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BIORREMEDIAO MICROBIANA
Introduo A revoluo industrial trouxe um enorme aumento da poluio e da produo de resduos. Na realidade, muitos dos problemas ambientais atuais so o resultado de mais de 200 anos de m gesto do lixo industrial, sendo os locais contaminados uma consequncia frequente do manuseamento e eliminao inadequados de materiais perigosos. A biorremediao o processo de tratamento que utiliza a ocorrncia natural de microrganismos para degradar substncias toxicamente perigosas transformando-as em substncias menos ou no txicas. um mecanismo de estimulao de situaes naturais de biodegradao para a limpeza de derramamentos de leos e tratamento de ambientes terrestres e aquticos contaminados com compostos xenobiticos (substncia sinttica que polui o meio ambiente). Maior segurana e menos perturbao do meio ambiente so os principais benefcios da biorremediao. Os dois maiores enfoques da biorremediao so a estimulao do crescimento microbiano no local contaminado e a adio de microrganismos degradadores de hidrocarbonetos adaptados ou de biosurfactantes. Biorremediao o bom uso de seres vivos ou seus componentes para restaurar ambientes poludos. Geralmente so processos que empregam microorganismos ou suas enzimas para degradar compostos poluentes. Na biorremediao utiliza-ea microorganismos, fungos, plantas verdes ou suas enzimas para que o ambiente contaminado retorne a sua condio original. Pode ser empregada para atacar contaminantes especficos do solo, tais como a degradao de hidrocarbonetos clorados pelas bactrias. Um exemplo mais geral a limpeza de derramamentos do leo pela adio dos fertilizantes de nitrato ou de sulfato para facilitar a decomposio do leo pelas bactrias locais ou exteriores. O processo de biorremediao se da pelo fato de mocroorganismos, como as bactrias, utilizarem carbono orgnico como fonte de alimentao. Sendo assim, convertendo os contaminantes em CO2 e H2O. A Biorremediao e a Fitorremediao foram usados por sculos. Por exemplo, a desalinao do solo de agricultura pela fitoextrao tem uma tradio longa. uma metodologia atrativa e confivel para o tratamento de solos e cursos dgua contaminados, considerando-se muito eficiente, alm de econmica, verstil e principalmente por causar uma menor perturbao ao ambiente, j que um sistema de estimulao de processos naturais de remediao. Enfim uma estratgia ou processo que emprega

microrganismos ou suas enzimas para destoxificar contaminantes no solo ou outros ambientes. Esta consiste basicamente na transformao do contaminante a formas que no oferecem riscos de contaminao. Portanto, fundamentada nos processos de degradao microbiana e reaes qumicas combinadas com processos de engenharia, criando condies para maximizar as transformaes dos contaminantes orgnicos do solo. De acordo com a Agncia de Proteo Ambiental. As principais categorias de contaminantes do solo so em ordem decrescente: os cloroalifticos, pesticidas, hidrocarbonetos aromticos, cloroaromticos, aromticos simples e outros. Estes originam-se da industrializao do petrleo bruto, industrias qumicas diversas e atividades agrcolas, sendo muitos destes produtos de difcil decomposio e, por isto, causam srios impactos ambientais. Alguns representantes mais importantes no mbito da biorremediao so: a) Os hidrocarbonetos aromticos policclicos (PAHs), que so orgnicos volteis com vrias ligaes tipo benzeno condensadas, representam mais de 100 diferentes compostos como antraceno e benzopireno. Os PAHs so em sua maioria lipoflicos e adsorvendo fortemente a superfcies hidrofbicas. O interesse na biorremediao destes compostos crescente devido aos efeitos mutagnicos e carcinognicos dos mesmos. b) Os hidrocarbonetos halogenados, especialmente os clorados, so os xenobiticos de grande persistncia no solo devido sua baixa degradabilidade que resultante da baixa solubilidade, tamanho molecular, toxicidade e elevada energia qumica de ligao. Os contaminantes mais estudados so: O PCP (Pentaclorofenol), TCE (Tricloroetileno) e os PCB's (bifenis policlorados). c) Os derivados nitrogenados do nitrotolueno empregados na confeco de materiais explosivos como o TNT (2,4,6- trinitrotolueno). Do ponto de vista prtico, a biorremediao fundamentada em trs aspectos principais: a) Existncia de microrganismos com capacidade catablica para degradar o contaminante; b) O contaminante deve estar disponvel ou acessvel ao ataque microbiano ou enzimtico; c) Condies ambientais adequadas para o crescimento e atividade do agente biorremediador. Microrganismos com as mais diversas capacidades metablicas so empregados na biorremediao. Alguns destes so pertencentes a gneros de bactrias e fungos como: Azospirillum, PseucAlcaligenes, Enterobacter, Proteus, Klebsiella, Serra tia. Bacillus, Arthrobacter, Nocardia, Fusarium, Chaetomium, Phanerochaete e Trametes. A ao metablica da degradao depender do microrganismo envolvido e do ambiente. A

