Un mtodo dinmico simple para la determinacin de KLa en fermentadores de laboratorio.

Introduccion
La determinacin de la absorcin de oxgeno del aire en el caldo debe evaluarse bajo las condiciones de funcionamiento de fermentadores. Bandopadhyay y Fujio, han desarrollado mtodos para la determinacin de KLa en sistemas de fermentacin reales que son rpidos y consistentes. El uso de la sonda de oxgeno disuelto de respuesta rpida es esencial para que estos mtodos. Sin embargo, las operaciones de proceso estn sujetas a interrupciones por razones obvias. Por otra parte, algunos investigadores creen que estos mtodos proporcionan valores ms bajos de absorcin ELK y oxgeno en caldos no newtonianos. Algunos otros trabajadores informaron que estos mtodos no proporcionan resultados absolutamente confiables, sugirieron que el estudio de equilibrio de oxgeno en el sistema durante la fermentacin sera ms confiable para evaluar las capacidades de transferencia de oxgeno de razn porque ninguna hiptesis sobre el efecto de las clulas, tensoactivos, viscosidad, etc., son necesarias; estudio del equilibrio de oxgeno, sin embargo, el estudio del equilibrio de oxgeno requiere instrumentacin adicional. La determinacin de la concentracin de oxgeno disuelto por la sonda y el porcentaje de oxgeno en el aire entrante y gas de salida de los fermentadores por el analizador de oxgeno puede utilizarse para determinar los valores de KLa en un fermentador de trabajo de una forma muy sencilla. Como cualquier sistema dinmico esto tambin requiere usar de modelo para describir el proceso de tiempo diferentes en trminos de variables de medida. Sin embargo, en el mtodo antiguo, es prestado escasa atencin a la participacin de la fase gaseosa en el modelo. El objetivo de este documento es describir este mtodo de determinacin de ELK mediante una relacin matemtica sencilla construida la concentracin de oxgeno disuelto y el porcentaje de oxgeno en la fase de gas de fermentadores. Teora Cuando el aire es suministrado en el caldo de fermentador una parte del oxgeno presente en el aire entrante se disuelve en el lquido del cual los microorganismos reciben el oxgeno para su respiracin y sus actividades metablicas; el oxgeno que no es absorbido sale a travs de los gases de salida. Bajo el aire o agitado muy fuerte las condiciones actuales en

un pozo mezclado de fases gas lquido, la distribucin de oxgeno en la fermentacin puede escribirse como: (1) suponiendo que la densidad y cambios de velocidad de flujo volumtrico de aire de admisin y salida son insignificantes en el transcurso de la fermentacin el anterior balance de oxgeno puede expresarse como: Para fermentadores de laboratorio con fase mixtas de gas lquido se puede suponer que el gas de salida contiene el mismo porcentaje de oxgeno que de la fase de gas de los fermentadores. De la ecuacin (2) podemos escribir la ecuacin de la tasa de transferencia de oxgeno en el caldo como: (3) Tambin, la tasa de transferencia de oxgeno en la fase disuelta de un cultivo aereado y agitado: (4) combinacin de las ecuaciones(3) y (4), obtenemos: (5) que da la concentracin de oxgeno disuelto como: (6) en la ecuacin (6) bajo las condiciones dadas en los supuestos, KLa, V, Q, C * y ft pueden suponerse que permanecen constante y la nica variable CL y fo. Dado que se trata de una ecuacin lineal de CL vs (ft-fo) producir una lnea recta con una pendiente de paQ / KLaV e intercepta C *. Todas las otras cantidades se conocen de las condiciones experimentales , KLa puede evaluarse desde la ladera. La tasa de absorcin de oxgeno (rCx) puede calcularse reordenando la ecuacin (3): (7) (8) el valor de C * puede obtenerse por extrapolacin de la recta en el ordinal de la trama de CL vs (ft-fo) y medir el valor de intercepcin. Sistema de sulfito El mtodo de sulfito para las mediciones de KLa es no biolgico y envuelve la participacin de reacciones qumicas, por lo que es posible escribir ecuaciones (3) y (4) como: (9) Y (10) donde R representa la participacin en la reaccin qumica. Combinando las ecuaciones (9) y (10) obtenemos (11)

