REAO DE AGLUTINAO ATIVA DIRETA

DETERMINAO DOS GRUPOS SANGNEOS ABO

INTRODUO Foi no incio do sculo XX que a transfuso de sangue, adquiriu bases mais cientficas. Em 1900 foram descritos os grupos sanguneos A, B e O por Landsteiner e em 1902 o grupo AB por De Costello e Starli. A descrio do sistema Rh foi posterior (1940), por Landsteiner e Wiener. Os grupos sanguneos de maneira geral so constitudos por antgenos que so a expresso de genes herdados da gerao anterior. Quando um antgeno est presente, isto significa que o indivduo herdou o gene de um ou de ambos os pais, e que este gene poder ser transmitido para a prxima gerao. SISTEMA ABO H vrios grupos sangneos herdados independentemente entre si sendo que so conhecidos diversos sistemas de grupo sangneos. Entre eles podemos citar os sistemas ABO, Rh, MNS, Kell, Lewis, etc. O sistema ABO o de maior importncia na prtica transfusional e no ensino da imunologia por ser o mais imunognico, ou seja, por ter maior capacidade de provocar a produo de anticorpos, seguido pelo sistema Rh. Os antgenos deste sistema esto presentes na maioria dos tecidos do organismo. Fazem parte deste sistema trs genes A, B e O podendo qualquer um dos trs ocupar o loco ABO em cada elemento do par de cromossomos responsveis por este sistema. Os genes ABO no codificam diretamente seus antgenos especficos, mas sim enzimas carreadoras que tem a funo de transportar acares especficos, para uma substncia precursora na superfcie dos eritrcitos resultando nos antgenos ABO. O indivduo do grupo AB possuidor de um gene A e de um gene B, sendo que um foi herdado da me e o outro do pai. Ele possui nos seus glbulos vermelhos os antgenos A e B e seu gentipo AB. No caso do grupo O, foi herdado do pai e da me o mesmo gene O. As clulas de grupo O so reconhecidas pela ausncia de antgeno A ou B. Quando o gene O herdado ao lado de A, apenas o gene A se manifesta; e se herdado ao lado do gene B apenas o gene B se manifesta. Ao realizarmos os testes rotineiros em laboratrio, no podemos diferenciar os indivduos BO e BB, e nem AO e AA. Os smbolos A e B, quando nos referimos a grupos sanguneos, indicam fentipos, enquanto que AA, BO etc. so gentipos (ver quadro abaixo).

FENTIPO A A O B B AB

GENTIPO AO AA OO BO BB AB

dito homozigoto o indivduo possuidor de genes iguais (AA, BB, OO), e heterozigoto quando os genes so diferentes (AO, BO, AB). Regularmente as pessoas expostas a um antgeno que no possuem, podem responder com a produo de um anticorpo especfico para este antgeno. Entretanto, h alguns antgenos que possuem uma estrutura que se assemelha muito com antgenos de bactrias e plantas, aos quais estamos constantemente expostos. Nestes casos, ocorre a produo de anticorpos a partir do contato com as bactrias e plantas, e no ao antgeno eritrocitrio. Neste grupo encontramos os antgenos do sistema ABO. Por este processo, os indivduos com idade superior a seis meses, possuem o anticorpo contra o antgeno que no tem nasuperfcie de seus eritrcitos, pois j foram expostos a essas bactrias e plantas, atravs da alimentao. Estes anticorpos so chamados de isoaglutininas ou aglutininas naturais e so da classe IgM. A CLASSIFICAO SANGNEA ABO A determinao do grupo sangneo deste sistema feita usando dois tipos de teste. 1o Atravs da identificao da presena de antgenos nos eritrcitos, usando como reativos anticorpos purificados (anti-A, anti-BB). Esta a chamada classificao ou tipagem direta e ser utilizada na aula prtica. 2o Atravs da identificao da presena de anticorpos no soro/plasma usando como reativos antgenos conhecidos (hemcias A e hemcias B). Esta a classificao ou tipagem reversa (ver quadro abaixo).

