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Resumo ALOSTERIA

1. Alosteria

As

enzimas

reguladas

por

moduladores

ligados

stio(s)

adicional(is) e que sofrem mudanas conformacionais no-covalentes so denominadas alostricas. So encontradas em quase todas as vias metablicas e geralmente est catalisando uma reao irreversvel localizada no incio da via. A sua estrutura so oligomricas, i.e., compostas de varias cadeias polipeptdicas, cada uma com uma forma estrutural ativa. A afinidade da ligao enzima-substrato das enzimas alostricas modificada por ligantes denominados efetores ou moduladores alostricos, unidos reversvel e nocovalentemente a locais especficos da estrutura tridimensional protica e nominados stios alostricos, que so diferentes e distantes dos stios ativos especficos para os substratos. Os efetores so pequenas molculas orgnicas, por exemplo, o ATP (trifosfato de adenosina), protenas de baixo peso molecular, substratos ou produtos da reao. A maioria das enzimas sujeitas a esses efeitos so decisivas na regulao do metabolismo intermedirio. Os efetores podem ser: Efetor alostrico positivo aumenta a afinidade da enzima pelo substrato e, assim, eleva a velocidade da reao. Efetor alostrico negativo reduz a afinidade da enzima pelo substrato e, assim, diminui a velocidade da reao. Na maioria das vias metablicas comum que o produto final atue como modulador/efetor alostrico negativo da enzima que catalisa as primeiras reaes da via. Portanto quando a concentrao deste produto fica aumentada ele vai agir como um inibidor alostrico, diminuindo a velocidade da via e a sua prpria produo. Caso o produto final comece a ser consumido e consequentemente sua concentrao diminua ele vai deixar de inibir a via, fazendo com isso que a via tenha sua velocidade aumentada. Este mecanismo um exemplo modelo muito comum de regulao alostrica: a inibio por "feed-back" (retroalimentao), onde o prprio produto da reao atua como modulador da enzima que a catalisa.

A maioria das enzimas alostricas oligomrica; ou seja, so compostas de vrias subunidades polipeptdicas, cada uma com um stio ativo. Em algumas enzimas, o stio alostrico e o stio ativo esto localizados na mesma subunidade (ex.: piruvatocarboxilase); em outras, esto localizados em subunidades diferentes (ex.: aspartatocarbamoiltransferase). Em

conseqncia da natureza oligomrica das enzimas alostricas, a ligao do substrato a uma subunidade pode afetar a ligao de outras molculas de substrato aos outros stios ativos. A interao estabelecida entre os stios ativos evidenciada pela cintica da catlise: o grfico de Vo versus a concentrao de substrato [S] uma curva sigmide, em lugar da curva hiperblica de MichaelisMenten (Figura 1).

Figura 1 Velocidade inicial da reao versus a concentrao de substrato para enzimas alostricas comparadas com enzimas no-alostricas.

Cooperatividade a influncia que a unio de um ligante a uma protmero tem sobre a unio de ligante a outro protmero numa protena oligomrica. Quanto a cooperatividade as reaes podem ser: Positivamente cooperativa onde a ligao do primeiro substrato aumenta a afinidade de substratos adicionais por outros stios ativos. Negativamente cooperativa em que a ligao do primeiro substrato reduz a afinidade por substratos adicionais. As enzimas alostricas podem exercer diferentes efeitos: Interaes homotrpicas. A unio do ligante a um protmero pode afetar a unio de ligantes aos outros protmeros do oligmero.

Interaes heterotrpicas. o efeito de um ligante sobre a ligao de um ligante diferente; o efeito pode ser tanto positivo como negativo. Algumas enzimas alostricas tm dois ou mais efetores e podem ser reguladas por efetores positivos e negativos que podero estar presentes em diferentes concentraes (Figura 2).

Figura 2 - Modelos de sistemas de enzimas alostricas. (a) Modelo de uma enzima monomrica. A ligao de um efetor alostrico positivo (A) ao stio ativador, j, induz a uma nova conformao da enzima, com maior afinidade pelo substrato. A ligao de um efetor alostrico negativo ao stio inibidor, i, resulta numa conformao da enzima com afinidade diminuda pelo substrato (S). (b) Modelo de uma enzima alostrica polimrica. A ligao de um efetor alostrico positivo (A) no stio j, causa uma mudana alostrica na conformao do protmero ao qual o efetor se liga que transmitida a um segundo protmero por meio de interaes cooperativas protmeroprotmero. A afinidade pelo substrato aumenta nos dois protmeros. Um efetor negativo diminui a afinidade pelo substrato nos dois protmeros.

Dois modelos explicam o comportamento de enzimas alostricas com curvas sigmoidais v0 versus [S] que refletem as interaes cooperativas entre as subunidades oligomricas (Figura 3): 1. Modelo concertado (ou de simetria): Proposto por Monod, Wyman e Changeux, onde as subunidades esto todas na forma inativa (T, tenso) ou todas na forma ativa (R, relaxado). Os estados T e R esto em equilbrio. Ativadores e substratos favorecem o estado R. Inibidores favorecem o estado T. Uma mudana conformacional num protmero causa uma mudana correspondente em todos os protmeros. 2. Modelo seqencial: Proposto por Koshland, Nmethy e Filmer as subunidades podem sofrer a mudana conformacional individualmente. A ligao do substrato aumenta a probabilidade da mudana conformacional. A mudana em uma subunidade faz ocorrer uma mudana similar na subunidade adjacente, vizinho do protmero contendo o ligante unido, assim como torna mais provvel a ligao de uma segunda molcula de substrato.

Figura 3 - Comportamento das enzimas alostricas. No modelo concertado, todas as unidades so convertidas do estado T (baixa afinidade) para o estado R (alta afinidade) simultaneamente. No modelo seqencial, as subunidades sofrem mudanas conformacionais progressivamente com as ligaes do substrato.

Um exemplo onde se pode encontrar as etapas de alosteria e modulao covalente na regulao do metabolismo intermedirio,

por exemplo, sntese e degradao de lipdeos e carboidratos (Figura 4). Em resposta ao hormnio adrenalina ou epenifrina, h um aumento da concentrao de glicose circulante, preparando o organismo para luta ou fuga. Na primeira etapa dessa resposta metablica, a adrenalina ativa por alosteria a enzima de membrana adenilato ciclase, formando AMP cclico. Numa segunda etapa de alosteria, o AMP cclico ativa a protena quinase A (PKA), ligando-se sua unidade regula-tria e liberando a unidade cataltica ativa. Na terceira etapa, ocorre modulao covalente em que a PKA fosforila a fosforilase quinase, tornando-a ativa. Na quarta etapa, tambm por modulao covalente, a fosforilase quinase fosforila a glicognio fosforilase,ativando-a. Por fim, esta hidrolisa diretamente o glicognio liberando glicose-1-fosfato para a via glicoltica.

Figura 4 - Regulao do metabolismo intermedirio, por exemplo, sntese e degradao de lipdeos e carboidratos envolvem etapas de alosteria e modulao covalente. Fonte: (http://pt.scribd.com/doc/51794114/sintese-e-degradacao-do-glicogenio-e-CK)

2. Referncia

MOTTA, V. T. Autolab: Anlises Clnicas. Disponvel em: http://carlosps.110mb.com/down/b/b2amino.pdf Acessado em: 09/10/11. LEHNINGER, A. L. Princpios de bioqumica. 2 ed. So Paulo: Sarvier, 1995.