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Metabolismo do Nitrognio

O nitrognio um elemento essencial encontrado em protenas, em cidos nuclicos e em outras biomolculas. Apesar do importante papel que exerce nos organismos vivos, o nitrognio utilizado biologicamente escasso. Embora o nitrognio molecular (N 2 ) seja abundante na biosfera, ele quase inerte quimicamente. Portanto, a converso do N 2 para a forma utilizvel necessita gasto de energia. Certos microorganismos podem reduzir o N 2 para formar NH 3 (amnia). As plantas e os microorganismos absorvem NH 3 e NO3 (on nitrato), o produto de oxidao da amnia. As duas molculas so usadas para a sntese de biomolculas contendo nitrognio. Os animais no sintetizam molculas contendo nitrognio a partir de amnia e nitrato. Em lugar disso, eles obtm nitrognio orgnico, (principalmente aminocidos) da dieta. Em uma complexa srie de vias, os animais usam o nitrognio dos aminocidos para sintetizar vrios compostos orgnicos. O nitrognio encontrado em inmeras biomolculas, como por exemplo, aminocidos, bases nitrogenadas, porfirinas e alguns lipdeos. Muitos metablitos contendo nitrognio so necessrios em pequenas quantidades (ex.: aminas biognicas e glutationa).

11.1 Fixao de nitrognio


Vrias circunstncias limitam a utilizao do nitrognio atmosfrico nos seres vivos. Devido a estabilidade qumica do nitrognio molecular atmosfrico, a reduo do N 2 at on amnio ( NH + ) (denominado fixao 4 do nitrognio) necessita de grande quantidade de energia. Por exemplo, no mnimo 16 ATP so necessrios para reduzir um N 2 a duas NH 3 . Alm disso, somente alguns procariotos podem fixar nitrognio. Entre eles esto as bactrias (Azotobacter vinelendii e Clostridium pasteurianum), as cianobactrias (Nostoc muscorum e Anabaena azollae) e as bactrias simbiontes (vrias espcies de Rhizobium) localizadas em ndulos de razes de plantas leguminosas como soja e alfafa. As espcies fixadoras de nitrognio possuem um complexo da nitrogenase, cuja estrutura consiste de duas protenas chamadas dinitrogenase e dinitrogenaseredutase. A dinitrogenase (MoFeprotena) um 2 2 -heterotetrmero que contm dois tomos de molibdnio (Mo) e 30 tomos de ferro. A dinitrogenaseredutase (Feprotena) um dmero de

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subunidades idnticas. O complexo da nitrogenase catalisa a produo de amnia a partir do nitrognio molecular:
N 2 + 8H + + 8e + 16 ATP + 16 H 2 O

2NH 3 + H 2 + 16ADP + 16P i

So necessrios oito eltrons para a reao: seis para a reduo do N 2 e dois para produzir H 2 . Os dois componentes do complexo da nitrogenase so inativados irreversivelmente pelo oxignio e, porisso, muitas bactrias fixadoras de oxignio ficam confinadas em ambientes anaerbicos. Em condies fisiolgicas, a amnia existe principalmente na forma protonada, NH + (on amnio) (pK 9,25). 4 A. Nitrificao e desnitrificao O nitrognio biologicamente til tambm obtido a partir do on nitrato ( NO3 ) presente na gua e no solo. O nitrato reduzido a on amnio pelas plantas, fungos e muitas bactrias. Primeiro, a nitratoredutase catalisa a reduo de dois eltrons do on nitrato a on nitrito ( NO ): 2
NO3 + 2H + 2 e
+

NO + H 2 O 2 NH + + 2H 2 O 4

A seguir, a nitritoredutase converte o nitrito a on amnio:


NO + 8H + 6e 2
+

O nitrato tambm produzido por certas bactrias que oxidam o NH + a 4


e a seguir at NO3 , em processo chamado nitrificao. Outros organismos convertem o on nitrato e o on nitrito de volta a N 2 para a atmosfera, em mecanismo chamado desnitrificao. Todas essas reaes constituem o ciclo do nitrognio. (Figura 11.1).

NO 2

N2

Desnitrificao

Nitrato NO3 Fixao do nitrognio


Nitrogenase Nitrato redutase

Nitrito NO2
Nitrito redutase
+ NH4

Nitrificao

Aminocidos Nucleotdeos Fosfolipdeos


Figura 11.1

11 Metabolismo do nitrognio Ciclo do nitrognio. A fixao do nitrognio converte N 2 em on amnio til biologicamente. O nitrato tambm pode ser convertido a on amnio. A amnia transformada de volta a N 2 por nitrificao seguida por desnitrificao.

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B. Incorporao de ons amnio em aminocidos Existem duas vias principais para a incorporao de ons amnio para formar aminocidos e, a seguir, outras biomolculas: (1) aminao redutiva de cetocidos e (2) formao de amidas de cido asprtico e de cido glutmico com a subsequente transferncia do nitrognio amida para formar outros aminocidos. A glutamato desidrogenase, uma enzima encontrada na mitocndria e citoplasma de clulas eucariticas e em algumas bactrias, catalisa a incorporao de ons amnio ao cetoglutarato:
COO
C

NAD(P)H,H + NADP +
+ NH 4 +

COO H3 N
+ C

H + H2 O

CH2 CH2 COO -Cetoglutarato

Glutamato-desidrogenase

CH2 CH2 COO Glutamato

Em eucariotos, a desidrogenase tambm libera ons amnio para a excreo de nitrognio a partir do glutamato proveniente, sobretudo, das reaes de transaminao. Como a reao reversvel, o excesso de amnia promove a sntese de glutamato. A glutamatodesidrogenase uma enzima alostrica ativada pelo ADP e o GDP, e inibida pelo ATP e o GTP. Os ons amnio so tambm incorporados ao glutamato para formar glutamina em presena da glutamina sintetase, enzima encontrada em todos os organismos. Nos microrganismos, um ponto crtico de entrada para a fixao de nitrognio. Em animais, a principal via de converso de ons amnio compostos altamente txicos em glutamina para ser transportada no sangue. Na primeira etapa da reao, o ATP doa um grupo fosforil para o glutamato. A seguir, os ons amnio reagem com o intermedirio (glutamilfosfato), deslocando o P i para produzir glutamina.
COO H3 N
+

COO H3 N ATP ADP


+

COO H3 N
+ NH 4 +

C CH2 CH2 C

C CH2 CH2 C

H Pi

C CH2 CH2 C

OPO2 3

NH2

Glutamato

-Glutamil-fosfato

Glutamina

O nome sintetase indica que o ATP consumido na reao. O crebro, uma fonte rica em glutaminasintetase, especialmente sensvel aos efeitos txicos de ons amnio. As clulas do crebro convertem ons amnio em glutamina, uma molcula neutra e notxica.

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A glutamina , ento, transportada ao fgado, onde ocorre a produo de compostos nitrogenados para a excreo. Em muitos organismos, a glutamina e o glutamato esto presentes em concentraes mais elevadas que outros aminocidos, o que consistente com seu papel de carreador de aminocidos. Sendo assim, a atividade da glutaminasintetase fortemente regulada para manter o suprimento adequado de aminocidos. Por exemplo, a glutaminasintetase dodecamrica da E. Coli regulada alostericamente e por modificao covalente. Em bactrias e vegetais, a enzima glutamato sintase catalisa a aminao redutiva do cetoglutarato empregando a glutamina como doadora de nitrognio e o NADH 2 como doador de eltrons (exemplo, em razes e sementes) e, em algumas plantas, a ferrodoxina reduzida (exemplo, em folhas):
NADPH + NADP + H+
Glutamato sintase

COO O C CH2 CH2 COO O


-Cetoglutarato

COO H3 N +
+

COO H3 N
+

COO H3 N +
+

C CH2 CH2 C

C CH2 CH2

C CH2 CH2

COO NH2 Glutamato

COO

Glutamina

(as reaes catalisadas pelas sintases no requerem ATP). O resultado das reaes da glutaminasintetase e glutamatosintase Cetoglutarato + NH + + NADPH + ATP 4 glutamato + NADP + + ADP + P i Em resumo, a ao combinada das duas reaes incorpora o nitrognio (on amnio) em um composto orgnico (cetoglutarato, um intermedirio do ciclo do cido ctrico) para produzir aminocidos (glutamato). Os mamferos no possuem a glutamatosintase, mesmo assim, as concentraes de glutamato nesses organismos so relativamente altas porque o aminocido produzido por outras reaes.

