Fertilizao in vitro

Biologia

ndice

ndice............................................................................................................................................. 2 Introduo .................................................................................................................................... 3 Fertilizao in vitro Breve Histria ........................................................................................... 4 Causas da infertilidade que levam opo pela FIV................................................................... 5 Tratamento hormonal.................................................................................................................. 7 Inibio da segregao de LH ...................................................................................................... 8 Fecundao ................................................................................................................................ 11 Transferncia do Embrio .......................................................................................................... 16 Crioconservao ......................................................................................................................... 18 Vantagens e Desvantagens ....................................................................................................... 21 Concluso ................................................................................................................................... 22 Bibliografia.................................................................................................................................. 23

Introduo
Reproduo assistida consiste na utilizao das vrias tcnicas que possibilitam a um casal infrtil ter filhos. Estes problemas de infertilidade tm sido ultrapassados, graas a uma evoluo da teraputica e da interveno mdica. A fertilizao in vitro (FIV) uma tcnica de reproduo medicamente assistida que consiste na colocao, em ambiente laboratorial, in vitro, de um nmero significativo de espermatozides juntamente com alguns ocitos II, com o objectivo de obter pr-embries de boa qualidade que sero transferidos, posteriormente, para a cavidade uterina. Para a execuo desta tcnica exige-se uma prvia estimulao ovrica e acompanhamento mdico regular. H uma posterior captao dos ocitos que depois so encaminhados ao laboratrio de embriologia onde sero classificados e ambientados num meio de cultura especial. Aps a fecundao, os ocitos so transferidos para o tero. Com a chegada revolucionria da fertilizao in vitro nos anos 80, a inseminao artificial foi abandonada e considerada ultrapassada, sendo retomada apenas recentemente e iniciou-se uma verdadeira revoluo na rea da reproduo assistida. Em 1978 nasceu a primeira criana cujo embrio foi concebido fora do corpo materno, atravs da fertilizao in vitro. A partir desse ano, e graas a essa tcnica, tem sido possvel fazer nascer muitos milhares de seres humanos que, de outro modo, nunca existiriam.

Fertilizao in vitro Breve Histria

O nascimento de Louise Brown no dia 25 de Julho de 1978, na Gr-Bretanha, marcou o incio de uma era de extraordinrio progresso no entendimento e tratamento dos problemas relacionados com a fertilidade humana. Aps anos de investigao, dois britnicos, o fisiologista Robert Edwards do King`s College de Cambridge e o ginecologista Patrick Steptoe conseguiram realizar o sonho de Lesley Brown. Lesley Brown, tentara durante nove anos engravidar, mas uma malformao na trompa de Falpio impedia-a de procriar. Loise Brown tornou-se assim o primeiro beb proveta do mundo. Originalmente a fertilizao in vitro seguida de transferncia de embries (FIV-TE) foi proposta para o tratamento dos casos de infertilidade tubria, ou seja, para aquelas pacientes em que as trompas estavam ausentes ou irreparavelmente obstrudas. O aprimoramento das tcnicas de FIV ampliou as suas indicaes e permitiu o seu uso para o tratamento da infertilidade de outras etiologias.

Fig. 1: Leslie Brown.

Fig. 2 : Patrick Steptoe e Robert Edwards, respectivamente.

Causas da infertilidade que levam opo pela FIV

Considera-se incapacidade permanente infertilidade temporria de procriar, a ou que

constitui para muitos indivduos uma importante e prolongada crise de vida. A infertilidade atinge um em cada seis casais e pode ter origem masculina ou feminina. Cerca de 30%
Fig. 3 - Infertilidade feminina

com origem no homem e 60% com origem na mulher.

Em 10% dos casos as causas da infertilidade so idiopticas. Uma vez que a mulher estril/ infrtil, hoje em dia recorre-se fertilizao in vitro dado que este processo permite a manipulao da fertilidade dos casais, podendo assim alcanarse a gravidez.