GRUPO SANGUNEO

SORO DE TIPAGEM Anti-A Anti-B + + + + -

HEMCIAS DE TIPAGEM AB + + + +

ANTGENO

ANTICORPO

A B AB O

A B AeB -

Anti-B Anti-A Ausente

Anti-A e anti-B

Observando o quadro acima podemos perceber a presena dos antgenos e anticorpos em cada grupo sanguneo. nesta presena ou ausncia de antgenos e anticorpos que se baseia a tipagem sangunea e a escolha do sangue a ser transfundido. As transfuses podem ser: Isogrupo quando doador e receptor so do mesmo grupo ABO Heterogrupo doador e receptor so de grupo sanguneo diferente. A escolha do sangue se baseia no fato que o indivduo no pode ser transfundido com um sangue que possua um antgeno que ele no tem, pois o anticorpo presente no seu plasma, contra esse antgeno, iria reagir com essas hemcias transfundidas. Em vista disso e observando o quadro acima, fica claro que um indivduo do grupo A no pode receber sangue B e assim por diante. Nas transfuses sangneas, em relao ao sistema ABO, preciso considerar, inicialmente, que a taxa de aglutinognios nas hemcias significativamente maior que a taxa de aglutininas no plasma. Dessa maneira, so inviveis as transfuses em que o sangue doado contm aglutinognios que encontraro no receptor as aglutininas contrastantes. Isso significa que, se o sangue doado apresenta aglutinognios A, o sangue do receptor no pode conter aglutininas anti-A; e que, se o sangue doado contm aglutinognios B, o receptor no pode apresentar aglutininas anti-B. Assim, exemplificando, um indivduo do grupo B no pode doar sangue para outro do grupo O, uma vez que as aglutininas anti-B do receptor reagiriam com os aglutinognios B do doador, semelhana de uma reao antgeno-anticorpo. Dessa reao, na qual os aglutinognios B atuariam como antgeno (estranho ao receptor do grupo O) e as aglutininas anti-B como anticorpos, resulta a aglutinao do sangue doado, fato que pode provocar a obstruo de vasos sangneos, com conseqncias que podem levar o receptor morte. No entanto, um indivduo do grupo O pode doar sangue para outro do grupo B. Isso porque o volume de sangue doado no contm aglutininas em taxa suficientemente grande para provocar a aglutinao das hemcias do receptor. Observe ento, que as hemcias que se aglutinam so aquelas presentes no sangue doado e, para tanto, devem conter aglutinognios (antgenos) estranhos, isto , que no existem no sangue do receptor. No entanto, sempre que possvel, deve se transfundir sangue isogrupo, pois se, por exemplo, transfundimos um sangue do grupo O a um paciente do grupo A, junto com as hemcias transfundidas temos uma quantidade de plasma onde h anticorpo anti-A, que poder reagir com as hemcias deste paciente causando um certo grau de hemlise maior ou menor, mas que poder ter um

significado dependendo do quadro clnico do paciente. Cada caso deve ser particularmente analisado pelo hemoterapeuta . Este sistema ABO, tambm pode ocasionar incompatibilidade materno-fetal, com desenvolvimento da doena hemoltica peri-natal. Apresenta tambm importncia em transplantes renais ou cardaco, com menor papel nos hepticos ou de medula ssea. Em alguns processos pode ocorrer a perda parcial do antgeno A ou B, como em algumas leucemias.