11.2 Transaminao
As transaminases (tambm chamadas aminotransferases) catalisam a transferncia reversivel de grupos amino de um aminocido para um cetocido para produzir um cetocido do aminocido original e um novo aminocido. Por exemplo:

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COO H3 N
+

COO COO + O C CH3 Piruvato ( -Cetocido)


Transaminase

C CH2 CH2

C CH2 CH2 COO + H3 N


+

COO C CH3 Alanina (Aminocido) H

COO Glutamato (Aminocido)

-Cetoglutarato ( -Cetocido)

As transaminases requerem piridoxal5fosfato (PLP) como coenzima. Este composto a forma fosforilada da piridoxina (vitamina B 6 ):
H
2 4 C 4 1+ 3 2

O H2 C OH CH3 HO H2 C N H
+

OH OH CH3

O3 P

5 H2 C

5 6

N H

Pirodoxal-5fosfato (PLP)

Pirodoxina (vitamina B6 )

A PLP est covalentemente ligada ao stio ativo da enzima via base de Schiff (RCH=NR, uma aldimina) ligada ao grupo -amino do resduo de lisina:
Enzima CH2 CH2 CH2 CH2 H C
2

N+

H O

O3 PO

CH2 N H Enzima-PLP (base de Schiff)


+

CH3

Foras estabilizadoras adicionais incluem interaes inicas entre as cadeias laterais de aminocidos e o anel piridinium e o grupo fosfato. As reaes de transaminao exercem papeis centrais tanto na sntese como degradao dos aminocidos. Alm disso, essas reaes envolvem a interconverso de aminocidos a piruvato ou cidos dicarboxlicos, e atuam como ponte entre o metabolismo dos aminocidos e os carboidratos.

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H H R C
+

Enzima

H C

O C O + O

O P O N+ H2 O O

H OH CH3

H NH3 -Aminocido H R O O P O N+ H H R O O P O N+ H Cabnion H+ H+ CH3 O C C O C O CH3 H+ H+ O C H C


+

O C O

H2 O

H Piridoxal-fosfato

H N HC H O

Base de Schiff

H R O O P O N+ O C C

O C O

H N+ HC H O

H N+ HC H O CH3

H Intermedirio quinonide

H R O O P O N+ H H2 O H R C H -Cetocido O C O C O + O H2 O O C C
+

O C O

H N H2 C H O CH3

NH2 O P O N+ H
Figura 11.2 Papel do piridoxal -5-fosfato na transaminao.

CH2 O O Piridoxamina-fosfato CH3

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11.3 Aminocidos essencias e noessencias


Os aminocidos diferem de outras classes de biomolculas pois cada membro sintetizado por via nica. Apesar da diversidade das vias sintticas, o esqueleto carbonado de cada aminocido derivado dos mesmos intermedirios metablicos: o piruvato, o oxalacetato, o cetoglutarato e o 3fosfoglicerato. A tirosina, sintetizada a partir da fenilalanina, uma exceo. Os aminocidos sintetizados em quantidades suficientes por mamferos a partir da amnia e de esqueletos carbonados, so denominados noessenciais; ou seja, eles esto disponveis para as clulas mesmo quando no includos na dieta. Por outro lado, os aminocidos essenciais so aqueles no sintetizados ou sintetizados em velocidade inadequada s necessidades metablicas do organismo e, portanto, devem ser ingeridos na dieta. Os aminocidos essenciais e noessenciais esto listados na Tabela 11.1.
Tabela 11.1 Aminocidos essenciais e no essenciais no homem Essenciais Arginina Histidina* Isoleucina Leucina Lisina Metionina Fenilalanina Treonina Triptofano Valina No essenciais Alanina Asparagina Aspartato Cistena Glutamato Glutamina Glicina Hidroxiprolina Prolina Serina Tirosina

* A histidina essencial no mnimo at os 12 anos de idade As fontes exgenas de protenas diferem consideravelmente em suas propores de aminocidos essenciais. Em geral, os aminocidos essncias so encontrados em maior quantidade em protenas de origem animal (exemplo, carne, leite e ovos). As protenas vegetais muitas vezes so carentes de um ou mais desses aminocidos. Por exemplo, a gliadina (protena do trigo) tem quantidade insuficiente de lisina enquanto a zena (protena do milho) tem baixo contedo de lisina e triptofano. Como as protenas vegetais diferem em sua composio de aminocidos, possvel obter aminocidos essenciais em quantidades apropriadas a partir da combinao de diversos vegetais. Por exemplo, o feijo (metionina baixa) associado com cereais (lisina baixa). As rotas biossintticas para a produo de aminocidos noessenciais so descritas a seguir. Ao considerar estes processos, deve-se compreender que se algum destes aminocidos for excluido da dieta, pode ocorrer uma elevada demanda de aminocidos essenciais, pois parte destes ltimos so utilizados na sntese de noessenciais. Por exemplo, a tirosina classificada como noessencial pois formada a partir da fenilalanina. Entretanto, na ausncia de tirosina exgena, a quantidade de fenilalanina necessria aumenta significativamente.

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A. Biossntese de aminocidos noessenciais Em mamferos, os aminocidos noessenciais so sintetizados a partir de vrias fontes, tais como, os aminocidos essenciais (tirosina por hidroxilao da fenilalanina) ou de intermedirios metablicos comuns: o piruvato, o oxalacetato, o cetoglutarato e o 3fosfoglicerato. Alguns aminocidos so formados por reaes de transaminao. Por essa via, a alanina produzida a partir do piruvato, o glutamato a partir do cetoglutarato e o aspartato a partir do oxaloacetato. A glutaminasintetase catalisa a amidao do glutamato para produzir glutamina. A asparaginasintetase, emprega a glutamina como doador de grupo amino e converte o aspartato em asparagina:
Glutamina + ATP Glutamato + AMP + PPi

COO H3 N
+

COO H3 N
+

C CH2 C

H
Asparagina-sintetase

C CH2 C

O O Aspartato

O NH2 Asparagina

Somente trs intermedirios metablicos (piruvato, oxaloacetato e cetoglutarato) fornecem cinco dos dez aminocidos noessenciais por reaes de transaminao e amidao. Vias mais complexas convertem glutamato em prolina e arginina:
COO H3 N
+

C CH2 CH2

COO H3 N
+

CH2 NH C H2 N NH2
+

C CH2 CH2

COO Glutamato

Arginina

COO C HN H CH2

H2 C CH2 Prolina

A serina tem como precursor a 3fosfoglicerato, um intermedirio da gliclise. A sntese ocorre em trs reaes:

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COO H C OH

NAD+

NADH

COO C OH

Glutamato -Cetoglutarato H3 N
+

COO C H

Pi H3 N
+

COO C CH2 OH Serina H

CH2 OPO2 3 3-Fosfoglicerato

CH2 OPO2 3 3-Fosfohidroxipiruvato

CH2 OPO 2 3 3-Fosfosserina

A serina, um aminocido com trs carbonos, produz glicina com dois carbonos em reao catalisada pela serinahidroximetiltransferase (a reao reversa converte glicina em serina). A enzima emprega um mecanismo dependente de piridoxal5fosfato (PLP) para remover o grupo hidroximetil (CH 2 OH) ligado ao carbono da serina; o fragmento de um carbono ento transferido para o cofator tetrahidrofolato (THF) (ver Seo 11.11.b).
COO H3 N
+

Tetraidrofolato Metileno-tetraidrofolato
Serina-hidroximetil-transferase

COO H3 N
+

C H

CH2 OH Serina

Glicina

O esqueleto carbonado da serina utilizado para a sntese de cistena. A reao envolve a condensao da serina com a homocistena para formar cistationina que por clivagem produz cistena, cetobutirato e amnia. Estas reaes so catalisadas pela cistationinasintetase e cistationina liase, respectivamente:
COO H3 N
+

COO
+

H2 O H3 N
+

COO C CH2 S Cistationina H H3 N


+

COO C CH2 CH2 H

H2 O

+ NH 4

COO H3 N
+

COO C CH2 CH3 -Cetobutirato

C CH2 OH

H + H3 N

C CH2 CH2 SH

C CH2 SH

H + O

Serina

Homocistena

Cistena

A homocistena derivada da metionina pela formao do intermedirio Sadenosilmetionina. A transferncia do grupo metila deste ltimo, libera a Sadenosilhomocistena, que clivada homocistena. Enquanto os carbonos da cistena so derivados da serina, o enxfre obtido unicamente a partir da metionina (em processo denominado transsulfurao). Restrio de cistena na dieta deve ser compensada por um aumento na ingesto de metionina. B. Biossntese de aminocidos essencias Os aminocidos essenciais so sintetizados por vias que necessitam vrias etapas. Em algum ponto da evoluo, os animais perderam a capacidade de sintetizar esses aminocidos, provavelmente porque as vias consumiam muita energia e os compostos j existiam em alimentos. Em

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resumo, os humanos no sintetizam aminocidos ramificados ou aromticos e, tambm, no incorporam enxfre em compostos como a metionina. Foi descrito acima que a sntese da cistena em mamferos necessita um tomo de enxfre derivado, em ltima instncia, da metionina. Em bactrias, a sntese de metionina requer um tomo de enxfre derivado da cistena. O enxfre proveniente do sulfeto inorgnico substitui o grupo acetila da O acetilserina (obtida por acilao da serina) para produzir cistena..
O H3 C COO H3 N
+