tecnologia da biorremediao tem como objetivo inocular o solo com microrganismos com capacidade de metabolizar resduos txicos, proporcionando maior segurana e menos perturbaes ao meio ambiente. Tcnicas de Biorremediao Apesar de fundamentadas em um nico processo bsico (biodegradao), as tcnicas de biorremediao envolvem variaes de tratamentos in situ" (no local) e "ex situ" (fora do local) que pode envolver inmeros procedimentos. A maioria dessas estratgias se aplica aos tratamentos de superfcie, enquanto algumas so especficas para a biorremediao em subsuperfcie como o caso da bioventilao, que consiste na injeo de ar no solo (ou camada) contaminado para estimular a degradao do contaminante. Vrios contaminantes podem ser tratados biologicamente com sucesso. Estes incluem petrleo bruto, hidrocarbonetos do petrleo como gasolina (que contm benzeno, xileno, tolueno e etilbenzeno) leo diesel, combustvel de avio, preservativos de madeira, solventes diversos, lodo de esgoto urbano industrial, e outros compostos xenobiticos ou biognicos, existindo mais de 300 compostos individuais. Tipos e Estratgias para Biorremediao do Solo a) Passiva- consiste na degradao intrnseca ou natural pelos micorganismos indgenas do solo. b) Bioestimuladora- consiste na adio de nutrientes, como N e P, para estimular os microrganismos indgenas. c) Biventilao- uma forma de bioestimulao por meio da adio de gases estimulantes, como O2 e CH4, para aumentar a atividade microbiana decompositora. d) Bioaumentao- a inoculao do local contaminado com microrganismos selecionados para degrao do contaminante. e) Landfarming- aplicao e incorporao de contaminantes ou rejeitos contaminados na superfcie de solo no contaminado para degrao. O solo arado e gradeado para promover a mistura uniforme do contaminante e aerao. f) Compostagem- o uso de microrganismos termoflicos aerbios em pilhas construdas para degradar o contaminante.

Principais Dificuldades para o Sucesso dos Tratamentos Biolgicos de Solos Contaminados. a) Heterogeneidade do rejeito- os rejeitos so distribudos de modo heterogneo no solo e o contaminante pode ocorrer em formas no acessivas. b) Concentrao do contaminante- contaminantes podem estar presentes em concentaes variadas (de muito baixa a muito alta). Se muito alta, pode ser txica e inibir o crescimento. c) Persistncia e toxidade- tratamentos biolgicos so eficientes para remover matrias biodegradveis e de baixa toxidade. c) Contaminantes resistentes biodegradao exigem adequadao nutricional do solo. (com fonte de C) e consrcio microbiano. d) Condies adequadas para o crescimento microbiano- atividade microbiana suficiente para promover adequada degrao exige condies ambientais favorveis passveis de destoxicaa por biorremediao, como por exemplo umidade, temperatura e aerao do solo.

Aspectos Biolgicos das Tcnicas mais Comumente Empregadas

Landfarming Consiste na aplicao do contaminante em forma lquida ou slida na camada arvel do solo, onde se concentram 90% dos microrganismos que usam os contaminantes como fonte de energia e que pode transform-Ios geralmente, mas no exclusivamente por cometabolismo. A matriz (rejeito) com C misturada ao solo por arao e gradagem e as condies fsico-qumicas do solo (gua, aerao e nutrientes) ajustadas para maximizar a atividade heterotrfica. Cria-se assim a camada reativa zona de tratamento fazendo com que esta camada de solo atue como bioreator natural (Figura 1 a seguir). Essa camada pode atingir 50 cm, dependendo da profundidade de incorporao dos resduos. Abaixo desta zona situa-se uma camada de solo ainda no saturada, acima do lenol fretico. Uma variao do "Iandfarming" convencional inclui a presena de plantas, cujo ambiente rizosfrico aumenta a atividade. dos heterotrficos e a biodegradao do contaminante. A pulverizao do solo pela arao e gradagem facilita o espalhamento do solo com contaminante pelo vento. Para que isso seja evitado, o solo deve ser mantido mido.