Algumas das causas de infertilidade da mulher que levam opo por este mtodo so:

Ovulao pouco frequente. Obstruo das trompas: deve-se geralmente a uma infeco genital, que assintomtica. Estando as trompas obstrudas, estas no conseguiro conduzir o ocito do ovrio at ao tero, impedindo a fecundao e a gravidez. Por vezes, a infeco das trompas causa uma inflamao aguda (salpingite) seguida de dilatao das trompas (hidrosalpinge) que obriga sua remoo cirrgica (salpingectomia). Estas infeces evitam-se com a monogamia (existncia de um nico parceiro sexual durante toda a vida de um indivduo) ou com a utilizao de preservativo. Noutros casos, deve-se laqueao das trompas, processo que consiste em cauterizar ou atar uma seco das trompas de Falpio de forma a impedir o transporte dos ocitos ao longo das trompas, no permitindo o seu contacto com os espermatozides.

Secrees vaginais hostis: a cavidade uterina encontra-se protegida pelo muco que reveste o colo uterino. Este muco cervical tambm responsvel pela limpeza e seleco dos espermatozides. Se o muco cervical no for competente, ou seja, se estas secrees vaginais forem muito cidas ou alcalinas, os espermatozides no conseguem penetrar na cavidade uterina.

Endometriose: doena congnita em que o tecido endometrial cresce na cavidade plvica em torno do tero, trompas e ovrios, causando fibrose na cavidade plvica, que encerra os ovrios no permitindo a libertao do ocito. H uma disfuno ovulatria, que impede o desenvolvimento do ovrio.

Causa idioptica: significa que no foram detectados, nos testes feitos, nenhuns desvios da normalidade. Se a durao da infertilidade longa, a FIV uma soluo e, neste caso, alm de se tentar conseguir uma gravidez, serve tambm para avaliar a capacidade dos gmetas de ambos os indivduos.

Tratamento hormonal
A estimulao ovarina necessria para aumentar a probabilidade de xito da fertilizao in vitro j que, em condies normais, a mulher desenvolve apenas um folculo, e portanto um ocito II, por ciclo ovrico. Efectua-se ento um tratamento que dura cerca de 12 a 20 dias, dependendo do indivduo. Este tratamento consiste em medicaes hormonais que se iniciam a partir do terceiro ou quinto dia do ciclo sexual. Nos ovrios, os ocitos amadurecem no interior de folculos onde existem clulas foliculares com a funo de nutrir e proteger a clula da linha germinativa que envolvem. Os folculos so, ento, alvos de ateno neste tratamento. Utiliza-se um derivado sinttico, prximo da hormona foliculoestimulina activar folculos, a (FSH), que de vai

maturao pois da esta

vrios

hormona que, o

proveniente naturalmente,

hipfise provoca

desenvolvimento folicular. Uma dose maior de FSH provoca ento o desenvolvimento de mais folculos ou
Fig. 4 - Ecografia de um ovrio onde so observveis folculos desenvolvidos.

garante que pelo menos um atinge o estado maduro. Se h desenvolvimento de um maior nmero de folculos, so obtidos mais ocitos II.

Para verificar que o desenvolvimento folicular decorre como o tratamento prev, por volta do 10 dia, os folculos so observados atravs de ecografias. Para o mesmo fim, realizam-se tambm anlises ao sangue, pois, j que os folculos segregam quantidades crescentes de estrognio, num tratamento como este em que o nmero de folculos maior, possvel identificar maiores concentraes de estrognio no sangue. Os resultados so considerados bons quando 3 a 8 folculos por ovrio atingem 17 mm. Quando o desenvolvimento folicular , ento, considerado suficiente, inicia-se uma nova fase, atravs da injeco de uma hormona sinttica idntica hormona luteoestimulina (LH), que provoca ovulao. Um pouco antes de esta ocorrer procede-se aspirao dos ocitos II. Como nem todos os folculos esto desenvolvidos possvel que alguns ocitos ainda no se encontrem em metfase II.