SCoA CoASH H3 N
+

COO C CH2 H O O C

S 2 + H + CH3 COO H3 N CH3


+

COO C CH2 Cistena H SH

C CH2 Serina

H OH

O-Acetilserina

A cistena doa, ento, o tomo de enxfre para a homocistena, cujo esqueleto de quatro carbonos derivado do aspartato. A etapa final da sntese da metionina catalisada pela metioninasintase, que adiciona homocistena um grupo metila transportado pelo tetrahidrofolato;
COO H3 N
+

Metil-tetraidrofolato Tetraidrofolato

COO H3 N
+

C CH2 CH2 SH

C CH2 CH2 S CH3

Homocistena

Metionina

Em humanos, nveis elevados de homocistena no sangue esto associados com a doena cardiovascular. A relao foi inicialmente descoberta em indivduos com homocistinria, uma desordem em que o excessso de homocistena excretada na urina. Esses indivduos desenvolvem aterosclerose ainda crianas, provavelmente porque a homocistena danifica diretamente as paredes dos vasos sangneos mesmo em ausncia de teores elevados de LDL. Aumentos na ingesto de folato, a vitamina precursora do tetraidrofolato, reduz o nvel de homocistena pela sua converso em metionina. O aspartato, precursor da metionina, tambm o precursor dos aminocidos essenciais treonina e lisina. Como esses aminocidos so derivados de outro aminocido, eles j possuem o grupo amino. Os aminocidos alifticos (valina, leucina e isoleucina) so sintetizados por vias que empregam o piruvato como substrato inicial. Esses aminocidos necessitam uma etapa catalisada por transaminase (com glutamato como substrato) para introduzir o grupo amino. Em plantas e bactrias, a via de sntese de aminocidos aromticos (fenilalanina, tirosina e triptofano) inicia com a condensao do fosfoenolpiruvato (um intermedirio glicoltico com trs carbonos) com a eritrose4fosfato (um intermedirio de quatro carbonos na via pentosefosfato). O produto da reao com sete carbonos cicliza e sofre

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modificaes adicionais, incluindo a adio de mais trs carbonos do fosfoenolpiruvato, para formar o corismato, o intermedirio comum na sntese dos trs aminocidos aromticos.
O C C CH2 Fosfoenolpiruvato + O C H H C C OH OH H HO H H Pi OPO 2 3 O C C CH2 C C C H OH OH OH Corismato O O O Fosfoenolpiruvato Pi COO CH2 C COO O

2 CH2 OPO3

CH2 OPO2 3

Eritrose-4-fosfato

Como os animais no sintetisam o corismato, essa via alvo de agentes que podem inibir o metabolismo de plantas sem afetar os animais. Por exemplo, o herbicida glifosato (Roundup ) compete com o segundo fosfoenolpiruvato na via que produz corismato.
O C C CH2 Fosfoenolpiruvato
2 OPO3

O C CH HN

CH2 OPO2 3 Glifosato

As duas reaes finais da via biossinttica do triptofano (que tem 13 etapas) so catalisadas pela triptofanosintase, uma enzima bifuncional com uma estrutura quaternria 2 2 . A subunidade cliva o indol3glicerolfosfato gerando indol e gliceraldedo3fosfato. A seguir, a subunidade adiciona serina ao indol para produzir triptofano.
COO OH OH C C N H H C H C H CH2 OPO2 3 N H Indol N H Triptofano Gliceraldedo 3-fosfato H3 N Serina H2 O
+

C CH2

Indol-3-glicerol-fosfato

Indol, o produto da reao da subunidade e o substrato para a reao da subunidade , nunca se separa da enzima. Em vez disso, o intermedirio indol se difunde entre os dois stios ativos, no escapando para o solvente circundante. Esse fenmeno, no qual o intermedirio de duas reaes

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diretamente transferido de um stio ativo a outro, chamado canalizao e aumenta a velocidade do processo ao evitar a perda de intermedirios. Somente um dos aminocidospadro no sintetizado a partir das principais vias que metabolizam os carboidratos: a histidina, para o qual, o ATP fornece um nitrognio e um tomo de carbono. O glutamato e a glutamina doam os outros dois tomos de nitrognio e os restantes cinco carbonos so derivados do 5fosforribosilpirofosfato (PRPP).
NH 2 N HC N N N Ribose-trifosfato ATP +
2

Glutamina Glutamato

COO H3 N
+

C CH2 C

O3 P

CH2 C H H C HO

HN H H C OH C O P P HC

CH N

Histidina

5-Fosforribosil pirofosfato (PRPP)

O 5fosforribosilpirofosfato tambm fonte de ribose para os nucleotdeos. Isso sugere que a histidina talvez tenha sido um dos primeiros aminocidos sintetizados nos primrdios da vida realizando a transio de um metabolismo todoRNA para um RNAeprotena.

11.4 Biossntese de nucleotdeos


Os nucleotdeos so sintetizados a partir de precursores metablicos: aminocidos, ribose5fosfato, CO 2 e NH 3 (via de novo) . O organismo humano tambm recicla nucleotdeos a partir dos produtos de degradao de cidos nuclicos e de co-fatores nucleotdeos (via de recuperao). Apesar do suprimento alimentar de nucleotdeos, as vias biossintticas e de recuperao so to eficientes que no h necessidade de purinas e pirimidinas da dieta. Nessa seo sero examinados algumas vias biossintticas dos nucleotdeos purnicos e pirimidnicos em mamferos. Os nucleotdeos de purina (AMP e GMP) so sintetizados a partir da ribose5fosfato (produto da via pentosefosfato) para formar 5fosforribosilpirofosfato (que tambm precursor da histidina):

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O3 P

CH2 H H OH

O H OH

H OH

ATP

AMP

O3 P

CH2 H H OH

O H OH

H O O O P O O O P O

Ribose-fosfato pirofosfocinase

Ribose-5-fosfato

5-Fosforibosil-pirofosfato

As subsequentes dez etapas da via requerem como substratos a glutamina, a glicina, o aspartato, o bicarbonato alm de grupos formil (HC=O) doados pelo tetraidrofolato. O produto a inosina monofosfato (IMP), um nucleotdeo cuja base a purina hipoxantina:
HCO3 O Aspartato Formil-tetraidrofolato
2

HN HC O

Glicina C N C N CH Formil-tetraidrofolato

Glutamina

O3 P

CH2 H H OH

H OH

Inosina-monofosfato (IMP)

O IMP o substrato para duas vias curtas que produzem AMP e GMP. Na sntese de AMP, um grupo amino do aspartato transferido para a purina; na sntese de GMP, o glutamato a fonte do grupo amino. As cinases ento catalisam as reaes de transferncia de grupos fosforil para converter os nucleosdeos monofosfatos em difosfatos e, a seguir, em trifosfatos (ATP e GTP). A Figura 11. 3 indica que a GTP participa da sntese de AMP, enquanto o ATP participa na sntese de GMP. Altas concentraes de ATP, portanto, promovem a produo de GMP, enquanto altas concentraes de GTP promovem a produo de AMP. Essa relao recproca um mecanismo de controle da produo dos nucleotdeos adenina e guanina. (Como a maioria dos nucleotdeos destinam-se para a sntese de DNA e RNA, eles so necessrios em quantidades aproximadamente iguais). A via que produz AMP e GMP tambm regulada por retroinibio em vrios pontos, incluindo a primeira etapa, a produo de 5fosforribosilpirofosfato a partir da ribose5fosfato, que inibida tanto pelo ADP como pelo GDP.

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H N

O N N N Ribose-5-fosfato IMP

Aspartato + GTP GDP + Pi OOC CH2 CH NH N N N N Ribose-5-fosfato COO

NAD+ + H2 O NADH + H + O N O N N N Ribose-5-fosfato

Adenilosuccinato Fumarato NH2 N N N N Ribose-5-fosfato AMP


Figura 11.3 Sntese de AMP e GMP a partir do IMP.

H Xantosina-monofosfato (XMP) Glutamina + ATP + H2 O Glutamato + AMP + PPi H N H2 N N H O N N Ribose-5-fosfato GMP

Em contraste aos nucleotdeos das purinas, os nucleotdeos das pirimidinas so sintetizados como uma base subsequentemente ligada ao 5fosforribosilpirofosfato para formar o nucleotdeo. A via de seis etapas que forma a uridina monofosfato (UMP) necessita glutamina, aspartato e bicarbonato.

