula com o ambiente qumico e fsico no

biorreator. a combinao clula (ou enzima) /meio ambiente (ou condies reacionais), que define o xito de um Bioprocesso. Pode-se encontrar uma grande variedade de configuraes de biorreatores. Dentre elas, as citadas abaixo: Biorreatores agitados mecanicamente em geral, os mais estudados e utilizados, apesar de no ideais, pois apresentam versatilidade e fornecem bons resultados para uma grande gama de Bioprocessos; Biorreatores agitados pneumaticamente possibilitam a operao contnua de Bioprocessos com altas densidades celulares, resultando em altos valores de produtividade volumtrica; Biorreatores membrana - promovem a produo e a separao de produtos de modo praticamente concomitante. Esses tipos de reatores permitem operar Bioprocessos com alta densidade celular, reduzindo tempos de residncia e aumentando a produtividade do processo. A extrao de produtos de fermentao do meio, que podem apresentar efeitos txicos ou inibitrios s enzimas ou s clulas ntegras, tambm uma vantagem importante dos biorreatores com membranas (Fernandes et al., 2003). Um grande nmero de aplicaes de biorreatores com membranas vem se concentrando na rea de tecnologia ambiental e, mais especialmente, no tratamento de efluentes, visando, sobretudo, o reuso de gua nas indstrias e em outros empreendimentos (hotis, shopping centers, parques temticos, entre outros). Biorreatores com clulas/enzimas imobilizadas com o crescente uso de clulas e enzimas na indstria, estes biorreatores foram desenvolvidos a fim de tornar sua aplicao mais conveniente. Os agentes biolgicos tm sido imobilizados, assemelhando-se aos catalisadores de fase slida da qumica convencional. Na ltima dcada, verificaram-se, ainda, significativas mudanas na

configurao de biorreatores, visando melhoria de seu desempenho e assegurar operaes com maior segurana. A exploso de conhecimentos no campo molecular tem promovido uma mudana na concepo dos Bioprocessos. Considerando o Brasil e sua enorme biodiversidade, pode-se melhorar e aprimorar o grande potencial dessas tcnicas, selecionando organismos com alta capacidade produtiva.

A riqueza dos sistemas biolgicos naturais imensa e apenas uma pequena parte foi descoberta e explorada, apesar de j se produzir um grande nmero de produtos naturais para ramos da indstria. necessrio desvendar este universo de compostos naturais ainda ocultos, gerando novas substncias bioativas, mas sempre preservando nosso meio ambiente.

6.

Concluso

O Brasil pode oferecer uma grande variedade de vegetais que podem contribuir como fontes de enzimas para serem aplicados nas mais diversas reas do conhecimento. Em qumica analtica, por exemplo, eles podem ser usados na construo de diversos tipos de biossensores e/ou procedimentos enzimticos de anlise. isso que so capazes da evoluo. Isto est em contraste impressionante aos catalizadores mais familiares aos qumicos industriais. As enzimas evoluram sobre quatro bilho anos para catalisar exquisitely os processos qumicos exigidos da vida coisas. Estes

catalizadores que existem na natureza foram alcanado durante os ltimos anos a um grau maior do que qualquer um imaginou uma dcada h, com as aproximaes de seleo clonando e elevada da produo para a atividade de enzima e arranjar em seqncia genomic. As enzimas podem ser evoludas alm as necessidades de natureza em catalizadores industriais pelas tcnicas da exposio dirigida da evoluo e do fago. Ao contrrio s tentativas mais adiantadas no projeto racional do melhorado as enzimas, as tcnicas mais recentes so rpidas e baratas, trazendo enzimas industriais fora de uma era em que somente algumas enzimas realmente valiosas podiam ser rentvel tornado, um momento onde industrial personalizado as enzimas estaro extensamente - disponveis. Esta mudana est tendo efeitos profundos no biocatalysis industrial.

Bibliografia Consultada
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