Inibio da segregao de LH
Num ciclo normal, sob estmulo da hormona GnRH (gonadotropic releasing hormone) proveniente do hipotlamo, a hipfise liberta a hormona (FSH) que vai estimular o crescimento dos folculos. Como o folculo produz estrognio, a concentrao desta hormona no sangue aumenta. Quando o estrognio atinge uma determinada concentrao na corrente sangunea, esta variao detectada pela hipfise, que, graas ao feedback negativo, diminui a secreo de FSH. Nesta altura segrega LH que actua no folculo maduro, estimulando a ovulao e a transformao do folculo em corpo amarelo. portanto a hipfise que controla o ciclo ovrico. Mas importante perceber o que acontece numa fertilizao in vitro em que a hipfise no seja controlada. existem folculos desenvolvimento, concentrao Como vrios em a de

estrognio no sangue aumenta mais

rapidamente do que em
Fig. 5 - Grficos da variao das taxas de estrognio, progesterona, FSH e LH.

circunstncias

normais. A hipfise ao detectar o aumento na concentrao de

estrognio, inibe a secreo de FSH e estimula a secreo precoce de LH. Mas nas condies da fertilizao in vitro os folculos ainda no esto suficientemente maduros para ocorrer a ovulao. Para evitar este problema, aquando uma fertilizao in vitro, os mdicos inibem a libertao de LH pela hipfise.

Recolha de Gmetas
O processo de recolha dos ocitos realizado sob o efeito de anestesia local, de modo a ser o mais indolor possvel para a paciente. Durante esta recolha, designada puno folicular, uma agulha passada atravs da vagina para retirar o contedo folicular com uma suco suave, sob controlo ecogrfico (ecografia

transvaginal). O processo repetido para cada folculo em ambos os ovrios. Com o auxlio de um estereomicroscpio sob fluxo laminar (onde flui ar estril de dentro para fora, evitando a contaminao do material), o
Fig. 6 - Puno Folicular

contedo lquido destes folculos obtidos no centro cirrgico, transferido para uma placa de meio de cultura e examinado procura do ocito. Todo o procedimento realizado de forma a que o ocito no sofra variaes importantes de temperatura, em ambiente extremamente limpo, com uma srie de cuidados em relao pureza do ar, e com controlo tambm da luminosidade do laboratrio, pois so sensveis a estas variaes Uma vez identificado o ocito este

transferido para outra placa contendo apenas meio de cultura, e ser classificado quanto sua maturidade. Podem ser classificados como imaturos ou maduros, encontrando-se em metfase II. Apenas os ocitos em
Fig. 7 - Ocito II maturo e 2 Glbulo polar

metfase II apresentam estado de maturao suficiente para serem fertilizados. O processo de maturao oocitria consiste numa complexa sequncia de eventos nucleares e citoplasmticos. Este processo composto por inmeras modificaes estruturais e moleculares no citoplasma (maturao citoplasmtica), em que h sntese de componentes citoplasmticos, e que culminam com a configurao cromossmica em metfase II (maturao nuclear). O meio de cultura dever conter os nutrientes necessrios para o metabolismo do ocito, que lhe sero proporcionados na forma de soro, uma soluo de unidades monomricas de todos os nutrientes. Alm das substncias adicionadas ao meio na soluo de soro, os ocitos em cultivo tambm so afectados por condies fisiolgicas especficas, tais como: osmolaridade, composio inica,

temperatura, pH, CO2 e concentrao de oxignio. Estes factores devem ser manipulados de forma a imitar ao mximo o ambiente das trompas de Falpio. A maturao dos ocitos in vitro permite assim que os ocitos que ainda no atingiram a maturidade atinjam a metfase II in vitro e adquiram a competncia para serem fecundados. A placa de vidro em que os ocitos so colocados, transferida para uma incubadora a 37C, sob condies de temperatura e presso constantes. Depois de 2 a 4 horas de ambientao na incubadora, os ocitos estaro prontos para a fertilizao Paralelamente puno folicular ocorre a recolha da amostra de esperma, de maneira natural (masturbao) ou atravs da puno testicular ou do epiddimo (no caso da ocorrncia de

azoospermia, isto , ausncia de espermatozides no lquido ejaculado). sero Aps esta recolha, atravs os da
Fig. 8 - Amostra de esperma recolhida

espermatozides

preparados

lavagem com meio de cultura de clulas e centrifugao, fazendo com que haja uma separao do plasma seminal, resultando em espermatozides com maior mobilidade e capacidade para fertilizao. Este processo importante porque remove substncias qumicas e bactrias que podem causar reaces adversas ou contraces uterinas intensas.