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O Glutamina HCO3 O H OH O HN C C N CH CH

Aspartato

O3 P

CH2 H H OH

Monofosfato de uridina (UMP)

A UMP fosforilada para formar UDP e, a seguir, UTP. A CTPsintetase catalisa a aminao de UTP a CTP, usando a glutamina como doador do grupo amino:
H N O O H OH CTP N Glutamina ATP + H2 O H Glutamato ADP + Pi P P P H2 C H H OH O H OH O O N N NH2

H2 C H H OH UTP

CTP-sintetase

A via de sntese de UMP em mamferos regulada principalmente por retroinibio pelo UMP, UDP e UTP. O ATP ativa a enzima que catalisa a primeira etapa. Isso ajuda a equlibrar a produo de nucleotdeos purnicos e pirimidnicos. At aqui, foram descritas as snteses de ATP, GTP, CTP e UTP, que so substratos para a sntese de RNA. O DNA sintetizado a partir de desoxinucleotdeos, que so formados pela reduo de ribonucleosdeos difosfatoatos ADP, GDP, CDP e UDP seguido de pela fosforilao de desoxinucleosdeo difosfatos a desoxinucleosdeo trifosfatos. A dUTP no usada para a sntese de DNA. Em vez disso, ela rapidamente convertida em nucleotdeos timina (que previne a incorporao acidental de uracila ao DNA). Inicialmente, a dUTP hidrolizada a dUMP. A seguir, a timidilatosintase adiciona um grupo metila ao dUMP para produzir dTMP, usando o metilenotetraidrofolato como doador de metila.

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H N O

O H + N H P H O Desoxirribose dUMP H2 N N N

H N
5

CH2 H CH2 N
10

N H2 C

R N 5, N 10-Metileno-tetraidrofolato
Timidilato sintase

H N O

O CH3 + N H P H O Desoxirribose dTMP H2 N N N

H N CH2 N CH2 HN R

Diidrofolato

A reao da serinahidroximetiltransferase a principal fonte de metilenotetraidrofolato. Na converso do grupo metileno (CH 2 ) a grupo metila (CH 3 ), a timidilatosintase converte o co-fator tetraidrofolato diidrofolato. A enzima diidrofolatoredutase dependente de NADH regenera, ento, o cofator tetraidrofolato reduzido. Finalmente, dTMP fosforilado para produzir dTTP, substrato para a DNApolimerase. (Ver Captulo 13). Como as clulas cancergenas sofrem rpida diviso celular, as enzimas da sntese de nucleotdeos, incluindo a timidilatosintase e a diidrofolatoredutase, so altamente ativas. Os compostos que inibem essas reaes so usados na terapia contra o cncer. Por exemplo, o anlogo da dUMP, a 5fluorodesoxiuridilato, inativa a timidilatosintase. Antifolatos como o metotrexato so inibidores competitivos da diidrofolatoredutase pois competem com o diidrofolato pela ligao com a enzima. Em presena de metotrexato, a clula cancergena no regenera o tetraidrofolato necessrio para a produo de dTMP e a clula morre. Muitas clulas no cancergenas, cujo crescimento mais lento, no so to sensveis ao efeito do medicamento.

11.5 Catabolismo dos aminocidos


Aps remoo dos grupos amino, as cadeias carbonadas dos aminocidos so degradadas para atender 10-15% das necessidades energticas do organismo. Segundo a natureza dos produtos de degradao, os aminocidos podem ser classificados como glicognicos (precursores da gliconeognese) e/ou cetognicos (produtores de corpos cetnicos)(Tabela 11.3).

11 Metabolismo do nitrognio

335

Tabela 11.3 Aminocidos glicognicos e cetognicos Glicognicos Alanina Arginina Asparagina Aspartato Glicina Cistena Glutamato Glutamina Histidina Metionina Prolina Serina Valina Cetognicos Leucina Lisina Glicognicos e cetognicos Fenilalanina Isoleucina Tirosina Treonina Triptofano

Ao examinar a Tabela 11.3 verifica-se que todos os aminocidos, exceto leucina e lisina, no mnimo parcialmente, so glicognicos; todos os aminocidos no essenciais so glicognicos; e os esqueletos dos aminocidos aromticos so tanto glicognicos como cetognicos. Trs aminocidos so convertidos a substratos glicognicos por transaminao (o reverso de suas reaes biossintticas): alanina a piruvato, aspartato a oxaloacetato, e glutamato a cetoglutarato. O glutamato pode tambm ser desaminado em reao de oxidao (ver Seo 11.1.B). A asparagina forma aspartato por desaminao, que produz, ento, oxaloacetato por transaminao.
COO H3 N
+

COO H2 O
+ NH 4

C CH2 C O

H3 N

C CH2 C O O

-Cetoglutarato Glutamato
Transaminase

COO O C CH2 C O O

Asparaginase

NH2

Asparagina

Asparato

Oxaloacetato

Do mesmo modo, a glutamina desaminada a glutamato e, ento, desaminada a cetoglutarato. A serina convertida em piruvato por desaminao:
COO H3 N
+ + NH 4

COO C O

C CH2 Serina

H OH

CH3 Piruvato

336

MOTTA

Bioqumica

Notar que nessa reao e na converso da asparagina e glutamina em suas contrapartes cidas, o grupo amino liberado como NH + em lugar de 4 ser transferido para outro composto. A prolina e a arginina (sintetizadas a partir do glutamato), e a histidina so catabolizadas a glutamato, posteriormente convertido a cetoglutarato. A famlia de aminocidos do glutamato, que inclui glutamina, prolina, arginina e histidina, constitui ao redor de 25% dos aminocidos da dieta, de tal modo, que suas contribuies potenciais para o metabolismo energtico significante. A cistena convertida a piruvato por um processo que libera amnia tambm como enxfre:
+ NH 4 H2 S

COO H3 N
+

H2 O

COO C O

C CH2

H SH

CH3 Piruvato

Cistena

Os produtos das reaes anteriores, piruvato, cetoglutarato so todos precursores glicognicos.


Piruvato CO2
Piruvato carboxilase

oxaloacetato

Oxaloacetato Ciclo do cido ctrico -Cetoglutarato

Gliconeognese

Glicose

A treonina glicognica e cetognica por formar acetil-CoA e glicina:


COO H3 N
+

NAD+ OH

NADH + H +

COO H3 N
+

C CH CH3

C C CH3

H O

CoASH

COO H3 N
+

C H Glicina + O

Treonina

-Amino

-Cetobutirato H3 C

SCoA

Acetil-CoA

A acetilCoA precursora de corpos cetnicos e a glicina potencialmente glicognica se for inicialmente convertida a serina pela ao da serina-hidroximetiltransferase. A principal rota de desdobramento da glicina, entretanto, catalisada por um complexo multiprotena conhecido como sistema de clivagem da glicina

11 Metabolismo do nitrognio

337

COO H3 N
+

NAD+ Tetraidrofolato

NADH
+ Metileno-tetraidrofolato + NH4 + CO2

CH2 +

Sistema de clivagem da glicina

As vias de degradao dos demais aminocidos so mais complexas. Por exemplo, os aminocidos com cadeias laterais ramificadas valina, leucina e isoleucina sofrem transaminao para as suas formas cetocidos e so, ento, ligados coenzima A, em reao de descarboxilao oxidativa. Essa etapa catalisada pelo complexo da desidrogenase do cetocido de cadeia ramificada, um complexo multienzimtico semelhante ao complexo da piruvatodesidrogenase e que compartilha as mesmas subunidades. A deficincia gentica da desidrogenase do cetocido de cadeia ramificada causa a doena da urina do xarope de bordo, na qual altas concentraes de cetocidos de cadeia ramificada so excretadas na urina que apresenta um odor caracterstico. A doena fatal caso no seja tratada com uma dieta de baixo teor de aminocidos de cadeia ramificada. As reaes iniciais do catabolismo da valina so mostrados na figura 11. . Etapas subsequentes fornecem o intermedirio do ciclo do cido ctrico, a succinilCoA. A isoleucina e degrada por uma via similar que produz succinilCoA e acetilCoA. A degradao da leucina fornece acetilCoA e o acetoacetato (corpo cetnico). A degradao da lisina segue uma via diferente, mas, tambm forma acetilCoA e acetoacetato. A degradao da metionina produz succinilCoA.

338

MOTTA

Bioqumica

+ NH3

H3 C

CH CH3

CH

COO

Valina -Cetoglutarato Glutamato O H3 C CH CH3 NAD+ + CoASH NADH + CO2 O H3 C CH CH3 Q QH2 O H3 C CH CH3
Figura 11.2 Etapas iniciais da degradao da valina.

COO

SCoA

SCoA

Finalmente, a clivagem de aminocidos aromticos fenilalanina, tirosina e triptofano fornece o acetoacetato (corpo cetnico) e tambm um composto glicognico (alanina ou fumarato). A primeira reao na via de degradao da fenilalanina sua hidroxilao a tirosina (porisso a tirosina noessencial). A reao usa a tetraidrobiopepterina (derivado da pterina) como co-fator. A tetraidrobiopepterina oxidada a diidrobiopeptirina em reao da fenilalaninahidroxilase. O cofator subsequentemente reduzido forma tetraidro por uma enzima NADHdependente.