en presencia del catalizador de cobre la oxidacin de sulfito tiene lugar instantneamente. Se ha informado que la tasa de absorcin de oxigeno en solucin de sulfito de sodio es igual a la tasa mxima de absorcin fsica en el sistema de gas lquid mixto. As, es posible suponer CL = 0 en la ecuacin (11); rearreglando obtenemos (12) Por lo tanto es posible determinar ELK de fermentadores de laboratorio utilizando el mtodo del sulfito basarse en cambio en el porcentaje de oxgeno en el aire de salida de fermentativos y clculo del valor mximo de agotamiento del oxgeno en fase gaseosa (ftfo). Cualquier analizador de oxgeno sensibles permite la fcil determinacin de este parmetro. Otros parmetros C *, pa, Q y v se conocen las condiciones experimentales. Para determinar C * debe conocerse la relacin de equilibrio entre la presin parcial de oxgeno en gases de salida y el oxgeno disuelto en lquido. Para gases cuya propiedad de baja solubilidad, esto viene dado por la ley de Henry. (13) Donde p = presin parcial del oxgeno en el aire de salida y H = constante de Henrys. Bajo oxgeno disuelto establecidos las condiciones de saturacin es el equilibrio entre el oxgeno en la fase de gas y el oxgeno disuelto y agotamiento de oxgeno gas insignificante fase se producir. En otras palabras ser casi la misma presin parcial de oxgeno (0,21 atm) en el aire de entrada y salida de los fermentadores Los estudios se llevaron a cabo en fermentadores rotativos horizontales (HRF) de 2,5 l y 5 l haba agitado tanque ferenter (STF) de configuracin estndar. El STF podra ser operado en condiciones con la instrumentacin disponible en la unidad. Las dimensiones fermentativos figuran en la tabla I. La HRF fue operada por medio de un cinturn H.P. 0,25 impulsado por motor D.C. 1420 rpm) su velocidad controlada entre 20-150 rp por un variac y un rectificador. Tabla I. details of fermenters. Fermentador Horizontal rotatorio Material de Vidrio (QFV) construccion Volumen total (l) 2.5 Volumen con el que se 0.9 trabaja Dimetro (cm) 10 Largo/ altura (cm) 30.48 Tipo burbujeador Tubular Numero de orificios en 10 micro-burbujeador Fermentador de tanque agitado Vidrio (QVF) 5 3 15.24 33 Sparger de tres orificio. Orificios situados en la esquina de un tringulo 3

Dimetro del orificio (mm) Tipo rotor Number of baffles Ancho de baffles (cm) Tabla 2.

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1 8 blade turbine type 4 1.2

Aire filtrado y estril se utiliz en el fermentador. Ambos, muestras de aire de entrada y salida fueron controladas analizando y grabando por medio de un analizador paramagnticos de oxgeno (DCL Servomax oxgeno analizador tipo 83). El instrumento fue normalizado segn el procedimiento establecido. Despus de la normalizacin el analizador fue conectado a la lnea de gas de salida de fermentadores. Concentracin de oxgeno disuelto en el caldo peridicamente se determin mediante analizador de oxgeno disuelto (Japn Universal de analizador de oxgeno). Durante la fermentacin registro continuo y control del pH fue mantenida por estril pH electrodo conectado con un controlador de la grabadora y micropump para alimentar a 0,1 N NaOH. El fermentador (rotativo) qued parcialmente sumergido en un bao de agua cuya temperatura precisamente estaba controlado por una guerra combinada y refrigerados sistema de recirculacin de agua con termostato. La temperatura STF de 5-1 fue controlada por un contacto directo de un elemento controlador automtico estril y utilizando un termopar combinado calefaccin y aportndoles refrigerado. Tres tipos diferentes de organismos fueron empleados en los estudios, es decir, una cepa bacteriana de Pseudomonas ovalis B1486), que convierte la sacarosa y una cepa de levadura de glucosa de utilizando Saccharomyces cerevisiae 3132 para la sntesis celular. La composicin del medio utilizado para cada organismo se muestra en la tabla 2. En todas las ejecuciones usamos aceite de oliva como agente Antiespumante. Experimental Por lotes se realizaron estudios con cada organismo por separado en la dos razn. Se realizaron estudios con PS. Ovalis B1486 a 29 C, S. cerevisiae 3132 a 29 C y a. niger A588 NCIM a 30 C. inoculums para tal caso prepar vertiendo aspticamente solucin salina fisiolgica estril 10 ml (0,85% NaCl) a una 24 horas inclinadas cultura y hacer una suspensin homognea de clulas sacudido bajo condiciones de esterilidad. 5 por ciento de la media volue de la suspensin celular fue trasladado a medio nutritivo 150 ml a temperatura adecuada en un agitador rotatorio en 250 rp 18-24 horas segn necesidades. Following incubation, 10 percent(v/v) of this inoculum was used to seed the main fermenter. Ps. Ovalis fermentation was conducted for 14 hours, S. cerevisiae for 24 hours and A. niger for 6 days. Data up to the end of logarithmic phase of growth of the organism were reused in computation, because aximum oxygen uptake takes place through this phase. Studies were conducted at three different speeds of the HRF and agitator of STF. During fermentation inlet an outlet air flow rate, dissolved oxygen concentrations were ade by asceptically drawing samples in a sterile bottle attached to the outlet end of the fermenter and holding a calibrated dissolve oxygen probe.