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Fecundao
A fertilizao in vitro, como o prprio nome indica, caracteriza-se por a fecundao se realizar fora do corpo da mulher, em laboratrio, sendo o ocito fecundado pelo espermatozide num pequeno recipiente de vidro (numa caixa de Petri, numa proveta, num tubo de ensaio).

Fig. 9 - Espermatozides e ocito

Fig. 10: Recipiente de vidro onde vai ocorrer a fecundao.

Fecundao (Reviso) A fecundao, como j estudmos, resultado de um conjunto complexo de processos, que tem incio com o encontro entre o ocito II e os espermatozides, que so atrados por uma substncia libertada pelas clulas foliculares que rodeiam o ocito II. Os espermatozides que que penetram entre as clulas foliculares ligam-se zona pelcida por receptores especficos, desencadeando a reao acrossmica, com a exocitose de enzimas do acrossoma que digerem a zona pelcida. Assim d-se a penetrao do espermatozide at membrana do ocito II ocorrendo a fuso da membrana dos dois gmetas. Assim, e como resultado, h uma alterao da zona pelcida impedindo a penetrao de outros espermatozides e h uma incorporao no progressiva ocito. Ocorre do a

espermatozide

finalizao da diviso II da meiose do ocito II com a formao do proncleo feminino e do segundo glbulo polar, e tambm do proncleo
Fig. 11 - Penetrao do espermatozide na membrana do ocito.

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masculino a partir da descondensao do ncleo do espermatozide. Os dois proncleos vo migrar para o centro do ocito II, terminando com a fuso dos dois proncleos (cariogamia) num s ncleo diploide com cromossomas maternos e paternos (ocorre emparelhamento dos pares de homlogos). O ovo formado assim uma clula nica do ponto de vista gentico, que vai evoluir para um indivduo tambm nico. Fertilizao in vitro - Fecundao Existem dois tipos de fertilizao in vitro, de acordo com a quantidade ou qualidade de espermatozides disponveis para a fecundao: a clssica, conhecida como a do beb proveta, realizada pela primeira vez em 1978, ou a ICSI (sigla em ingls para injeo intracitoplasmtica de espermatozide), criada em 1992, utilizada quando h problemas graves com a quantidade ou qualidade dos espermatozides, e o nmero insuficiente para a fertilizao in vitro convencional.

Fig. 12 - Fertilizao in vitro clssica, em que muitos espermatozides so postos em contacto com o ocito.

Fig. 13 - ICSI, tcnica de fertilizao in vitro que se efectua com um nmero muito reduzido de espermatozides.

Na FIV clssica, para que ocorra a fecundao, colocam-se, num meio de cultura apropriado e com ambiente controlado, alguns ocitos II maduros e prontos a ser fertilizados, previamente removidos e mantidos em cultura durante algumas horas (2 a 4 horas), juntamente com uma elevada concentrao de espermatozides, na ordem dos milhares de espermatozides mveis para cada ocito. Os espermatozides mais resistentes e mais capacitados em termos de mobilidade, j seleccionados anteriormente, fertilizam os ocitos, sendo que apenas um espermatozide penetra em cada ocito, e que este processo ocorre naturalmente. Na FIV, ao contrrio do que acontece na ICSI, o ocito

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colocado no meio de cultura nas mesmas condies com que o este atinge as Trompas de Falpio. Este est envolvido pela zona pelcida e esta pelas clulas foliculares, conjunto celular a que se d o nome de corona radiata, e previamente submetido a um processo de maturao para que se encontre bloqueado em metfase II (apenas estes ocitos so viveis e utilizados na fecundao). A zona pelcida e algumas clulas so digeridas por enzimas do espermatozide, e as clulas remanescentes sero posteriormente removidas do meio de cultura. O meio de cultura onde ocorre a fecundao e onde as clulas