11 Metabolismo do nitrognio

339

H H2 N N H O N N H H
8 5 7 6

O2 + H H C OH CH3 H H H H CH2 H C
+ NH3

N H C HO H

COO

Tetraidrobiopterina
Fenilalanina hidroxilase

Fenilalanina

H HN N H O N N H H H N H C HO H C OH CH3 HO H H H H

H2 O + H CH2 C
+ NH3

COO

Diidrobiopterina

Tirosina

O resumo das interrelaes entre o ciclo do cido ctrico e o metabolismo dos aminocidos mostrada na Figura 11.3.

340

MOTTA

Bioqumica

Alanina Cistena Glicina Serina Treonina Triptofano Piruvato

CO2

Isoleucina Leucina Lisina Treonina

Glicose Asparagina Aspartato

Acetil-CoA

Acetoacetato Leucina Lisina Fenilalanina Triptofano Tirosina

Oxaloacetato

Citrato

Asparato Fenilalanina Tirosina

Fumarato

Ciclo do cido ctrico

Isocitrato CO2

Succinil-CoA Isoleucina Metionina Valina

-Cetoglutarato CO2 Arginina Glutamato Glutamina Histidina Prolina

Figura 11.3 Resumo das interrelaes entre o ciclo do cido ctrico e o metabolismo dos aminocidos. Converso dos esqueletos carbonados dos aminocidos em piruvato, acetoacetato, acetil-CoA, ou intermedirios do ciclo do cido ctrico para posterior catabolismo.

11.6 Excreo do nitrognio


Os aminocidos so degradados no fgado e, em menor grau, no rim. A contribuio do msculo esqueltico mnima. No fgado, os grupos amino dos aminocidos so removidos em processo envolvendo principalmente dois tipos de reaes: transaminao e desaminao oxidativa. A. Transaminao A reao de transaminao transfere reversivelmente o grupo amino de um aminocido para o cetoglutarado em presena de transaminases (aminotransferases)(ver Seo 11.2) Aminocido + cetoglutarato cetocido + glutamato A treonina, arginina, lisina e prolina no sofrem transaminao com o cetoglutarato.

11 Metabolismo do nitrognio

341

B. Desaminao oxidativa A glutamatodesidrogenase catalisa a remoo do grupo amino como amnia livre a partir do glutamato proveniente, sobretudo, das reaes de transaminao (ver Seo 11.1.B). No fgado, a enzima est localizada na matriz mitocondrial e emprega o NAD + ou NADP + como aceptor de eltrons:
desidrogenase Glutamato + NAD + + H 2 O Glutamato

Cetoglutarato + NADH + H + + NH 3
C. L -Aminocido-oxidases
L aminocidooxidases

Pequenas quantidades de amnia so formadas pela ao das encontradas nos peroxissomas do fgado e rins. O aceptor imediato de eltrons a FMN (flavina mononucleotdeo). A FMNH 2 produzida reage com o O 2 para formar H 2 O 2 .

D. Serina e treonina-desidratases A serina e a treonina no so substratos para as reaes de transaminaes. Seus grupos amino so removidos por enzimas hepticas que necessitam piridoxalfosfato: a serina desidratase e treonina desidratase. O esqueleto carbonado produzidos nas reaes so o piruvato e o cetoglutarato, respectivamente. E. Urease bacteriana Cerca de 25% da amnia heptica produzida pela ao de ureases bacterianas intestinais sobre a uria que difunde do sangue para o lmen intestinal. A amnia liberada volta ao fgado pela circulao.

11.7 Destino da amnia


Os ons amnio formados por transaminao/desaminao oxidativa e por outras reaes, so exportados dos tecidos extrahepticos para o fgado para formar uria, um composto notxico. Os efeitos txicos dos ons amnio so provocados pela adio dos mesmos ao cetoglutarato para formar glutamato (ao reversa da glutamatodesidrogenase). Como o desvio do cetoglutarato interfere no funcionamento normal do ciclo do cido ctrico, ocorre a diminuio da oxidao de acetilCoA derivado da glicose, o principal combustvel para o crebro e, assim, elevar a formao de corpos cetnicos. Como o cetoglutarato tambm intermedirio em outros processos sua depleo altera o metabolismo normal da clula. Outros fatores pouco entendidos tambm atuam para a toxicidade de ons amnio para o crebro. So dois os mecanismos para o transporte de ons amnio dos tecidos extrahepticos para o fgado ou para os rins: a sntese de glutamina e o ciclo glicose alanina.

342

MOTTA

Bioqumica

A. Incorporao da amnia ao glutamato para formar glutamina A maioria dos tecidos sintetizam glutamina a partir do glutamato como forma de armazenamento temporrio notxico e transporte de amnia para o fgado ou para os rins. (Ver Seo 11.1.B). Glutamato + ATP [-glutamilfosfato] + NH + glutamina + P i 4 A glutamina hidrolizada no fgado e rim, a glutamato e amnia pela ao da enzima glutaminase: Glutamina + H 2 O Glutamato + NH 3 No fgado, a amnia liberada pela hidrlise utilizada na sntese de uria. No rim, alm da atividade da glutaminase para a produo de glutamato, ocorre a desaminao oxidativa desse ltimo a cetoglutarato pela ao da glutamatodesidrogenase. Portanto, duas molculas de amnia so excretadas na urina para cada glutamina transformada em cetoglutarato.
Glutamina Glutaminase glutamato desidrogenase cetoglutarato + 2NH 3
Glutamato
Glutaminase

Nos tbulos renais, a amnia protonada a ons amnio (NH 4 + ), que atuam na neutralizao de cidos metablicos na urina. A glutamina tambm exerce importante papel na biossntese de hexosaminas, aminocidos, purinas e pirimidinas. B. Ciclo glicosealanina Os ons amnio produzidos pela degradao de aminocidos nos msculos e outros tecidos, so tambm transportados ao fgado como alanina utilizando o ciclo da glicosealanina. No msculo, os ons amnio reagem com o cetoglutarato para formar glutamato pela ao da glutamatodesidrogenase. O glutamato transfere o seu grupo amino ao piruvato em presena da alaninatransaminase:
Glutamato + piruvato

cetoglutarato + alanina

Alanina transaminase

A alanina produzida transportada pelo sangue ao fgado onde transfere o seu grupo amino para o cetoglutarato por meio da alaninatransaminase, formando glutamato que, por desaminao, produz cetoglutarato e amnia pela glutamatodesidrogenase.

11.8 Sntese da uria (Ciclo da Uria)


A uria um composto neutro, notxico, altamente solvel e excretado pela urina o principal produto de excreo do excesso de nitrognio proveniente do catabolismo dos aminocidos no homem. Com ingesto normal de protenas, a uria constitui 80% dos produtos nitrogenados da urina. So ainda encontrados na urina: cido rico, creatinina, ons amnio e outras formas menores de compostos nitrogenados. A sntese de uria realizada no fgado por cinco reaes (duas mitocondriais e trs citoslicas) do ciclo da uria (ciclo de KrebsHenseleit) (Figura 11.4).

11 Metabolismo do nitrognio

343

Aminocido

-Cetoglutarato
Transaminase

NH3
Glutamato desidrogenase

HCO3
Carbamoil-fosfato-sintetase

-Cetocido

Glutamato

Carbamoil fosfato

Ornitina

Citrulina

Uria Aspartato Arginina Argininosuccinato


-Cetocido
Transaminase

Aminocido Oxaloacetato

Fumarato Malato Fumarase


Figura 11.4 Ciclo da uria. As enzimas que participam do ciclo so: (1) carbamoil-fosfato-sintetase, (2) ornitinatranscarbamoilase, (3) arginino-succinato-sintetase, (4) arginino-succinase e (5) arginase. As enzimas (1) e (2) so mitocondriais e as enzimas 3-5 so citoslicas.

1. Carbamoilfosfatosintetase I. O substrato inicial para o ciclo da uria uma molcula ativada produzida pela condensao do bicarbonato e on amnio, catalisada pela carbamoilfosfatosintetase I. A reao consome dois ATP e produz carbamoilfosfato (composto de alta energia). Tecnicamente a reao no faz parte do ciclo da uria.

344

MOTTA

Bioqumica

ADP O HO C O + O O P O ADP O HO C OPO2 3 + :NH3 O

Carbonil fosfato

Pi O O ATP ADP O
2

Carbamato

NH2

O3 P

NH2

Carbamoil-fosfato

Figura 11.5 Sntese da carbamoilfosfato catalisada pela carbamoilfosfatosintetase I. O ATP ativa o fosfato para formar a carbonilafosfato. O NH 3 reage com a carbamilafosfato para formar carbamato. A incorporao de um segundo grupo fosforil forma carbamoil-fosfato e ADP.

A enzima requer Nacetilglutamato como efetor alostrico positivo. Essa a etapa limitante de sntese da uria. 2. Ornitinatranscarbamoilase. A reao seguinte do ciclo a transferncia do grupo carbamoil (NH 2 CO), oriundo do carbamoilfosfato, para a ornitina para produzir citrulina. A reao ocorre na matriz mitocondrial pela ao da ornitinatranscarbamoilase. A citrulina transferida para o citosol por uma protena transportadora especfica. As reaes seguintes do ciclo da uria tem lugar no citosol.