TIPO AGLUTINOGNIOS AGLUTININAS SANGNEO NAS HEMCIAS NO PLASMA A B AB O A B AeB anti-B anti-A anti-A e anti-B

DETERMINAO DO GRUPO SANGUNEO Rh POR AGLUTINAO SIMPLES

O fator Rh constitudo de aproximadamente 40 antgenos e esta famlia gnica ainda no totalmente compreendida. Sabe-se que cada pessoa herda um gene ou um complexo gnico Rh de cada um dos pais. No sistema descrito por Fisher e Race os pares allicos produzem 5 antgenos (D,C,c,E e e). Estes antgenos so lipoprotenas e esto dispersamente distribudas na superfcie das hemcias. Quando dizemos que um indivduo Rh Positivo, quer dizer que o antgeno D est presente na superfcie de suas hemcias. Isto porque o antgeno D foi o primeiro a ser descoberto nesse sistema, e inicialmente foi considerado como nico. Aps os antgenos A e B (do sistema ABO), o antgeno D o mais importante na prtica transfusional. Em algumas situaes podemos ter uma expresso fraca do antgeno D. Isso pode ocorrer por: Variaes quantitativas que so transmitidas geneticamente. Efeito de posio, sendo o mais conhecido o enfraquecimento do antgeno D quando o gen C est na posio trans em relao ao D. Expresso gnica parcial por ausncia de um dos mltiplos componentes do antgeno D. Estes casos so chamados na prtica de Rh fraco, e se refere ao que era conhecido anteriormente como Du. O antgeno Du particularmente importante na tipagem de sangue de populaes de negros, nas quais mais freqente e pode levar a falsos resultados Rh negativos, e levar a aloimunizaes tanto por transfuses quanto por gestao incompatvel. Ao contrrio do que ocorre com os antgenos A e B, as pessoas cujos eritrcitos carecem do antgeno D, no tem regularmente o anticorpo correspondente. A produo de anti-D quase sempre posterior a exposio por transfuso ou gravidez a eritrcitos que possuem o antgeno D. Uma alta proporo de pessoas D-negativas que recebem sangue Dpositivo produzem anti-D. Se encontrarmos anticorpos deste sistema, podemos concluir que ocorreu uma imunizao atravs de uma transfuso ou de uma gravidez. Qualquer antgeno deste sistema capaz de provocar a produo de anticorpos, e assim a gerar situaes de incompatibilidade. Aloimunizaes contra antgenos E, c, e, C so tambm observadas em pacientes politransfundidos, mas com uma freqncia inferior. A maioria dos casos de Doena Hemoltica do Recm-Nascido (DHRN) devida ao anti-D. A profilaxia por imunoglobulinas anti-D diminuu o nmero de aloimunizaes maternas contra o antgeno D, mas no contra E, c, e, C Na rotina, realizada a tipagem, apenas, para o antgeno D nesse sistema. Os outros antgenos (E, C, c, e), so determinados apenas em situaes onde ocorre incompatibilidade. A produo de anticorpos contra estes antgenos ocorre de forma semelhante produo de anti-D. A capacidade de provocar a produo de anticorpos destes antgenos varia. Partindo do mais imunognico, temos D > c > E > C > e.