permanecem ao longo das sucessivas divises mitticas que vo sofrer o mesmo meio onde os ocitos foram mantidos anteriormente e essencial para assegurar o metabolismo das clulas. assim constitudo por gua ultrapurificada, uma concentrao de ies muito prxima das encontradas no sangue e enriquecido com fluidos biolgicos, especialmente o soro humano (soluo de unidades monomricas preparado a partir do sangue da paciente), ficando assim o meio de cultura rico em aminocidos, vitaminas e colesterol. Este vai ser colocado numa incubadora a 37C, com 5% CO2 e uma atmosfera humidificada, reconstituindo as condies do oviduto e do tero. Durante os dias seguintes, os ocitos fecundados iro dividir-se e tornar-se-o embries.
Fig. 14 - Espermatozides resistentes e capacitados, prontos para fertilizar o ocito.

Quinze a dezanove horas aps a inseminao as clulas so examinadas ao microscpio pelo embriologista para averiguar se houve fertilizao normal (presena dos proncleos masculino e feminino). Fertilizao normal Fertilizao Anormal Fertilizao Anormal

2 Pro-ncleos

1 Pro-ncleo

3 Pro-ncleo

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Os zigotos com um ou mais de dois proncleos so rejeitados j que resultam em embries geneticamente alterados. Aps a fecundao (fertilizao) forma-se o zigoto. A partir desse momento inicia-se a multiplicao celular em que ocorrem sucessivas divises mitticas, para a formao do denominado pr-embrio. Vinte e quatro horas aps a inseminao observa-se a presena de pr-embries, divididos em duas clulas, aps 48 horas (2 dias) estar dividido em 4 clulas, aps 72 horas (3 dias) 8 clulas e assim

sucessivamente. A transferncia dos pr-embries normalmente realiza-se no segundo terceiro e/ou quinto dia aps a inseminao, com pr-

embries com quatro, oito ou mais clulas. Isto ser definido de acordo com o desenvolvimento embrionrio
Fig. 15 - Pr embries divididos em duas, quatro e seis clulas, algumas horas aps a fecundao.

especfico de cada caso. Antes desta transferncia os pr-embries so classificados morfologicamente.

Algumas horas aps a inseminao, os pr-embries sero observados para identificar os que se dividiram precocemente. Embries com diviso precoce tm maior potencial para a implantao, j que estes apresentam um maior nmero de divises celulares e assim uma maior probabilidade de se encontrar j em fase de blastocisto, fase em que o embrio se encontra dividido em dois grupos celulares, a massa celular interna, que vai dar origem ao novo ser) e o trofoblasto. A existncia do trofoblasto de extrema importncia, j que este grupo de clulas responsvel pela aderncia do embrio zona superficial do endomtrio, dando origem ao processo de implantao do embrio, a que se d o nome de nidao. Se este processo no ocorrer, no se verifica gravidez. Assim, embries com diviso precoce devero estar entre os escolhidos para a transferncia. Para o mesmo efeito, podem tambm ser alteradas determinadas variantes do meio de cultura e do ambiente envolvente que influenciem a diviso celular.

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A figura representa os estgios do desenvolvimento embrionrio: O estgio A mostra o ocito II antes de ser fecundando pelo espermatozide; O estgio B representa o ocito II que acabou de ser fertilizado. No estgio C percebe-se o incio do desenvolvimento do embrio; O estgio D representa um embrio 24 horas aps a fertilizao (estgio de 2

clulas); Os estgios E e F representam o embrio 48 horas aps a fertilizao (estgio de 4

clulas); O estgio G representa o embrio 72 horas aps a fertilizao (estgio de 8 clulas); A figura H representa o embrio j compactado, no estado chamado de mrula; O estgio I representa o embrio no quinto dia de desenvolvimento (blastocisto).