11 Metabolismo do nitrognio

345

O H3 N CH 2 CH 2 CH 2 H C
+ NH3

H O + H2 N C O O P O H O

N CH 2 CH 2 CH 2 C

NH2

+ Pi

+ NH3

COO Ornitina Carbamoil-fosfato

COO Citrulina

3. Argininosuccinatosintetase. O segundo grupo amino da uria doado pelo aspartato. A condensao necessita ATP e catalisada pela argininosuccinatosintetase. Os produtos formados so: argininosuccinato, AMP e pirofosfato (PP i ). O pirofosfato (forte inibidor da reao) clivado a ortofosfato (2P i ). A clivagem supre energia adicional para as reaes sintticas, alm de remover o efeito inibidor do pirofosfato.
O H N CH 2 CH 2 CH 2 H C
+ NH3 + 2

COO C N H C CH 2 COO H

NH2 COO +
+

H ATP AMP + PPi

N CH 2 CH 2 CH 2

H3 N

C CH 2

COO

+ NH3

COO Citrulina Aspartato

COO Argininossuccinato

A principal fonte de aspartato a transaminao do glutamato com o oxaloacetato: Oxaloacetato + glutamato aspartato + cetoglutarato

4. Argininosuccinase. A argininosuccinase (argininossuccinatoliase) catalisa a clivagem do arginino-succinato para fornecer arginina e fumarato. A sntese do fumarato une o ciclo da uria ao ciclo da cido ctrico. O fumarato tambm pode ser reconvertido a aspartato.

346

MOTTA

Bioqumica

O H N CH 2 CH 2 CH 2 H C
+ NH3

COO C N H C CH 2 COO H

NH2 COO +
+

H ATP AMP + PPi

N CH 2 CH 2 CH 2

H3 N

C CH 2

COO

+ NH3

COO Citrulina Aspartato

COO Argininossuccinato

5. Arginase. Somente o fgado possui a enzima arginase que catalisa a hidrlise da arginina produzindo uria e regenerando a ornitina. A ornitina retorna para a mitocndria onde condensa novamente com a carbamoilfosfato para reiniciar o ciclo. Atravs da corrente sangnea, a uria transportada at os rins, onde excretada pela urina.
H2 N C NH CH 2 CH 2 CH 2 H C
+ NH3 + NH2 + NH3

H2 O

CH 2 CH 2 CH 2 H C
+ NH3

O + H2 N C NH2

COO Arginina

COO Ornitina Uria

A uria proveniente, portanto, de dois grupos amino, um da amnia e outro do aspartato, e de um carbono fornecido pelo bicarbonato. A sntese de uma molcula de uria requer quatro ATP. Dois para a sntese de carbamoilfosfato e um para a formao de argininossuccinato; esse ltimo clivado em AMP e pirofosfato (PP i ) cuja hidrlise fornece dois ortofosfatos (2P i ). Duas molculas de ATP so consumidas para gerar o ATP a partir de AMP. Mesmo assim, o ciclo da uria rende 2 ATP por meio de reaes auxiliares. A reao da glutamatodesidrogenase produz NADH (ou NADPH), e a converso de malato a oxaloacetato pela malatodesidrogenase tambm gera NADH (equivalente a 3 ATP). Total das duas reaes: 6 ATP. O rendimento lquido 2 ATP por molcula de uria. A. Regulao do ciclo da uria A carbamoilfosfatosintetase I mitocondrial ativada alostericamente pelo Nacetilglutamato, produzido a partir do glutamato e de acetilCoA em reao catalisada pela Nacetilglutamatosintase, que ativada pela arginina.

11 Metabolismo do nitrognio

347

COO H3 N
+

O O + H3 C C SCoA HSCoA H3 C C NH

COO C CH2 CH2 COO H

C CH2 CH2

COO Glutamato Acetil-CoA

N-Acetilglutamato

Quando a quebra metablica de aminocidos aumenta, a concentrao do glutamato eleva e estimula a sntese do Nacetilglutamato que, por sua vez, aumenta a sntese de uria. As demais enzimas do ciclo da uria so reguladas pela concentrao de seus substratos. So modificadas por variaes no consumo de protenas na dieta. Aps alguns dias de alteraes no contedo protico da dieta, ocorrem mudanas na produo de uria. Vrios hormnios (exemplo, glucagon e glicocorticides) esto envolvidos no controle da velocidade de sntese das enzimas do ciclo.

11.9 Excreo de nitrognio como cido rico


A uria uma substncia relativamente no-txica e facilmente transportada pelo sangue at os rins. Entretanto, a molcula de uria necessita grandes quantidades de gua para a sua excreo eficiente. Vertebrados voadores como os pssaros e para os rptis adaptados a ambientes ridos, isso um srio problema. Esses organismos produzem cido rico como produto de excreo de nitrognio que eliminado como uma mistura semifluda.
O HN O N H H N O N H

cido rico

O cido rico tambm o produto final da degradao de purina nucleotdeos em primatas e alguns outros animais. As molculas de nucleotdeos so desdobradas por nucleotidases (que removem os grupos fosfato para formar nucleosdeos) e desaminases (que removem os substituintes amnicos do anel). A reao final do catabolismo de purina nucleotdeos catalisada pela xantina oxidase para formar cido rico:
O HN O N H Xantina N N H O HN O N H H N O N H

O2 , H2 O

H2 O2

Xantina-oxidase

cido rico

348

MOTTA

Bioqumica

O excesso de cido rico, que pouco solvel em meio aquoso, resulta em deposio de cristais de urato de sdio na forma de clculos renais. O cido rico tambm pode precipitar nas articulaes, principalmente, dos joelhos e dos dedos do p, em uma condio clnica dolorosa conhecida como gota. O excesso de cido rico pode ser tratado por um anlogo de purina que bloqueia a atividade da xantinaoxidase. Os intermedirios anteriores do catabolismo da purinas, que so mais solveis que o cido rico, so ento excretados. As pirimidinas nucleotdeos, de modo semelhante as purinas, sofrem desaminao e remoo dos grupos fosfato e ribose. Os produtos das reaes so muitas vezes utilizados nas vias de recuperao para regenerar nucleotdeos. Entretanto, de modo diferente das purinas, as bases pirimidnicas (uracila e timina) podem ser ainda degradas como derivados de CoA. Consequentemente, o catabolismo das pirimidinas celulares contribui levemente para o pool de combustveis metablicos, enquanto o excesso de purinas so excretados.

11.10 Molculas derivadas dos aminocidos


Os aminocidos alm de servirem como blocos construtores de polipeptdeos, so precursores de muitas biomolculas de grande importncia fisiolgica. Na discusso seguinte, sero abordadas a sntese de vrias dessas molculas, por exemplo, neurotransmissores, glutationa, alcalides, porfirinas e nucleotdeos. Como esses processos envolvem a transferncia de carbonos, a seo inicia com uma descrio do metabolismo de monocarbonos. Grupamentos de uma unidade de carbono (em vrios estgios de oxidao) so transferidos de um composto para outro em fases importantes do metabolismo como a sntese e destoxificao. Dois so os carreadores de compostos monocarbnicos: a S-adenosilmetionina e o tetraidrofolato. A. S adenosilmetionina (SAM) A Sadenosilmetionina doadora de grupos metila (CH 3 ) de um intermedirio a outro em vrias reaes de sntese.
NH2 N N CH3
+S

N N

CH2 H H OH

O H OH

H2 C H2 C H3 N
+

CH

COO S-Adenosinilmetionina

obtido pela transferncia do grupo adenosil do ATP para a metionina: Metionina + ATP SAdenosilmetionina + P i + PP i

11 Metabolismo do nitrognio

349

O grupo sulfnio da Sadenosilmetionina reage com aceptores nuclefilos e doa grupos metila para as reaes de sntese. Por exemplo, a converso do hormnio noradrenalina em adrenalina:
HO HO OH CH CH2 NH3
+

HO HO

OH CH CH2 NH2
+

CH3

Noradrenalina

Adrenalina

A S-adenosilmetionina atua como doador de metila em reaes de metilao de fosfolipdeos, protenas, DNA e RNA (Tabela 11.4).
Tabela 11.4 Transferncia de grupos metila a partir da S-adenosilmetionina. Aceptor metlico cido guanidinoactico Fosfatidiletanolamina (3 metilas) Nicotinamida Noradrenalina Carnosina cido aminobutrico (GABA) RNA de transferncia e ribossmico DNA Produto metilado Creatina Fosfatidilcolina N Metilnicotinamida Adrenalina Anserina Carnitina RNA metilado DNA metilado

B. Tetraidrofolato (THF) O tetraidrofolato (THF) cofator derivado do folato, atua como um carregador de unidades de um carbono (C 1 ) em vrias reaes do metabolismo dos aminocidos e dos nucleotdeos. Os mamferos no sintetizam folato (a forma oxidada do tetraidrofolato) e devem obt-lo a partir de alimentos. As exigncias por folato aumenta durante as primeiras semanas de gravidez, quando o sistema nervoso fetal comea a se desenvolver. Suprimentos de folato parecem prevenir certos defeitos do tubo neural como a spina bfida, na qual o cordo espinhal permanece exposto.