TRANSFUSO Para efeito de transfuso, considerado que pacientes Rh positivos podem receber sangue Rh positivo ou negativo, e que pacientes Rh negativos podem receber somente sangue Rh negativo. Para os pacientes D fraco, existem alguns critrios a serem observados. Se o antgeno D est enfraquecido por interao gnica, estando o mesmo presente integralmente, o paciente poder receber sangue Rh positivo ou negativo. Porm nos casos em que o antgeno D est enfraquecido por ausncia de um dos componentes, pode ocorrer produo de anticorpos contra o antgeno D na sua forma completa. Como rotineiramente, no se identifica a causa que leva a expresso enfraquecida do antgeno, costuma-se dar preferncia a usar sangue Rh negativo para os pacientes Rh fraco. Existem situaes clnicas onde necessrio avaliar o risco X benefcio, e fazer outras opes. Neste momento necessrio o acompanhamento do hemoterapeuta. REAO DE AGLUTINAO A medida direta da ligao de um anticorpo ao antgeno especfico utilizada na maioria dos ensaios sorolgicos. Alguns importantes ensaios esto baseados na capacidade do anticorpo se ligar ao antgeno e esta ligao levar a uma alterao do estado fsico do antgeno. Estas interaes secundrias podem assim ser detectadas de diversas maneiras. Por exemplo: quando o antgeno est presente numa superfcie de uma partcula grande como, por exemplo, uma bactria, ou um eritrcito, os anticorpos, uma vez ligados, levam estas partculas a se agruparem num fenmeno conhecido por aglutinao. O mesmo princpio aplica-se s reaes utilizadas para determinao dos grupos sanguneos, onde os antgenos encontram-se na superfcie das hemcias e esta reao de aglutinao causada pela ligao do anticorpo denominada hemaglutinao (do grego ,haima, sangue). Este procedimento utilizado para determinar o grupo sanguneo ABO e tambm pode ser utilizado para o grupo Rh, mas deve-se levar em considerao que somente 75% dos indivduos Rh positivos (D positivos) podem ser tipados desta forma, j que existem os D fracos que necessitam ser testados pela forma de aglutinao indireta (Coombs indireto). Para a tipagem utiliza-se anticorpos (aglutininas) anti-A ou anti-B e anti-D que se ligaro nos determinantes antignicos A, B e D respectivamente presentes nas hemcias (aglutinognios). Estes aglutinognios esto presentes num grande nmero de cpias na superfcie das hemcias levando as clulas a se ligarem cruzadamente entre si quando da ligao do anticorpo especfico. Estas ligaes cruzadas ocorrem pela interao das clulas pela ligao simultnea de uma mesma molcula de anticorpo em clulas diferentes, j que cada molcula de Ig possui pelo menos dois stios de ligao ao antgeno. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS: 1.Harmening,D. Tcnicas Moderna em Banco de Sangue e Transfuso. Rio de Janeiro, Editora Revinter Ltda, 1992 2.Melo,L e col. Imunohematologia Eritrocitria - STD - Sociedade Brasileira de Hematologia e Hemoterapia, 1996 3.Novaretti,M.C.Z. Sistema de Grupo Sanguneo ABO . Hematologia Hemoterapia . 1: 3616, 1996

4. Novaretti,M.C.Z. Sistema de Grupo Sanguneo Rh . Hematologia Hemoterapia . 1: 1016, 1996. 5.Oliveira,M.C. ; Ges,S.M , Imunologia Eritrocitria - Prticas, Rio de Janeiro, MEDSI , 1998. 6. Ortho Diagnostics, Antgenos e anticorpos aplicados aos sistemas ABO e Rh, 3a edio, 1978. 7.Verrastro,T. e col. Hematologia e Hemoterapia . Fundamentos de Morfologia, Fisiologia, Patologia e Clinica. Editora Atheneu, 1996. 8. Janeway, C.A. e cols Imunobiologia: O sistema imune na sade e na doena, Editora ARTMED, 2002.

PROCEDIMENTO Cada aluno que desejar fazer a determinao de seu grupo sanguneo ABO e Rh deve pegar uma lmina de microscpio limpa no laboratrio; Utilizando uma lanceta estril coletar trs gotas de sangue do dedo colocando uma ao lado da outra na lmina de microscpio; Utilizando o prprio conta-gotas dos anticorpos comerciais (e tomando o cuidado para no contaminar estes conta-gotas com o sangue da lmina), colocar uma gota de anticorpo monoclonal anti-A (colorao azul) em uma gota de sangue, uma gota de anticorpo monoclonal anti-B (colorao amarela) na outra gota de sangue e uma gota do anticorpo anti-D na terceira gota de sangue; Utilizando u mmisturador, homogeneizar o sangue com o anticorpo adicionado Verificar ou no a aglutinao, cuja positividade vai indicar a presena do antgeno contra o qual o anticorpo est reagindo.