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Transferncia do Embrio
A colocao dos pr-embries no interior da cavidade uterina feita cerca de 4872h, s vezes at 120h, aps a captao dos ocitos e fertilizao dos mesmos. O dia em que se colocam os pr-embries no tero materno definido de acordo com o desenvolvimento especfico de cada caso. A transferncia embrionria deve ser feita com a paciente em posio ginecolgica, numa sala prxima do laboratrio onde se encontram os pr-embries. Antes de iniciar a transferncia, o mdico coloca o espculo (instrumento que facilita ao mdico a observao e examinao da vagina) e lava a vagina com soro fisiolgico ou meio de cultura. Os pr-embries selecionados para transferncia so aspirados para um tubo de plstico fino, chamado catter, procedimento realizado pelo(a) bilogo(a) dentro do laboratrio de FIV. Ao mesmo tempo, o mdico que vai transferir os embries faz um exame de ultrasom plvico. Para que este exame seja realizado a mulher tem de ter a bexiga cheia, pois isto retifica o tero das mulheres, dado que muitas mulheres tm o tero com curvatura anterior, e facilita o controlo da dos Este

ecogrfico transferncia embries.

exame de extrema importncia

Fig. 16 - Representao do processo de transferncia embrionria.

pois

permite determinar e

visualizar a entrada do catter dentro da cavidade uterina e ter a certeza de que os prembries esto a ser colocados no local adequado do tero. O cateter passa atravs do orifcio cervical externo e interno e os pr-embries so libertados 1 cm abaixo do fundo uterino, sada das trompas. Aps a transferncia, o catter avaliado no laboratrio para confirmar que os pr-embries foram todos depositados na cavidade uterina.

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 um processo simples, indolor, que demora cerca de 5 minutos, no sendo necessria sedao nem anestesia. Normalmente transferem-se 2 a 3 pr-embries para a cavidade uterina. Contudo, o nmero de pr-embries transferidos depende da idade da mulher e da qualidade dos pr-embries. Nos casos em que no se consegue introduzir o catter no colo uterino e nos casos em que os pr-embries no implantam por anomalia molecular dos receptores do endomtrio, pode efectuar-se a introduo dos pr-embries directamente no endomtrio (transferncia trans-endometrial). Neste caso, a taxa de gravidez menor devido reaco inflamatria da picada. Trata-se de um procedimento indolor e sem complicaes, efectuando-se sob controlo ecogrfico. No tratamento, a transferncia de pr-embries o passo mais crtico em relao s taxas de gravidez, logo a seguir qualidade e ao nmero dos pr-embries transferidos. A transferncia dos pr-embries no corresponde sua implantao no endomtrio. A nidao um processo natural que ocorre ao 8 dia do desenvolvimento embrionrio. Ou seja, se a mulher efectuar a transferncia embrionria ao 3 dia, os pr-embries permanecem na cavidade uterina, desenvolvendo-se at ao 8 dia, altura em que, adquirem a capacidade de nidarem. Aps a transferncia embrionria a paciente dever ficar aproximadamente 30 minutos em repouso. A mulher no necessita de permanecer deitada nem de ficar em casa em repouso durante os dias que se seguem transferncia. Apesar de estarem na cavidade uterina, os embries no caiem para o exterior porque a cavidade uterina virtual, ou seja, as paredes tocam-se e no deixam sair os embries. No entanto, como se trata de um tratamento, numa situao de dificuldade em conceber, os cuidados so geralmente aumentados, aconselhando-se repouso em casa durante 1 semana. A futura me deve aumentar as horas de repouso dirias, sentada ou deitada; fazer uma alimentao equilibrada de 3/3 horas, com 1,5L gua/dia; abster-se de viagens prolongadas, de desportos basculantes (hipismo, motociclismo, ciclismo, saltos), de relaes sexuais e de trabalho de p prolongado. O ideal no programar viagens para o mesmo dia da transferncia. Pelo que se estudou at agora, o repouso no tem qualquer significado sobre as taxas de gestao. A transferncia de embries um processo emocionalmente desgastante devido carga emocional que esta fase implica, para alm de poder implicar dores nos seios e em todo o abdmen. Atualmente transferem-se cada vez menos embries, principalmente em mulheres jovens e com embries com alto potencial de implantao, para diminuir as gestaes mltiplas.