(Z O N A S A T U R A D A (L E N O L F R E T IC O )
Figura 1. S eo transversal esquem tica de um a clula da unidade de tratam ento no solo em pregado pelo landifarm ing

O "Iandfarming" empregado com elevada eficincia no tratamento de rejeitos industriais, especialmente na indstria petroqumica (Bewley, 1996). Concentraes de petrleo de at 7% (70.00" kg-1) so reduzidas para 100-200 mg kg-1 em poucos meses, desde que as condies fsicas (umidade e aerao), qumicas (presena de aceptores de eltrons) e biolgicas (elevada atividade heterotrfica) sejam adequadas. Para a degradao de 100 unidades de C so necessrias, em mdia, 2 unidades N para as bactrias, 3 0.4 parara fungos e 3 a 6 para os actinomicetos. Assim para se obter sucesso com esse processo, alm da boa aerao para o O2 no seja limitante, garantindo assim o fluxo de eltrons da bioxidao, a disponibilidade de N P e outros nutrientes no solo essencial, assim como importante a relao C/N do material a ser tratado. Para lodos de refinarias de petrleo, a biodegrao favorecida, quando a relao C/N de 9:1. Por isso, o tipo de solo e seu teor de matria orgnica, como a aplicao de N, so fatores que precisam ser controlados. A matria orgnica do solo importante para a populao microbiana com metabolizante, que tambm atua na biodegrado de certos componentes do petrleo e de outros resduos. Muitos apresentam baixa degradabilidade e neste caso, o tratamento do

rejeito com surfactante ou agentes pr-oxidantes, reduz a recalcitrncia e acelera a degradao destes pelos microrganism. Em condies timas de nutrientres (e.g. relao C: N: P 70: 5:1) a biodegradao de petrleo bruto ou lodo de refinaria atinge de 6 a 8 menos de um ano. A composio qumica do resduo tambm determina a velocidade de sua decomposio. A frao de compostos saturados do petrleo degrada-se mais facilmente do que a insaturada, exercendo grande influncia na tratabilidade dos resduos de refinarias. No Brasil, as condies climticas so muito favorveis ao uso desse processo. Na refinaria da Petrobrs em Curitiba (PR) em solo com biota adaptada para biodegradao destes rejeitos, possvel tratar de 0,5 a 1,0 m3 de 0:m2 de solo por ano ao custo de R$ 9,00 a 12,60 por m3 e, no caso de lodo de destilaria, possivel de 400 0.800 Mg ha-1 (CARVALHO, 1998). Um outro exemplo interessante ocorreu no tratamento de solo contaminado com atrazina na fbrica Ciba-Geigy Corp no estado de Louisiana - EUA. O solo, alm de arado e gradeado, recebeu 880 kg de fertilizante 13-13-13 (NPK) e aplicao de culturas de Pseudomonas degradadoras de atrazina. Aps 20 semanas a concentrao do contaminante reduziu de 100 mg kg-1 para apenas 10 mg kg-1, uma reduo de 90% da concentrao original. Para uma rea de 1,9 ha de solo contaminado a empresa gastou US$ 1,05 milho, enquanto para outro procedimento, como escavao e disposio apropriada do solo contaminado, seriam gastos US$ 5,3 milhes. Com a biorremediao US$ 4,25 milhes foram economizados pela empresa. Portanto, o "Iandfarming" representou uma economia de 2,3 milhes de dlares no tratamento de 1 ha de solo poludo, neste caso. Apesar de ser um processo simples, para a implantao do "Iandfarming", devem-se observar critrios tcnicos para a seleo de locais apropriados, pois h formao de gases e materiais lixiviveis que oferecem riscos ao meio ambiente. A topografia do solo, a localizao em relao aos cursos de gua, o tipo e a profundidade do solo, so alguns aspectos importantes na definio da rea destinada a esse processo. Os rgos reguladores e de gesto ambiental possuem as instrues normativas para a implementao do processo. Biorremediao Fase Slida baseada nos mesmos princpios do mtodo anterior, porm constitui-se de pilhas de solo, que funcionam como clulas de tratamento. Nas clulas realiza-se controle mais rigoroso da volatilizao. lixiviao e escoamento superficial de material contaminado, o que no ocorre no "Iandfarming", sendo, portanto, mais seguro e apropriado para tratamento de solos