350

MOTTA

Bioqumica

(a) H2 N HN O N

H N H H N O C H N COO CH CH 2 CH2 O C
n OH

H CH2 N H H

2-Amino-4-oxo 6-metilpterina

p-Aminobenzoato

Glutamatos (n=1-6)

(b) H2 N HN O N

H N
5

H H CH2 R

N H H2 C N
10

N 5 ,N 10-Metilenotetraidrofolato
Figura 11.2 Tetraidrofolato (THF). (a) O cofator consiste de um derivado da pterina, um resduo de p aminobenzoato e mais de seis resduos de glutamato. a forma reduzida da vitamina folato. Os quatro tomos de H da forma tetraidro esto sombreados. (b) Na converso da serina em glicina, um grupo metileno (sombreado) liga-se ao N5 e N10 do tetraidrofolato. O tetraidrofolato pode carregar unidades de um carbono de diferentes estados de oxidao. Por exemplo, um grupo metila ligado ao N5 e um grupo formil (HCO) ligado ao N5 ou N10.

O tetraidrofolato aceita unidades de um carbono de vrios aminocidos ou de seus metablitos. Um exemplo proeminente a remoo do grupo hidroximetil da serina com a consequente formao de glicina. Alm da serina, outros intermedirios doam unidades de um carbono ao tetraidrofolato (Tabela 11.5).

11 Metabolismo do nitrognio

351

Tabela 11.5 Doadores de unidades de um carbono (C 1 ) ao tetraidrofolato (THF) Doador Serina Formaldedo Metionina Colina Sarcosina Glicina cido aminolevulnico Triptofano Formato Histidina Mecanismo Converso em glicina com transferncia de metileno Combinao direta Oxidao da metila; transferida como HC=O Converso em betana; os grupos metila so oxidados e transferidos Oxidao da metila; transferida como H 2 C=O Oxidao a formato, que transferido Oxidao a formato, que transferido Oxidao N-formilquinurinina, doador de formato Combinao direta Formao do cido formiminoglutmico e transferncia de formimidoil (-HC=NH)

C. Neurotransmissores Na terminao do nervo, a chegada do impulso nervoso influencia uma segunda clula, como, por exemplo, outro nervo, msculo esqueltico, msculo involuntrio ou glndula secretria. A juno entre o terminal do nervo e a clula seguinte a sinapse. A chegada do potencial de ao na sinapse resulta na liberao de uma substncia transmissora pela membrana pr-sinaptica que atravessa a lacuna (espao entre as clulas) e libera o sinal ao se ligar a um receptor especfico presente na membrana pssinptica. Os neurotransmissores so molculas pequenas que comunicam os impulsos nervosos atravs da maioria das sinapses. Podem ser excitatrios ou inibitrios. Muitos neurotransmissores so aminocidos ou aminas primrias ou secundrias derivadas de aminocidos (aminas biognicas) (Tabela 11.6). Nessa seo, ser realizada uma breve discusso de aminocidos, aminas biogncias e do xido ntrico como neurotransmissores.
Tabela 11.6 Neurotransmissores aminocidos e aminas. Aminocidos Glicina Glutamato cido -aminobutrico (GABA) Aminas Noradrenalina (norepinefrina) Adrenalina (epinefrina) Dopamina Serotonina Histamina

1. Glicina. um neurotransmissor inibitrio para a medula espinhal e grande parte do tronco cerebral onde bloqueia o impulso que migra atravs do cordo medular para os neurnios motores, para estimular o msculo esqueltico. As terminaes nervosas pr-sinpticas apresentam uma sistema de transporte para remover a glicina da sinapse. A inibio surge pelo aumento da condutncia de Cl. A estricnina provoca rigidez e convulses ao se ligar aos receptores de glicina. A apamina, a amida polipeptdica de 18 resduos de aminocidos do veneno de abelha, funciona de forma semelhante.

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Bioqumica

2. Glutamato. o neurotransmissor excitatrio amplamente distribudo pelo sistema nervoso central. O glutamato reciclado nos neurnios e nas clulas gliais. A clula glial transforma o glutamato em glutamina, que ento difunde novamente para o neurnio. A glutaminase mitocondrial no neurnio produz novamente o glutamato, para reutilizao. A ativao de seu receptor (NmetilDaspartato, NMDA) aumenta a sensibilidade aos estmulos de outros neurotransmissores. O lcool inibe a influencia do glutamato, e deste modo diminui a sensibilidade aos estmulos. O glutamato monossdico suspeito de contribuir para alguns distrbios psicolgicos, apesar desse fato no ter sido ainda comprovado. 3. cido aminobutrico (GABA). Atua como neurotransmissor inibitrio no sistema nervoso central. A ligao do GABA ao seu receptor aumeta a permeabilidade da membrana da clula nervosa para os ons cloretos (Os benzodiazepnicos, uma classe de tranqilizantes que reduzem a ansiedade e causam relaxamento muscular, provocam uma potencializao da resposta ao GABA aumentando a condutncia da membrana para cloretos).
H3 N
+

CH2 CH2 CH2

COO -Aminobutirato

Existem dois tipos de receptores deste neurotransmissor: os GABA e os GABA, dos quais apenas o primeiro estimulado pelo lcool, benzodiazepinas e barbituricos do que resulta uma diminuio de sensibilidade para outros estmulos. O efeito ansioltico do lcool mediado pelos receptores de GABA 4. Catecolaminas. Compreendem a dopamina, noradrenalina (norepinefrina) e adrenalina (epinefrina), e so derivadas do aminocido tirosina. A dopamina e noradrenalina so usadas no crebro como neurotransmissores excitatrios. Fora do sistema nervoso, a noradrenalina e a adrenalina so liberadas principalmente pela medula adrenal e pelo sistema nervoso perifrico. Como ambas regulam vrios aspectos do metabolismo, elas so consideradas hormnios.
COO H3 N
+

CH3 H3 N
+

C CH2

CH2 CH2

H3 N

CH2 CH OH

+ H3 N

CH2 CH OH

HO OH Tirosina OH Dopamina

HO OH Noradrenalina

HO OH Adrenalina

HO OH Catecol

A secreo da adrenalina em resposta ao estresse, trauma, exerccio vioroso ou hipoglicemia causa a rpida mobilizao de energia armazenada, ou seja, glicose do fgado e cidos graxos do tecido adiposo. A reao na qual a noradrenalina metilada para formar adrenalina

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mediada pela enzima feniletanolaminaNmetiltransferase (PNMT). Apesar da enzima ocorrer predominatemente nas clulas cromafnicas da medula adrenal ela tambm encontrada em certas pores do crebro onde a adrenalina funciona como um neurotransmissor. Evidncias recentes indicam que a adrenalina e a noradrenalina esto presentes em vrios outros rgos (exemplo, fgado, corao e pulmo) 5. Serotonina (5-hidroxitriptamina). A serotonina um poderoso vasoconstritor e estimulador da contrao do msculo liso e inibidor da secreo gstrica. encontrada no crebro, intestino, mastcitos e plaquetas, bem como em tumores carcinides. No crebro atua, aparentemente, como um agente neuro-hormonal que aumenta a atividade do nervo. A serotonina sintetizada a partir do triptofano.
COO H3 N
+ +

C CH2

H HO

H3 N

CH2 CH2

N H Triptofano

N H Serotonina

Baixos nveis de serotonina no crebro esto relacionados depresso, agresso e hiperatividade. O efeito antidepressivo de medicamentos como o Prozac resulta de sua capacidade de aumentar os teores de serotonina pelo bloqueio da reabsoro do neurotransmissor liberado. A serotonina tambem convertida em melatonina (N-acetil-5-metoxitriptamina) formada na glndula pineal e retina. Sua concentrao baixa durante o dia e alta no escuro. Como a melatonina parece influenciar a sntese de alguns neurotransmissores que controlam o ritmo circadiano, ela tem sido usada para o tratamento de distrbios do sono e do jet lag.
CH3 O C HN CH3 O CH2 CH2

N H Melatonina

6. Histamina. uma amina produzida por muitos tecidos do organismo, e tem efeitos fisiolgicos complexos. um mediador de reaes alrgicas e inflamatrias, um estimulador da produo gstrica de cido e um neurotransmissor em diversas reas do crebro. A histamina formada pela descarboxilao da L histidina em uma reao catalisada pela histidinadescarboxilase, uma enzima que necessita de piridoxal5fosfato.