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Crioconservao
A crioconservao uma tcnica usada para a conservao de clulas ou tecidos a temperaturas inferiores a 196C negativos, temperatura na qual a gua inexistente, podendo ser o perodo de armazenamento extremamente longo. Desde a dcada de 50, realizada a crioconservao de espermatozides. J nos anos 80, relata-se o nascimento do primeiro bebe nascido de embrio humano congelado. O constrangimento resultante da necessidade de colheita do esperma por masturbao e a ansiedade podem ter como consequncia uma dificuldade adicional e, por vezes, at a impossibilidade da colheita do esperma. Deste modo, para evitar a situao angustiante de no ter espermatozides para a respectiva tentativa de fecundao dos ocitos obtidos, os doentes so esclarecidos da possibilidade de crioconservao dos espermatozides em azoto lquido, antes do incio do ciclo. Permite assim a preservao dos espermatozides por um tempo prolongado, se necessrio, mantendo as suas propriedades biolgicas depois de descongelados. A tcnica de crioconservao de espermatozides tambm muito til quando um homem tem no incio do processo de FIV, baixa concentrao espermtica, baixa mobilidade dos espermatozides ou at mesmo azooespermia (ausncia total de espermatozides no lquido ejaculado). Para evitar os danos celulares causados pelo processo de crioconservao e descongelamento, que so a desidratao (alteraes osmticas) e a formao dos cristais de gelo intracelulares, necessria a
Fig. 17 - Botija de azoto para crioconservao de espermatozides

utilizao de meios crioprotectores de alta osmolaridade para que penetrem na clula durante o congelamento e saiam da mesma durante o descongelamento, sem causar dano celular que impea a capacidade fertilizante do espermatozide. Depois de colocados na soluo de crioprotector os espermatozides so crioconservados em botijas de azoto lquido onde a temperatura de 196C negativos. As amostras de esperma, nas referidas condies, podem ser guardadas durante 50 anos, ou talvez mais sem alterao de qualidade em relao anlise psdescongelamento inicial. Estatisticamente a taxa de sucesso utilizando-se na tcnica de FIV esperma crioconservado no difere das taxas de sucesso da
Fig. 18 - Crioconservao de embries: colocao na botija de azoto

populao de casais com infertilidade em geral.

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No incio de um tratamento de Fertilizao in vitro outra questo bastante importante para ser discutida com os casais diz respeito ao nmero de ocitos que, potencialmente, sero produzidos durante o ciclo. Este nmero est directamente relacionado ao nmero de embries que sero obtidos. Um nmero maior de embries produzidos permite a escolha daqueles que, potencialmente, tm melhores condies para implantao, aumentando as hipteses de sucesso. Entretanto frequentemente sobram embries de boa qualidade, que podem ser congelados, por um processo semelhante ao dos espermatozides. A crioconservao de embries , no entanto, mais complexa, pois obriga a uma passagem dos embries por diversas concentraes de crioprotectores podendo ser efectuada com base na descida automaticamente programada da temperatura em aparelho especial (crioconservao lenta). Actualmente, existem protocolos de congelamento de embries com hipteses reais de gestao aps descongelamento (70%), embora as taxas de sobrevivncia sejam inferiores s de embries frescos. Segundo o Conselho Federal de Medicina, actualmente os embries excedentes aos ciclos de Fertilizao in vitro podem ter trs destinos: congelamento, doao a outro casal ou doao para pesquisa com clulas estaminais. A maioria dos casais opta pelo congelamento. Quanto ao tempo que os embries podem ficar congelados muito discutido. J existem relatos de gestaes com nascimento de bebs saudveis com mais de 10 anos de congelamento. Por fim, a preservao dos gmetas femininos configurou-se como um dos grandes desafios da reproduo assistida ao longo dos anos. O ocito trata-se de uma clula relativamente grande, com maior volume de gua intracelular e uma membrana muito resistente. Tem ainda a particularidade de, quando maturo, encontrar-se na metfase da fase equacional da meiose, em que o fuso acromtico, muito sensvel a temperaturas extremas, se encontra formado para conduzir os cromatdeos irmos a cada um dos polos da clula. Deste modo, ao contrrio da clula reprodutora masculina, que se adaptou logo preservao a Fig. 20 - Ocitos Ps-Vitrificao baixssimas temperaturas, o ocito oferece alguma resistncia a esta tcnica. Como o ocito, por ser muito sensvel ao frio no responde de maneira positiva ao congelamento demorado, desenvolveu-se uma alternativa ao congelamento convencional, a vitrificao. Esta consiste numa tcnica muito semelhante crioconservao habitual, mas com a diferena que de congelamento rpido, minimizando a injria causada pelo frio ao ocito, pois evita a formao de cristais de gelo. A tcnica de vitrificao de ocitos e a sua subsequente desvitrificao (descongelamento) tem conduzido a resultados semelhantes aos que se obtm quanto se utilizam ocitos recolhidos na ocasio de um procedimento de Fertilizao In Vitro (FIV). Os passos desta
Fig. 19 - Ocitos Pr-Vitrificao