contendo compostos que oferecem elevad risco ambiental. Na biorremediao fase slida pode-se tambm optar pela compostagem que consiste em um tratamento controlado pela gerao de calor pelos aerbios termoflicos. A elevao da temperatura na massa contaminada ideal para tratamento de rejeitos e lodos diversos, incluindo contaminantes explosivos. um processo barato e fcil de ser monitorado. Tratamentos" in situ" Os tratamentos" in situ" so baseados na manipulao da fase aquosa e estmulo da decomposio pela injeo de ar (bioventilao) e suplementao com nutrientes em galerias e poos de infiltrao. comum o uso de plantas nesse tipo de tratamento, as quais fornecem substratos atividade microbiana enquanto os microrganismos transformam os contaminantes. Alm da biodegradao, os microrganismos atuam direta ou indiretamente na biosoro, reduzindo a ao dos contaminantes no meio ambiente. Bioaumentao A biorremediao envolve ainda a inoculao do solo com culturas puras ou consrcio microbiano contendo microrganismos selecionados para degradaes de contaminantes especficos. Esses processos so conhecidos por bioaumentao que tem sido bastante estudada para vrios herbicidas, hidrocarbonetos clorados e carbonatos atravs do emprego de populaes indgenas aclimatadas, isolados selecionados e at mesmo microrganismos transgnicos contendo plasmdeos degradadores (Struthers et aI., 1998; Bewey, 1996). Para isso, recorre-se a populaes aclimatadas atravs de mutao direta ou transformao gentica, para degradao acelerada de determinado composto (Felsot & Shelton, 1993). Isolados indgenas, bem como microrganismos modificados geneticamente, contendo plasmdeos catablicos, tm sido empregados na produo de inoculantes comerciais para biorremediao. Vrias bactrias e fungos. compreendendo dezenas de formulaes comerciais, so vendidos nos EUA a preos que variam de USS 3,6 a US$ 18,0 kg-1 (Glass, 1992). Entretanto, existem poucas evidncias definitivas de sucesso dessa tcnica, exceto em algumas situaes especficas, como se verifica com o Agrobacterium radiobacter J14 que possui elevada capacidade de degradar a atrazina e o fungo Phanerochaete chrysosporum, o qua: degrada mais que 60 xenobiticos, incluindo 12 aromticos policclicos, 12 aromticos

clorados, 9 policclicos aromticos, 3 alquil-clorados, 6 biopolmeros e 16 corantes diversos (Bumpus, 1993). P. chrysosporum capaz de degradar entre 15 a 98% de vrios xenobiticos em menos de 60 dias. Em geral, a bioaumentao mais apropriada para tratamentos de contaminantes muito recalcitrantes, em contaminaes recentes e onde se pretende aplicar a degradao acelerada. Uma estratgia que vem ganhando espao na biorremediao o uso de plantas para acelerar o processo de degradao. As plantas, alm de atuarem diretamente sobre vrios tipos de contaminantes, contribuem indiretamente atravs do efeito rizosfrico sobre a microbiota biodegradadora. O tratamento de um solo contaminado com hidrocarbonetos aromticos policclicos (HAP's) em concentrao de 185 mg kg-1 de HAPs total e 50 mg kg-1 de HAP's carcinognicos, sofreu reduo de 26% aps 180 dias de tratamento sem planta e de 57% quando o solo foi semeado com Panicum virgatum (switchgrass). Na frao carcinognica houve reduo apenas nas parcelas com planta, sendo esta reduo da ordem de 30%. Vrias outras plantas e contaminantes tm sido estudadas na biorremediao, evidenciando a importncia dos processos microbianos influenciados por estas. A biorremediao microbiana tem concepo muito antiga, mas s recentemente evoluiu de estudos pilotos para aplicao em larga escala. No momento, representa a principal tecnologia de remediao de solo por ser: a) De baixo custo (US$ 13 a 1.500 por tonelada de solo tratado) em relao a outras tcnicas; b) Ser uma soluo permanente; c) Fundamentada em processos naturais; d) Aplicvel a uma grande variedade de contaminantes; e) De grande aceitao pblica. No Brasil a biorremediao ainda muito pouco praticada, exceto "Iandfarming", que praticado com sucesso, principalmente na indstria petroqumica brasileira. A biorremediao um mtodo confivel e atrativo para o tratamento de solos e cursos dgua contaminados com hidrocarbonetos, sendo considerada eficiente, econmica e verstil; por outro lado, a biorremediao no local, muitas vezes limitada por dificuldades no transporte de nutrientes ou receptores de eltrons e no controle das condies para aclimatao e degradao dos contaminantes nos sistemas subsuperficiais (JAIN et al., 1992; CORSEUIL et al., 1994; CORSEUIL et al., 1996).

