Alunos: Adeildes Guedes Aline Ariadne Vanessa Fabio do Carmo Juliana Xavier Osias Sousa Rosa Cristina Paulo

Arago

Relatrio de Microbiologia

Braslia, 2011

1. ELISA (Enzyme Linked ImmunonoSorbent Assay)

Traduzindo para o portugus ELISA Ensaio Imunoabsorvente Ligado Enzima. Esse mtodo foi desenvolvido nos anos 1970 e tem o objetivo de detectar antgenos como hormnios, drogas, marcadores tumorais, alrgenos, etc e anticorpos contra bactrias, vrus, fungos e protozorios. Essa tcnica realizada com o auxilio de uma placa contendo 96 poinhos existindo trs mtodos.

Tipos de Elisa:

1 Mtodo competitivo:

utilizado na deteco de antgenos e anticorpos, na placa devem ser fixados os antgenos depois adicionados os anticorpos (soro estudado) e logo aps acrescentado anticorpos marcado com uma enzima para a formao da cor quando positiva a reao.

2 Mtodo indireto:

utilizado na deteco de anticorpos na placa fixados na parede dos poinhos, acrescentado o soro em estudo, logo aps adicionado os anticorpos marcados com enzimas. A presena de cor se d pela reao entre o anticorpo marcado com substrato fazendo com que o cromgeno mude de cor.

3 Mtodo sanduche ou Mtodo direto:

utilizado na deteco de um antgeno que fica entre dois anticorpos assim o primeiro anticorpo especifico fixado na superfcie do poinho logo aps adicionado o antgeno (amostra em estudo) depois um anticorpo especifico marcado com uma enzima adicionado, essa enzima reage com o substrato fazendo com que o cromgeno mude de cor. Essa reao de cor possvel em todos os mtodos citados acima devido a reao qumica entre um anticorpo marcado com uma enzima com um substrato sendo assim os anticorpos mais utilizados: o cido 5-aminosaliclico (castanho), o 2,2-diazino (3-etilbenzotiazolino-6cido

sulfnico-ABTS) (verde) e a tetrametilbenzidina-TMB (azul). Essa cor pode ser lida atravs de um aparelho chamado espectrofotmetro que mostra valores de absorbncia conforme a concentrao possibilitando assim resultados qualitativos e quantitativos, quanto mais antgenos ou anticorpos se ligarem maior ser a concentrao, tendo assim muita absoro de luz ento a absorbncia ser baixa. O espectrofotmetro um aparelho utilizado para medir a absorbncia, ou seja, a quantidade de luz que absorvida pela soluo. Este aparelho foi inventado por um americano chamado Arnold O. Beckman, em 1940.

2. MATERIAIS: 1-EPIs (jaleco e luvas) para proteo individual; 2-Kit Chagatest HAI para deteco do anticorpo; 3-Placas de ELISA para a realizao do teste; 4-Pipetas semi automticas e ponteiras para a transferncia de pequenos volumes (l); 5-Tubos de hemlise serviram para a diluio do soro no tampo

3. MTODO: Hematoaglutinao indireta para a deteco do anticorpo Trypanosoma cruzi.

Foram realizados os seguintes passos: 1-Separao de todo material a ser utilizado; 2-Diluio do soro (usamos somente o controle positivo e o controle negativo) 200l de tampo pra 10l de soro. 3-Pipetar em um poinho 55l da diluio conforme a identificao Homogeneizar por 5mim e deixar incubar por 1h;

ATENO! A identificao pode ser feita de acordo com numerao e/ou pela ordem alfabtica contida na placa.

Fonte: Google imagens

4-O resultado pode ser observado a olho nu.

4. RESULTADOS E CONCLUSO Como esse teste foi realizado com o controle negativo e o positivo foi ntido o resultado.
Negativo, pois no houve ligao das hemcias com o anticorpo presente na superfcie do poinho Positivo, pois ligao das com o presente na do poinho. houve a hemcias anticorpo superfcie

Concluso Atualmente o teste utilizado como diagnstico nos laboratrios o ELISA, pois ele tem a capacidade de oferecer resultados rpidos, porm ele tambm oferece desvantagens, uma vez que: como ele apenas qualitativo e no quantitativo ele informa apenas se o paciente teve ou no a patologia, sendo necessrio em caso positivo uma anlise quantitativa da patologia. Dessa forma para uma deteco quantitativa, utilizam-se testes de biologia molecular como, por exemplo, o PCR que detectam a presena do DNA ou RNA viral. Existem vrios tipos de teste ELISA, mas o que foi utilizado em nossa aula prtica foi o indireto que sua forma mais simples. Como foi utilizado um teste que continha um controle positivo e negativo o resultado foi bem ntido, e dessa forma observou-se que: a amostra com o resultado positivo obteve uma ligao de hemcias, fazendo com que as mesmas ficassem na superfcie da placa, enquanto as com o resultado negativo as hemcias precipitaram para o fundo da placa, pois no houve ligao de antgeno-anticorpo.

5. BIBLIOGRAFIA

http://www.wiener-lab.com.ar/wienerw/br/chagas.vsp http://www.patologias.net/2010/05/teste-elisa-2/ http://imunologiahematologia.wordpress.com/2010/01/26/elisa/ http://www.portaleducacao.com.br/farmacia/artigos/6972/reacaoimunoenzimatica-elisa

http://www.infoescola.com/materiais-de-laboratorio/espectrofotometro/