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tcnica so os mesmos de um ciclo de FIV: estimulao do ovrio com hormonas, aspirao dos vulos, e em vez de os inseminar e fecundar, realiza-se a vitrificao, ficando armazenados posteriormente em azoto lquido.

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Vantagens e Desvantagens
Vantagens A fertilizao in vitro uma tcnica medicamente assistida que se tem vindo a aperfeioar. Embora tenha uma taxa de sucesso relativamente baixa, esta tcnica apresenta muitas vantagens das quais se destacam as seguintes: Mulheres que fizeram laqueao de trompas podem recorrer a esta tcnica para terem filhos; Mulheres infrteis podem ter filhos atravs desta tcnica; Pode ser realizada uma avaliao nos ocitos, e a fertilizao e o desenvolvimento dos pr-embries podem ser acompanhados em laboratrio; Os embries e os gmetas podem ser criopreservados e utilizados, posteriormente, pelo casal. Desvantagens Apesar da fertilizao in vitro ser vantajosa para alguns casais, possui tambm inmeras desvantagens das quais se destacam: Risco de nascimentos mltiplos, uma vez que so transferidos para o tero materno mltiplos embries; No caso de ocorrer nascimentos mltiplos existe a possibilidade de perda de gravidez, complicaes obsttricas, parto prematuro e mortalidade neonatal; Risco de o beb possuir malformaes congnitas; Risco de complicaes com a sade materna; Desapontamento por parte do casal, no caso de ineficcia dos tratamentos; Podero ocorrer complicaes no local da puno transvaginal durante a aspirao folicular, ainda que de baixa frequncia, sangramento por leso da parede vaginal, abscesso tubrio e leses de estruturas vizinhas tais como intestino, bexiga, uretra e grandes vasos. Tcnica dispendiosa.

Taxas de sucesso: Num tratamento de fertilizao in vitro, as probabilidades de

gravidez por transferncia embrionria so, em mdia, cerca de 27% a 33%. Um quarto das gravidezes termina com um aborto espontneo ou uma gravidez ectpica.

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Concluso
A fertilizao in vitro, utilizada desde 1978, uma das vrias tcnicas de reproduo medicamente assistida utilizada para superar os problemas sentidos pelos casais que sofrem de infertilidade, perante o desejo de ter filhos. Numa primeira etapa feita estimulao ovarina atravs de medicaes hormonais, aumentando o nmero de ocitos II produzidos no ciclo e consequentemente a probabilidade de xito. Os ocitos, bem como os espermatozides que so paralelamente recolhidos, so preparados em laboratrio, e maturados, se necessrio. Quando maturos so ento colocados juntamente com uma elevada concentrao de espermatozides, e ocorre a fecundao fora do corpo da mulher, in vitro, sendo que este processo ocorre naturalmente. Os embries assim formados so transferidos para o tero. A nidao, no entanto, um processo que ocorre naturalmente. A transferncia dos pr-embries o passo mais crtico em relao s taxas de gravidez, logo a seguir qualidade e ao nmero dos pr-embries transferidos. Para preservar os embries de boa qualidade excedentes, ou espermatozides e ocitos, desenvolveu-se uma tcnica, denominada crioconservao. Na fertilizao in vitro as probabilidadees de gravidez so, em mdia, de 27% a 33%.

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Bibliografia
www.apfertilidade.org www.min-saude.pt www.abcdasaude.com.br www.medicinareprodutiva.com.br www.fertilidadeumaviagem.com

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