Fitorremediao Neste processo emprega-se plantas para descontaminar stios com resduos qumicos orgnicos em sua poro superficial. reas contendo plantas apresentam uma biodegradabilidade mais acelerada e completa se comparada com reas no plantadas devido: a) Expanso da populao ativa dos microrganismos no solo (rizosfera) que se utilizam da frao exudata das razes como fonte de alimento. b) O exudato das razes tambm estimula transformaes cometablicas, assim sendo, muitos contaminates so degradados via estimulao da microbiota pela presena do exudato. c) Algumas plantas produzem enzimas que transformam metabolicamente os contaminantes orgnicos contribuindo desta forma para sua oxidao mais rpida pelos microrganismos presentes no solo. A tecnologia de biorremediao tornou-se um importante mtodo de restaurao de ambientes contaminados por resduos de petrleo, pois utilizam capacidade dos microrganismos em biodegradar ou biotransformar as mais diversas substncias. A biodegradao ou biotransformao de compostos orgnicos contaminantes uma das principais medidas de recuperao de ecossistemas contaminados e requer a interao de muitos grupos de organismos vivos diferentes que trabalhem juntos ou seqencialmente na degradao dos compostos (KATAOKA, 2001). Os mais eficientes biodegradadores so os microrganismos, devido abundncia, grande diversidade de espcies, versatilidade catablica e anablica, bem como a capacidade de adaptao s condies adversas do meio (TEIXEIRA & LIMA, 1991 apud KATAOKA, 2001). Microrganismos que degradam hidrocarbonetos esto amplamente distribudos no solo e em ambientes aquticos. Populaes desses microrganismos normalmente constituem menos que 1% da comunidade microbiana total, mas quando hidrocarbonetos esto presentes, essas populaes aumentam em 10% da comunidade (ATLAS, 1995). A biorremediao teve um papel muito importante na limpeza do derramamento de 41 milhes de litros de petrleo causado pelo navio Exxon Valdez, no Golfo do Alasca, em 1989, dando incio ao desenvolvimento dessa tcnica; e h boas razes para se acreditar que este mtodo ter um papel importante no tratamento de futuros derramamentos de leo em circunstncias apropriadas (PRINCE, 1993; SEABRA et al.; 1999). O mercado de tecnologias ambientais disponvel hoje bastante amplo, sendo que uma ateno maior tem sido dispensada aos tratamentos e remediaes de solos e guas subterrneas. Este fato pode ser entendido por razo da gerao de resduos slidos estar

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sendo cada vez maior e tambm pela existncia de polticas ambientais cada vez mais restritivas nos ltimos anos. Com isso, os pesquisadores da rea se vem obrigados a desenvolver tcnicas menos dispendiosas e to eficientes quanto tecnologias consolidadas como a incinerao. Tanto na biorremediao In situ como na ex situ, a contribuio externade microrganismos deve ser avaliada de acordo com o tipo de solo, do equipamento a ser empregado, e principalmente os tipos de contaminantes orgnicos presentes, assim sendo vrios estudos de laboratrio e campo mostram que para se obter bons resultados faz-se necessria a aplicao de duas ou mais tecnologias em associao. A determinao desta ou daquela tecnologia a ser aplicada ao stio depender das caractersticas dos contaminantes e principalmente do local onde ocorreu a contaminao. Estas respostas podem ser obtidas mediante testes em escala piloto e principalmente no estudo detalhado das vrias caractersticas envolvidas no processo.

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