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7. xido ntrico. um gs altamente reativo. Alm de muitas funes do xido ntrico (regulao da presso sangnea, inibio da coagulao sangnea e a destruio de clulas estranhas, lesadas ou cancerosas pelos macrfagos) ele tambm atua como um neurotransmissor. O xido ntrico (NO) sintetizado a partir da arginina pela xidontricosintase (NOS) sendo produzido em muitas reas do crebro onde sua funo est relacionada com a funo neurotransmissora do glutamato. Quando o glutamato liberado de um neurnio e se liga a certas classes de receptores do glutamato, um fluxo de Ca 2+ atravs de uma membrana ps-sinaptica disparado, o que estimula a sntese da NOS. Uma vez sintetizado, o xido ntrico difunde de sua clula de origem para a clula pr-sinptica, onde os sinais promovem a liberao do glutamato. Em outras palavras, o NO atua como um neurotransmissor retrgado; ou seja, ele promove um ciclo no qual o glutamato liberado do neurnio pr-sinaptico e ento liga-se e promove potenciais de ao no neurnio pssinptico. Esse mecanismo potenciador exerce importante papel no aprendizado e na formao da memria, tambm como em outras funes no crebro dos mamferos. D. Glutationa (GSH) A glutationa (glutamilcisteinilglicina) tripeptdeo contendo uma sulfidrila. A glutationa (GSH) est envolvida na sntese do DNA e RNA, de certos eicosanides e de outras biomolculas. Em muitos desses processos, a GSH atua como agente redutor que mantm os grupos sulfidrilicos das enzimas e outras molculas no estado reduzido. Alm de proteger as clulas das radiaes, da toxicidade do oxignio e de toxinas ambientais, a GSH tambm promove o transporte de aminocidos (ciclo glutamil). A GSH contribui para a proteo das clulas das toxinas ambientais. A GSH reage com vrias molculas estranhas para formar conjugados de GSH. A ligao desses substratos com a GSH, prepara-os para a excreo, que pode ser espontnea ou catalisada pelas glutationaStransferases (tambm conhecidas como ligandinas). Antes da excreo urinria, os GSH conjugados so geralmente convertidos em cidos mercaptricos. E. Biossntese do grupo heme O heme, uma das molculas mais complexas sintetizadas pelos mamferos, tem um anel porfirnico contendo ferro. O heme um componente estrutural da hemoglobina, mioglobina e citocromos. A via biossinttica do heme predominante no fgado, medula ssea, clulas intestinais e em reticulcitos (clulas precursores de eritrcitos contendo ncleo). Na primeira etapa da sntese, a glicina se condensa com succinil-CoA, formando o -aminolevulinato (ALA) em reao catalisada pela ALAsintase que necessita de fosfato de piridoxal. a etapa comprometida da biossntese de porfirinas. A ALAsintase, uma enzima mitocondrial, inibida alostericamente pela hemina um derivado do heme contendo Fe + . Na etapa seguinte da sntese da porfirina, duas molculas de ALA condensam para formar porfobilinognio. A forfobilinognio-sintase, que catalisa essa reao, uma enzima contendo zinco extremamente sensvel ao envenenamento por metais pesados. A uroporfirinognio I sintase catalisa a condensao simtrica de quatro molculas de porfobilinognio. Quando quatro molculas de CO 2 so removidas, catalisada pela uroporfirinogniodescarboxilase, o coproporfirinognio sintetizado. A

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reao seguida pela remoo de duas molculas de CO 2 adicionais, formando assim, o protoporfirinognio IX. A oxidao do grupos metilenos do anel porfirnico produz a protoporfirina IX, o precursor direto do heme. A etapa final da sntese do heme a insero de Fe 2+ , uma reao que ocorre espontaneamente mas acelerada pela ferroquelatase. A protoporfirina IX tambm um precursor das clorofilas. Aps a incorporao de magnsio (Mg 2+ ), a enzima Mg-protoporfirinametilesterase catalisa a adio do grupo metila para formar Mgprotoporfirina IX monometilester. Essa molcula ento convertida em clorofila em vrias reaes induzidas pela luz. F. Degradao do grupo heme Com cerca de 120 dias de vida, as clulas vermelhas envelhecem pelo esgotamento das enzimas eritrocitrias. Como conseqncia, elas so removidas da circulao pelos macrfagos do sistema retculo endotelial (bao, fgado e medula ssea) onde so degradadas. O ferro retorna ao plasma e se liga tranferrina. A globina degradada em seus aminocidos componentes para posterior reutilizao. A protoporfirina IX forma bilirrubina. A protoporfirina oxidada biliverdina um pigmento verde escuro e monxido de carbono (CO) pela hemeoxigenase. A biliverdina convertida em bilirrubina, um tetrapirrol insolvel em solues aquosas, em reao catalisada pela biliverdinaredutase.

COOH COOH CH2 H3C CH CH3 CH2 CH2 H O N H C H N H C H N H C H N H CH2 CH2 CH3 CH2 CH

Bilirrubina

A bilirrubina produzida no SRE apolar e insolvel em gua e transportada para o fgado via corrente circulatria ligada de maneira firme mas reversvel, albumina. A bilirrubina isolada da albumina entra na clula heptica e conjugada pela ao da uridinadifosfatoglicuroniltransferase (UDPGT) com o cido UDPglicurnico para produzir o monoglicurondio e o diglicurondio da bilirrubina (bilirrubuna conjugada). O derivado conjugado, solvel em gua, excretado do hepatcito na forma de bile e constitui um dos pigmentos biliares. Devido a solubilidade em gua, a bilirrubina conjugada encontrada em pequenas quantidades tanto no plasma como na urina. No intestino grosso, a bilirrubina degrada por enzimas bacterianas para formar urobilinognio. A ictercia a pigmentao amarela da pele, esclertica e membranas mucosas, resultante do acmulo de bilirrubina ou de seus conjugados. Torna-se evidente clinicamente quando as concentraes plasmticas de bilirrubina total excedem 3,0 mg/dL, apesar de graus menores tambm

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terem significncia clnica. A ictercia o sinal mais precoce de uma srie de patologias hepticas e biliares. Resumo
1. Os organismos fixadores de nitrognio convertem N 2 em NH 3 em reao consumidora de ATP. O nitrato e nitrito pode tambm serem reduzidos a NH 3 . 2. A amnia incoporada glutamina pela ao da glutamina sintetase. 3. A transaminase emprega um grupo prosttico PLP para intrconverso reversvel de aminocidos e cetocidos. catalisar a

4. Os organismos variam grandemente em suas capacidades de sintetizar aminocidos. Alguns organismos (exemplo, plantas e alguns microorganismos) podem produzir todas as molculas de aminocidos necessrias a partir da fixao de nitrognio. Os animais podem produzir somente alguns aminocidos. Os aminocidos no essenciais so produzidos a partir de molculas precursoras, enquanto os aminocidos essenciais devem ser obtidos da dieta. 5. Nas reaes de transaminao (uma das mais proeminentes dos aminocidos), novos aminocidos so produzidos quando os grupos -amino so transferidos do doador aminocido ao receptor -cetocido. Como as reaes de transaminao so reversveis, elas atuam tanto na sntese como na degradao. Os ons amnio ou o nitrognio amida da glutamina podem ser diretamente incorporados aos aminocidos e, eventualmente, a outros metablitos. 6. Os aminocidos so classificados como cetognicos ou glicognicos com base no destino de seus esqueletos carbonados se so convertidos em cidos graxos/corpos cetnicos ou glicose. Alguns aminocidos so classificados tanto cetognicos como glicognicos porque seus esqueletos carbonados so precursores de gorduras e de carboidratos. 7. Os aminocidos so precursores de muitas biomolculas fisiologicamente importantes. Muitos dos processos que sintetizam essas molculas envolvem a transferncia de grupos de monocarbonos (exemplo, metila, metileno, metenil e formil). A S-adenosilmetionina (SAM) e tetraidrofolato (THF) so os mais importantes carreadores de grupos de um carbono. 8. Muitas molculas derivadas dos aminocidos incluem vrios neurotransmissores (exemplo, GABA, catecolaminas, serotonina, histamina e xido ntrico) e hormnios (exemplo, cido indol actico). A glutationa um exemplo de derivado de aminocido que exerce um papel essencial nas clulas. O heme um exemplo de um sistema complexo de anis heterocclicos derivado da glicina e da succinil CoA. A via biossinttica que produz heme similar a uma que produz as clorofilas nas plantas. 9. A porfirina do heme degradada para formar o produto de excreo, a bilirrubina em um processo de biotransformao que envolve as enzimas heme oxigenase e biliverdina-redutase e UDP glicurosiltransferase. Aps sofre reaes de conjugao, a bilirrubina excretada como um componente da bile.

Referncias
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11 Metabolismo do nitrognio NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So Paulo : Sarvier, 2002. p. 639-81. VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto Alegre : Artmed, 2000. p. 562-610.

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Informaes adicionais
Metabolic Pathways of Biochemistry: http://www.gwu.edu/~mpb/ The Medical Biochemistry Page: http://www.indstate.edu/thcme/mwking/home.html Biochemistry (Moskow): http://www.protein.bio.msu.su/biokhimiya/